Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря

Досліджували протеїназну активність в різних залозистих структурах травної системи рапани. Показано, що максимальна питома (на одиницю сирої маси тканини) протеолітична активність та найбільша різноманітність молекулярних форм ферменту представлені у слинних залозах, найменша активність — у гепат...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	2014
Автори:	Топтіков, В.А., Тоцький, В.М., Алексєєва, Т.Г., Ковтун, О.О.
Формат:	Стаття
Мова:	Ukrainian
Опубліковано:	Інститут гідробіології НАН України 2014
Назва видання:	Гидробиологический журнал
Теми:	Экологическая физиология и биохимия водных животных
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/110136
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря / В.А. Топтіков, В.М. Тоцький, Т.Г. Алексєєва, О.О. Ковтун // Гидробиологический журнал. — 2014. — Т. 50, № 5. — С. 90-101. — Бібліогр.: 30 назв. — укр.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-110136
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1101362016-12-30T03:02:59Z Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря Топтіков, В.А. Тоцький, В.М. Алексєєва, Т.Г. Ковтун, О.О. Экологическая физиология и биохимия водных животных Досліджували протеїназну активність в різних залозистих структурах травної системи рапани. Показано, що максимальна питома (на одиницю сирої маси тканини) протеолітична активність та найбільша різноманітність молекулярних форм ферменту представлені у слинних залозах, найменша активність — у гепатопанкреасі та Лейбленівській залозі. За допомогою специфічних інгібіторів встановлено, що протеолітична активність слинних залоз обумовлена головним чином металопротеїназами. Вивчали розподіл протеіназної активності в різних залозистих структурах травної системи рапани. Показано, що максимальна питома (на одиницю маси тканини) протеолітична активність і найбільша різноманітність молекулярних форм ферменту виявляються в слинних залозах у гепатопанкреасі і Лейблейновській залозі активність мінімальна. За допомогою інгібіторів встановлено, що протеолітична активність слинних залоз обумовлена в основному металлопротеіназами. The distribution of proteinase activity in various glandular structures of the digestive system rapa whelks were investigated. It was shown that the maximum proteolytic activity and the greatest variety of molecular forms of the enzyme were in the salivary glands. Proteolytic activity was the minimal in hepatopancreas and Leybleynovskiy gland. The use of inhibitors was established that the proteolytic activity of the salivary glands caused mainly by metalloproteinases. 2014 Article Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря / В.А. Топтіков, В.М. Тоцький, Т.Г. Алексєєва, О.О. Ковтун // Гидробиологический журнал. — 2014. — Т. 50, № 5. — С. 90-101. — Бібліогр.: 30 назв. — укр. 0375-8990 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/110136 594.3:[577.151.643+577.152.34] uk Гидробиологический журнал Інститут гідробіології НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Ukrainian
topic	Экологическая физиология и биохимия водных животных Экологическая физиология и биохимия водных животных
spellingShingle	Экологическая физиология и биохимия водных животных Экологическая физиология и биохимия водных животных Топтіков, В.А. Тоцький, В.М. Алексєєва, Т.Г. Ковтун, О.О. Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря Гидробиологический журнал
description	Досліджували протеїназну активність в різних залозистих структурах травної системи рапани. Показано, що максимальна питома (на одиницю сирої маси тканини) протеолітична активність та найбільша різноманітність молекулярних форм ферменту представлені у слинних залозах, найменша активність — у гепатопанкреасі та Лейбленівській залозі. За допомогою специфічних інгібіторів встановлено, що протеолітична активність слинних залоз обумовлена головним чином металопротеїназами.
format	Article
author	Топтіков, В.А. Тоцький, В.М. Алексєєва, Т.Г. Ковтун, О.О.
author_facet	Топтіков, В.А. Тоцький, В.М. Алексєєва, Т.Г. Ковтун, О.О.
author_sort	Топтіков, В.А.
