Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів
Оптимізація лікування холодових ран на даний час залишається актуальною задачею, яка може бути вирішена, зокрема, за рахунок введення до складу комплексної терапії імунобіологічних препаратів. Дослідним щурам вводили по 1 мл екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або с...
Збережено в:
| Дата: | 2015 |
|---|---|
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2015
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/134519 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів / І.Г. Беспалова, Л.А. Рогоза, С.Є. Гальченко, Б.П. Сандомирський // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 2. — С. 151–161. — Бібліогр.: 28 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-134519 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1345192018-06-14T03:06:07Z Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів Беспалова, І.Г. Рогоза, Л.А. Гальченко, С.Є. Сандомирський, Б.П. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Оптимізація лікування холодових ран на даний час залишається актуальною задачею, яка може бути вирішена, зокрема, за рахунок введення до складу комплексної терапії імунобіологічних препаратів. Дослідним щурам вводили по 1 мл екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або селезінки свиней у черевну порожнину раз на добу протягом всього строку експерименту. Доза пептидів становила 50 мкг на 100 г маси тварини. Контрольним щурам вводили 1 мл фізіологічного розчину раз на добу. Встановлено, що введення тваринам із холодовою травмою екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри новорождених поросят або селезінки свиней прискорює загоєння ран. Починаючи з 7-ї доби площа ран у тварин, яким вводили екстракт кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або селезінки свиней, статистично значуще менша, ніж у контрольних щурів. Також у дослідних тварин більш швидкими темпами нормалізувався індекс зсуву лейкоцитів крові. Після введення тваринам із холодовою травмою екстрактів знизився рівень вільнорадикального окислення ліпідів і рівень ТБКАП у сироватці крові. Так, вже на 14-у добу експерименту в групах із введенням екстракту кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней або шкіри новонароджених поросят рівень ТБКАП нормалізувався, а в контрольній групі це відбулося лише на 21-у добу. У тварин, яким вводили екстракти, навантаженість альбуміну лігандами зменшилася швидше, ніж у контролі. Оптимизация лечения холодовых ран на сегодняшний день остается актуальной проблемой, которая может быть решена, в частности, за счет введения в состав комплексной терапии иммунобиологических препаратов. Опытным крысам вводили по 1 мл экстракта криоконсервированных фрагментов кожи новорожденных поросят или селезенки свиней внутрибрюшинно раз в сутки на протяжении всего срока эксперимента. Доза пептидов составляла 50 мкг на 100 г массы животного. Контрольным крысам вводили 1 мл физиологического раствора раз в сутки. Установлено, что введение животным с холодовой травмой экстракта криоконсервированных фрагментов кожи новорожденных поросят и селезенки свиней ускоряет заживление холодовых ран. Начиная с 7-х суток площадь ран у животных, которым вводили экстракт криоконсервированных фрагментов кожи новорожденных поросят или селезенки свиней, статистически значимо менше, чем у контрольных крыс. Также у исследуемых животных более быстрыми темпами нормализовался индекс сдвига лейкоцитов крови. После введения животным с холодовой травмой исследованных экстрактов снизился уровень свободнорадикального окисления липидов и уровень ТБКАП в сыворотке крови. Так, уже на 14-е сутки эксперимента в группах животных с введением экстракта криоконсервированных фрагментов селезенки свиней или кожи новорожденных поросят уровень ТБКАП нормализовался, а в контрольной группе это произошло только на 21-е сутки. У животных, которым вводили экстракты, нагруженность альбумина лигандами снизилась быстрее, чем в контроле. The optimizing of cold wound treatment has been currently remained a relevant task, which can be particularly solved through the introduction of the combined therapy with immune biological products. The experimental animals were injected with 1 ml