Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo
Проведено порівняльне дослідження цито- та генотоксичних ефектів дії різних концентрацій наночастинок феромагнетика (ФМ), постійного магнітного поля (ПМП) та їхнього поєднаного впливу через певні часові інтервали на клітини асцитної карциноми Ерліха, клітини еритроїдного ряду кісткового мозку і лімф...
Збережено в:
| Дата: | 2013 |
|---|---|
| Автори: | , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2013
|
| Назва видання: | Цитология и генетика |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/126576 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo / В.Ф. Чехун, Ю.В. Лозовська, Н.Ю. Лук'янова, Д.В. Демаш, І.М. Тодор, Л.А. Налєскіна // Цитология и генетика. — 2013. — Т. 47, № 3. — С. 60-70. — Бібліогр.: 26 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-126576 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1265762017-11-27T03:02:53Z Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo Чехун, В.Ф. Лозовська, Ю.В. Лук'янова, Н.Ю. Демаш, Д.В. Тодор, І.М. Налєскіна, Л.А. Оригинальные работы Проведено порівняльне дослідження цито- та генотоксичних ефектів дії різних концентрацій наночастинок феромагнетика (ФМ), постійного магнітного поля (ПМП) та їхнього поєднаного впливу через певні часові інтервали на клітини асцитної карциноми Ерліха, клітини еритроїдного ряду кісткового мозку і лімфоцити периферичної крові. Мікроядерний тест та метод «ДНК-комет» використано як маркери генотоксичного впливу. Встановлено, що межею незначно вираженої зміни цитоархітектоніки клітин асцитної карциноми Ерліха під впливом ФМ у концентрації 3 мг/кг. Із зростанням концентрації ФМ у пухлинних клітинах з'являються виражені ознаки блеббінгу цитоплазматичної мембрани, збільшується кількість мікроядер та «% ДНК у хвості комет» у клітинах асцитної карциноми Ерліха, клітинах кісткового мозку та лімфоцитах периферичної крові. Показано, що магнітне поле як самостійний чинник не спричиняє цито- та генотоксичні ефекти на досліджені клітини. При поєднаній дії ПМП з ФМ спостерігається феномен індукції наночастинками ФМ дії ПМП, що проявляється у зростанні сумарного впливу цих чинників на клітини. Мікроядерний тест та метод «ДНК-комет» можуть бути використані для визначення стабільності геному як пухлинних клітин, так і соматичних немалігнізованих при тестуванні генотоксичного впливу наноматеріалів при створенні векторних наносистем. Зазначено, що більшу чутливість щодо оцінки генотоксичної дії досліджених чинників має метод «ДНК-комет». Исследованы цито- и генотоксические эффекты действия наночастиц ферромагнетика (ФМ), постоянного магнитного поля (ПМП) и соединения этих агентов на клетки асцитной карциномы Эрлиха, клетки эритроидного ряда костного мозга и лимфоциты периферической крови с помощью микроядерного теста и метода «ДНК-комет». Показано, что проявления указанных эффектов связаны как с концентрацией ФМ, так и продолжительностью действия тестированных факторов. Вместе с тем установлено, что действие ПМП как самостоятель-ного агента не вызывает в исследованных клетках изменений цитоархитектоники и количества микроядер, которые ассоциируются с повреждением ДНК. При совместном применении ФМ и ПМП наблюдается феномен индукции наночастицами ФМ действия ПМП. Полученные результаты дают основание рекомендовать микроядерный тест и метод «ДНК-комет» в качестве маркеров стабильности генома при тестировании генотоксического влияния наноматериалов при создании векторных наносистем. Cyto- and genotoxic effects of nanoparticles on the basis of FM, CMF or their combination have been studied in AKE cells, BM cells of erythroid line, and peripheral blood lymphocytes with the use of MN test and «DNA-comet» assay. It has been shown that expression of mentioned effects is related to FM concentration and duration of tested agent action. It has been also demonstrated that action of CMF alone in the studied cells did not cause any changes in cell architectonics or affect MN counts which are associated with DNA damage. When FM and CMF were used in combination there has been observed the phenomenon of induction of CMF action with FM nanoparticles. The obtained results allow recommend MN test and «DNAcomet » assay as the markers of genome stability in the tests of genotoxic effects of nanomaterials for development of vector nanosystems. 2013 Article Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo / В.Ф. Чехун, Ю.В. Лозовська, Н.Ю. Лук'янова, Д.В. Демаш, І.М. Тодор, Л.А. Налєскіна // Цитология и генетика. — 2013. — Т. 47, № 3. — С. 60-70. — Бібліогр.: 26 назв. — укр. 0564-3783 DOI: 10.3103/S009545271303002X http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/126576 616.006:575.155:620.3 uk Цитология и генетика Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Оригинальные работы Оригинальные работы |
| spellingShingle |
Оригинальные работы Оригинальные работы Чехун, В.Ф. Лозовська, Ю.В. Лук'янова, Н.Ю. Демаш, Д.В. Тодор, І.М. Налєскіна, Л.А. Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo Цитология и генетика |
| description |
Проведено порівняльне дослідження цито- та генотоксичних ефектів дії різних концентрацій наночастинок феромагнетика (ФМ), постійного магнітного поля (ПМП) та їхнього поєднаного впливу через певні часові інтервали на клітини асцитної карциноми Ерліха, клітини еритроїдного ряду кісткового мозку і лімфоцити периферичної крові. Мікроядерний тест та метод «ДНК-комет» використано як маркери генотоксичного впливу. Встановлено, що межею незначно вираженої зміни цитоархітектоніки клітин асцитної карциноми Ерліха під впливом ФМ у концентрації 3 мг/кг. Із зростанням концентрації ФМ у пухлинних клітинах з'являються виражені ознаки блеббінгу цитоплазматичної мембрани, збільшується кількість мікроядер та «% ДНК у хвості комет» у клітинах асцитної карциноми Ерліха, клітинах кісткового мозку та лімфоцитах периферичної крові. Показано, що магнітне поле як самостійний чинник не спричиняє цито- та генотоксичні ефекти на досліджені клітини. При поєднаній дії ПМП з ФМ спостерігається феномен індукції наночастинками ФМ дії ПМП, що проявляється у зростанні сумарного впливу цих чинників на клітини. Мікроядерний тест та метод «ДНК-комет» можуть бути використані для визначення стабільності геному як пухлинних клітин, так і соматичних немалігнізованих при тестуванні генотоксичного впливу наноматеріалів при створенні векторних наносистем. Зазначено, що більшу чутливість щодо оцінки генотоксичної дії досліджених чинників має метод «ДНК-комет». |
| format |
Article |
| author |
Чехун, В.Ф. Лозовська, Ю.В. Лук'янова, Н.Ю. Демаш, Д.В. Тодор, І.М. Налєскіна, Л.А. |
| author_facet |
Чехун, В.Ф. Лозовська, Ю.В. Лук'янова, Н.Ю. Демаш, Д.В. Тодор, І.М. Налєскіна, Л.А. |
| author_sort |
Чехун, В.Ф. |
| title |
Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo |
| title_short |
Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo |
| title_full |
Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo |
| title_fullStr |
Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo |
| title_full_unstemmed |
Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo |
| title_sort |
оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo |
| publisher |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| publishDate |
2013 |
| topic_facet |
Оригинальные работы |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/126576 |
| citation_txt |
Оцінка цито- та генотоксичної дії наноферомагнетика та постійного магнітного поля в системі in vivo / В.Ф. Чехун, Ю.В. Лозовська, Н.Ю. Лук'янова, Д.В. Демаш, І.М. Тодор, Л.А. Налєскіна // Цитология и генетика. — 2013. — Т. 47, № 3. — С. 60-70. — Бібліогр.: 26 назв. — укр. |
| series |
Цитология и генетика |
| work_keys_str_mv |
AT čehunvf ocínkacitotagenotoksičnoídíínanoferomagnetikatapostíjnogomagnítnogopolâvsistemíinvivo AT lozovsʹkaûv ocínkacitotagenotoksičnoídíínanoferomagnetikatapostíjnogomagnítnogopolâvsistemíinvivo AT lukânovanû ocínkacitotagenotoksičnoídíínanoferomagnetikatapostíjnogomagnítnogopolâvsistemíinvivo AT demašdv ocínkacitotagenotoksičnoídíínanoferomagnetikatapostíjnogomagnítnogopolâvsistemíinvivo AT todorím ocínkacitotagenotoksičnoídíínanoferomagnetikatapostíjnogomagnítnogopolâvsistemíinvivo AT nalêskínala ocínkacitotagenotoksičnoídíínanoferomagnetikatapostíjnogomagnítnogopolâvsistemíinvivo |
| first_indexed |
2025-07-09T05:17:44Z |
| last_indexed |
2025-07-09T05:17:44Z |
| _version_ |
1837145279962284032 |
| fulltext |
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 360
Ïðîâåäåíî ïîð³âíÿëüíå äîñë³äæåííÿ öèòî- òà ãåíî-
òîêñè÷íèõ åôåêò³â 䳿 ð³çíèõ êîíöåíòðàö³é íàíî-
÷àñòèíîê ôåðîìàãíåòèêà (ÔÌ), ïîñò³éíîãî ìàãí³ò-
íîãî ïîëÿ (ÏÌÏ) òà ¿õíüîãî ïîºäíàíîãî âïëèâó ÷åðåç
ïåâí³ ÷àñîâ³ ³íòåðâàëè íà êë³òèíè àñöèòíî¿ êàðöè-
íîìè Åðë³õà, êë³òèíè åðèòðî¿äíîãî ðÿäó ê³ñòêîâîãî
ìîçêó ³ ë³ìôîöèòè ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³. ̳êðîÿäåðíèé
òåñò òà ìåòîä «ÄÍÊ-êîìåò» âèêîðèñòàíî ÿê ìàð-
êåðè ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó. Âñòàíîâëåíî, ùî ìåæåþ
íåçíà÷íî âèðàæåíî¿ çì³íè öèòîàðõ³òåêòîí³êè êë³òèí
àñöèòíî¿ êàðöèíîìè Åðë³õà ï³ä âïëèâîì ÔÌ º
êîíöåíòðàö³ÿ 3 ìã/êã. ²ç çðîñòàííÿì êîíöåíòðàö³¿ ÔÌ
ó ïóõëèííèõ êë³òèíàõ ç’ÿâëÿþòüñÿ âèðàæåí³ îçíàêè
áëåáá³íãó öèòîïëàçìàòè÷íî¿ ìåìáðàíè, çá³ëüøóºòüñÿ
ê³ëüê³ñòü ì³êðîÿäåð òà «% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò» â
êë³òèíàõ àñöèòíî¿ êàðöèíîìè Åðë³õà, êë³òèíàõ ê³ñò-
êîâîãî ìîçêó òà ë³ìôîöèòàõ ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³. Ïî-
êàçàíî, ùî ìàãí³òíå ïîëå ÿê ñàìîñò³éíèé ÷èííèê íå
ñïðè÷èíÿº öèòî- òà ãåíîòîêñè÷í³ åôåêòè íà äîñë³ä-
æåí³ êë³òèíè. Ïðè ïîºäíàí³é 䳿 ÏÌÏ ç ÔÌ ñïîñòå-
ð³ãàºòüñÿ ôåíîìåí ³íäóêö³¿ íàíî÷àñòèíêàìè ÔÌ ä³¿
ÏÌÏ, ùî ïðîÿâëÿºòüñÿ ó çðîñòàíí³ ñóìàðíîãî âïëè-
âó öèõ ÷èííèê³â íà êë³òèíè. ̳êðîÿäåðíèé òåñò òà
ìåòîä «ÄÍÊ-êîìåò» ìîæóòü áóòè âèêîðèñòàí³ äëÿ
âèçíà÷åííÿ ñòàá³ëüíîñò³ ãåíîìó ÿê ïóõëèííèõ êë³òèí,
òàê ³ ñîìàòè÷íèõ íåìàë³ãí³çîâàíèõ ïðè òåñòóâàíí³
ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó íàíîìàòåð³àë³â ïðè ñòâîðåíí³
âåêòîðíèõ íàíîñèñòåì. Çàçíà÷åíî, ùî á³ëüøó ÷óòëè-
â³ñòü ùîäî îö³íêè ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ äîñë³äæåíèõ ÷èí-
íèê³â ìຠìåòîä «ÄÍÊ-êîìåò».
Âñòóï. ×èñëåíí³ íåäîë³êè ìåäèêàìåíòîçíî¿
òåðàﳿ îíêîëîã³÷íèõ õâîðèõ, à ñàìå íåñïå-
öèô³÷í³ñòü òà òîêñè÷í³ñòü 䳿 á³ëüøîñò³ ïðå-
ïàðàò³â íà æèòòºâî âàæëèâ³ îðãàíè òà ñèñòåìè
îðãàí³çìó, à òàêîæ ïðèðîäíà òà íàáóòà ðåçèñ-
òåíòí³ñòü ïóõëèí äî ïðîòèïóõëèííèõ çàñîá³â
ïîòðåáóþòü ïîøóê³â íîâ³òí³õ ï³äõîä³â äëÿ âè-
ð³øåííÿ öèõ âàæëèâèõ ïðîáëåì. Îäíèì ç íèõ
º çàñòîñóâàííÿ â êë³í³÷í³é ïðàêòèö³ îñòàíí³õ
çäîáóòê³â íàíîòåõíîëîã³é [1–4].