title	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря
title_short	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря
title_full	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря
title_fullStr	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря
title_full_unstemmed	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря
title_sort	особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (rapana venosa) з північно-західної частини чорного моря
publisher	Інститут гідробіології НАН України
publishDate	2014
topic_facet	Экологическая физиология и биохимия водных животных
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/110136
citation_txt	Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря / В.А. Топтіков, В.М. Тоцький, Т.Г. Алексєєва, О.О. Ковтун // Гидробиологический журнал. — 2014. — Т. 50, № 5. — С. 90-101. — Бібліогр.: 30 назв. — укр.
series	Гидробиологический журнал
work_keys_str_mv	AT toptíkovva osoblivostíproteínaznoíaktivnostíutravnomutraktírapanirapanavenosazpívníčnozahídnoíčastiničornogomorâ AT tocʹkijvm osoblivostíproteínaznoíaktivnostíutravnomutraktírapanirapanavenosazpívníčnozahídnoíčastiničornogomorâ AT aleksêêvatg osoblivostíproteínaznoíaktivnostíutravnomutraktírapanirapanavenosazpívníčnozahídnoíčastiničornogomorâ AT kovtunoo osoblivostíproteínaznoíaktivnostíutravnomutraktírapanirapanavenosazpívníčnozahídnoíčastiničornogomorâ
first_indexed	2025-07-08T00:09:58Z
last_indexed	2025-07-08T00:09:58Z
_version_	1837035318618882048
fulltext	ÓÄÊ 594.3:[577.151.643+577.152.34] Â. À. Òîïò³êîâ, Â. Ì. Òîöüêèé, Ò. Ã. Àëåêñººâà, Î. Î. Êîâòóí ÎÑÎÁËÈÂÎÑÒ² ÏÐÎÒÅ¯ÍÀÇÍÎ¯ ÀÊÒÈÂÍÎÑÒ² Ó ÒÐÀÂÍÎÌÓ ÒÐÀÊÒ² ÐÀÏÀÍÈ (RAPANA VENOSA) Ç Ï²ÂÍ²×ÍÎ-ÇÀÕ²ÄÍÎ¯ ×ÀÑÒÈÍÈ ×ÎÐÍÎÃÎ ÌÎÐß Äîñë³äæóâàëè ïðîòå¿íàçíó àêòèâí³ñòü â ð³çíèõ çàëîçèñòèõ ñòðóêòóðàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè. Ïîêàçàíî, ùî ìàêñèìàëüíà ïèòîìà (íà îäèíèöþ ñèðî¿ ìàñè òêà- íèíè) ïðîòåîë³òè÷íà àêòèâí³ñòü òà íàéá³ëüøà ð³çíîìàí³òí³ñòü ìîëåêóëÿðíèõ ôîðì ôåðìåíòó ïðåäñòàâëåí³ ó ñëèííèõ çàëîçàõ, íàéìåíøà àêòèâí³ñòü — ó ãåïà- òîïàíêðåàñ³ òà Ëåéáëåí³âñüê³é çàëîç³. Çà äîïîìîãîþ ñïåöèô³÷íèõ ³íã³á³òîð³â âñòà- íîâëåíî, ùî ïðîòåîë³òè÷íà àêòèâí³ñòü ñëèííèõ çàëîç îáóìîâëåíà ãîëîâíèì ÷è- íîì ìåòàëîïðîòå¿íàçàìè. Êëþ÷îâ³ ñëîâà: Rapana venosa, òðàâíà ñèñòåìà, ïðîòåîë³òè÷íà àê- òèâí³ñòü. ×åðåâîíîãèé ìîëþñê Rapana venosa (Vallenciennes) (Gastropoda: Murici- dae, Rapaninae) — óñï³øíèé âñåëåíåöü, ÿêèé çà ï³âñòîë³òòÿ ñïðè÷èíèâ ³ñòîòí³ çáèòêè àáîðèãåíí³é ôàóí³ ×îðíîãî ìîðÿ, îñîáëèâî òàêèì âàæëèâèì ïðîìèñëîâèì îá’ºêòàì, ÿê óñòðèö³ òà ì³ä³¿ [30]. Ïîðÿä ç ³íøèìè ïðè÷èíàìè, îäíèì ³ç ÷èííèê³â øâèäêîãî ³ ìàñîâîãî ðîçñåëåííÿ ðàïàíè â àêâàòîð³¿ ×îð- íîãî ìîðÿ (³ íå ò³ëüêè â öüîìó ðåã³îí³) º çäàòí³ñòü öüîãî ìîëþñêà çì³íþâàòè ñâî¿ òðîô³÷í³ ïð³îðèòåòè â çàëåæíîñò³ â³ä îáñòàâèí [28]. ßêùî íà áàòüê³âùèí³ (ï³âí³÷íî-ñõ³äíà ÷àñòèíà Òèõîãî îêåàíó) îñíîâíèì äæåðåëîì æèâëåííÿ ðàïàíè º óñòðèö³, òî â íîâîìó àðåàë³, ï³ñëÿ çíèùåííÿ çàïàñ³â óñòðèöü, ðàïàíà ïåðåéøëà íà ñïîæèâàííÿ ³íøèõ ìîëþñê³â, çîêðåìà òàêèõ äâîñòóëêîâèõ, ÿê ì³ä³¿ òà âåíåð³äè [5, 22]. Êð³ì òîãî, ðàïàíà ìîæå âæèâàòè â ¿æó êðàá³â, æèâèòèñÿ ïàäàëëþ [21] ³ íàâ³òü âèÿâëÿòè êàí³áàë³çì [22]. Äîðîñë³ îñîáèíè ðàïàíè â ï³âí³÷íî-çàõ³äí³é ÷àñòèí³ ×îðíîãî ìîðÿ æèâ- ëÿòüñÿ ãîëîâíèì ÷èíîì ì³ä³ÿìè (Mytilus galloprovincialis Lamark). Â³äîìî, ùî âì³ñò ïðîòå¿í³â ó ì’ÿñ³ ì³ä³é äîð³âíþº â ñåðåäíüîìó 11,5% [19]. Òîìó, äëÿ åôåêòèâíîãî ïåðåòðàâëþâàííÿ ¿æ³ ó ðàïàíè ìàº áóòè àäåêâàòíèé íàá³ð ïðî- òåîë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â. Íà ñüîãîäí³ ó ôàõîâ³é ë³òåðàòóð³ äîñèòü äåòàëüíî îïèñàíî ëîêàë³çàö³þ îñíîâíèõ õ³ì³÷íèõ ñïîëóê â òêàíèíàõ ìîëþñêà òà âèç- íà÷åíî äåÿê³ çàãàëüí³ ìîðôîô³ç³îëîã³÷í³ îñîáëèâîñò³ ôóíêö³îíóâàííÿ ð³çíèõ îðãàí³â ³ ñèñòåì [3, 10, 15, 17, 18]. Îäíàê á³ëüø³ñòü á³îõ³ì³÷íèõ àñ- ÝÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÀß ÔÈÇÈÎËÎÃÈß È ÁÈÎÕÈÌÈß ÂÎÄÍÛÕ ÆÈÂÎÒÍÛÕ © Â. À. Òîïò³êîâ, Â. Ì. Òîöüêèé, Ò. Ã. Àëåêñººâà, Î. Î. Êîâòóí, 2014 90 ISSN 0375-8990 Ãèäðîáèîë. æóðí. 2014. ¹ 5. Ò. 50 ïåêò³â ä³ÿëüíîñò³ öèõ ñèñòåì, ó òîìó ÷èñë³ òðàâíî¿, ïðàêòè÷íî íå äîñë³äæåí³. Íåçâàæàþ÷è íà òå, ùî äî ãðóïè