extract of cryopreserved fragments of either newborn piglet skin or pig spleen into abdominal cavity once a day within the course of experiment. The dose of peptides was 50 µg per 100 g of an animal. The control rats were injected with 1 ml of physiological saline once a day. It has been established that introduction to the animals with cold trauma of the extract of cryopreserved fragments of either newborn piglet skin or pig spleen accelerates the healing of cold wounds. Starting from day 7 the area of wounds in the animals, which were injected with the extract of cryopreserved fragments of either newborn piglet skin or pig spleen was statistically and significantly lower than in the control rats. In addition, in the experimental animals the index of blood leukocytes shift was more rapidly normalized. After introduction of the extracts to the animals with cold trauma the rate of free radical oxidation of lipids and the TBARS level in blood serum of the animals with cold injury were reduced. Thus, to day 14 of the experiment in the groups with introduced extract of cryopreserved fragments of either pig spleen or newborn piglet skin the level of TBARS was normalized, and in the control group this happened only to day 21. In the animals introduced with the extracts, the ligand-loading of albumin decreased faster than in the control animals. 2015 Article Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів / І.Г. Беспалова, Л.А. Рогоза, С.Є. Гальченко, Б.П. Сандомирський // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 2. — С. 151–161. — Бібліогр.: 28 назв. — укр. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/134519 612.44.014.086.3:616.127-002:612.649.011.87.014.3 uk Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Беспалова, І.Г. Рогоза, Л.А. Гальченко, С.Є. Сандомирський, Б.П. Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
Оптимізація лікування холодових ран на даний час залишається актуальною задачею, яка може бути вирішена,
зокрема, за рахунок введення до складу комплексної терапії імунобіологічних препаратів. Дослідним щурам вводили по 1 мл
екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або селезінки свиней у черевну порожнину раз на
добу протягом всього строку експерименту. Доза пептидів становила 50 мкг на 100 г маси тварини. Контрольним щурам
вводили 1 мл фізіологічного розчину раз на добу. Встановлено, що введення тваринам із холодовою травмою екстракту
кріоконсервованих фрагментів шкіри новорождених поросят або селезінки свиней прискорює загоєння ран. Починаючи з
7-ї доби площа ран у тварин, яким вводили екстракт кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або
селезінки свиней, статистично значуще менша, ніж у контрольних щурів. Також у дослідних тварин більш швидкими темпами
нормалізувався індекс зсуву лейкоцитів крові. Після введення тваринам із холодовою травмою екстрактів знизився рівень
вільнорадикального окислення ліпідів і рівень ТБКАП у сироватці крові. Так, вже на 14-у добу експерименту в групах із введенням
екстракту кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней або шкіри новонароджених поросят рівень ТБКАП
нормалізувався, а в контрольній групі це відбулося лише на 21-у добу. У тварин, яким вводили екстракти, навантаженість
альбуміну лігандами зменшилася швидше, ніж у контролі. |
| format |
Article |
| author |
Беспалова, І.Г. Рогоза, Л.А. Гальченко, С.Є. Сандомирський, Б.П. |
| author_facet |
Беспалова, І.Г. Рогоза, Л.А. Гальченко, С.Є. Сандомирський, Б.П. |
| author_sort |
Беспалова, І.Г. |
| title |
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів |
| title_short |
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів |
| title_full |
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів |
| title_fullStr |
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів |
| title_full_unstemmed |
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів |
| title_sort |
вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2015 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/134519 |
| citation_txt |
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів / І.Г. Беспалова, Л.А. Рогоза, С.Є. Гальченко, Б.П. Сандомирський // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2015. — Т. 25, № 2. — С. 151–161. — Бібліогр.: 28 назв. — укр. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT bespalovaíg vplivekstraktívkríokonservovanihfragmentívselezínkisvinejtaškíriporosâtnaproceszagoênnâholodovihranuŝurív AT rogozala vplivekstraktívkríokonservovanihfragmentívselezínkisvinejtaškíriporosâtnaproceszagoênnâholodovihranuŝurív AT galʹčenkosê vplivekstraktívkríokonservovanihfragmentívselezínkisvinejtaškíriporosâtnaproceszagoênnâholodovihranuŝurív AT sandomirsʹkijbp vplivekstraktívkríokonservovanihfragmentívselezínkisvinejtaškíriporosâtnaproceszagoênnâholodovihranuŝurív |
| first_indexed |
2025-07-09T21:35:16Z |
| last_indexed |
2025-07-09T21:35:16Z |
| _version_ |
1837206781140402176 |
| fulltext |
УДК 612.44.014.086.3:616.127-002:612.649.011.87.014.3
І.Г. Беспалова, Л.А. Рогоза, С.Є. Гальченко*, Б.П. Сандомирський
Вплив екстрактів кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней
та шкіри поросят на процес загоєння холодових ран у щурів
UDC 612.44.014.086.3:616.127-002:612.649.011.87.014.3
I.G. Bespalova, L.A. Rogoza, S.Ye. Galchenko*, B.P. Sandomirsky
Extracts of Cryopreserved Fragments of Pig Spleen and Piglet
Skin Affect the Healing of Cold Wounds in Rats
Реферат: Оптимізація лікування холодових ран на даний час залишається актуальною задачею, яка може бути вирішена,
зокрема, за рахунок введення до складу комплексної терапії імунобіологічних препаратів. Дослідним щурам вводили по 1 мл
екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або селезінки свиней у черевну порожнину раз на
добу протягом всього строку експерименту. Доза пептидів становила 50 мкг на 100 г маси тварини. Контрольним щурам
вводили 1 мл фізіологічного розчину раз на добу. Встановлено, що введення тваринам із холодовою травмою екстракту
кріоконсервованих фрагментів шкіри новорождених поросят або селезінки свиней прискорює загоєння ран. Починаючи з
7-ї доби площа ран у тварин, яким вводили екстракт кріоконсервованих фрагментів шкіри новонароджених поросят або
селезінки свиней, статистично значуще менша, ніж у контрольних щурів. Також у дослідних тварин більш швидкими темпами
нормалізувався індекс зсуву лейкоцитів крові. Після введення тваринам із холодовою травмою екстрактів знизився рівень
вільнорадикального окислення ліпідів і рівень ТБКАП у сироватці крові. Так, вже на 14-у добу експерименту в групах із вве-
денням екстракту кріоконсервованих фрагментів селезінки свиней або шкіри новонароджених поросят рівень ТБКАП
нормалізувався, а в контрольній групі це відбулося лише на 21-у добу. У тварин, яким вводили екстракти, навантаженість
альбуміну лігандами зменшилася швидше, ніж у контролі.
Ключові слова: холодова травма, загоєння, екстракт, шкіра, селезінка.
Реферат: Оптимизация лечения холодовых ран на сегодняшний день остается актуальной проблемой, которая может
быть решена, в частности, за счет введения в состав комплексной терапии иммунобиологических препаратов. Опытным
крысам вводили по 1 мл экстракта криоконсервированных фрагментов кожи новорожденных поросят или селезенки
свиней внутрибрюшинно раз в сутки на протяжении всего срока эксперимента. Доза пептидов составляла 50 мкг на 100 г
массы животного. Контрольным крысам вводили 1 мл физиологического раствора раз в сутки. Установлено, что введение
животным с холодовой травмой экстракта криоконсервированных фрагментов кожи новорожденных поросят и селезенки
свиней ускоряет заживление холодовых ран. Начиная с 7-х суток площадь ран у животных, которым вводили экстракт
криоконсервированных фрагментов кожи новорожденных поросят или селезенки свиней, статистически значимо менше,
чем у контрольных крыс. Также у исследуемых животных более быстрыми темпами нормализовался индекс сдвига
лейкоцитов крови. После введения животным с холодовой травмой исследованных экстрактов снизился уровень
свободнорадикального окисления липидов и уровень ТБКАП в сыворотке крови. Так, уже на 14-е сутки эксперимента в
группах животных с введением экстракта криоконсервированных фрагментов селезенки свиней или кожи новорожденных
поросят уровень ТБКАП нормализовался, а в контрольной группе это произошло только на 21-е сутки. У животных,
которым вводили экстракты, нагруженность альбумина лигандами снизилась быстрее, чем в контроле.