Âñòàíîâëåíî, ùî çàâäÿêè êîíñòðóþâàííþ
íàíî÷àñòèíîê ç íîâèìè çàäàíèìè ô³çèêî-õ³ì³÷-
íèìè âëàñòèâîñòÿìè ìîæíà ïðîãíîçóâàòè ïåâí³
ïðîöåñè, ÿê³ â³äáóâàòèìóòüñÿ ó êë³òèíàõ ï³ä
¿õí³ì âïëèâîì. Ñòâîðåííÿ íàíîêîìïîçèò³â íà
îñíîâ³ íàíî÷àñòèíîê ôåðîìàãíåòèê³â (ÔÌ)
òà á³îïîë³ìåð³â íà ïðèêëàä³ ë³ïîñîì ïîêàçàëî
äîñèòü íèçüêó òîêñè÷í³ñòü ³ ìîæëèâ³ñòü ö³ëå-
ñïðÿìîâàíîãî òðàíñïîðòó òàêèõ êîìïëåêñ³â äî
ïåâíî¿ ì³øåí³ [3]. Çíà÷íó ðîëü ó ñïðÿìîâàíî-
ìó òà êåðîâàíîìó ðóñ³ ÔÌ â³äâîäÿòü çàñòî-
ñóâàííþ çîâí³øíüîãî ïîñò³éíîãî ìàãí³òíîãî ïî-
ëÿ (ÏÌÏ). Ñàìå ñòâîðåííÿ òàêî¿ âåêòîðíî¿ ñè-
ñòåìè êåðîâàíî¿ äîñòàâêè ë³ê³â äî ïóõëèííèõ
êë³òèí ç ì³í³ìàëüíîþ òîêñè÷í³ñòþ äëÿ âñüîãî
îðãàí³çìó ³ âèâ÷åííÿ ¿¿ 䳿 â ñèñòåìàõ in vitro òà
in vivo ñë³ä ââàæàòè íàéâàæëèâ³øèì çàâäàííÿì
ôóíäàìåíòàëüíèõ äîñë³äæåíü.
³äîìî, ùî ì³øåíÿìè äëÿ ÔÌ òà ÏÌÏ º
ìàêðîìîëåêóëè (ÄÍÊ, ÐÍÊ, á³ëêè), á³îëîã³÷í³
ìåìáðàíè ³ ñèñòåìè îêèñëåííÿ – â³äíîâëåííÿ,
ïðîòå íåâèð³øåíèì çàëèøàºòüñÿ ïèòàííÿ êîì-
á³íîâàíîãî âïëèâó çàçíà÷åíèõ ÷èííèê³â íà ö³
ñèñòåìè [5, 6]. Äàí³ ñó÷àñíèõ äîñë³äæåíü ñâ³ä-
÷àòü, ùî ÔÌ ìîæóòü âèêëèêàòè çàïàëüí³ ïðî-
öåñè òà õàðàêòåðèçóþòüñÿ íåéðî-, êàðä³î- òà
ãåïàòîòîêñè÷í³ñòþ, àëå äîñ³ íå ç’ÿñîâàíèé ìîæ-
ëèâèé ðèçèê ãåíî- òà öèòîòîêñè÷íîñò³ ÔÌ
íà îðãàí³çì ëþäèíè [5–7]. ³äñóòí³ñòü ºäèíî¿
ñèñòåìè îö³íêè ãåíî- òà öèòîòîêñè÷íîñò³ ÔÌ
íà îðãàí³çì ³ íèçüêà ³íôîðìàòèâí³ñòü ³ñíóþ-
÷èõ â³äîìîñòåé ïîòðåáóþòü ïðîâåäåííÿ ´ðóí-
òîâíèõ åêñïåðèìåíòàëüíèõ äîñë³äæåíü ùîäî
âèçíà÷åííÿ éîãî íàñë³äê³â òà âñåá³÷íîãî àíà-
ë³çó îòðèìàíèõ ðåçóëüòàò³â. Äàí³ ë³òåðàòóðè
ñâ³ä÷àòü, ùî êëàñè÷íèì ìåòîäîì âèçíà÷åííÿ
ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó øê³äëèâèõ ÷èííèê³â íà
æèâ³ îðãàí³çìè º ì³êðîÿäåðíèé òåñò, à â îñ-
òàíí³ ðîêè øèðîêî âèçíàíèì ñòàâ ùå ìåòîä
ãåëü-åëåêòðîôîðåçó ³çîëüîâàíèõ êë³òèí («ÄÍÊ-
êîìåò») [8, 9].
УДК 616.006:575.155:620.3
В.Ф. ЧЕХУН, Ю.В. ЛОЗОВСЬКА, Н.Ю. ЛУК’ЯНОВА, Д.В. ДЕМАШ, І.М. ТОДОР, Л.А. НАЛЄСКІНА
Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології
ім. Р.Є. Кавецького НАН України, Київ
E-mail: chekhun@onconet.kiev.ua
ОЦІНКА ЦИТО- ТА ГЕНОТОКСИЧНОЇ ДІЇ НАНОФЕРОМАГНЕТИКА
ТА ПОСТІЙНОГО МАГНІТНОГО ПОЛЯ В СИСТЕМІ IN VIVO
© Â.Ô. ×ÅÕÓÍ, Þ.Â. ËÎÇÎÂÑÜÊÀ, Í.Þ. ËÓÊ’ßÍÎÂÀ,
Ä.Â. ÄÅÌÀØ, ².Ì. ÒÎÄÎÐ, Ë.À. ÍÀ˪ÑʲÍÀ, 2013
61ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 3
Îö³íêà öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ íàíîôåðîìàãíåòèêà òà ïîñò³éíîãî ìàãí³òíîãî ïîëÿ
Ìåòîþ íàøî¿ ðîáîòè áóëî îö³íèòè öèòî- ³
ãåíîòîêñè÷í³ íàñë³äêè 䳿 ÔÌ, ÏÌÏ òà êîì-
á³íîâàíîãî çàñòîñóâàííÿ ¿õ â ñèñòåì³ in vivo.
Ìàòåð³àëè òà ìåòîäè. Îá’ºêòîì äîñë³äæåí-
íÿ áóëè íåë³í³éí³ á³ë³ ìèø³: ³íòàêòí³ òà ç ïåðå-
ùåïëåíîþ àñöèòíîþ êàðöèíîìîþ Åðë³õà (ÀÊÅ)
³ç ðîçðàõóíêó 2·106 êë³òèí íà òâàðèíó. Ìèøàì
ç ÀÊÅ òà ³íòàêòíèì òâàðèíàì ÷åðåç 7 ä³á ï³ñëÿ
ïåðåùåïëåííÿ ïóõëèíè âíóòð³øíüî÷åðåâíî ââî-
äèëè íàíî÷àñòèíêè ÔÌ, ñòàá³ë³çîâàí³ á³îëî-
ã³÷íî àêòèâíèìè ñóðôàêòàíòàìè òà ïîë³ìåðà-
ìè, ðîçì³ðîì 80–100 íì [10], ÿê³ ñèíòåçîâàí³
ñï³ëüíî ³ç ñï³âðîá³òíèêàìè ²íñòèòóòó õ³ì³¿ ïî-
âåðõí³ ³ì. Î.Î. ×óéêà ÍÀÍ Óêðà¿íè (ïàòåíò
¹ 99211).
 çàëåæíîñò³ â³ä âèð³øóâàíèõ çàäà÷ ó äîñ-
ë³äæåííÿõ âèêîðèñòîâóâàëè òàê³ êîíöåíòðàö³¿
ÔÌ: 0,5; 1,5; 3,0; 6,0 òà 10 ìã/êã. Îö³íêó ãåíî-
³ öèòîòîêñè÷íîãî åôåêòó ÔÌ, ÏÌÏ òà ¿õíüî¿
êîìá³íîâàíî¿ ä³¿ çä³éñíþâàëè íà êë³òèíàõ ÀÊÅ,
êë³òèíàõ åðèòðî¿äíîãî ðÿäó ê³ñòêîâîãî ìîçêó
(ÊÌ), ë³ìôîöèòàõ ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ ÷åðåç
1, 24 òà 48 ãîä.
Âðàõîâóþ÷è õàðàêòåð âïëèâó çàñòîñîâàíèõ
÷èííèê³â, ìèøåé ðîçïîä³ëèëè íà ÷îòèðè ãðó-
ïè: 1) êîíòðîëüíà; 2) òâàðèíè, ÿê³ îòðèìóâàëè
ÔÌ âíóòð³øíüî÷åðåâíî; 3) ìèø³, ÿê³ âïðîäîâæ
1 ãîä çàçíàëè 䳿 ÏÌÏ ç ³íäóêö³ºþ 150 ìÒë;
4) ãðóïà òâàðèí, ÿê³ ï³ääàâàëèñü êîìá³íîâàíî-
ìó âïëèâó ÏÌÏ òà ÔÌ. ÏÌÏ ñòâîðþâàëè çà
äîïîìîãîþ ñèñòåìè ç äâîõ ïîñò³éíèõ ìàãí³ò³â,
ðîçðîáëåíî¿ ñï³âðîá³òíèêàìè ²íñòèòóòó åëåêòðî-
äèíàì³êè ÍÀÍ Óêðà¿íè. Ìèøåé çàáèâàëè øëÿ-
õîì äåêàï³òàö³¿ ³ç äîòðèìàííÿì âñ³õ íîðì á³î-
åòèêè ùîäî ïîâîäæåííÿ ç åêñïåðèìåíòàëü-
íèìè òâàðèíàìè.
̳êðîÿäåðíèé òåñò íà êë³òèíàõ ÀÊÅ. Ñóñ-
ïåíç³þ êë³òèí ÀÊÅ íàíîñèëè íà çíåæèðåí³
ïðåäìåòí³ ñêåëüöÿ ó âèãëÿä³ êðàïåëü, äåê³ëü-
êà õâèëèí âèòðèìóâàëè íà ïîâ³òð³ òà ô³êñóâà-
ëè ó ìåòàíîë³ ïðîòÿãîì 2 õâ. Äëÿ âèçíà÷åí-
íÿ ìîðôîëîã³÷íèõ îñîáëèâîñòåé ïóõëèííèõ
êë³òèí öèòîëîã³÷í³ ïðåïàðàòè ôàðáóâàëè çà
ìåòîäîì óìçà (5%-íèé ðîç÷èí àçóð-åîçèíó ó
Í2Î) 8 õâ. Îö³íþâàííÿ ê³ëüêîñò³ ì³êðîÿäåð (Ìß)
ïðîâîäèëè íà ïðåïàðàòàõ, ïîôàðáîâàíèõ àêðè-
äèíîâèì æîâòîãàðÿ÷èì (3,0 ìã/ìë íà ôîñôàò-
íîìó áóôåð³, ðÍ 6,4–6,5) ³ç ðîçðàõóíêó íà
1000 êë³òèí ÀÊÅ çà äîïîìîãîþ ñâ³òëîâîãî
ì³êðîñêîïà (40×10).
Óìîâè âèçíà÷åííÿ ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó íà
êë³òèíàõ ÊÌ. Çðàçêè ÊÌ îòðèìóâàëè ³ç ñòåã-
íîâî¿ ê³ñòêè ìèøåé ³ ãîòóâàëè ñóñïåíç³þ ó
ñåðåäîâèù³ RPMI. ϳñëÿ öüîãî âèçíà÷àëè êîí-
öåíòðàö³þ êë³òèí ³ ðîáèëè ìàçêè. Öèòîëîã³÷í³
ïðåïàðàòè ï³äñóøóâàëè ïðè ê³ìíàòí³é òåìïå-
ðàòóð³, ô³êñóâàëè ó ìåòàíîë³ 2 õâ ³ ôàðáóâà-
ëè àêðèäèíîâèì æîâòîãàðÿ÷èì (12,5 ìã/ìë
ôîñôàòíîãî áóôåðà, ðÍ 6,4...6,5) âïðîäîâæ
1 õâ. ²äåíòèô³êàö³þ êë³òèí ÊÌ çà ìîðôîëî-
㳺þ ïðîâîäèëè çã³äíî ç ìåòîäîì Hayashi [8, 9].