ïðîòå¿íàç â³äíîñÿòüñÿ ôåðìåíòè, ÿê³ âèêî- íóþòü íå ò³ëüêè òðàâíó ôóíêö³þ, à é â³ä³ãðàþòü âàæëèâó ðîëü ó áàãàòüîõ ³íøèõ ïðîöåñàõ (á³îãåíåç ñòðóêòóð, ôàãîöèòîç, ïîä³ë êë³òèí, ãóìîðàëüíà, íåéðî- òà ³ììóíîðåãóëÿö³ÿ), ïðîòåîë³òè÷í³ ôåðìåíòè ìîëþñê³â âèâ÷åíî íå- äîñòàòíüî. Â ë³òåðàòóð³ íå âäàëîñÿ çíàéòè äåòàëüíî¿ ³íôîðìàö³¿ ùîäî ôóíêö³îíóâàííÿ ïðîòåîë³òè÷íî¿ ñèñòåìè ó ðàïàíè. Ìîæíà íàâåñòè íèçêó ðîá³ò, â ÿêèõ ïîêàçàíî íàÿâí³ñòü ó ìîëþñê³â ïðàêòè÷íî âñ³õ â³äîìèõ ãðóï ïðîòåîë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â, äåÿê³ ¿õí³ âëàñòèâîñò³, ðîëü ó æèòòºä³ÿëüíîñò³ òâàðèí, çîêðåìà ï³ä âïëèâîì òîêñèêàíò³â, òà â³äíîñíó ê³ëüê³ñòü ð³çíèõ ãðóï ïðîòå¿íàç â îðãàí³çì³ [6, 7, 9, 12]. Îäíàê ó íèõ äîñë³äæóâàëèñÿ ³íø³ ÷åðåâî- íîã³ ìîëþñêè òà ïðåäñòàâíèêè äâîñòóëêîâèõ, ïðè÷îìó íà ð³âí³ îäíîãî îêðå- ìîãî îðãàíó àáî îðãàí³çìó â ö³ëîìó. Ó çâ’ÿçêó ç öèì, à òàêîæ âðàõîâóþ÷è âå- ëèêó ðîëü ðàïàíè â ñó÷àñí³é åêîëîã³¿ ×îðíîãî ìîðÿ, ìåòîþ ðîáîòè áóëî ç’ÿ- ñóâàòè ïîë³ìîðô³çì òà îñîáëèâîñò³ åêñïðåñ³¿ ïðîòå¿íàç ó ð³çíèõ â³ää³ëàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè. Ìàòåð³àë ³ ìåòîäèêà äîñë³äæåíü. Ìîëþñê³â çáèðàëè âðó÷íó âîäîëàçíèì ñïîñîáîì â ðàéîí³ Ìàëîãî Ôîíòàíó â Îäåñüê³é çàòîö³ ó 50 ì â³ä áåðåãà íà ãëèáèí³ 5—7 ì. Çá³ð çä³éñíþâàëè â ñåðïí³, âåðåñí³ òà íà ïî÷àòêó æîâòíÿ 2012 ð., âñüîãî áóëî ï’ÿòü íåçàëåæíèõ çáîð³â ìàòåð³àëó. Ç³áðàíèõ ìîëþñê³â îäðàçó çàìîðîæóâàëè ó ìîðîçèëüí³é êàìåð³ äî –28oÑ ³ â òàêîìó ñòàí³ çáåð³ãàëè äî àíàë³çó. Â äîñë³ä³ âèêîðèñòîâóâàëè ñòàòåâîçð³ëèõ îñîáèí ðîçì³ðîì (çà âèñîòîþ ìóøë³) â³ä 65 äî 85 ìì. Ì’ÿêå ò³ëî ìîëþñêà ï³ñëÿ ëåãêîãî â³äòàþâàííÿ îáå- ðåæíî âèòÿãóâàëè ç ìóøë³ ³ ïðåïàðóâàëè íà ïîâåðõí³ õîëîäîãåíó, ùîá çà- ïîá³ãòè ñóòòºâîìó íàãð³âàííþ ìàòåð³àëó. Äëÿ àíàë³çó â³äáèðàëè òàê³ ÷àñòèíè òðàâíî¿ ñèñòåìè (ðèñ. 1): ñëèíí³ (ãëîòêîâ³) çàëîçè, äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çàëîçè, îðãàí Ëåéáëåéíà (ãðóøîïîä³áíèé îðãàí) ðàçîì ç ä³ëÿíêîþ ñòðàâîõîäó, «ìà- ëèíîâó» çàëîçó ðàçîì ç ä³ëÿíêîþ ñòðàâîõîäó, Ëåéáëåí³âñüêó (ñòðàâîõ³äíó) çàëîçó, ãåïàòîïàíêðåàñ (òðàâíó çàëîçó, ïå÷³íêó). Äëÿ àíàë³çó âèêîðèñòîâóâà- ëè ñóêóïíèé ìàòåð³àë, ÿêèé ñêëàäàâñÿ ç îðãàí³â 6—10 îñîáèí ç ð³âíîþ ê³ëüê³ñòþ ñàìö³â ³ ñàìîê. Àíàë³ç ïðîòå¿íàç çä³éñíþâàëè ìåòîäîì åëåêòðîôîðåçó â ïîë³àêðè- ëàì³äíîìó ãåë³, ùî äàëî ìîæëèâ³ñòü âèçíà÷àòè ³çîçèìíèé ñêëàä òà àê- òèâí³ñòü îêðåìèõ ìíîæèííèõ ôîðì äîñë³äæóâàíèõ ôåðìåíò³â. Òêàíèíè ãî- ìîãåí³çóâàëè ó áóôåð³ äëÿ åêñòðàêö³¿ òàêîãî ñêëàäó: 0,05 Ì Òðèñ-HCl (ðÍ 6,8), 0,01% äèò³îòðå³òîë, 0,01% àñêîðá³íîâà êèñëîòà, 0,01% íàòð³ºâà ñ³ëü ÅÄÒÀ, 1% òðèòîí Õ-100. Ñï³ââ³äíîøåííÿ òêàíèíà (ìã) : áóôåð (ìêë) ñòàíîâè- ëî 1 : 1. Ïðîáè ðîçòèðàëè áåçïîñåðåäíüî ó öåíòðèôóæíèõ ïðîá³ðêàõ, 3—5 ðàç³â ï³ääàâàëè çàìîðîæóâàííþ-â³äòàþâàííþ, ï³ñëÿ ÷îãî öåíòðèôóãóâàëè íà õîëîä³ (+4oÑ) 20 õâ ïðè 10 000 g. Äî íàäîñàäîâî¿ ð³äèíè äîäàâàëè òðè îá’ºìè îõîëîäæåíîãî (-28oÑ) àöåòîíó. Á³ëêîâèé îñàä îòðèìóâàëè öåíòðèôó- ãóâàííÿì çà âèùåçàçíà÷åíèõ óìîâ ³ îáðîáëÿëè ïðîòÿãîì íî÷³ îõîëîäæåíèì áóòàíîëîì ïðè +2—+4oÑ. Ï³ñëÿ öåíòðèôóãóâàííÿ ìàòåð³àë âèñóøóâàëè äåê³ëüêà ä³á ïðè -28oÑ, à ïîò³ì ïðè ê³ìíàòí³é òåìïåðàòóð³ 2—4 ãîä. Îñàä ðîç- ÷èíÿëè ó ñï³ââ³äíîøåíí³ 1 : 1 (ìã òêàíèíè : ìêë ðîç÷èíó) ó áóôåð³ äëÿ åêñò- ðàêö³¿ ç äîäàâàííÿì 15% öóêðîçè ³ íåâåëèêî¿ ê³ëüêîñò³ áðîìôåíîëîâîãî ñè- 91 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ íüîãî. Îòðèìàíèé ðîç÷èí âèêîðèñòîâóâàëè äëÿ åëåêòðîôîðåçó. Îñê³ëüêè â ð³çíèõ òêàíèíàõ áóëà íåîäíàêîâà ôåðìåíòàòèâíà àêòèâí³ñòü, â ãåëü âíîñèëè åêñïåðèìåíòàëüíî âèçíà÷åíó ê³ëüê³ñòü âèõ³äíîãî ìàòåð³àëó, çà ÿêî¿ ìîæíà áóëî âèÿâëÿòè ôåðìåíò â åëåêòðîôîðåãðàìàõ ìàëî àêòèâíèõ ïðîá. Ê³ëüê³ñòü âçÿòîãî äëÿ àíàë³çó ìàòåð³àëó áóëà åêâ³âàëåíòíîþ 10 ìë (ñëèíí³ çàëîçè), 15 (îðãàí Ëåéáëåéíà ³ ìàëèíîâà çàëîçà) òà 25 ìã (Ëåéáëåéí³âñüêà çàëîçà ³ ãåïà- òîïàíêðåàñ) òêàíèíè. Ðîçïîä³ë á³ëê³â çä³éñíþâàëè â ñèñòåì³ Äåâ³ñà [23] ó 10%-ìó ïîë³àêðè- ëàì³äíîìó ãåë³. Çä³éñíþâàëè âåðòèêàëüíèé íàòèâíèé åëåêòðîôîðåç ïðè ê³ìíàòí³é òåìïåðàòóð³ â ïëàñòèíàõ ãåëþ ðîçì³ðîì 130�110�1 ìì â àïàðàò³ VE-4M (Õåë³êîí, Ðîñ³ÿ). Ñïî÷àòêó åëåêòðîôîðåç ïðîâàäèëè ïðè 15 ìÀ ³ 110 Â, ïîêè ôðîíò áàðâíèêà íå ïåðåì³ùóâàâñÿ â³ä ñòàðòó íà â³äñòàíü á³ëÿ òðåòèíè ãåëþ, ï³ñëÿ ÷îãî ñèëó òà íàïðóãó ñòðóìó çá³ëüøóâàëè äî 30 ìÀ ³ 260 Â. Çàãàëüíà òðèâàë³ñòü åëåêòðîôîðåçó ñêëàäàëà 4—5 ãîä. Ïðîòåîë³òè÷íó àêòèâí³ñòü âèçíà÷àëè çà ðîçùåïëåííÿì æåëàòèíó. Äëÿ öüîãî ïðè ïîë³ìåðèçàö³¿ ó ðîç÷èí ìîíîìåð³â ïîë³àêðèëàì³äó äîäàâàëè æåëà- òèí äî ê³íöåâî¿ êîíöåíòðàö³¿ 0,1% [27]. Ïî çàâåðøåíí³ åëåêòðîôîðåçó ãåë³ ³íêóáóâàëè ó â³äïîâ³äíîìó áóôåð³ ïðè 26—28oÑ ïðîòÿãîì 18 ãîä. Îñê³ëüêè äëÿ á³ëüøîñò³ â³äîìèõ ïðîòå¿íàç éîíè êàëüö³þ º àêòèâàòîðàìè, ó ñåðåäîâè- ùå äîäàâàëè CaCl2 äî ê³íöåâî¿ êîíöåíòðàö³¿ 1 ìÌ. Ï³ñëÿ ³íêóáàö³¿ ãåë³ ôàð- áóâàëè ðîç÷èíîì êóìàñ³ R 250 [11]. Ó ì³ñöÿõ çíàõîäæåííÿ ïðîòå¿íàç ñïîñ- 92 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 1. Ä³ëÿíêè òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè, âèêîðèñòàíí³ äëÿ àíàë³çó: 1 — ñëèíí³ çàëîçè; 2 — äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çàëîçè; 3 — îðãàí Ëåéáëåéíà ç³ ñòðàâîõîäîì; 4 — ìàëèíîâà çàëîçà ç³ ñòðàâîõîäîì; 5 — Ëåé- áëåéí³âñüêà çàëîçà; 6 — ãåïàòîïàíêðåàñ; à — ðîçêðèòà ìàíò³éíà ïîðîæíèíà, ìàíò³ÿ â³äãîðíóòà ó áîêè; á — âèäàëåíà Ëåéáëåéí³âñüêà çàëîçà. òåð³ãàëîñü ïîñëàáëåííÿ àáî â³äñóòí³ñòü çàáàðâëåííÿ: îòðèìóâàëè òàê çâàíèé æåëàòèíàçíèé ïðîô³ëü. Äëÿ âñòàíîâëåííÿ ïðèðîäè ïðîòå¿íàç âèêîðèñòîâóâàëè ð³çí³ ³íã³á³òîðè, ÿê³ äîäàâàëè ó áóôåð äëÿ ³íêóáàö³¿ ãåë³â. Çà êèñëî¿ ðåàêö³¿ ñåðåäîâèùà (ðÍ 4,6) çàñòîñîâóâàëè òàê³ ³íã³á³òîðè: ïðîòè ìåòàëîïðîòå¿íàç — ÅÄÒÀ (10 ìÌ) òà 1,10-ôåíàíòðîë³í (1 ìÌ), äëÿ âïëèâó íà ã³ñòèäèíîâ³ òà àñïàðàã³íîâ³ ïðîòå¿íà- çè áðàëè ãóàí³äèí·HCl (6,3 ìÌ). Äëÿ ä³¿ íà öèñòå¿íîâ³ ïðîòå¿íàçè âèêîðèñòî- âóâàëè äâ³ êîìá³íàö³¿ öèñòå¿íó ³ ÅÄÒÀ: ñòèìóëþþ÷ó (25 ìÌ öèñòå¿íó ³ 1 ìÌ ÅÄÒÀ) [29] ³ ãàëüìóþ÷ó — ç ï³äâèùåíèì âì³ñòîì àãåíòà, ùî çâ’ÿçóº êàò³îíè (25 ìÌ öèñòå¿íó ³ 10 ìÌ ÅÄÒÀ). Ó ñëàáîëóæíîìó ñåðåäîâèù³ (ðÍ 7,8) âèêî- ðèñòîâóâàëè ³íã³á³òîðè òðèïñèíîïîä³áíèõ ïðîòå¿íàç: ñîºâèé ³íã³á³òîð òðèï- ñèíó Êóí³òöà òà îâîìóêî¿ä ó ê³íöåâ³é êîíöåíòðàö³¿ 0,5 ìã/ìë. Åëåêòðîôîðåãðàìè äîêóìåíòóâàëè çà äîïîìîãîþ ñêàíóþ÷î¿ ïðèñòàâêè äî êîìï’þòåðà ³ çä³éñíþâàëè ê³ëüê³ñíèé àíàë³ç åëåêòðîôîðåãðàì çà êîìï’þ- òåðíîþ ïðîãðàìîþ ÀíàÈÑ (Ì. À. Ïîäæàðñêèé, Ä. Ã. Ðèáàëêà, podzhars- ky@ukr.net). Ôåðìåíòàòèâíó àêòèâí³ñòü îö³íþâàëè çà ïëîùåþ ï³ê³â íà äåí- ñèòîãðàìàõ â³äïîâ³äíèõ ìíîæèííèõ ôîðì ³ ïåðåðàõîâóâàëè â óìîâíèõ îäè- íèöÿõ íà 1 ìã ñèðî¿ òêàíèíè. Ðåçóëüòàòè äîñë³äæåíü îáðîáëÿëè ç âèêîðè- ñòàííÿì ïàêåòó ïðîãðàì Microsoft Excel. Ïåðåâ³ðêó ðîçïîä³ëó îòðèìàíèõ äà- íèõ íà íîðìàëüí³ñòü çä³éñíþâàëè çà äîïîìîãîþ êðèòåð³þ Øàï³ðî — Ó³ëêà [1]. Äîñòîâ³ðí³ñòü â³äì³ííîñòåé âñòàíîâëþâàëè â³äïîâ³äíî äî t-êðèòåð³þ Ñò’þäåíòà. Ðåçóëüòàòè äîñë³äæåíü òà ¿õ îáãîâîðåííÿ Âðàõîâóþ÷è ìàéæå ïîâíó â³äñóòí³ñòü ³íôîðìàö³¿ ùîäî ïðîòåîë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â ðàïàíè, àíàë³ç ïðîòå¿íàç çä³éñíþâàëè ïðè çíà÷åííÿõ ðÍ, çà ÿêèõ ìîæíà âèÿâèòè íàéá³ëüø ðîçïîâñþäæåí³ ôåðìåíòè, ùî ã³äðîë³çóþòü á³ëêè, òîáòî ïðè ðÍ 7,8 òà 4,6. Òèïîâ³ åëåêòðîôîðåãðàìè ïðåäñòàâëåíî íà ðèñóíêó 2. Ê³ëüê³ñíà îáðîáêà ïîêàçàëà, ùî íàéá³ëüø âèñîêîþ ïèòîìîþ ïðîòå¿íà- çíîþ àêòèâí³ñòþ ïðè îáîõ çíà÷åííÿõ ðÍ ñåðåäîâèùà õàðàêòåðèçóâàëèñü ñëèíí³ çàëîçè (ðèñ. 3). Íàÿâí³ñòü ïðîòå¿íàç ó ñëèííèõ çàëîçàõ ðàïàíè ðàí³øå áóëî ïîêàçàíî ã³ñòîõ³ì³÷íèìè ìåòîäàìè [20], àëå ïîð³âíÿëüíèé àíàë³ç ã³äðîë³òè÷íî¿ àêòèâ- íîñò³ â ð³çíèõ çàëîçèñòèõ ñòðóêòóðàõ òðàâíîãî òðàêòó ðàïàíè íàìè ïðîâåäå- íî âïåðøå. Ïðèñóòí³ñòü ìàêñèìàëüíî¿ ïðîòå¿íàçíî¿ àêòèâíîñò³ ó ïåðåäí³õ â³ää³ëàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè ïðèíöèïîâî â³äð³çíÿº öèõ ìîëþñê³â â³ä õðåáåòíèõ, ó ÿêèõ ïðîöåñ òðàâëåííÿ á³ëê³â â îñíîâíîìó â³äáóâàºòüñÿ ó ñå- ðåäí³õ ä³ëÿíêàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè. Çàçíà÷åí³ îñîáëèâîñò³ â ðîçïîä³ë³ ïðîòå- îë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â ó õèæèõ ÷åðåâîíîãèõ ìîëþñê³â çáëèæóº ¿õ ³ç ïàâóêàìè òà äåÿêèìè õèæèìè êîìàõàìè, ÿê³, îêð³ì îòðóòè, ââîäÿòü ó ò³ëî æåðòâè òà- êîæ íàá³ð ã³äðîëàç, ùî ñïðèÿº éîãî ðîçì’ÿêøåííþ [2]. Îêð³ì â³äì³ííîñòåé ïî ñóìàðí³é ã³äðîë³òè÷í³é àêòèâíîñò³, äîñë³äæóâàí³ çàëîçèñò³ ñòðóêòóðè òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè â³äð³çíÿþòüñÿ òàêîæ ÿê³ñíèì 93 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ ñêëàäîì ïðîòå¿íàç ³ ðîçïîä³ëîì ¿õí³õ ³çîôîðì â åëåêòðîôîðåòè÷íèõ ñïåêò- ðàõ. Îòðèìàí³ äàí³ íàâåäåíî ó òàáëèöÿõ 1 ³ 2. Ç íàâåäåíèõ äàíèõ âèäíî, ùî ñëèíí³ çàëîçè â³äð³çíÿþòüñÿ íå ëèøå âèñî- êèì ð³âíåì ïðîòå¿íàçíî¿ àêòèâíîñò³, à é íàéá³ëüøîþ ê³ëüê³ñòþ ìîëåêóëÿð- íèõ ôîðì ö³º¿ ãðóïè ôåðìåíò³â. Íàéíèæ÷à ïèòîìà ïðîòåîë³òè÷íà àêòèâí³ñòü ³ ì³í³ìàëüíà ê³ëüê³ñòü ³çîôîðì âèÿâëÿºòüñÿ ó Ëåéáëåéí³âñüê³é çàëîç³ òà ãåïà- òîïàíêðåàñ³. Â³äîìî [4], ùî ó äâîñòóëêîâèõ ìîëþñê³â ïåðåòðàâëþâàííÿ ïðî- òå¿í³â çä³éñíþºòüñÿ ãîëîâíèì ÷èíîì ó ãåïàòîïàíêðåàñ³ øëÿõîì 94 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 2. Æåëàòèíàçí³ ïðîô³ë³ åêñòðàêò³â äîñë³äæóâàíèõ ä³ëÿíîê òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè: à, â — ïðè çíà- ÷åíí³ ðÍ 4,6; á, ã — ïðè ðÍ 7,8; (à, á — åëåêòðîôîðåãðàìè; â, ã — ¿õí³ ñõåìè); 1 — ñëèíí³ çàëîçè; 2 — äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çàëîçè; 3 — îðãàí Ëåéáëåéíà ç³ ñòðàâîõîäîì; 4 — ìàëèíîâà çàëîçà ç³ ñòðàâîõîäîì; 5 — Ëåéáëåéí³âñüêà çàëîçà; 6 — ãåïàòîïàíêðåàñ; ê³ëüê³ñòü âíåñåíîãî ðîç÷èíó åêâ³âàëåíòíî: 1, 2 — 10 ìã; 3, 4 — 15 ìã; 5, 6 — 25 ìã òêàíèíè. âíóòð³øíüîêë³òèííîãî òðàâëåííÿ çà äîïîìîãîþ àìåáî¿äíèõ êë³òèí. Íà ï³äñòàâ³ îòðèìàíèõ äàíèõ ìîæíà ïðèïóñòèòè, ùî ó ðàïàí ³ç ¿õ ñêëàäíî äèôå- ðåíö³éîâàíîþ òðàâíîþ ñèñòåìîþ ã³äðîë³ç á³ëê³â ïî÷èíàºòüñÿ âæå çà ìåæà- ìè òà ó ïåðåäíüî¿ ÷àñòèíè òðàâíîãî òðàêòó â ïðîöåñàõ ïîçàêèøêîâîãî ³ ïî- ðîæíèííîãî òðàâëåííÿ. Â íàñòóïíèõ â³ää³ëàõ ïåðåðîáêà á³ëê³â, â³ðîã³äíî, â³äáóâàºòüñÿ ÿê ó ðåçóëüòàò³ ïîðîæíèííîãî òðàâëåííÿ, òàê ³ çà ðàõóíîê âíóòð³øíüîêë³òèííîãî òðàâëåííÿ. Äëÿ ç’ÿñóâàííÿ ïðèðîäè ïðîòå¿íàçíî¿ àêòèâíîñò³ áóëî çàñòîñîâàíî ³íã³á³òîðíèé àíàë³ç. Îñê³ëüêè â ñëèííèõ çàëîçàõ ïðîòå¿íàçè ìàþòü íàéá³ëüøó ïèòîìó àêòèâí³ñòü ³ ð³çíîìàí³òí³ñòü òà ïåðåâàæíà ÷àñòêà ïðîòå- îë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â ðàïàíè çîñåðåäæåíà â öèõ çàëîçàõ, ðåçóëüòàòè ³íã³á³òîðíîãî àíàë³çó ïðåäñòàâëåí³ ñàìå äëÿ öèõ ñòðóêòóð. Ó ñëèííèõ çàëîçàõ â îñíîâíîìó ïðåäñòàâëåí³ ìåòàëîïðîòå¿íàçè, îñê³ëüêè 1,10-ôåíàíòðîë³í òà ÅÄÒÀ ïîâí³ñòþ ïðèãí³÷óþòü ã³äðîë³òè÷íó àêòèâí³ñòü âñ³õ ³çîôîðì ïðîòå¿íàç (ðèñ. 4). Ã³äðîõëîðèä ãóàí³äèíó íå ïîâí³ñòþ, àëå äî- ñòàòíüî ñèëüíî âïëèâàº íà ïðîòåîë³òè÷íó àêòèâí³ñòü. Ïðè öüîìó â³í ïîâí³ñòþ ãàëüìóº á³ëüø ðóõëèâ³ ôîðìè ôåðìåíòó (ç â³äíîñíîþ åëåêòðîôî- ðåòè÷íîþ ðóõëèâ³ñòþ Rf âèùå 0,10) ³ ÷àñòêîâî (ïðèáëèçíî íà 50%) ïðèãí³÷óº àêòèâí³ñòü ó ìàëîðóõëèâ³é çîí³ (Rf äî 0,10). Ãóàí³äèí º ñèëüíîþ îñíîâîþ òà ìîæå êîíêóðóâàòè çà âîäíåâ³ çâ’ÿçêè ç éîíîãåííèìè ðàäèêàëàìè àì³íîêèñ- ëîò á³ëê³â, âíàñë³äîê ÷îãî â³í çäàòåí âçàºìîä³ÿòè ç ã³ñòèäèíîì òà êàðáîêñèëü- íèìè ãðóïàìè äèêàðáîíîâèõ àì³íîêèñëîò [13, 17]. Íà ï³äñòàâ³ âèÿâëåíî¿ ³íã³áóþ÷î¿ ä³¿ ãóàí³äèíó íà ïðîòåîë³òè÷íó àêòèâí³ñòü ìîæíà ïðèïóñòèòè, ùî âêàçàí³ àì³íîêèñëîòè ó ñêëàä³ ôåðìåíò³â ìàþòü âàæëèâå çíà÷åííÿ äëÿ ïðîÿ- âó ôåðìåíòàòèâíî¿ àêòèâíîñò³ ìåòàëîïðîòå¿íàç ñëèííèõ çàëîç ðàïàíè. Íà- ÿâí³ñòü ã³ñòèäèíó, ãëþòàì³íîâî¿ àáî àñïàðàã³íîâî¿ àì³íîêèñëîò â îñíîâíîìó ìîòèâ³ àêòèâíîãî öåíòðó àáî ïîðó÷ ç íèì ïîêàçàíà äëÿ ìåòàëîïðîòå¿íàç ð³çíèõ îðãàí³çì³â [14, 16]. Öèñòå¿í íå âèÿâëÿâ ñòèìóëþþ÷î¿ ä³¿, îòæå äîñë³äæóâàí³ ïðîòå¿íàçè, éìîâ³ðíî, íå íàëåæèòü äî ò³îëîâèõ ïðîòåîë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â. Ïîâíà â³äñóòí³ñòü âïëèâó ñîºâîãî ³íã³á³òîðó òðèïñèíà òà îâîìó- 95 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 3. Âíåñîê (%) ð³çíèõ â³ää³ë³â ó çàãàëüíó ïðîòå¿íàçíó àêòèâí³ñòü òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè ïðè ðÍ 4,6 (à) òà ïðè ðÍ 7,8 (á) ó ðîçðàõóíêó íà 1 ìã ñèðî¿ ìàñè òêàíèíè: 1 — ñëèíí³ çàëîçè; 2 — äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çà- ëîçè; 3 — îðãàí Ëåéáëåéíà ç³ ñòðàâîõîäîì; 4 — ìàëèíîâà çàëîçà ç³ ñòðàâîõîäîì; 5 — Ëåéáëåéí³âñüêà çàëîçà; 6 — ãåïàòîïàíêðåàñ. êî¿äó ñâ³ä÷èòü ïðî òå, ùî âèÿâëåí³ â ñëèííèõ çàëîçàõ ðàïàíè ôåðìåíòè íå º òðèïñèíîïîä³áíèìè ïðîòå¿íàçàìè. ßê â³äîìî, äî ãðóïè ìåòàëîïðîòå¿íàç â³äíîñÿòüñÿ òàê çâàí³ ìàòðèêñí³ ìå- òàëîïðîòå¿íàçè, ÿê³ âèêîíóþòü ãîëîâíó ðîëü ó êàòàáîë³çì³ ñïîëó÷íîòêàíèí- íîãî êîìïëåêñó [16]. Îñíîâíà á³îëîã³÷íà ôóíêö³ÿ ìàòðèêñíèõ ìåòàëîïðî- òå¿íàç ïîëÿãàº ó ðóéíóâàíí³ êîìïîíåíò³â ïîçàêë³òèííîãî ìàòðèêñó [24, 26]. Âðàõîâóþ÷è