Ключевые слова: холодовая травма, заживление, экстракт, кожа, селезенка.
Abstract: The optimizing of cold wound treatment has been currently remained a relevant task, which can be particularly solved
through the introduction of the combined therapy with immune biological products. The experimental animals were injected with 1 ml
extract of cryopreserved fragments of either newborn piglet skin or pig spleen into abdominal cavity once a day within the course of
experiment. The dose of peptides was 50 µg per 100 g of an animal. The control rats were injected with 1 ml of physiological saline
once a day. It has been established that introduction to the animals with cold trauma of the extract of cryopreserved fragments of
either newborn piglet skin or pig spleen accelerates the healing of cold wounds. Starting from day 7 the area of wounds in the
animals, which were injected with the extract of cryopreserved fragments of either newborn piglet skin or pig spleen was statistically
and significantly lower than in the control rats. In addition, in the experimental animals the index of blood leukocytes shift was more
rapidly normalized. After introduction of the extracts to the animals with cold trauma the rate of free radical oxidation of lipids and the
TBARS level in blood serum of the animals with cold injury were reduced. Thus, to day 14 of the experiment in the groups with
introduced extract of cryopreserved fragments of either pig spleen or newborn piglet skin the level of TBARS was normalized, and
in the control group this happened only to day 21. In the animals introduced with the extracts, the ligand-loading of albumin decreased
faster than in the control animals.
Key words: cold trauma, healing, extract, skin, spleen.
*Автор, якому необхідно надсилати кореспонденцію:
вул. Переяславська, 23, м. Харків, Україна 61015;
тел.: (+38 057) 372-74-35, факс: (+38 057) 373-30-84,
електронна пошта: sgalchenko@yandex.ru
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 7435, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: sgalchenko@yandex.ru
Department of Experimental Cryomedicine, Institute for Problems
of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sci-
ences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Відділ експериментальної кріомедицини, Інститут проблем
кріобіології і кріомедицини НАН України, м. Харків
Надійшла 11.11.2014
Принята в печать 20.02.2015
Проблеми кріобіології і кріомедицини. – 2015. – Т. 25, №2. – С. 151–161.
© 2015 Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
Received November, 11, 2014
Accepted February, 20, 2015
Probl. Cryobiol. Cryomed. 2015. 25(2): 151–161.
© 2015 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
оригинальне дослідження research article
152 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
Відмороження – один із видів термічної травми,
одержаної внаслідок впливу негативних температур
на тканини. Незважаючи на те, що такі травми ви-
никають тільки у холодну пору року та в мирний
час зустрічаються значно рідше, ніж опіки, оптимі-
зація лікування відморожень залишається актуаль-
ною медичною проблемою [18]. Це пов’язано зі
складністю їх лікування, тривалою втратою праце-
здатності та високими показниками інвалідизації
постраждалих [20].
На сьогодні важливо проводити подальші дослі-
дження, які стосуються патогенезу холодових ран
[11, 25], оскільки одержання нових знань може
сприяти покращенню результатів їх лікування.
Відомо, що першочерговими заходами під час
лікування опікової хвороби та відморожень є най-
більш повне та швидке відновлення пошкодженого
шкірного покриву для попередження токсичних
впливів, інфекційних ускладнень і зневоднення орга-
нізму [13]. Це може бути досягнуто, зокрема, вве-
денням до складу комплексної терапії імунобіоло-
гічних препаратів [2, 28].