Äîñë³äæóâàëè êë³òèíè åðèòðî¿äíîãî ðÿäó
ÊÌ òâàðèí – íîðìîõðîìàòîô³ëüí³ (ÍÕÅ) òà
ïîë³õðîìàòîô³ëüí³ åðèòðîöèòè (ÏÕÅ). Öå îáó-
ìîâëåíî òèì, ùî çã³äíî ç äàíèìè ñó÷àñíî¿
ë³òåðàòóðè Ìß êðàùå âèçíà÷àòè ó êë³òèíàõ
áåç ÿäðà, à ñàìå ó ìîëîäèõ ÏÕÅ òà çð³ëèõ
ÍÕÅ [11]. Ó ðÿä³ ïîâ³äîìëåíü àêöåíòîâàíî
óâàãó íà ïåâí³é ñêëàäíîñò³ â îö³íö³ Ìß ó
êë³òèíàõ åðèòðî¿äíîãî ðÿäó, ÿêà ïîâ’ÿçà-
íà ç³ ñïåöèô³êîþ äîçð³âàííÿ öèõ êë³òèí, à
ñàìå «âèäàëåííÿì» ÿäðà ç åðèòðîáëàñòó, çà-
òðèìêîþ ïåâíèõ ôðàãìåíò³â ÿäðà ç ïîäàëü-
øîþ ¿õ åë³ì³íàö³ºþ [12]. Ñàìå òîìó ïðè çàñòî-
ñóâàíí³ Ìß ïðîïîíóþòü äîñë³äæóâàòè ÏÕÅ
[13]. Ìè ñêîðèñòàëèñÿ âèçíà÷åííÿì ì³êðî-
ÿäåðíîãî òåñòó ëèøå ó êë³òèíàõ ÊÌ, îñê³ëüêè
çà îö³íêàìè äåÿêèõ àâòîð³â äîñë³äæåííÿ ê³ëü-
êîñò³ Ìß òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ òà ÍÕÅ ó
ïåðèôåðè÷í³é êðîâ³, íà â³äì³íó â³ä ÊÌ, ìàº
ðÿä íåäîë³ê³â: íèçüêèé âì³ñò ÏÕÅ òà ìîæëè-
â³ñòü åë³ì³íàö³¿ Ìß ó ÍÕÅ [13, 14]. ϳäðàõóí-
êè Ìß ïðîâîäèëè íà ôëóîðåñöåíòíîìó ì³êðî-
ñêîï³ Micros ÌÑ-300 ïðè çàãàëüíîìó çá³ëü-
øåíí³ ïðèëàäó ×400 øëÿõîì âèçíà÷åííÿ ê³ëü-
êîñò³ êë³òèí ç Ìß ñåðåä 1000 ÏÕÅ. Ðàçîì ç
öèì îö³íþâàëè ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ òà ÍÕÅ
ÿê ïîêàçíèêà öèòîòîêñè÷íîãî åôåêòó (³ç ðîç-
ðàõóíêó íà 2000 êë³òèí). ÏÕÅ çã³äíî ç ìåòî-
äèêîþ ³ç çàñòîñóâàííÿì àêðèäèíîâîãî æîâòî-
ãàðÿ÷îãî ìàëè ïîìàðàí÷åâå çàáàðâëåííÿ, ÍÕÅ –
çåëåíå, à Ìß – ÿñêðàâî-æîâòå. Ñë³ä çàçíà÷è-
òè, ùî Ìß, ÿê³ âèÿâëÿëèñü ó ÍÕÅ, áóëè
çàáàðâëåí³ ó ñâ³òëî-çåëåíèé êîë³ð.
Ìåòîä ëóæíîãî ãåëü-åëåêòðîôîðåçó îäèíè÷íèõ
êë³òèí («ìåòîä ÄÍÊ-êîìåò»). Ïàðàëåëüíî ³ç
çàñòîñóâàííÿì ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó ãåíîòîê-
ñè÷íèé åôåêò äîñë³äæåíèõ ÷èííèê³â âèâ÷àëè
çà äîïîìîãîþ ìåòîäó ãåëü-åëåêòðîôîðåçó ³çî-
ëüîâàíèõ êë³òèí («ÄÍÊ-êîìåò»), ÿêèé çà äà-
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 362
Â.Ô. ×åõóí, Þ.Â. Ëîçîâñüêà, Í.Þ. Ëóê’ÿíîâà òà ³í.
íèìè ë³òåðàòóðè ïîçíà÷àºòüñÿ ÿê «% ÄÍÊ ó
õâîñò³ êîìåò», íà êë³òèíàõ ÀÊÅ òà ë³ìôîöèòàõ
ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ ï³ääîñë³äíèõ òâàðèí. Äëÿ
âèä³ëåííÿ ë³ìôîöèò³â çàñòîñîâóâàëè öåíòðè-
ôóãóâàííÿ ó ñóì³ø³ ô³êîë/óðîãðàô³í. Îòðèìàíó
ñóñïåíç³þ êë³òèí ó 1%-í³é ëåãêîïëàâê³é àãàðîç³
(«Sigma», ÑØÀ) â êîíöåíòðàö³¿ 2·106/ìë íàíî-
ñèëè íà ïðåäìåòí³ ñêåëüöÿ ç ïîïåðåäíüî íà-
íåñåíèì øàðîì òóãîïëàâêî¿ àãàðîçè («Sigma»,
ÑØÀ). ϳñëÿ öüîãî ïðîâîäèâñÿ ë³çèñ êë³òèí
âïðîäîâæ 1 ãîä òà 20-õâèëèííà ³íêóáàö³ÿ ¿õ ó
áóôåð³ äëÿ ëóæíîãî åëåêòðîôîðåçó [15]. Ãîðè-
çîíòàëüíèé åëåêòðîôîðåç çä³éñíþâàëè ïðî-
òÿãîì 30 õâ (ð³çíèöÿ ïîòåíö³àë³â 24 Â, ñèëà
ñòðóìó 300 ìÀ). ϳñëÿ öüîãî êë³òèíè ³íêóáó-
âàëè ó íåéòðàë³çóþ÷îìó áóôåð³ (Tris-HCl
0,2 M, pH 7,5), â³äìèâàëè äèñòèëÿòîì ³ ôàð-
áóâàëè ôëóîðåñöåíòíèì áàðâíèêîì SYBR Green
(«Sigma», ÑØÀ) [10].
Àíàë³ç îòðèìàíèõ çîáðàæåíü çä³éñíþâàëè
çà äîïîìîãîþ ïðîãðàìè CometScore. Çíà÷óù³ñòü
â³äì³ííîñòåé ì³æ ïîêàçíèêàìè ð³çíèõ ãðóï
îö³íþâàëè ç âèêîðèñòàííÿì t-êðèòåð³þ Ñò’þ-
äåíòà, â³äì³ííîñò³ ââàæàëè çíà÷óùèìè ïðè ð
< 0,05.
Ñòàòèñòè÷íó îáðîáêó ïðîâîäèëè çà äîïîìî-
ãîþ ïðîãðàìíîãî çàáåçïå÷åííÿ STATISTICA 6.0.
Ðåçóëüòàòè äîñë³äæåíü òà ¿õ îáãîâîðåííÿ.
Òåñòóâàííÿ öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó ð³ç-
íèõ êîíöåíòðàö³é ÔÌ íà êë³òèíàõ ÀÊÅ òà
ÊÌ ³ç âèêîðèñòàííÿì Ìß-òåñòó. Ïåðøèì åòà-
ïîì öüîãî ôðàãìåíòó äîñë³äæåíü áóëî âèçíà-
÷åííÿ íà ïóõëèííèõ êë³òèíàõ òâàðèí ç ÀÊÅ
ò³º¿ ì³í³ìàëüíî¿ êîíöåíòðàö³¿¿ ÔÌ, çà ÿêî¿ âæå
ñïîñòåð³ãàºòüñÿ öèòîòîêñè÷íèé åôåêò. Òàêà
ïåðåäóìîâà ïîâ’ÿçàíà ç òèì, ùî çà äàíèìè
ë³òåðàòóðè ôåðîìàãí³òí³ ðå÷îâèíè ìàþòü âëàñ-
òèâ³ñòü âïëèâàòè íà á³îëîã³÷í³ îá’ºêòè íàâ³òü
áåç ïîºäíàííÿ ¿õ 䳿 ç öèòîñòàòèêîì. Êàë³áðîâ-
êà çàñòîñîâàíèõ êîíöåíòðàö³é ÔÌ ðîçïîä³-
ëÿëàñü íàñòóïíèì ÷èíîì: 0,5; 1,5; 3,0; 6,0 òà
10 ìã/êã ìàñè ò³ëà òâàðèíè (òàáë. 1). Íàñë³äêè
䳿 öèõ ÷èííèê³â îö³íþâàëè ÷åðåç 24 òà 48 ãîä
çà äîïîìîãîþ ñâ³òëîâî¿ ì³êðîñêîﳿ íà ïðåïà-
ðàòàõ, ïîôàðáîâàíèõ çà ìåòîäîì óìçà, òà çà
äàíèìè Ìß-òåñòó, îòðèìàíèìè ïðè ëþì³íåñ-
öåíòí³é ì³êðîñêîﳿ. Ðåçóëüòàòè öèòîìîðôî-
ëîã³÷íèõ äîñë³äæåíü ïðåäñòàâëåí³ íà ðèñ. 1.
Àíàë³ç îñîáëèâîñòåé öèòîìîðôîëî㳿 ïóõ-
ëèííèõ êë³òèí ÀÊÅ ï³ñëÿ 䳿 çàçíà÷åíèõ êîí-
öåíòðàö³é ÔÌ ïîêàçàâ, ùî öèòîàðõ³òåêòîí³êà
êë³òèí ïðè ³íêóáàö³¿ ¿õ ç ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿
0,5 òà 1,5 ìã/êã íå ìຠ³ñòîòíèõ â³äì³ííîñòåé
â³ä êîíòðîëþ.
Çà îö³íêîþ âïëèâó ÔÌ íà ãåíîòîêñè÷í³ñòü
ó êîíöåíòðàö³¿ 0,5 òà 1,5 ìã/êã ïðè òðèâàëîñò³
䳿 24 òà 48 ãîä âñòàíîâëåíî, ùî öåé ÷èííèê
ó âêàçàíèõ êîíöåíòðàö³ÿõ íå ñïðè÷èíÿº òàêî¿
䳿 íà ïóõëèíí³ êë³òèíè íåçàëåæíî â³ä ÷àñó
êîíòàêòó ç íèìè.
Ëèøå ïðè êîíöåíòðàö³¿ ÔÌ 3 ìã/êã ÷å-
ðåç 24 ãîä ³ á³ëüøîþ ì³ðîþ – ÷åðåç 48 ãîä ó
ïóõëèííèõ êë³òèíàõ âèçíà÷åíî ïðîÿâè ïî-
ì³ðíîãî öèòîòîêñè÷íîãî åôåêòó, ÿê³é ïîëÿãàâ
ó çì³í³ êîíô³ãóðàö³¿ öèòîïëàçìàòè÷íî¿ ìåìá-
ðàíè. Îñòàííÿ íàáóâàëà ôåñòîí÷àòîãî âèãëÿäó,
ó íåçíà÷í³é ê³ëüêîñò³ êë³òèí ïîïóëÿö³¿ ÷åðåç
24 ãîä âèçíà÷àëèñü îçíàêè ôîðìóâàííÿ áëåá-
á³íãó ìåìáðàíè, à ÷åðåç 48 ãîä â ÷àñòèí³ êë³òèí
çàçíà÷åíèé ôåíîìåí âæå ÷³òêî ïðîñòåæóâàâñÿ.
Ðàçîì ç öèì ÔÌ ïðè äàí³é êîíöåíòðàö³¿ âè-
êëèêàâ íåçíà÷íå çðîñòàííÿ ê³ëüêîñò³ Ìß, ÿêå
ñïîñòåð³ãàëîñü ëèøå ÷åðåç 48 ãîä ïîð³âíÿíî ç
êîíòðîëåì, ùî ñâ³ä÷èòü ïðî çá³ëüøåííÿ ãåíî-
òîêñè÷íîãî åôåêòó ÔÌ ç ïîäîâæåííÿì ÷àñîâî¿
åêñïîçèö³¿ (òàáë. 1). Ïðè êîíöåíòðàö³¿ 6 ìã/êã,
à îñîáëèâî 10 ìã/êã âïëèâ öüîãî àãåíòà ïîçíà-
÷àâñÿ íå ëèøå íà çì³íàõ ç áîêó öèòîïëàçìè,
àëå ³ ÿäåð ïóõëèííèõ êë³òèí, ùî ï³äòâåðäè-
ëîñü ³ íàáóëî á³ëüøî¿ ³íôîðìàòèâíîñò³ ïðè
çàñòîñóâàíí³ öèòîãåíåòè÷íèõ ìåòîä³â äîñë³ä-
æåííÿ. Âñòàíîâëåíî, ùî ÔÌ ó êîíöåíòðàö³ÿõ
6 òà 10 ìã/êã âèêëèêàâ çíà÷íå çðîñòàííÿ
ê³ëüêîñò³ Ìß ó ïóõëèíèõ êë³òèíàõ òâàðèí ç
Òàáëèöÿ 1
ʳëüê³ñíà îö³íêà Ìß (‰) ó ïóõëèííèõ êë³òèíàõ ÀÊÅ
ï³ñëÿ 䳿 ð³çíèõ êîíöåíòðàö³é ÔÌ
*ð < 0,05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíò-
ðîëþ.