çàçíà÷åí³ ôóíêö³îíàëüí³ îñîáëèâîñò³ ìåòàëîïðîòå¿íàç, íåâàæ- êî çðîçóì³òè ðîëü ¿õíüî¿ âèñîêî¿ àêòèâíîñò³ ñàìå â ñëèííèõ çàëîçàõ ðàïàíè. Òàêà âëàñòèâ³ñòü ñåêðåòó ñëèííèõ çàëîç ðàïàíè çàáåçïå÷óº íå ò³ëüêè ïåðåâà- 96 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 1. Ïîêàçíèêè ñïåêòð³â ìîëåêóëÿðíèõ ôîðì ïðîòåîë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â ó ð³çíèõ â³ää³ëàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè, ðÍ 4,6 Çíà÷åííÿ Rf Â³ää³ëè òðàâíî¿ ñèñòåìè ñëèíí³ çàëîçè äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çàëîçè îðãàí Ëåéáëåéíà ìàëèíîâà çàëîçà Ëåéáëåéí³â- ñüêà çàëîçà ãåïàòîïàí- êðåàñ Àêòèâí³ñòü 0,08—0,10 20,45 ± 3,74 1,32 ± 0,28 2,62 ± 0,61 0,00 0,00 0,00 0,14—0,16 33,36 ± 5,42 0,39 ± 0,09 4,71 ± 1,01 1,15 ± 0,30 0,35 ± 0,11 0,37 ± 0,08 0,20—0,22 10,32 ± 1,97 0,47 ± 0,11 3,35 ± 0,72 1,10 ± 0,25 0,88 ± 0,18 1,01 ± 0,23 0,26—0,28 5,04 ± 1,20 1,58 ± 0,35 4,71 ± 1,07 0,90 ± 0,18 0,00 0,00 0,50—0,52 0,00 0,00 0,00 1,71 ± 0,40 1,61 ± 0,35 2,61 ± 0,56 Âñüîãî 69,17 ± 7,87 3,76 ± 0,54 15,39 ± 1,85 4,86 ± 0,69 2,84 ± 0,49 3,99 ± 0,54 Ïèòîìà âàãà ³çîôîðì 0,08—0,10 29,57 ± 4,34 35,11 ± 5,29 17,08 ± 2,65 0,00 0,00 0,00 0,14—0,16 48,23 ± 7,41 10,37 ± 1,40 30,60 ± 4,93 23,66 ± 3,65 12,35 ± 1,78 9,27 ± 1,12 0,20—0,22 14,92 ± 2,46 12,50 ± 1,98 21,77 ± 3,12 22,63 ± 3,48 31,00 ± 4,57 25,31 ± 4,75 0,26—0,28 7,29 ± 1,01 42,02 ± 6,25 30,62 ± 4,61 18,52 ± 2,65 0,00 0,00 0,50—0,52 0,00 0,00 0,00 35,60 ± 5,19 56,69 ± 9,01 65,41 ± 9,62 Ï ð è ì ³ ò ê à. Òóò ³ â òàáë. 2: Rf — â³äíîñíà åëåêòðîôîðåòè÷íà ðóõëèâ³ñòü; àêòèâí³ñòü íàâåäåíà â óìîâíèõ îäèíèöÿõ íà 1 ìã ñèðî¿ ìàñè, ïèòîìà âàãà — ó â³äñîòêàõ â³ä çàãàëüíî¿ àêòèâíîñò³. 97 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 2. Ïîêàçíèêè ñïåêòð³â ìîëåêóëÿðíèõ ôîðì ïðîòåîë³òè÷íèõ ôåðìåíò³â ó ð³çíèõ â³ää³ëàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè, ðÍ 7,8 Çíà÷åííÿ Rf Â³ää³ëè òðàâíî¿ ñèñòåìè Ñëèíí³ çàëîçè äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çàëîçè Îðãàí Ëåéáëåéíà ìàëèíîâà çàëîçà Ëåé- áëåéí³âñüêà çàëîçà ãåïàòîïàíê- ðåàñ Àêòèâí³ñòü 0,08—0,10 9,58 ± 1,46 1,42 ± 0,20 0,00 0,00 0,00 0,00 0,14—0,16 14,39 ± 2,08 3,08 ± 0,43 2,19 ± 0,32 0,23 ± 0,06 0,00 0,00 0,24—0,26 9,48 ± 1,37 4,80 ± 0,69 4,10 ± 0,63 0,75 ± 0,17 0,00 0,00 0,32—0,34 3,60 ± 0,60 4,00 ± 0,52 6,41 ± 0,98 1,04 ± 0,24 0,00 0,55 ± 0,12 0,40—0,42 0,84 ± 0,11 0,37 ± 0,06 2,67 ± 0,41 1,44 ± 0,31 0,55 ± 0,13 0,45 ± 0,10 0,50—0,52 2,00 ± 0,30 0,53 ± 0,09 5,57 ± 0,91 0,47 ± 0,10 0,50 ± 0,12 0,56 ± 0,12 0,58—0,60 2,21 ± 0,38 0,64 ± 0,10 2,07 ± 0,33 3,25 ± 0,64 0,59 ± 0,13 0,00 0,66—0,68 2,57 ± 0,39 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,74—0,76 1,39 ± 0,19 0,82 ± 0,13 0,86 ± 0,13 1,25 ± 0,26 1,38 ± 0,26 0,87 ± 0,17 0,84—0,86 0,47 ± 0,08 0,45 ± 0,07 0,00 0,00 0,00 0,00 Âñüîãî 46,54 ± 5,00 16,12 ± 2,12 23,88 ± 3,12 8,44 ± 1,09 3,02 ± 0,50 2,43 ± 0,46 Ïèòîìà âàãà ³çîôîðì 0,08—0,10 20,59 ± 3,96 8,80 ± 1,50 0,00 0,00 0,00 0,00 0,14—0,16 30,90 ± 6,00 19,11 ± 3,63 9,18 ± 1,47 2,73 ± 0,38 0,00 0,00 0,24—0,26 20,39 ± 3,60 29,80 ± 4,05 17,18 ± 2,21 8,90 ± 1,22 0,00 0,00 0,32—0,34 7,73 ± 1,42 24,84 ± 3,75 26,85 ± 3,64 12,34 ± 1,83 0,00 22,63 ± 3,12 0,40—0,42 1,81 ± 0,34 2,32 ± 0,41 11,20 ± 1,55 17,08 ± 2,20 18,21 ± 2,13 18,52 ± 2,56 0,50—0,52 4,29 ± 0,78 3,28 ± 0,61 23,34 ± 3,61 5,58 ± 0,72 16,56 ± 2,12 23,05 ± 3,22 ðþâàííÿ ïðîòå¿í³â ó òðàâí³é ñèñòåì³, àëå é øëÿõîì äåñòðóêö³¿ ì³æêë³òèííî- ãî ìàòð³êñó ñïðèÿº ðîçì’ÿêøåííþ ò³ëà æåðòâè, ùî çíà÷íî ïîëåãøóº ôóíê- ö³îíóâàííÿ ðàäóëÿðíîãî àïàðàòó õèæîãî ÷åðåâîíîãîãî ìîëþñêà. Öÿ îñîá- ëèâ³ñòü ñåêðåö³¿, éìîâ³ðíî, ìîæå ñëóãóâàòè îäí³ºþ ç ïðè÷èí íåíàæåðëèâîñò³ ðàïàíè. Òàê, â ëàáîðàòîðíèõ óìîâàõ áóëî ïîêàçàíî, ùî ðàïàíà çà äîáó ìîæå ç’¿ñòè ê³ëüê³ñòü ¿æ³, ùî ñêëàäàº â³ä ¿¿ âëàñíî¿ ìàñè â³ä 0,8% (äëÿ êðóïíèõ îñî- áèí ç äîâæèíîþ ðàêîâèíè ïîíàä 101 ìì) äî 3,6% (äëÿ äð³áí³øèõ îñîáèí ðîçì³ðîì 60—100 ìì) [25]. Çäàòí³ñòü ðàïàíè äî ñïîæèâàííÿ âåëèêî¿ ê³ëüêîñò³ ¿æ³ áóëî ï³äòâåðäæåíî ³ â ïîëüîâèõ äîñë³äæåííÿõ [8]. Òàêèì ÷èíîì, ñëèíí³ çàëîçè ðàïàíè ñåêðåòóþòü íå ëèøå ñëèç, ùî çàáåçïå÷óº ôîðìóâàííÿ õàð÷îâî¿ ãðóäêè, àëå ³ ôåðìåíòè äëÿ ïåðåâàðþâàííÿ ¿æ³, ïðîòå¿íàçè