У медичній практиці перспективним є викорис-
тання препаратів, які містять регуляторні пептиди
з унікальною сукупністю фізіологічних властивос-
тей [4, 21, 27]. Показано, що екстракти кріоконсер-
вованих фрагментів органів свиней і поросят
стимулюють процеси репаративної регенерації при
експериментальних патологічних станах [8].
Також було встановлено, що при додаванні
екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри
новонароджених поросят (ЕШНП) або селезінки
свиней (ЕСС) у середовище культивування фібро-
бластів шкіри щурів збільшується їх метаболічна
та проліферативна активність [26]. При цьому
ефективність ЕШНП була дещо більшою, ніж
ЕСС. У зв’язку з цим доцільно вивчити біологічну
дію цих екстрактів на рівні організму, зокрема при
травмах шкіри.
Мета роботи – дослідити вплив екстрактів кріо-
консервованих фрагментів селезінки свиней та
шкіри поросят на швидкість загоєння ран, інтенсив-
ність процесів перекисного окислення ліпідів і
ступінь інтоксикації організму при холодовій травмі
шкіри.
Матеріали та методи
Експерименти проводили за регламентом,
затвердженим Комітетом із біоетики ІПКіК НАН
України, який було розроблено відповідно до
«Загальних принципів експериментів на тваринах»,
схвалених V Національним конгресом із біоетики
(Київ, 2013) та узгоджених з положеннями «Євро-
пейської конвенції із захисту хребетних тварин, які
використовуються для експериментальних та інших
наукових цілей» (Страсбург, 1986).
Frostbite is a kind of thermal injury resulting from
the impact of negative temperatures on the tissues.
Although such injuries occur in a cold season, and in
peacetime they are much rarer than burns, optimization
of their treatment has remained an urgent task [25].
This is due to the complicated treatment, long-term
disability and high disability rates of the affected
individuals [9].
Today it is important to perform further studies
concerning the pathogenesis of cold injuries [2, 28],
because the new knowledge can contribute to better
treatment outcomes. It is known that the primary
measures when treating the burn diseases and frostbites
are the most complete and rapid recovery of a damaged
skin to prevent toxic effects, infectious complications
and body dehydration [18]. This can be particularly
achieved by including the immunobiological products
to a combined therapy [1, 17].
In clinical practice the application of the products
containing regulatory peptides with a unique set of
physiological properties is perspective [4, 10, 13]. The
extracts of cryopreserved fragments of pig and piglet
organs have been shown to stimulate a reparative
regeneration in model pathology conditions [14].
It also has been found that introduction of the
extracts of cryopreserved fragments of newborn piglet
skin (NPSE) or pig spleen (PSE) to the medium for
culturing rat skin fibroblasts increases their metabolic
and proliferative activity [7]. Herewith the efficiency
of NSPE was slightly higher than that of PSE. In this
regard, it is advisable to study biological effects of these
extracts at a body level, in particular in skin lesions.
The research aim was to investigate the effect of
extracts of cryopreserved fragments of pig spleen and
piglet skin to accelerate the wound healing, intensity
of lipid peroxidation and intoxication rate at skin cold
trauma.
Materials and methods
The experiments were carried out according to the
regulations approved by the Committee in Bioethics
of the IPC&C of the National Academy of Sciences
of Ukraine, which was developed under the General
Principles of Experiments in Animals, approved by the
5th National Congress in Bioethics (Kyiv, 2013) and
agreed with the statements of the European Convention
for the Protection of Vertebrate Animals Used for
Experimental and Other Scientific Purposes (Stras-
bourg, 1986).
Pig spleen and piglet skin were disintegrated into
fragments of 2–5 mg and three times washed with
physiological saline (pH 7.4). The fragments of organs
were dropwise supplemented in 1: 1 ratio with the solu-
tion of PEO-1500 cryoprotectant in 20% concentration,
later they were frozen at a cooling rate of 1 deg/min.