Êîíöåíòðàö³ÿ ÔÌ,
ìã/êã
×àñ åêñïîçèö³¿
24 ãîä 48 ãîä
Êîíòðîëü
0,5
1,5
3
6
10
2,2 ± 0,25
2,0 ± 0,66
1,33 ± 0,33
2,2 ± 0,25
6,0 ± 0,01 *
5,4 ± 0,33 *
2,0 ± 0,01
2,0 ± 0,66
2,0 ± 0,60
3,6 ± 0,33
6,0 ± 0,01 *
6,5 ± 0,33 *
63ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 3
Îö³íêà öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ íàíîôåðîìàãíåòèêà òà ïîñò³éíîãî ìàãí³òíîãî ïîëÿ
ÀÊÅ, ÿêå ïðàêòè÷íî íå çì³íþâàëîñü ³ç ïî-
äîâæåííÿì ÷àñîâî¿ åêñïîçèö³¿. Ìîðôîëîã³÷í³
îñîáëèâîñò³ Ìß êë³òèí òâàðèí ç ÀÊÅ ï³ñëÿ
ôàðáóâàííÿ àêðèäèíîâèì æîâòîãàðÿ÷èì ïðåä-
ñòàâëåíî íà ðèñ. 2. Àíàëîã³÷íèì ÷èíîì òåñòóâà-
ëè ãåíîòîêñè÷íó ä³þ íà ïóõëèíí³ êë³òèíè òèõ
æå êîíöåíòðàö³é ÔÌ ³ç çàñòîñóâàííÿì ìåòîäó
«ÄÍÊ-êîìåò» (òàáë. 2).
Ðåçóëüòàòè îö³íêè ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó
ÔÌ ó êîíöåíòðàö³ÿõ 0,5 òà 1, 5 ìã/êã ñâ³ä÷àòü
ïðî â³äñóòí³ñòü öüîãî åôåêòó ó ïóõëèííèõ
êë³òèíàõ, ùî çá³ãàºòüñÿ ç äàíèìè äîñë³äæåííÿ
ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó.
Äîñòîâ³ðíèé ãåíîòîêñè÷íèé åôåêò íàíîôå-
ðîìàãíåòèêà â ïóõëèííèõ êë³òèíàõ âèçíà÷àâñÿ
ëèøå ïðè êîíöåíòðàö³¿ 3 ìã/êã ÷åðåç 48 ãîä
éîãî 䳿 (òàáë. 2). Íàéá³ëüø âèðàæåíèé ãåíî-
òîêñè÷íèé âïëèâ ÔÌ íà êë³òèíè ÀÊÅ ñïîñòå-
ð³ãàâñÿ ïðè 䳿 íàíîêîìïîçèòó â êîíöåíòðà-
ö³ÿõ 6 òà 10 ìã/êã.
Îñê³ëüêè íà íîâîìó âèòêó äîñë³äæåíü åêñ-
ïåðèìåíòàëüíî¿ îíêîëî㳿 ³ç âïðîâàäæåííÿì
íàíîòåõíîëîã³é ïîñòóëàò àêàäåì³êà Ð.ª. Êà-
âåöüêîãî ïðî âçàºìîçâ’ÿçîê ì³æ ïóõëèíîþ òà
îðãàí³çìîì çàëèøàºòüñÿ àêòóàëüíèì, àíàëîã³÷-
íèì ÷èíîì ìè äîñë³äèëè ãåíîòîêñè÷íèé âïëèâ
ÔÌ íà íåìàë³ãí³çîâàí³ êë³òèíè òâàðèí ç ÀÊÅ,
çîêðåìà ê³ñòêîâîãî ìîçêó.
³äîìî, ùî êë³òèíè ÊÌ º óí³âåðñàëüíîþ
òåñò-ñèñòåìîþ, ÿêà äຠîá’ºêòèâíó îö³íêó ãåíî-
³ öèòîòîêñè÷íî¿ ä³¿ ð³çíèõ ÷èííèê³â íà âåñü
îðãàí³çì â ö³ëîìó. Âñòàíîâëåíî, ùî êë³òèíè
ÊÌ òâàðèí ïåðøî÷åðãîâî ðåàãóþòü íà ââå-
äåííÿ â îðãàí³çì íàíî÷àñòèíîê, çì³íþþ÷è ñâ³é
Ðèñ. 1. Çì³íè öèòîàðõ³òåêòîí³êè êë³òèí ÀÊÅ ï³ä âïëèâîì ð³çíèõ êîíöåíòðàö³é ÔÌ: à – êîíòðîëü, êë³òèíè
ÀÊÅ ÷åðåç 48 ãîä êóëüòèâóâàííÿ ìàþòü îêðóãëó ôîðìó, ÷³òêî îêðåñëåíó öèòîïëàçìàòè÷íó ìåìáðàíó òà
êîìïàêòíå ðîçòàøóâàííÿ ãåòåðîõðîìàòèíó â ÿäðàõ; á – êë³òèíè ÀÊÅ ï³ñëÿ 䳿 ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 1,5 ìã/êã
ïðîòÿãîì 48 ãîä íå â³äð³çíÿþòüñÿ â³ä êîíòðîëþ; â – çì³íà êîíô³ãóðàö³¿ öèòîïëàçìàòè÷íî¿ ìåìáðàíè êë³òèí
ÀÊÅ ï³ñëÿ 48-ãîäèííî¿ ä³¿ ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 3 ìã/êã; ã – êë³òèíè ÀÊÅ ÷åðåç 48 ãîä êóëüòèâóâàííÿ â
ñåðåäîâèù³ ç ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 10 ìã/êã õàðàêòåðèçóþòüñÿ ÿâèùàìè áëåáá³íãó öèòîïëàçìàòè÷íî¿ ìåìáðàíè
òà âèðàæåíèìè çì³íàìè òåêñòóðè õðîìàòèíó, çîêðåìà ð³çíèìè ïðîÿâàìè éîãî ôðàãìåíòàö³¿. Çàáàðâëåííÿ çà
óìçà. Ìàñë. ³ìåðñ. ×1000
Ðèñ. 2. Ïóõëèíí³ êë³òèíè òâàðèí ç ÀÊÅ: à – ïóõëèí-
íà êë³òèíà ç Ìß; á – ïóõëèííà êë³òèíà áåç Ìß.
Çá. ×400. Çàáàðâëåííÿ àêðèäèíîâèì æîâòîãàðÿ÷èì
Òàáëèöÿ 2
ʳëüê³ñíà îö³íêà «% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò»
ïóõëèííèõ êë³òèí òâàðèí ç ÀÊÅ ï³ñëÿ 䳿 ð³çíèõ
êîíöåíòðàö³é ÔÌ
*ð < 0,05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíò-
ðîëþ.
Êîíöåíòðàö³ÿ
ÔÌ, ìã/êã
×àñ åêñïîçèö³¿
24 ãîä 48 ãîä
Êîíòðîëü
0,5
1,5
3
6
10
6,51 ± 0,52
5,72 ± 0,66
7,96 ± 1,32
8,24 ±1,43
19,80 ± 1,14*
21,47±1,86*
6,38 ± 1,21
5,33 ± 1,41
6,49 ± 1,00
9,02 ± 1,65
21,63 ± 1,83*
22,54 ± 2,33*
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 364
Â.Ô. ×åõóí, Þ.Â. Ëîçîâñüêà, Í.Þ. Ëóê’ÿíîâà òà ³í.
êë³òèííèé ñêëàä òà ìîðôîëîã³÷í³ õàðàêòåðèñ-
òèêè. Äîñë³äæåííÿ ïîêàçàëè, ùî ö³ çì³íè ó
êë³òèíàõ ÊÌ ïîâ’ÿçàí³ ç ô³çèêî-õ³ì³÷íèìè
îñîáëèâîñòÿìè íàíîêîìïîçèòó, éîãî êîíöåíò-
ðàö³ºþ òà ðîçì³ðîì íàíî÷àñòèíîê [14]. Ñàìå
òîìóíàìè ïðîâåäåíî àíàë³ç ìîðôîëî㳿 åðèò-
ðî¿äíîãî ðÿäó êë³òèí ÊÌ òâàðèí ç ÀÊÅ ï³ñëÿ
ââåäåííÿ îáðàíèõ êîíöåíòðàö³é ÔÌ òà âèçíà-
÷åíî ì³í³ìàëüíó êîíöåíòðàö³þ öüîãî ÷èííèêà,
ïðè ÿê³é âæå ñïîñòåð³ãàºòüñÿ ãåíî- òà öèòî-
òîêñè÷íèé åôåêò (òàáë. 3).
Àíàë³ç ÔÌ ó êîíöåíòðàö³ÿõ 0,5 òà 1,5 ìã/êã
íå âèÿâèâ äîñòîâ³ðíîãî öèòî- òà ãåíîòîêñè÷-
íîãî åôåêòó íà êë³òèíè ÊÌ â³äíîñíî ïîêàç-
íèê³â êîíòðîëþ (òàáë. 2). Äîñë³äæåííÿ âïëèâó
ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 3,0 ìã/êã íà êë³òèíè ÊÌ
òâàðèí ïîêàçàëî äîñòîâ³ðíèé, àëå ïîð³âíÿíî
ç êîíòðîëåì ñëàáî âèðàæåíèé öèòî- òà ãåíî-
òîêñè÷íèé åôåêò â³äíîñíî çíà÷åíü ïîïåðåäí³õ
ãðóï (òàáë. 3). Öå îáóìîâëåíî íåâåëèêîþ ê³ëü-
ê³ñòþ Ìß ó ÏÕÅ òà ïîâíîþ â³äñóòí³ñòþ ¿õ ó ÍÕÅ.
Íà â³äì³íó â³ä öüîãî ïðè 䳿 ÔÌ ó êîíöåíòðàö³ÿõ
6 òà 10 ìã/êã Ìß ñïîñòåð³ãàëèñü íå ëèøå ó
ÏÕÅ, à é ó ÍÕÅ, ùî º ñâ³ä÷åííÿì á³ëüø âèðà-
æåíîãî ãåíîòîêñè÷íîãî åôåêòó öèõ êîíöåíòðà-
ö³é íà åðèòðî¿äíèé ðÿä êë³òèí ÊÌ, í³æ ó ïî-
ïåðåäí³õ ãðóïàõ, ÿêèé çá³ëüøóâàâñÿ ç ïîäîâ-
æåííÿì ÷àñîâî¿ åêñïîçèö³¿. Íàéá³ëüøèé öèòî-
òà ãåíîòîêñè÷íèé åôåêò ó êë³òèíàõ åðèòðî¿ä-
íîãî ðÿäó ÊÌ âñòàíîâëåíî ïðè êîíöåíòðàö³¿
ÔÌ 10 ìã/êã.
Òàêèì ÷èíîì, äèçàéí íàâåäåíîãî äîñë³ä-
æåííÿ äîçâîëèâ âèçíà÷èòèñü ç êîíöåíòðàö³ºþ
ÔÌ äëÿ âèêîðèñòàííÿ ó ñêëàä³ íàíîêîìïî-
çèò³â, ÿêà ñàìà ïî ñîá³ ñïðè÷èíÿº ïîì³ðíèé
öèòîòîêñè÷íèé òà ãåíîòîêñè÷íèé åôåêòè ³ ìîæå
áóòè âèêîðèñòàíà ó ïîäàëüøèõ äîñë³äæåííÿõ
ùîäî âèçíà÷åííÿ ìîäèô³êóþ÷î¿ öèòî- òà ãåíî-
òîêñè÷íî¿ ä³¿ ïðè ïîºäíàíí³ ç ÏÌÏ.
Êîìïëåêñíå äîñë³äæåííÿ ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿
ÔÌ, ÏÌÏ òà êîìá³íàö³¿ öèõ ÷èííèê³â íà êë³-
òèíè ÀÊÅ. Çã³äíî ç ñó÷àñíèìè óÿâëåííÿìè äëÿ
ñòâîðåííÿ ö³ëåñïðÿìîâàíî¿ âåêòîðíî¿ äîñòàâêè
ÔÌ äî ïóõëèííèõ êë³òèí º îáîâ’ÿçêîâèì çàñ-
òîñóâàííÿ ÏÌÏ, îäíàê íàäòî ìàëî äîñë³äæå-
íîþ çàëèøàºòüñÿ ïðîáëåìà ïîºäíàíî¿ ä³¿ ÔÌ ³
ÏÌÏ ÿê íà ïóõëèíí³ êë³òèíè, òàê ³ íà ³íø³
îðãàíè òà ñèñòåìè îðãàí³çìó.