çîêðå- ìà. 98 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ Çíà÷åííÿ Rf Â³ää³ëè òðàâíî¿ ñèñòåìè Ñëèíí³ çàëîçè äîäàòêîâ³ ñëèíí³ çàëîçè Îðãàí Ëåéáëåéíà ìàëèíîâà çàëîçà Ëåé- áëåéí³âñüêà çàëîçà ãåïàòîïàíê- ðåàñ 0,58—0,60 4,75 ± 0,93 3,98 ± 0,66 8,66 ± 1,11 38,55 ± 5,38 19,54 ± 2,97 0,00 0,66—0,68 5,52 ± 1,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,74—0,76 2,29 ± 0,44 5,10 ± 0,93 3,60 ± 0,57 14,83 ± 2,18 45,70 ± 7,26 35,80 ± 5,17 0,84—0,86 1,01 ± 0,21 2,78 ± 0,61 0,00 0,00 0,00 0,00 Ïðîäîâæåííÿ òàáë. 2 4. Âïëèâ ð³çíèõ ³íã³á³òîð³â íà ïðîÿâ ïðîòåîë³òè÷íî¿ àêòèâíîñò³ â ñëèííèõ çàëîçàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðà- ïàíè: 1 — 1,10-ôåíàíòðîë³í; 2 — 10 ìÌ ÅÄÒÀ; 3 — 25 ìÌ öèñòå¿íó+1 ìÌ ÅÄÒÀ; 4 — 25 ìÌ öèñ- òå¿íó+10 ìÌ ÅÄÒÀ; 5 — 6,3 ìÌ ãóàí³ä³íó ã³äðîõëîð³äó; 6 — 0,5 ìã/ìë ñîºâîãî ³íã³á³òîðó òðèïñèíó; 7 — 0,5 ìã/ìë îâîìóêî¿äó; ïîêàçàíî çàëèøêîâó àêòèâí³ñòü ó â³äñîòêàõ äî êîíòðîëþ, ïðèéíÿòîãî çà 100%. Âèñíîâêè Ïðîâåäåí³ äîñë³äæåííÿ ïîêàçàëè, ùî ó âñ³õ çàëîçèñòèõ ñòðóêòóðàõ òðàâíî¿ ñè- ñòåìè ðàïàíè íàÿâíà ïðîòåîë³òè÷íà àêòèâí³ñòü. Îäíàê âîíà ðîçïîä³ëåíà íåð³âíîì³ðíî. Íàéá³ëüø âèñîêó ïèòîìó àêòèâí³ñòü (íà îäèíèöþ ñèðî¿ ìàñè òêàíè- íè) ³ á³ëüøó ê³ëüê³ñòü ìîëåêóëÿðíèõ ôîðì ïðîòº¿íàç âèÿâëåíî â ñëèííèõ çàëîçàõ, íàéìåíøèé ð³âåíü ïèòîìî¿ àêòèâíîñò³ ³ ìåíøó ê³ëüê³ñòü ³çîôîðì ôåðìåíòó — â ãåïàòîïàíêðåàñ³ òà Ëåéáëåéí³âñüê³é çàëîç³. ²íãèá³òîðíèé àíàë³ç ïîêàçàâ, ùî ïðîòå- îë³òè÷íà àêòèâí³ñòü â ñëèííèõ çàëîçàõ ðàïàíè ïîâ’ÿçàíà â îñíîâíîìó ç ìåòàëîïðî- òå¿íàçàìè. Ìîæëèâî, ùî ìåòàëîïðîòå¿íàçè ñëèííèõ çàëîç ðàïàíè íå ëèøå áåðóòü ó÷àñòü ó ïåðåâàðþâàíí³ á³ëê³â, à é ñïðèÿþòü ðîçì’ÿêøåííþ ò³ëà æåðòâè, ùî ïî- ëåãøóº ðîáîòó ðàäóëÿðíîãî àïàðàòó õèæàêà. Âèâ÷àëè ðîçïîä³ë ïðîòå³íàçíî¿ àêòèâíîñò³ â ð³çíèõ çàëîçèñòèõ ñòðóêòóðàõ òðàâíî¿ ñèñòåìè ðàïàíè. Ïîêàçàíî, ùî ìàêñèìàëüíà ïèòîìà (íà îäèíèöþ ìàñè òêà- íèíè) ïðîòåîë³òè÷íà àêòèâí³ñòü ³ íàéá³ëüøà ð³çíîìàí³òí³ñòü ìîëåêóëÿðíèõ ôîðì ôåðìåíòó âèÿâëÿþòüñÿ â ñëèííèõ çàëîçàõ; ó ãåïàòîïàíêðåàñ³ ³ Ëåéáëåéíîâñüê³é çà- ëîç³ àêòèâí³ñòü ì³í³ìàëüíà. Çà äîïîìîãîþ ³íã³á³òîð³â âñòàíîâëåíî, ùî ïðîòå- îë³òè÷íà àêòèâí³ñòü ñëèííèõ çàëîç îáóìîâëåíà â îñíîâíîìó ìåòàëëîïðîòå³íàçàìè. The distribution of proteinase activity in various glandular structures of the digestive system rapa whelks were investigated. It was shown that the maximum proteolytic activity and the greatest variety of molecular forms of the enzyme were in the salivary glands. Prote- olytic activity was the minimal in hepatopancreas and Leybleynovskiy gland. The use of in- hibitors was established that the proteolytic activity of the salivary glands caused mainly by metalloproteinases. ** 1. Àòðàìåíòîâà Ë.Î., Óòºâñüêà Î.Ì. Ñòàòèñòè÷í³ ìåòîäè â á³îëîã³¿. — Õàðê³â: Âèä-âî Õàðê. óí-òó, 2007. — 288 ñ. 2. Áàðíñ Ð., Êåéëîó Ï., Îëèâ Ï., Ãîëäèíã Ä. Áåñïîçâîíî÷íûå. Íîâûé îáîá- ùåííûé ïîäõîä: Ïåð. ñ àíãë. — Ì.: Ìèð, 1992. — 583 ñ. 3. Ãàåâñêàÿ À.Â. Ïàðàçèòû, áîëåçíè è âðåäèòåëè ìèäèé (Mytilus, Mytilidae). II. Ìîëëþñêè (Mollusca). — Ñåâàñòîïîëü: ÝÊÎÑÈ-Ãèäðîôèçèêà, 2006. — 100 ñ. 4. Æèçíü æèâîòíûõ. Â 7 ò. Ò. 2 / Ïîä ðåä. Ð. Ê. Ïàñòåðíàêà. — 2-å èçä., ïå- ðåðàá. — Ì.: Ïðîñâåùåíèå, 1988. — 447 ñ. 5. Êàíòîð Þ.È. Áèîëîãè÷åñêèå è èñòîðè÷åñêèå òàéíû ðàïàíû // Ïðèðîäà. — 2003. — ¹ 5. — Ñ. 32—34. 6. Êàíöåðîâà Í.Ï. Ñà2+-çàâèñèìûå ïðîòåîëèòè÷åñêèå ôåðìåíòû íåêîòî- ðûõ âîäíûõ áåñïîçâîíî÷íûõ è ðûá: Àâòîðåô. äèñ. … êàíä. áèîë. íàóê. — Ïåòðîçàâîäñê, 2011. — 23 ñ. 7. Êîíèí Ä.Í. Èçó÷åíèå êîìïëåêñà ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðåíòîâ ïðè âîç- äåéñòâèè òîêñèêàíòîâ ðàçëè÷íîé õèìè÷åñêîé ñòðóêòóðû â ïå÷åíè æèâî- ðîäêè ðå÷íîé: Àâòîðåô. äèñ. … êàíä. áèîë. íàóê. — Ì., 2011. — 21 ñ. 99 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 8. Êóðàêèí À.Ï., Ãîâîðèí È.À. Èíòåíñèâíîñòü ïîòðåáëåíèÿ ìèäèé ðàïàíîé Rapana venosa â ñåâåðî-çàïàäíîé ÷àñòè ×åðíîãî ìîðÿ // Ãèäðîáèîë. æóðí. — 2011. — Ò. 47, ¹ 4. — Ñ. 15—22. 9. Ëèòâèíîâà Î.À. Ðàçðàáîòêà òåõíîëîãèè ôåðìåíòíîãî ïðåïàðàòà èç ìîë- ëþñêà äðåéññåíà (Dreissena polymorpha Pollas): Àâòîðåô. äèñ. … êàíä. òåõí. íàóê. — Êàëèíèíãðàä, 2009. — 26 ñ. 10. Ìèõàéëîâ Â.Â., Ëèòâèíåíêî Í.