The samples were thawed in 37...40°C water bath
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
153
Cелезінку свиней та шкіру поросят подрібню-
вали на фрагменти масою 2–5 мг і тричі відмивали
фізіологічним розчином (рН 7,4). До фрагментів
органів по краплях додавали в співвідношенні 1:1
розчин кріопротектора ПЕО-1500 із концентрацією
20%, далі їх заморожували зі швидкістю охоло-
дження 1 град/хв. Матеріал відігрівали на водяній
бані з температурою 37...40°С та відмивали від
кріопротектора фізіологічним розчином. У цьому ж
розчині фрагменти інкубували протягом 60 хв.
Супернатант прогрівали на водяній бані 15 хв та
фільтрували через паперовий фільтр [8]. Концентра-
цію пептидів у екстрактах визначали спектрофото-
метричним методом при довжині хвиль 280 та
296 нм.
Робота була виконана на білих нелінійних щурах
масою 180–210 г. Шерсть у зоні стегна епілірували.
Відмороження утворювали під поверхневим нарко-
зом мідним аплікатором із діаметром 10 мм за
температури –196°С та 30-секундній експозиції, яку
повторювали двічі [23]. Тварини з холодовою трав-
мою були розділені на групи (n = 28 у кожній):
1 (контроль) – введення фізіологічного розчину; 2 –
введення ЕШНП; 3 – введення ЕСС. Дослідним
тваринам вводили по 1 мл екстракту у черевну
порожнину раз на добу протягом всього строку екс-
перименту. Доза пептидів становила 50 мкг на 100 г
маси тварини. Контрольним щурам вводили 1 мл
фізіологічного розчину раз на добу.
Площу ран визначали по цифрових зображеннях
за допомогою програми «AxioVision Rel.4.8» («Carl
Zeiss», Німеччина). Рівень перекисного окислення
ліпідів (ПОЛ) визначали за початковим рівнем про-
дуктів, які реагують із тіобарбітуровою кислотою
(ТБКАП), у сироватці крові спектрофотометрич-
ним методом за стандартною методикою при
довжині хвилі 532 нм [13].
Для оцінки процесів вільнорадикального окис-
лення в комірку хемілюмінометра ХЛ-1250
(«Диалин», Росія), яка містить 1 мл фізіологічного
розчину, додавали 100 мкл сироватки крові, 100 мкл
розчину двовалентного заліза в кінцевій концентра-
ції 5×10–2 моль/л та реєстрували світлосуму протя-
гом 60 с, яку виражали в умовних одиницях. При
цьому світлосума хемілюмінесценції (ХЛ) була
пропорційна кількості вільних радикалів, тобто
інтенсивності процесів вільнорадикального окис-
лення. Для визначення стійкості до перекисного
окислення в комірку хемілюмінометра, яка містить
1 мл фізіологічного розчину та 100 мкл сироватки
крові, додавали 200 мкл 5%-го розчину перекису
водню і протягом 60 с реєстрували світлосуму, яку
виражали в умовних одиницях [3].
Лейкоцитарну формулу крові визначали на
мазках, забарвлених азур II-еозином за Рома-
and washed of cryoprotectant with a physiological
saline. The samples were then incubated in the same
solution for 60 min. The supernatant was warmed in a
water bath for 15 min and filtered through a filter paper
[14]. The concentration of peptides in extracts was
spectrophotometrically examined at 280 and 296 nm.
The work was performed in 180–210 g white out-
bred rats. Hair was epilated in the hip area. The frost-
bite was simulated under a surface anesthesia with
copper applicator of 10 mm diameter at –196°C and
30-second exposure, which was repeated twice [24].
The animals with a cold injury were divided into groups
(n = 28 each): 1 (control) – introduced with a physio-
logical saline; 2 – introduced with the NPSE; 3 –
introduced with the PSE. Experimental animals were
injected with 1 ml of the extract into an abdomen once
a day within the whole experiment. The dose of pep-
tides made 50 mg per 100 g of an animal. The control
rats were injected with 1 ml of saline once a day.