Ïåðø çà âñå íàìè ïðîâåäåíî ïîð³âíÿëüíèé
àíàë³ç ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ ÔÌ, ÏÌÏ òà ¿õíüîãî
ïîºäíàíîãî âïëèâó íà ïóõëèíí³ êë³òèíè çà äàíè-
ìè ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó òà ìåòîäó «ÄÍÊ-êîìåò»
(òàáë. 4). Ðåçóëüòàòè äîñë³äæåíü çàñâ³ä÷èëè
ïðî á³ëüø âèñîêó ÷óòëèâ³ñòü òà ³íôîðìàòèâ-
í³ñòü ìåòîäó «ÄÍÊ-êîìåò», í³æ ì³êðîÿäåðíîãî
òåñòó, ïðè çàñòîñóâàíí³ ¿õ äëÿ îö³íêè ãåíî-
òîêñè÷íîãî âïëèâó ÔÌ íà ïóõëèíí³ êë³òèíè
ÀÊÅ áåç ÏÌÏ òà íà ôîí³ ÏÌÏ. Âñòàíîâ-
ëåíî, ùî «% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò» ïóõëèííèõ
êë³òèí äåùî ï³äâèùóâàâñÿ ÷åðåç 1 ãîä ³íêóáà-
ö³¿ òà çíà÷íî çðîñòàâ ó ïîð³âíÿíí³ ç êîíòðîëåì
÷åðåç 24 ãîä êîíòàêòíî¿ âçàºìî䳿 ç ÔÌ íà
ôîí³ ÏÌÏ òà áåç íüîãî. Íàòîì³ñòü äàí³ ì³êðî-
ÿäåðíîãî òåñòó íå ïîêàçàëè ñóòòºâèõ çì³í ê³ëü-
êîñò³ Ìß ó ïóõëèííèõ êë³òèíàõ âíàñë³äîê 䳿 ÔÌ
íà ôîí³ ÏÌÏ òà áåç ÏÌÏ ïðè äàíèõ ÷àñîâèõ
Òàáëèöÿ 3
ʳëüê³ñíà îö³íêà Ìß (‰) òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ/ÍÕÅ ó ÊÌ òâàðèí ç ÀÊÅ ïðè ð³çíèõ êîíöåíòðàö³ÿõ ÔÌ
* ð < 0.05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíòðîëþ.
Êîíöåíòðàö³ÿ
ÔÌ, ìã/êã
×àñ åêñïîçèö³¿
24 ãîä 48 ãîä
Ìß/ÏÕÅ Ìß/ÍÕÅ ÏÕÅ/ÍÕÅ Ìß/ÏÕÅ Ìß/ÍÕÅ ÏÕÅ/ÍÕÅ
Êîíòðîëü
0,5
1,5
3,0
6,0
10
1,93 ± 0,20
1,66 ± 0,33
2,33 ± 0,33
3,60 ± 0,40*
3,66 ± 1,00*
3,66 ± 1,00*
–
–
–
–
1,66 ± 0,33
3,33 ± 0,33*
0,81 ± 0,05
0,94 ± 0,07
0,63 ± 0,02*
0,44 ± 0,01*
0,48 ± 0,01*
0,39 ± 0,01*
–
1,66 ± 0,33
2,33 ± 0,33
3,86 ± 0,40
3,76 ± 0,99*
4,66 ± 0,66*
–
–
–
–
2,10 ± 0,33
4 ± 0,66*
–
0,99 ± 0,07
0,58 ± 0,05*
0,41 ± 0,02*
0,44 ± 0,01*
0,29 ± 0,06*
65ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 3
Îö³íêà öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ íàíîôåðîìàãíåòèêà òà ïîñò³éíîãî ìàãí³òíîãî ïîëÿ
åêñïîçèö³ÿõ. Ïðîòå, ÿê áóëî ïîêàçàíî ðàí³øå,
öåé ïîêàçíèê çðîñòàâ ï³ñëÿ 48-ãîäèííî¿ ³íêó-
áàö³¿ ç íàíîêîìïîçèòîì (òàáë. 1). Ñë³ä çàçíà÷è-
òè, ùî ïðè äîñë³äæåíí³ ä³¿ ÏÌÏ ÿê ñàìîñò³éíîãî
÷èííèêà òðèâàë³ñòþ 1 òà 24 ãîä ïðè çàñòîñóâàíí³
ìåòîäó «ÄÍÊ-êîìåò» ³ ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó äî-
ñòîâ³ðíèõ çì³í ó ãåíîì³ ïóõëèííèõ êë³òèí íå
âèÿâëåíî ó ïîð³âíÿíí³ ç êîíòðîëåì (ð < 0,05).
Îö³íêà ãåíî- òà öèòîòîêñè÷íîãî âïëèâó ÔÌ,
ÏÌÏ òà ¿õ ïîºäíàíî¿ ä³¿ ³ç âèêîðèñòàííÿì Ìß-
òåñòó íà åðèòðî¿äíèé ðÿä êë³òèí ÊÌ ³íòàêò-
íèõ òâàðèí ³ òâàðèí ç àñöèòíîþ êàðöèíîìîþ
Åðë³õà. Àíàë³ç öèòîëîã³÷íèõ ïðåïàðàò³â, âèãîòîâ-
ëåíèõ ç ÊÌ ³íòàêòíèõ òâàðèí, äîçâîëèâ çàâäÿ-
êè â³äì³ííîñòÿì ôëóîðåñöåíö³¿ ÷³òêî âèçíà-
÷èòè ÏÕÅ òà ÍÕÅ (ðèñ. 3). Ìß äîáðå ïðîñòå-
æóâàëèñÿ ó ÏÕÅ òà ìàëè ÿñêðàâî-æîâòèé êî-
ë³ð (ðèñ. 4). Çà äàíèìè ë³òåðàòóðè â³äîìî, ùî
çì³íè ç áîêó ìîðôîëî㳿 êë³òèí ÊÌ âíàñë³-
äîê âïëèâó íàíîêîìïîçèò³â ìîæíà ñïîñòåð³-
ãàòè âæå ÷åðåç 1–2 ãîä ï³ñëÿ ¿õíüîãî ââå-
äåííÿ [15, 16]. Ñàìå òîìó âïëèâ îáðàíî¿ íàìè
êîíöåíòðàö³¿ ÔÌ 3 ìã/êã íà åðèòðî¿äíèé ðÿä
êë³òèí ÊÌ îö³íþâàëè ÷åðåç 1 òà 24 ãîä ï³ñëÿ
ââåäåííÿ. Ïðè äîñë³äæåíí³ ãåíî- òà öèòîòîê-
ñè÷íîãî âïëèâó ÔÌ íà ôîí³ ÏÌÏ òà áåç
íüîãî ó ãðóï³ ³íòàêòíèõ òâàðèí íå âèÿâëåíî
äîñòîâ³ðíèõ çì³í â ìîðôîëî㳿 åðèòðî¿äíîãî
ðÿäó ÊÌ ÷åðåç 1 ãîä ï³ñëÿ 䳿 çàñòîñîâàíèõ
÷èííèê³â (òàáë. 3).
Ïðîñòåæóºòüñÿ òåíäåíö³ÿ äî íåçíà÷íîãî
çðîñòàííÿ ê³ëüêîñò³ Ìß òà ñï³ââ³äíîøåííÿ
ÏÕÅ/ÍÕE ó ³íòàêòíèõ ï³ääîñë³äíèõ òâàðèí ï³ñ-
ëÿ îäíîãîäèííî¿ åêñïîçèö³¿ ç ÏÌÏ. Àíàëîã³÷íà
òåíäåíö³ÿ ùîäî çðîñòàííÿ ê³ëüêîñò³ Ìß òà
îäíî÷àñíîãî çíèæåííÿ ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ/
ÍÕE ñïîñòåð³ãàëàñü ó ãðóïàõ òâàðèí, ÿê³ çàçíà-
ëè âïëèâó ÔÌ òà ïîºäíàíî¿ ä³¿ ÔÌ ³ ÏÌÏ ïðî-
òÿãîì 1 ãîä (òàáë. 5). ²ñòîòíå çðîñòàííÿ ê³ëü-
êîñò³ Ìß òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ/ÍÕÅ (ð <
< 0,05) ó ÊÌ òâàðèí âèçíà÷åíî ï³ñëÿ 24-ãî-
Ðèñ. 3. Åðèòðîöèòè ÊÌ ³íòàêòíèõ ìèøåé: à – ÍÕÅ,
á – ÏÕÅ. Çàáàðâëåííÿ àêðèäèíîâèì æîâòîãàðÿ÷èì.
Çá. ×400
Ðèñ. 4. Íåçð³ë³ åðèòðîöèòè ÊÌ ³íòàêòíèõ ìèøåé:
à – ç Ìß ó ÍÕÅ, á – ÍÕÅ áåç Ìß. Çàáàðâëåííÿ
àêðèäèíîâèì æîâòîãàðÿ÷èì. Çá ×400
Òàáëèöÿ 4
ʳëüê³ñíà îö³íêà «% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò» òà Ìß
ó ïóõëèííèõ êë³òèíàõ òâàðèí ç ÀÊÅ, ùî çàçíàëè
âïëèâó ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 3 ìã/êã, ÏÌÏ
òà îäíî÷àñíî¿ ä³¿ öèõ ÷èííèê³â
* ð < 0,05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíò-
ðîëþ.
Ãðóïè òâàðèí
×àñ åêñïîçèö³¿
1 ãîä 24 ãîä
Ìß (‰)
Êîíòðîëü
ÏÌÏ
ÔÌ
ÔÌ + ÏÌÏ
2,00 ± 0,01
2,20 ± 0,25
2,00 ± 0,01
2,80 ± 0,55
2,20 ± 0,25
2,40 ± 0,25
2,20 ± 0,25
3,60 ± 0,33
% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò
Êîíòðîëü
ÏÌÏ
ÔÌ
ÔÌ + ÏÌÏ
6,50 ± 0,52
7,89 ± 1,29
8,15 ± 1,47
7,63 ± 1,35
6,65 ± 0,54
6,50 ± 1,34
19,80 ± 1,14*
21,40 ± 2,05*
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 366
Â.Ô. ×åõóí, Þ.Â. Ëîçîâñüêà, Í.Þ. Ëóê’ÿíîâà òà ³í.
äèííîãî âïëèâó ÔÌ òà ÏÌÏ, ùî º ñâ³ä÷åííÿì
ï³äâèùåííÿ ãåíî- òà öèòîòîêñè÷íîãî åôåêòó 䳿
öèõ ôàêòîð³â ÷åðåç äàíèé ïåð³îä ÷àñó.
Ïîðÿä ç öèì ïðîàíàë³çîâàíî öèòî- òà ãåíî-
òîêñè÷íèé åôåêò 䳿 ÔÌ, ÏÌÏ òà ¿õíüîãî êîì-
á³íîâàíîãî âïëèâó íà êë³òèíè åðèòðî¿äíîãî ðÿ-
äó ÊÌ òâàðèí ç ÀÊÅ. Ó ö³é ãðóï³ òâàðèí, ÿê
³ â ³íòàêòí³é, âæå ÷åðåç 1 ãîä âñòàíîâëåíî
òåíäåíö³þ äî ïåðåðîçïîä³ëó êë³òèí åðèòðî¿äíî-
ãî ðÿäó ÊÌ ï³ä âïëèâîì öèõ àãåíò³â, ïðîòå
á³ëüø ñóòòºâ³ çì³íè ñïîñòåð³ãàëèñü ó òâàðèí
÷åðåç 24 ãîä âïëèâó, ùî ï³äòâåðäæóºòüñÿ â³-
Ðèñ. 5. Ãåëü-åëåêòðîôîðåç ë³ìôîöèò³â ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ ³íòàêòíèõ ìèøåé (à) òà ìèøåé ç ÀÊÅ (á), à òàêîæ
êë³òèí ÀÊÅ ï³ñëÿ 24-ãîäèííîãî âïëèâó ÔÌ (â). ×400, SYBR Green I
Òàáëèöÿ 5
ʳëüê³ñíà îö³íêà Ìß (‰) òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ/ÍÕÅ ó ÊÌ ³íòàêòíèõ òâàðèí
ï³ñëÿ 䳿 ÔÌ, ÏÌÏ òà ¿õíüîãî îäíî÷àñíîãî âïëèâó
* ð < 0,05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíòðîëþ.
Ãðóïè òâàðèí
×àñ åêñïîçèö³¿
1 ãîä 24 ãîä
Ìß/ÏÕÅ ÏÕÅ/ÍÕÅ Ìß/ÏÕÅ ÏÕÅ/ÍÕÅ
Êîíòðîëü
ÏÌÏ
ÔÌ
ÔÌ + ÏÌÏ
0,25 ± 0,25
0,50 ± 0,25
0,50 ± 0,25
0,50 ± 0,25
0,95 ± 0,02
1,00 ± 0,04
0,82 ± 0,02
0,78 ± 0,03
–
0,75 ± 0,25
1,20 ± 0,01*
1,50 ± 0,41*
–
1,05 ± 0,06
0,65 ± 0,02*
0,69 ± 0,02*
* ð < 0,05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíòðîëþ.