Ì. Îñîáåííîñòè ðàñïðåäåëåíèÿ è çàïàñû ðàïàíû — Rapana thomassiana âîçëå Êðûìñêîãî ïîáåðåæüÿ Êåð÷åíñêîãî ïðîëèâà: Òåç. äîêë. ìåæäóíàð. ñåìèíàðà, Ìóðìàíñê, 19—21 ìàðòà 2003 ã. — Ìóðìàíñê: ÌÌÁÈ ÊÍÖ ÐÀÍ, 2003. — Ñ. 54—56. 11. Îñòåðìàí Ë. À. Ìåòîäû èññëåäîâàíèÿ áåëêîâ è íóêëåèíîâûõ êèñëîò: Ýëåêòðîôîðåç è óëüòðàöåíòðèôóãèðîâàíèå (ïðàêòè÷åñêîå ïîñîáèå). — Ì.: Íàóêà, 1981. — 288 ñ. 12. Ïèâíåíêî Ò.Í. Ñðàâíèòåëüíûå èññëåäîâàíèÿ ïàíêðåàòè÷åñêèõ ñåðèíî- âûõ ïðîòåèíàç ãèäðîáèîíòîâ Òèõîãî îêåàíà: Àâòîðåô. äèñ. … äîêò. áèîë. íàóê. — Âëàäèâîñòîê, 1998. — 41 ñ. 13. Ðåçíèêîâ Â. À. Õèìèÿ àçîòñîäåðæàùèõ îðãàíè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé: Ó÷åá. ïîñîáèå. — Íîâîñèáèðñê: Èçä-âî Íîâîñèá. óí-òà, 2006. — 130 ñ. 14. Ðóäàêîâà Í.Ë. Íîâàÿ ñåêðåòèðóåìàÿ ìåòàëëîýíäîïåïòèäàçà Bacillus inter- medius: Àâòîðåô. äèñ. … êàíä. áèîë. íàóê — Êàçàíü, 2010. — 24 ñ. 15. Ñàåíêî Å.Ì. Äèíàìèêà áèîõèìè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé òêàíåé ðàïàíû (Ra- pana thomasiana) â ðàçëè÷íûå ïåðèîäû ãîäîâîãî öèêëà // Âîïð. ðûáî- ëîâñòâà. — 2008. — Ò. 9, ¹ 4 (36). — Ñ. 788—796. 16. Ñîëîâüåâà Í.È. Îñíîâíûå ìåòàëëîïðîòåèíàçû ñîåäèíèòåëüíî-òêàííîãî ìàòðèêñà // Áèîîðãàíè÷åñêàÿ õèìèÿ. — 1994. — Ò. 20, ¹ 2. — Ñ. 143—152. 17. Ñèðîòêèí Â.À. Èçáðàííûå ãëàâû ê ëåêöèîííîìó êóðñó «Áèîôèçè÷åñêàÿ õèìèÿ». — Êàçàíü: Èçä-âî Êàçàí. óí-òà, 2011. — 51 ñ. 18. Ñòóäåíèêèíà Å.È., Ôðîëåíêî Ë.Í. Õàðàêòåðèñòèêà è çàïàñ Rapana tho- massiana â ñåâåðî-âîñòî÷íîé ÷àñòè ×åðíîãî ìîðÿ: Òåç. äîêë.VI Âñåðîñ. êîíô. ïî ïðîìûñë. áåñïîçâîíî÷íûì, Êàëèíèíãðàä (ïîñ. Ëåñíîå), 3—6 ñåíò. 2002 ã. — Ì.: ÂÍÈÐÎ, 2002. — Ñ. 177—188. 19. Õèìè÷åñêèé ñîñòàâ ïèùåâûõ ïðîäóêòîâ. Êí. 2: Ñïðàâî÷íûå òàáëèöû ñî- äåðæàíèÿ àìèíîêèñëîò, æèðíûõ êèñëîò, âèòàìèíîâ, ìàêðî- è ìèêðîýëå- ìåíòîâ, îðãàíè÷åñêèõ êèñëîò è óãëåâîäîâ / Ïîä ðåä. È. Ì. Ñêóðèõèíà è Ì. Í. Âîëãàðåâà. — 2-å èçä., ïåðåðàá. è äîï. — Ì.: Àãðîïðîìèçäàò, 1987. — 360 ñ. 20. ×óõ÷èí Â.Ä. Ôóíêöèîíàëüíàÿ ìîðôîëîãèÿ ðàïàíû. — Êèåâ: Íàóê. äóìêà, 1970. — 138 ñ. 21. ×óõ÷èí Â.Ä. Ýêîëîãèÿ áðþõîíîãèõ ìîëëþñêîâ ×åðíîãî ìîðÿ. — Êèåâ: Íàóê. äóìêà, 1984. — 176 ñ. 22. Øàäðèí Í.Â., Àôàíàñîâà Ò.À. Ïèòàíèå è ðàñïðåäåëåíèå Rapana venosa (Vallenciennes, 1846) â àêâàòîðèè Îïóêñêîãî çàïîâåäíèêà (Âîñòî÷íûé Êðûì, ×åðíîå ìîðå) // Ìîð. åêîë. æóðí. — 2009. — Ò. 8, ¹ 2. — Ñ. 24. 23. Davis B.I. Disc elektrophoresis. 2. Method and application to human serum proteins // Ann. New York Acad. Sci. — 1964. — Vol. 121, N 2. — P. 404—427. 100 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ 24. Deryugina E.I., Quigley J.P. Pleiotropic roles of matrix metalloproteinases in tumor angiogenesis: contrasting, overlapping and compensatory functions // Biochim. Biophys. Acta. — 2010. — Vol. 1803, N l. — P. l03—120. 25. International Council for the Exploration of the Sea. Alien Species Alert: Ra- pana Venosa (veined whelk)/ Ed. by R. Mann, A. Occhipinti, J. M. Harding. — ICES Cooperative Research Report. — 2004. — N 264. — 14 p. 26. Nagase H., Woessner J. Matrix Metalloproteinases. // J. Biol. Chem. — 1999. — Vol. 274, N 31. — Ð. 21491—21494. 27. Pena L.B., Tomaro M.L., Gallego S.M. Effect of different metals on protease activity in sunflower cotyledons // Electronic J. of Biotechnology. — 2006. — Vol. 9, I. 3. — P. 258—262. http://www.ejbiotechnology.info/con- tent/vol9/issue3/full/18/ 28. Savini D., Occhipinti-Ambrogi A. Consumption rates and prey preference of the invasive gastropod Rapana venosa in the Northern Adriatic Sea // Hel- gol. Mar. Res. — 2006. — Vol. 60. — P. 153—159. 29. Sgardieri V.G., Gupte S.M., Kramer D.E., Whitaker J.R. Ficus enzymes. I. Se- paration of the proteolytic enzymes of Ficus carica and Ficus glabrata latices // J. Biol. Chem. — 1964. — Vol. 239, N 7. — P. 2170—2177. 30. Zolotarev V. The Black Sea ecosystem changes related to the introduction of new mollusk species // PSZNJ: Mar. Ecology. — 1996. — Vol. 17 (1—3). — P. 227—236. Îäåñüêèé íàö³îíàëüíèé óí³âåðñèòåò Íàä³éøëà 24.03.14 101 Ýêîëîãè÷åñêàÿ ôèçèîëîãèÿ è áèîõèìèÿ âîäíûõ æèâîòíûõ

Особливості протеїназної активності у травному тракті рапани (Rapana venosa) з північно-західної частини Чорного моря

Репозитарії

Схожі ресурси