The area of wounds was determined by digital images
using the AxioVision Rel. 4.8 (Carl Zeiss, Germany).
The rate of lipid peroxidation (LPO) was spectrophoto-
metrically determined by an initial level of the thio-
barbituric acid reactive substances (TBARS) in blood
serum according to standard methods at 532 nm [18].
Free radical oxidation was assessed in a chemilumi-
nometer HL-1250 well (Dialin, Russia): the well with
1 ml physiological saline was supplemented with 100 µl
serum, 100 µl solution of ferrous iron in a final concent-
ration of 5×10–2 mol/l and during 60 s the light sum
was recorded, which was expressed in arbitrary units.
Herewith the light sum of chemiluminescence (CL)
was proportional to the amount of free radicals, i. e.
the intensity of free radical oxidation. To examine the
resistance to lipid peroxidation 200 ml of 5% solution
of hydrogen peroxide were introduced into the chemilu-
minometer well with 1 ml of physiological saline and
100 µl of blood serum and for 60 s the light sum was
recorded and expressed in arbitrary units [3].
Leukogram was determined in the smears stained
with azure II-eosin according to Romanowsky-Giemsa
by counting 500 cells with the light microscope
(LOMO, Russia). Blood samples were taken from the
tail vein of animals. Leukocyte shift index (LSI) is the
ratio of eosinophils and neutrophils sum to the sum of
monocytes and lymphocytes found by the formula:
LSI = (eosinophils + basophils + myelocytes + rod-like +
segmented)/(monocytes + lymphocytes) [21]. The
blood serum was obtained from the animals decapitated
under surface anesthesia. The study was performed
to 3-, 7-, 14- and 21-st days of the experiment.
To examine the blood serum albumin load with
ligands we used a fluorescent probe K-35, synthesized
at Institute for Single Crystals of the National Academy
of Sciences of Ukraine (Kharkiv), which was dissolved
154 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
in ethanol with an initial concentration of 0.58×10–3 mol/l
[15]. The rat blood serum was 40 times diluted with
sodium phosphate buffer. Measurements were perfor-
med with Varian Cary Eclipse spectrofluorimeter
(Varian, USA). The spectra were automatically correc-
ted. The width of the input and output gaps of mono-
chromators was 5 nm. The probe fluorescence was
excited with 420 nm light. All the spectra records were
done at 20°C in 1×1×3 cm cuvettes. The spectra were
processed with Microcal Origin 6.0 software.
The results were statistically analyzed by non-
parametric MANOVA. The indices were calculated
using the Statistics 17.0 software (SPSS Inc., USA).
Data were presented as mean ± SEM.
Results and discussion
It is known that the introduction of the extract of
cryopreserved fragments of pig and piglet organs contri-
butes to the normalization of regeneration course and
immune status of an organism [8, 14]. The relevant
immune cells play an important role in regulation of
proliferation of all somatic cells [11]. The first 24 hrs
of monitoring the dynamics of healing of the experi-
mental cold wounds were notable by absent differences
in the surface of wounds in animals of all experimental
groups.
To the day 3 the cold wounds in group 1 had a
heterogeneous surface with exerted and disengaging
sites of gray color and darker foci in the center, small
hemorrhages were present, often merged together. The
surface of wounds in the animals of groups 2 and 3
was covered with thinner crust of soft consistency.
To the day 7 the cold wounds in the control group
of animals were covered with a film of fibrin, under
which a weak granulation was formed, plasmorrhea
was seen mainly in the center. In the animals after
administration of PSE and NPSE the cold wounds were
of a uniform pink colour and were less swollen. Marked
wound contracting was found.