Ãðóïè òâàðèí
×àñ åêñïîçèö³¿
1 ãîä 24 ãîä
Ìß/ÏÕÅ ÏÕÅ/ÍÕÅ Ìß/ÏÕÅ ÏÕÅ/ÍÕÅ
Êîíòðîëü
ÏÌÏ
ÔÌ
ÔÌ + ÏÌÏ
1,93 ± 0,20
2,40 ± 0,24
2,60 ± 0,24
3,00 ± 0,00
0,81 ± 0,05
0,63 ± 0,02
0,44 ± 0,01
0,25 ± 0,01
–
2,40 ± 0,24
3,60 ± 0,40*
5,00 ± 0,55*
–
0,69 ± 0,01*
0,44 ± 0,01*
0,23 ± 0,02*
Òàáëèöÿ 6
ʳëüê³ñíà îö³íêà Ìß (‰) òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ/ÍÕÅ ó ÊÌ òâàðèí ç ÀÊÅ ï³ñëÿ 䳿 ÔÌ, ÏÌÏ
òà ¿õíüîãî îäíî÷àñíîãî âïëèâó
67ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 3
Îö³íêà öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ íàíîôåðîìàãíåòèêà òà ïîñò³éíîãî ìàãí³òíîãî ïîëÿ
ðîã³äíèì çðîñòàííÿì ê³ëüêîñò³ Ìß ó ÏÕÅ
(ð < 0,05) ³ ñâ³ä÷èòü íå ëèøå ïðî öèòî-
òîêñè÷íèé, àëå ³ ãåíîòîêñè÷íèé âïëèâ öèõ
÷èííèê³â. Íàéá³ëüø âèðàæåíèé öèòîòîêñè÷íèé
åôåêò ùîäî êë³òèí ÊÌ (ð < 0,05) âèÿâëåíî ó
ãðóï³ òâàðèí ç ÀÊÅ ÷åðåç 24 ãîä îäíî÷àñíîãî
âïëèâó ÔÌ òà ÏÌÏ (òàáë. 6). Ïîð³âíÿëüíèé
àíàë³ç ê³ëüêîñò³ Ìß ó ÏÕÅ ÊÌ ³íòàêòíèõ òâà-
ðèí, ùî çàçíàëè 䳿 äîñë³äæåíèõ ÷èííèê³â, òà
àíàëîã³÷íî¿ ãðóïè òâàðèí ç ÀÊÅ âèÿâèâ äîñòî-
â³ðíå çá³ëüøåííÿ ¿õ (ð < 0,05) ó òâàðèí îñòàííüî¿.
Íàø³ äàí³ óçãîäæóþòüñÿ ç ðåçóëüòàòàìè ³íøèõ
äîñë³äíèê³â ³ çàñâ³ä÷óþòü, ùî ê³ëüê³ñòü Ìß ó
ÏÕÅ çíà÷íî çðîñòຠïðè íàÿâíîñò³ â îðãàí³çì³
ïóõëèííîãî ïðîöåñó [11]. ² öå çàêîíîì³ðíî, îñ-
ê³ëüêè â³äîìî, ùî ðîçâèòîê ïóõëèííîãî ïðîöå-
ñó ïîâ’ÿçàíèé ³ç çì³íàìè ó ãåíîì³ êë³òèí îð-
ãàí³çìó, ÿê³ â³äáóâàþòüñÿ íå ò³ëüêè â ïóõëèí-
íèõ, àëå ³ â íåìàë³ãí³çîâàíèõ êë³òèíàõ [11, 12].
Âðàõîâóþ÷è òå, ùî çá³ëüøåííÿ ê³ëüêîñò³ Ìß
º â³äîáðàæåííÿì ïîðóøåíü ÄÍÊ, à îòðèìàíà
çà äîïîìîãîþ ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó ³íôîðìà-
ö³ÿ ùîäî çì³íè â ÿäðàõ çà äàíèìè äåÿêèõ
äæåðåë ë³òåðàòóðè ö³ëêîì â³äïîâ³äຠðåçóëü-
òàòàì äîñë³äæåííÿ êàð³îòèïó êë³òèí, öåé òåñò
âèïðàâäàíî ìîæíà çàñòîñóâàòè ÿê ìàðêåð ãåíî-
òîêñè÷íîãî âïëèâó ð³çíîìàí³òíèõ ÷èííèê³â
[8, 11].
²ñíóþòü äàí³ ³íøèõ åêñïåðèìåíòàëüíèõ äîñ-
ë³äæåíü ùîäî çì³íè ìîðôîëî㳿 êë³òèí åðè-
òðî¿äíîãî ðÿäó ÊÌ â ñèñòåì³ in vivo, ê³ëüêîñò³
Ìß òà ñï³ââ³äíîøåííÿ ÏÕÅ/ÍÕÅ âíàñë³äîê
âïëèâó ð³çíèõ ÷èííèê³â, çîêðåìà îòðóéíèõ ðå-
÷îâèí, öèòîñòàòèê³â, íàíîêîìïîçèò³â òà íàíî-
÷àñòèíîê [18–20, 22]. Ïîêàçàíî, ùî íèçüê³ êîí-
öåíòðàö³¿ òîêñè÷íèõ ðå÷îâèí ëèøå âèêëèêà-
þòü óòâîðåííÿ Ìß òà íåñóòòºâî çì³íþþòü
ÏÕÅ/ÍÕÅ, òîä³ ÿê âèñîê³ êîíöåíòðàö³¿ äîñòî-
â³ðíî çíèæóþòü ê³ëüê³ñòü ÏÕÅ [20, 21]. Ñë³ä
çâåðíóòè óâàãó, ùî ìîðôîëîã³ÿ êë³òèí åðè-
òðî¿äíîãî ðÿäó ÊÌ òà ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³
çì³íþºòüñÿ íå ëèøå ï³ä âïëèâîì êîíöåíòðàö³¿,
àëå ³ ðîçì³ðó íàíî÷àñòèíîê [16, 21]. Âñòàíîâëå-
íî, ùî íàíî÷àñòèíêè Al2O3 ç ä³àìåòðîì 30 íì
âîëîä³ëè ìåíøîþ ãåíî- òà öèòîòîêñè÷íîþ
䳺þ, í³æ àíàëîãè ç ä³àìåòðîì 40 íì [21].
Ç ïîçèö³é îòðèìàíèõ íàìè äàíèõ îñîáëè-
âî¿ óâàãè çàñëóãîâóþòü íåîäíîçíà÷í³ â³äîìîñò³
ïðî çì³íè ìîðôîëî㳿 êë³òèí åðèòðî¿äíîãî ðÿäó
ÊÌ òà ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ âíàñë³äîê âïëèâó
ÏÌÏ. Ââàæàºòüñÿ, ùî ³ñòîòí³ çì³íè ìîðôîëî-
㳿 öèõ êë³òèí ìîæíà ñïîñòåð³ãàòè ëèøå ïðè
³íäóêö³¿ ÏÌÏ â³ä 1 Òë [23]. Ó äåÿêèõ ðîáîòàõ
ïîêàçàíî çðîñòàííÿ ê³ëüêîñò³ Ìß ó ÏÕÅ ³ç
çá³ëüøåííÿì ³íäóêö³¿ òà åêñïîçèö³¿ ÏÌÏ [22].
Çã³äíî ç ðåçóëüòàòàìè âëàñíèõ äîñë³äæåíü ê³ëü-
ê³ñòü Ìß òà ÏÕÅ/ÍÕÅ ó ÊÌ ³íòàêòíèõ òâàðèí
òà ç ÀÊÅ ñóòòºâî íå çì³íþþòüñÿ âíàñë³äîê 䳿
ÏÌÏ (150 ìÒë) ÷åðåç 1 òà 24 ãîä âïëèâó, ùî
ï³äòâåðäæóºòüñÿ ³íøèìè äàíèìè ë³òåðàòóðè
Ðèñ. 6. Ãåíîòîêñè÷íèé åôåêò ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 3 ìã/êã, ÏÌÏ òà ¿õíüî¿ êîìá³íàö³¿ ùîäî ë³ìôîöèò³â
ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ òà êë³òèí ÀÊÅ: ïî âåðòèêàë³ – «% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò»; ïî ãîðèçîíòàë³ – âàð³àíòè
âïëèâó; *ð < 0,05 – äîñòîâ³ðí³ çì³íè â³äíîñíî çíà÷åíü êîíòðîëþ
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 368
Â.Ô. ×åõóí, Þ.Â. Ëîçîâñüêà, Í.Þ. Ëóê’ÿíîâà òà ³í.
[23], â òîé æå ÷àñ ìè âñòàíîâèëè, ùî ãåíî-
³ öèòîòîêñè÷íèé åôåêò ÔÌ çá³ëüøóºòüñÿ ó
êîìá³íàö³¿ ç ÏÌÏ. Îòæå, îòðèìàí³ ðåçóëüòàòè
º ñâ³ä÷åííÿì öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íîãî åôåêò³â
ó êë³òèíàõ åðèòðî¿äíîãî ðÿäó ÊÌ ³ ìîæóòü
áóòè âèêîðèñòàí³ ÿê ïîêàçíèêè íåñòàá³ëüíîñò³
ãåíîìó ïðè 䳿 ÔÌ, ÏÌÏ òà ¿õíüîìó êîì-
á³íîâàíîìó âïëèâ³ íà îðãàí³çì.
Âèçíà÷åííÿ ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó ÔÌ, ÏÌÏ
òà ¿õíüî¿ êîìá³íîâàíî¿ ä³¿ ç âèêîðèñòàííÿì ìåòî-
äó «ÄÍÊ-êîìåò» íà ïóõëèíí³ êë³òèíè òà ë³ì-
ôîöèòè ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³. Ïîð³âíÿëüíèé àíàë³ç
«% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò» â ë³ìôîöèòàõ ïåðè-
ôåðè÷íî¿ êðîâ³ òà ïóõëèííèõ êë³òèíàõ ìèøåé
ç ÀÊÅ âíàñë³äîê 䳿 ÔÌ ó êîíöåíòðàö³¿ 3 ìã/êã
âèÿâèâ äîñòîâ³ðíå çðîñòàííÿ öüîãî ïîêàçíèêà
â îáîõ òèïàõ êë³òèí ÷åðåç 24 ãîä ï³ñëÿ âïëèâó.
Ïðîòå á³ëüø âèðàæåíèé ãåíîòîêñè÷íèé åôåêò
ö³º¿ êîíöåíòðàö³¿ çàçíà÷åíîãî ÷èííèêà ñïîñ-
òåð³ãàâñÿ ó òðàíñôîðìîâàíèõ êë³òèíàõ (ðèñ. 5).
 òîé æå ÷àñ âñòàíîâëåíî, ùî âíàñë³äîê 䳿
ÏÌÏ ó ïóõëèííèõ êë³òèíàõ íå â³äáóâàºòüñÿ
äîñòîâ³ðíèõ çì³í öüîãî ïîêàçíèêà íåçàëåæíî â³ä
òðèâàëîñò³ ³íäóêö³¿. Îäíàê äîâåäåíî, ùî êîì-
á³íîâàíèé âïëèâ ÔÌ òà ÏÌÏ çíà÷íî çá³ëü-
øóâàâ «% ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò» â ïóõëèííèõ
êë³òèíàõ ÷åðåç 24 ãîä ³íêóáàö³¿ òà ó íåçíà÷í³é
ì³ð³ – â ë³ìôîöèòàõ ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³. Îòæå
ðåçóëüòàòè ïðîâåäåíèõ äîñë³äæåíü ñâ³ä÷àòü ïðî
òå, ùî ÏÌÏ, ÔÌ òà ¿õí³é êîìá³íîâàíèé âïëèâ
ïðè 1- òà 24-ãîäèíí³é åêñïîçèö³¿ íå ïðèçâîäÿòü
äî ³ñòîòíèõ çì³í öèòîãåíåòè÷íèõ ïîêàçíèê³â ó
ë³ìôîöèòàõ ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³. Íàòîì³ñòü ÷å-
ðåç 24 ãîä ï³ñëÿ âíóòð³øíüî÷åðåâíîãî ââåäåí-
íÿ ÔÌ ñïîñòåð³ãàºòüñÿ äîñòîâ³ðíå óðàæåííÿ
ÄÍÊ ïóõëèííèõ êë³òèí, íå ïîâ’ÿçàíå ç ïðè-
ñóòí³ñòþ çîâí³øíüîãî ÏÌÏ. Îòðèìàí³ äàí³
ñâ³ä÷àòü ïðî á³ëüø âèñîêó ÷óòëèâ³ñòü ïóõ-
ëèííèõ êë³òèí äî 䳿 ÔÌ, í³æ ë³ìôîöèò³â
ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ (ðèñ. 6). ²ñíóþòü äâà ìîæ-
ëèâèõ ìåõàí³çìè, ÿêèìè ìîæíà ïîÿñíèòè öå
ÿâèùå: çàë³çîâì³ñí³ íàíî÷àñòèíêè ìîæóòü âè-
êëèêàòè óøêîäæåííÿ ÄÍÊ îïîñåðåäêîâàíî,
ñïðèÿþ÷è ðîçâèòêó îêñèäàòèâíîãî ñòðåñó, à òà-
êîæ øëÿõîì ïðîíèêíåííÿ ÷åðåç ìåìáðàíè ÿäðà
òà áåçïîñåðåäíüî¿ âçàºìî䳿 ç ÄÍÊ [24–26].
²îíè çàë³çà, ÿê³ âèâ³ëüíÿþòüñÿ ç íàíî÷àñòè-
íîê, ìîæóòü ïåðåòâîðþâàòè âíóòð³øíüîêë³òèí-
í³ ïðîäóêòè ìåòàáîë³çìó êèñíþ (ïåðîêñèä âîä-
íþ òà ñóïåðîêñèä-àí³îíè) íà ã³äðîêñèëüí³ ðàäè-
êàëè ÎÍ, ÿê³ çäàòí³ ïîøêîäæóâàòè ÄÍÊ, à
òàêîæ ³í³ö³þâàòè çøèâêè ì³æ òèì³íîì ÄÍÊ ³
òèðîçèíîì ã³ñòîí³â ó õðîìàòèí³ [26]. Òàêèì
÷èíîì, íàíî÷àñòèíêè, ÿê³ ì³ñòÿòü çàë³çî, ìî-
æóòü áóòè äæåðåëîì íàäëèøêó çàë³çà â êë³òè-
í³, ùî ïðèçâîäèòü äî ãåíåðóâàííÿ âèñîêîðåàê-
òèâíèõ ã³äðîêñèëüíèõ ðàäèêàë³â [26, 27]. Íàñ-
ë³äêàìè âçàºìî䳿 àêòèâíèõ ôîðì êèñíþ ç
ÄÍÊ ìîæóòü áóòè îäíî- òà äâîëàíöþãîâ³
ðîçðèâè, ìîäèô³êàö³¿ îñíîâ (íàïðèêëàä, ôîð-
ìóâàííÿ 8-ã³äðîêñèäåçîêñèãóàíîçèíîâèõ ïîõ³ä-
íèõ), ôîðìóâàííÿ ïîïåðå÷íèõ çøèâîê òîùî
[27]. Ïðè÷èíîþ âèçíà÷åíèõ ó âëàñíîìó äîñ-
ë³äæåíí³ â³äì³ííîñòåé ì³æ ïîêàçíèêàìè, ùî
â³äîáðàæàþòü ñòóï³íü óðàæåííÿ ÄÍÊ ë³ìôî-
öèò³â ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ òà ïóõëèííèõ êë³òèí
ÀÊÅ, ìè ââàæàºìî òå, ùî íàíî÷àñòèíêè ÔÌ
ââîäèëè òâàðèíàì âíóòð³øíüî÷åðåâíî, ³ òîìó
êîíöåíòðàö³ÿ ÔÌ â àñöèòí³é ð³äèí³ áóëà íà-
áàãàòî á³ëüøîþ ó ïîð³âíÿíí³ ç éîãî êîíöåíò-
ðàö³ºþ ïðè âçàºìî䳿 ç ë³ìôîöèòàìè.
Âèñíîâêè. Çà ðåçóëüòàòàìè ïîð³âíÿëüíîãî
òåñòóâàííÿ ð³çíèõ êîíöåíòðàö³é ÔÌ íà
öèòî- òà ãåíîòîêñè÷í³ñòü ìåæåþ íàéìåíøèõ
ïðîÿâ³â 䳿 öüîãî ÷èííèêà íà êë³òèíè ÀÊÅ,
êë³òèíè åðèòðî¿äíîãî ðÿäó ÊÌ òà ë³ìôîöèòè
ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³ º êîíöåíòðàö³ÿ 3 ìã/êã,
ùî äîçâîëÿº ðåêîìåíäóâàòè ¿¿ äëÿ çàñòîñóâàí-
íÿ íà âñ³õ åòàïàõ åêñïåðèìåíòàëüíèõ äîñë³ä-
æåíü ùîäî ñòâîðåííÿ âåêòîðíèõ íàíîñèñòåì.
Âñòàíîâëåíî, ùî öèòî- òà ãåíîòîêñè÷í³ åôåê-
òè ó ïóõëèííèõ êë³òèíàõ òà êë³òèíàõ îðãàí³ç-
ìó – íîñ³ÿ ïóõëèí ïðè 䳿 ÔÌ, ÏÌÏ òà ¿õ-
íüîìó ïîºäíàíí³ ìàþòü îäíîòèïíó ñïðÿìîâà-
í³ñòü – çá³ëüøåííÿ ê³ëüêîñò³ Ìß, êë³òèí ç «%
ÄÍÊ ó õâîñò³ êîìåò», çì³íó ñï³ââ³äíîøåííÿ
ÏÕÅ/ÍÕÅ, àëå ñòóï³íü ïðîÿâó öèõ çì³í ïî-
â’ÿçàíèé ç êîíöåíòðàö³ºþ ÔÌ òà òðèâàë³ñ-
òþ 䳿 âèêîðèñòàíèõ ÷èííèê³â. Äîâåäåíî, ùî
ÏÌÏ íå ñïðè÷èíÿº ³ñòîòíîãî öèòî- òà ãåíî-
òîêñè÷íîãî åôåêò³â íà ïóõëèíí³ êë³òèíè, êë³-
òèíè åðèòðî¿äíîãî ðÿäó ÊÌ òà ë³ìôîöèòè
ïåðèôåðè÷íî¿ êðîâ³, â òîé æå ÷àñ ïðè ïîºäíà-
í³é éîãî 䳿 ç ÔÌ çì³íè â öèõ êë³òèíàõ íàáó-
âàþòü á³ëüø âèðàæåíîãî õàðàêòåðó, ùî º ñâ³ä-
÷åííÿì ìîäèô³êóþ÷îãî âïëèâó ÔÌ ÿê ³íäóê-
òîðà àêòèâíîñò³ ÏÌÏ. Ïîêàçàíî, ùî îö³íêà
öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íîãî âïëèâó ÔÌ, ÏÌÏ
òà êîìá³íàö³¿ öèõ ÷èííèê³â íà ïóõëèíí³ êë³-
òèíè, êë³òèíè ÊÌ òà ë³ìôîöèòè ïåðèôåðè÷-
69ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 3
Îö³íêà öèòî- òà ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ íàíîôåðîìàãíåòèêà òà ïîñò³éíîãî ìàãí³òíîãî ïîëÿ
íî¿ êðîâ³ ìîæå çä³éñíþâàòèñü ç âèêîðèñòàí-
íÿì ÿê ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó, òàê ³ ìåòîäó
«ÄÍÊ-êîìåò», ÿê³ º ³íôîðìàòèâíèìè òà âçàºì-
íî äîïîâíþþòü îäèí îäíîãî, àëå á³ëüøó ÷óò-
ëèâ³ñòü ìຠîñòàí³é. Êîìïëåêñíå âèçíà÷åííÿ
öèòî- ³ ãåíîòîêñè÷íî¿ ä³¿ ÔÌ ÿê ñàìîñò³é-
íîãî ÷èííèêà òà íà ôîí³ ÏÌÏ çà äîïîìîãîþ
ì³êðîÿäåðíîãî òåñòó ³ ìåòîäó «ÄÍÊ-êîìåò» â
ñèñòåì³ in vivo ìîæå ñëóãóâàòè âàæëèâèì
êðèòåð³ºì îö³íêè ñòàá³ëüíîñò³ ãåíîìó íå ëèøå
ïóõëèííèõ êë³òèí, àëå é íåìàë³ãí³çîâàíèõ êë³-
òèí îðãàí³çìó – íîñ³ÿ ïóõëèíè.
Ðîáîòà âèêîíàíà çà ï³äòðèìêè äîãîâîðîì
¹ 5.18.3.53 Äåðæàâíî¿ ö³ëüîâî¿ íàóêîâî-òåõí³÷íî¿
ïðîãðàìè «Íàíîòåõíîëî㳿 òà íàíîìàòåð³àëè» íà
2010–2014 ðð.
V.F. Chekhun, Yu.V. Lozovska, N.Yu. Lukyanova,
D.V. Demash, I.N. Todor, L.A. Naleskina
R.E. Kavetsky Institute of Experimental Pathology,
Oncology and Radiobiology NAS of Ukraine, Kyiv
E-mail: chekhun@onconet.kiev.ua
EVALUATION OF CYTO- AND GENOTOXIC
ACTION OF FERRONANOMAGNETIC
AND CONSTANT MAGNETIC FIELD
IN IN VIVO SYSTEM
Cyto- and genotoxic effects of nanoparticles on the basis
of FM, CMF or their combination have been studied in
AKE cells, BM cells of erythroid line, and peripheral blood
lymphocytes with the use of MN test and «DNA-comet»
assay. It has been shown that expression of mentioned ef-
fects is related to FM concentration and duration of tested
agent action. It has been also demonstrated that action of
CMF alone in the studied cells did not cause any changes
in cell architectonics or affect MN counts which are associ-
ated with DNA damage. When FM and CMF were used
in combination there has been observed the phenomenon
of induction of CMF action with FM nanoparticles. The
obtained results allow recommend MN test and «DNA-
comet» assay as the markers of genome stability in the tests
of genotoxic effects of nanomaterials for development of
vector nanosystems.
Â.Ô. ×åõóí, Þ.Â. Ëîçîâñêàÿ, Í.Þ. Ëóêüÿíîâà,
Ä.Â. Äåìàø, È.Í. Òîäîð, Ë.À. Íàëåñêèíà
ÎÖÅÍÊÀ ÖÈÒÎ- È ÃÅÍÎÒÎÊÑÈ×ÅÑÊÎÃÎ
ÄÅÉÑÒÂÈß ÍÀÍÎÔÅÐÐÎÌÀÃÍÅÒÈÊÀ
È ÏÎÑÒÎßÍÍÎÃÎ ÌÀÃÍÈÒÍÎÃÎ ÏÎËß
 ÑÈÑÒÅÌÅ IN VIVO
Èññëåäîâàíû öèòî- è ãåíîòîêñè÷åñêèå ýôôåêòû
äåéñòâèÿ íàíî÷àñòèö ôåððîìàãíåòèêà (ÔÌ), ïîñòî-
ÿííîãî ìàãíèòíîãî ïîëÿ (ÏÌÏ) è ñîåäèíåíèÿ ýòèõ
àãåíòîâ íà êëåòêè àñöèòíîé êàðöèíîìû Ýðëèõà,
êëåòêè ýðèòðîèäíîãî ðÿäà êîñòíîãî ìîçãà è ëèì-
ôîöèòû ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ñ ïîìîùüþ ìèêðî-
ÿäåðíîãî òåñòà è ìåòîäà «ÄÍÊ-êîìåò». Ïîêàçàíî,
÷òî ïðîÿâëåíèÿ óêàçàííûõ ýôôåêòîâ ñâÿçàíû êàê
ñ êîíöåíòðàöèåé ÔÌ, òàê è ïðîäîëæèòåëüíîñòüþ
äåéñòâèÿ òåñòèðîâàííûõ ôàêòîðîâ. Âìåñòå ñ òåì
óñòàíîâëåíî, ÷òî äåéñòâèå ÏÌÏ êàê ñàìîñòîÿòåëü-
íîãî àãåíòà íå âûçûâàåò â èññëåäîâàííûõ êëåòêàõ
èçìåíåíèé öèòîàðõèòåêòîíèêè è êîëè÷åñòâà ìèêðî-
ÿäåð, êîòîðûå àññîöèèðóþòñÿ ñ ïîâðåæäåíèåì ÄÍÊ.
Ïðè ñîâìåñòíîì ïðèìåíåíèè ÔÌ è ÏÌÏ íà-
áëþäàåòñÿ ôåíîìåí èíäóêöèè íàíî÷àñòèöàìè ÔÌ
äåéñòâèÿ ÏÌÏ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû äàþò îñíî-
âàíèå ðåêîìåíäîâàòü ìèêðîÿäåðíûé òåñò è ìåòîä
«ÄÍÊ-êîìåò» â êà÷åñòâå ìàðêåðîâ ñòàáèëüíîñòè ãå-
íîìà ïðè òåñòèðîâàíèè ãåíîòîêñè÷åñêîãî âëèÿíèÿ
íàíîìàòåðèàëîâ ïðè ñîçäàíèè âåêòîðíûõ íàíîñèñ-
òåì.
ÑÏÈÑÎÊ Ë²ÒÅÐÀÒÓÐÈ
1. Íàëºñê³íà Ë.À., Áîðîäàé Í.Â., ×åõóí Â.Ô. Ñüîãî-
äåííÿ òà ïåðñïåêòèâè ñòâîðåííÿ íàíîñèñòåì
ñïðÿìîâàíî¿ äîñòàâêè ë³êàðñüêèõ ïðåïàðàò³â äî
ïóõëèííèõ êë³òèí // Îíêîëîãèÿ. – 2009. – 11,
¹ 3. – Ñ. 166–173.
2. Ãîëîâåíêî Ì.ß. Íàíîìåäèöèíà: äîñÿãíåííÿ òà
ïåðñïåêòèâè ðîçâèòêó íîâ³òí³õ òåõíîëîã³é ó ä³à-
ãíîñòèö³ òà ë³êóâàíí³ (îãëÿä ë³òåðàòóðè) // Æóðí.
ÀÌÍ Óêðà¿íè. – 2007. – 13, ¹ 4. – Ñ. 617–635.
3. ×åõóí Â.Ô. Íàíîòåõíîëî㳿 â îíêîëî㳿: â³ä òåîð³¿
äî ìîëåêóëÿðíî¿ â³çóàë³çàö³¿ òà êåðîâàíî¿ òåðà-
ﳿ // Îíêîëîãèÿ. – 2008. – 10, ¹ 4. – C. 414–
419.
4. Ñåâåðèí Å.Ñ., Ðîäèíà À.Â. Ïðîáëåìû è ïåðñïåê-
òèâû ñîâðåìåííîé ïðîòèâîîïóõîëåâîé òåðà-
ïèè // Óñï. áèîë. õèìèè. – 2006. – 46. – Ñ. 43–
64.
5. Oberdoster G., Oberdoster E., Oberdoster J. Nanotox-
icology: an emerging discipline evolving from studies
of ultrafine particles // Health. Persp. – 2005. –
113, ¹ 7. – P. 823–839.
6. Îíèùåíêî Ã.Ã., Àð÷àêîâ À.È., Áåññîíîâ Â.Â. è äð.
Ìåòîäè÷åñêèå ïîäõîäû ê îöåíêå áåçîïàñíîñòè
íàíîìàòåðèàëîâ. Ôåäåðàëüíàÿ ñëóæáà ïî íàäçî-
ðó â ñôåðå çàùèòû ïðàâ ïîòðåáèòåëåé è áëàãî-
ïîëó÷èÿ ÷åëîâåêà, ÃÓ ÍÈÈ áèîìåä. õèìèè èì.
Â.Í. Îðåõîâè÷à ÐÀÌÍ, ÃÓ ÍÈÈ ýïèäåìèîëî-
ãèè è ìèêðîáèîëîãèè èì. Í.Ô. Ãàìàëåè, Ãîñ.
íàó÷. öåíòð ÐÔ – Èí-ò ìåä.-áèîë. ïðîáëåì
ÐÀÍ, 2009. – Ñ. 1–25.
7. Êóí䳺â Þ.²., Äåìåöüêà Î.Â., Êó÷åðóê Ò.Ê., Ìîâ-
÷àí Â.Î., Íîâè÷åíêî Í.Ë., Íàëºñê³íà Ë.À. Á³îëî-
ã³÷íà àêòèâí³ñòü ÷àñòèíîê íàíîä³àïàçîíó â
çàëåæíîñò³ â³ä ¿õ ðîçì³ðó // Îíêîëîãèÿ. – 2008. –
10, ¹ 2. – Ñ. 217–224.
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2013. Ò. 47. ¹ 370
Â.Ô. ×åõóí, Þ.Â. Ëîçîâñüêà, Í.Þ. Ëóê’ÿíîâà òà ³í.
8. Tinwell H., Ashby J. Comparison of Acridine orange
and Gimsa stains in several mouse bone marrow
micronucleus assay-including a triple dose study //
Mutagenesis. – 1989. – 6, ¹ 3. – P. 476–481.
9. Dias V.M.,Manelli-Oliveria R., Machado-Santelli G.M.
Using fluorescence for improvement of the quantita-
tive analysis of micronucleus in cell culture // Mu-
tat. Res. – 2005. – 565, ¹ 2. – P. 173–179.
10. Ìèõàéëåíêî Â.Ì., Ñîðî÷èíñêàÿ À.Á. Ïðèìåíåíèå
ìåòîäà ÄÍÊ-êîìåò äëÿ îöåíêè ïîâðåæäåíèé
ÄÍÊ, âûçâàííûõ ðàçëè÷íûìè àãåíòàìè îêðóæà-
þùåé ñðåäû // Îíêîëîãèÿ. – 2008. – 10, ¹ 3. –
Ñ. 303–309.
11. Bonassi S., Znaor À., Ceppi M. et al. An increased mi-
cronuclei frequency in peripheral blood lymphocytes
predict the risk of cancer in humans // Carcinogen-
esis. – 2006. – 28, ¹ 3. – P. 625–631.
12. Nersesyan A.K. Biomonitoring of cytogenetic effect
of antitumor therapy by means of micronucleus assay
in exfoliated epithelial cells // Cytology and Gene-
tics. – 2007. – 41, ¹ 6. – P. 385–390.
13. Êovaleva Î.À. Cytogenetic anomalies and causes for
their occurence // Cytology and Genetics. – 2008. –
42, ¹ 1. – P. 48–59.
14. Ôèðñîâà Ñ.Ñ., Áó÷àðñêàÿ À.Á., Ìàñëÿêîâà Ã.Í. è äð.
Èçìåíåíèå ìîðôîëîãè÷åñêèõ ïîêàçàòåëåé êîñò-
íîãî ìîçãà è ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ïðè äëè-
òåëüíîì âîçäåéñòâèè çîëîòûõ íàíî÷àñòèö // Èçâ.
Ñàðàòîâ. óí-òà. Ñåð. Ôèçèêà. – 2011. – 11, âûï. 2. –
Ñ. 54–57.
15. Travlos G.S. Normal structure, function and histol-
ogy of bone marrow // Toxicol. Path. – 2006. – 34,
¹ 5. – P. 550–565.
16. Candido-Bacani P. de M., dos Reis M.B., Serpeloni
J.M. et al. Mutagenicity and genotoxicity of isatin
in mammalian cell in vivo // Mutat. Res. – 2011. –
719, 1/2. – P. 47–51.
17. Junior A.D., Mota L.G., Nunan E.A et al. Tissue dis-
tribution evaluation of stealth Ph-sensitive liposomal
cisplatin versus free cisplatin in Ehrlich tumour-bear-
ing mice // Life Sci. – 2007. – 80. – P. 659–664.
18. Suzuki H., Ikeda N., Kobayashi K. et al. Evaluation
of liver and peripheral blood micronucleus assay with
9 chemicals using young rats a study by the Col-
laborative Study Group for the Micronucleus Test
(CSGMT) // Mutat. Res. – 2005. – 583, ¹ 2. –
P. 133–145.
19. Celik A., Ogenler O., Comelekoglu U. The evaluation
of micronucleus frequency by acridine orange fluo-
rescent staining in peripheral blood of rats treated
with lead acetate // Mutagenesis. – 2005. – 20,
¹ 6. – P. 411–415.
20. Wang Z.Y., Song J., Zhang D.S. Nanosized As203/
Fe203 complex combined with magnetic fluid hyper-
thermia selectively target liver cancer cell // World J.
Gastroenterol. – 2009. – 15, ¹ 24. – P. 2995–3002.
21. Balasubramanyam A., Sailaja N., Mahboob M., Rah-
man M.R., Saber M.N. In vivo genotoxicity assess-
ment of aluminium oxide nanomaterials in rat pe-
ripheral blood cells using the comet assay and mi-
cronucleus test // Mutagenesis. – 2009. – 24,
¹ 3. – P. 245–251.
22. Suzuki Y., Toyama Y., Miyakoshi Y. et al. Effect of
static magnetic field on the induction of micronuclei
by some mutagens // Environm. Health and Prevent.
Med. – 2006. – ¹ 11. – P. 228–232.
23. Suzuki Y., Ikehata M., Nakamura K. et al. Induc-
tion of micronuclei in mice exposed in static mag-
netic fields // Mutagenesis. – 2001. – 216, ¹ 6. –
P. 499–501.
24. Ferrari M. Cancer nanotechnology: opportunities and
challenges // Nat. Rev. Cancer. – 2005. – 5, ¹ 3. –
P. 161–171.
25. Altman S.A, Zastawny T.H, Randers-Eichhorn L. et
al. Formation of DNA-protein cross-links in cul-
tured mammalian cells upon treatment with iron
ions // Free Radic. Biol. Med. – 1995. – 19, ¹ 6. –
P. 897–902.
26. Rouse R.L., Murhy G., Boudreaux M.J. et al. Soot
nanoparticles promote biotransformation, oxidative
stress and inflammation in murine lungs // Amer.
J. Resp. Cell. Mol. Biol. – 2008. – 131, ¹ 1. –
P. 40–41.
Íàä³éøëà 11.10.12
<<
/ASCII85EncodePages false
/AllowTransparency false
/AutoPositionEPSFiles true
/AutoRotatePages /None
/Binding /Left
/CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
/CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
/sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
/CannotEmbedFontPolicy /Error
/CompatibilityLevel 1.4
/CompressObjects /Tags
/CompressPages true
/ConvertImagesToIndexed true
/PassThroughJPEGImages true
/CreateJobTicket false
/DefaultRenderingIntent /Default
/DetectBlends true
/DetectCurves 0.0000
/ColorConversionStrategy /CMYK
/DoThumbnails false
/EmbedAllFonts true
/EmbedOpenType false
/ParseICCProfilesInComments true
/EmbedJobOptions true
/DSCReportingLevel 0
/EmitDSCWarnings false
/EndPage -1
/ImageMemory 1048576
/LockDistillerParams false
/MaxSubsetPct 100
/Optimize true
/OPM 1
/ParseDSCComments true
/ParseDSCCommentsForDocInfo true
/PreserveCopyPage true
/PreserveDICMYKValues true
/PreserveEPSInfo true
/PreserveFlatness true
/PreserveHalftoneInfo false
/PreserveOPIComments false
/PreserveOverprintSettings true
/StartPage 1
/SubsetFonts true
/TransferFunctionInfo /Apply
/UCRandBGInfo /Preserve
/UsePrologue false
/ColorSettingsFile ()
/AlwaysEmbed [ true
]
/NeverEmbed [ true
]
/AntiAliasColorImages false
/CropColorImages true
/ColorImageMinResolution 300
/ColorImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleColorImages true
/ColorImageDownsampleType /Bicubic
/ColorImageResolution 1200
/ColorImageDepth -1
/ColorImageMinDownsampleDepth 1
/ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeColorImages false
/ColorImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterColorImages true
/ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
/ColorACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/ColorImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000ColorACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000ColorImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasGrayImages false
/CropGrayImages true
/GrayImageMinResolution 300
/GrayImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleGrayImages true
/GrayImageDownsampleType /Bicubic
/GrayImageResolution 1200
/GrayImageDepth -1
/GrayImageMinDownsampleDepth 2
/GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeGrayImages false
/GrayImageFilter /DCTEncode
/AutoFilterGrayImages true
/GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
/GrayACSImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/GrayImageDict <<
/QFactor 0.15
/HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
>>
/JPEG2000GrayACSImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/JPEG2000GrayImageDict <<
/TileWidth 256
/TileHeight 256
/Quality 30
>>
/AntiAliasMonoImages false
/CropMonoImages true
/MonoImageMinResolution 1200
/MonoImageMinResolutionPolicy /OK
/DownsampleMonoImages true
/MonoImageDownsampleType /Bicubic
/MonoImageResolution 1200
/MonoImageDepth -1
/MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
/EncodeMonoImages false
/MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
/MonoImageDict <<
/K -1
>>
/AllowPSXObjects false
/CheckCompliance [
/None
]
/PDFX1aCheck false
/PDFX3Check false
/PDFXCompliantPDFOnly false
/PDFXNoTrimBoxError true
/PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
/PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
0.00000
0.00000
0.00000
0.00000
]
/PDFXOutputIntentProfile (None)
/PDFXOutputConditionIdentifier ()
/PDFXOutputCondition ()
/PDFXRegistryName ()
/PDFXTrapped /False
/CreateJDFFile false
/Description <<
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
/BGR <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>
/CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
/CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
/CZE <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>
/DAN <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>
/DEU <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>
/ESP <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>
/ETI <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>
/FRA <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>
/GRE <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>
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
/HRV (Za stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.)
/HUN <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>
/ITA <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>
/JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002>
/KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
/LTH <FEFF004e006100750064006f006b0069007400650020016100690075006f007300200070006100720061006d006500740072007500730020006e006f0072011700640061006d00690020006b0075007200740069002000410064006f00620065002000500044004600200064006f006b0075006d0065006e007400750073002c0020006b00750072006900650020006c0061006200690061007500730069006100690020007000720069007400610069006b007900740069002000610075006b01610074006f00730020006b006f006b007900620117007300200070006100720065006e006700740069006e00690061006d00200073007000610075007300640069006e0069006d00750069002e0020002000530075006b0075007200740069002000500044004600200064006f006b0075006d0065006e007400610069002000670061006c006900200062016b007400690020006100740069006400610072006f006d00690020004100630072006f006200610074002000690072002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e0030002000610072002000760117006c00650073006e0117006d00690073002000760065007200730069006a006f006d00690073002e>
/LVI <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>
/NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
/NOR <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>
/POL <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>
/PTB <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>
/RUM <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>
/RUS <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>
/SKY <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>
/SLV <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>
/SUO <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>
/SVE <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>
/TUR <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>
/UKR <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>
/ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
>>
/Namespace [
(Adobe)
(Common)
(1.0)
]
/OtherNamespaces [
<<
/AsReaderSpreads false
/CropImagesToFrames true
/ErrorControl /WarnAndContinue
/FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
/IncludeGuidesGrids false
/IncludeNonPrinting false
/IncludeSlug false
/Namespace [
(Adobe)
(InDesign)
(4.0)
]
/OmitPlacedBitmaps false
/OmitPlacedEPS false
/OmitPlacedPDF false
/SimulateOverprint /Legacy
>>
<<
/AddBleedMarks false
/AddColorBars false
/AddCropMarks false
/AddPageInfo false
/AddRegMarks false
/ConvertColors /ConvertToCMYK
/DestinationProfileName ()
/DestinationProfileSelector /DocumentCMYK
/Downsample16BitImages true
/FlattenerPreset <<
/PresetSelector /MediumResolution
>>
/FormElements false
/GenerateStructure false
/IncludeBookmarks false
/IncludeHyperlinks false
/IncludeInteractive false
/IncludeLayers false
/IncludeProfiles false
/MultimediaHandling /UseObjectSettings
/Namespace [
(Adobe)
(CreativeSuite)
(2.0)
]
/PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK
/PreserveEditing true
/UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
/UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile
/UseDocumentBleed false
>>
]
>> setdistillerparams
<<
/HWResolution [2400 2400]
/PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice
|