To day 14 the differences in healing of the cold
wounds between the groups of animals were much
more pronounced. In the animals of group 1 the cold
wounds had the islets of fibrinous plaque, the remained
inseparable crust was present somewhere. The lesion
in the animals of groups 2 and 3 had a smooth pink
granulating surface. To day 21 in the animals injected
with NPSE the wound was healed. In case of intro-
ducing PSE the wound in one animal also was healed
completely, and in the control ones no wound healing
was observed.
To day 3 of the experiment no statistically significant
differences in wound area of the animals of control
and experimental groups were observed (Table. 1).
To day 7 the wound area in the animals of groups 2
and 3 was in 1.2 and 1.5 times less than in the control.
новським-Гімзою, підраховуючи по 500 клітин у
світловому мікроскопі («ЛОМО», Росія). Кров для
досліджень брали з хвостової вени тварин. Індекс
зсуву лейкоцитів крові (ІЗЛК), тобто відношення
суми еозинофілів і нейтрофілів до суми моноцитів і
лімфоцитів, визначали за формулою: ІЗЛК = (еози-
нофіли + базофіли + мієлоцити + паличкоядерні +
сегментоядерні)/(моноцити + лімфоцити) [16]. Для
одержання сироватки крові тварин декапітували під
поверхневим наркозом. Дослідження проводили на
3-, 7-, 14- та 21-у добу експерименту.
Для визначення навантаженості альбуміну сиро-
ватки крові лігандами використовували флуорес-
центний зонд К-35, синтезований в ДНУ «НТК
Інститут монокристалів НАН України» (Харків),
який розчиняли в етиловому спирті з початковою
концентрацією 0,58×10–3 моль/л [1]. Сироватку
крові щурів розводили натрій-фосфатним буфером
у 40 разів. Для вимірювань використовували спект-
рофлуориметр «Varian Cary Eclipse» («Varian»,
США). Проводили автоматичну корекцію спектрів.
Ширина вхідної та вихідної щілин монохроматорів
становила 5 нм. Флуоресценцію зонда збуджували
світлом із довжиною хвилі 420 нм. Всі спектральні
вимірювання здійснювали при 20°С у стандартних
кварцових кюветах 1×1×3 см. Спектри обробляли
за програмою «Microcal Origin 6.0».
Статистичну обробку результатів виконували
непараметричним методом МANOVA. Розрахунок
показників проводили за допомогою програми «Sta-
tistics 17.0» («SPSS Inc.», США). Дані представлено
як середнє значення ± похибка середнього.
Результати та обговорення
Відомо, що введення екстрактів кріоконсер-
вованих фрагментів органів свиней і поросят сприяє
нормалізації процесу репаративної регенерації та
імунного статусу організму [7, 8]. Відповідні клітини
імунної системи відіграють важливу роль у регу-
ляції проліферації усіх соматичних клітин [9]. На
1-у добу спостереження за динамікою загоєння
експериментальних холодових ран встановлено, що
поверхня рани у тварин усіх дослідних груп не
відрізнялася.
На 3-ю добу холодові рани у тварин групи 1 ма-
ли неоднорідну поверхню з виступаючими і запа-
даючими ділянками сірого кольору та темнішими
вогнищами в центрі, виявлялися дрібні геморагії,
які нерідко зливалися між собою. Поверхня ран у
тварин груп 2 та 3 вкривалася більш тонким стру-
пом м’якої консистенції.
На 7-у добу в контрольній групі тварин холодові
рани були покриті плівкою фібрину, під якою фор-
мувалися слабка грануляція, плазморея переважно
в центрі. У тварин після введення ЕСС та ЕШНП
кортС
,яннежеретсопс
абод
noitavresbO
yad,mret
утнемирепскеивомУ
ьлортноK
lortnoC
ССЕяннедевВ
ESP
noitcudortni
яннедевВ
ПНШЕ
ESPN
noitcudortni
3 4,0±5,4 3,0±8,3 4,0±7,3
7 3,0±4,3 *2,0±8,2 *2,0±3,2
41 3,0±3,2 *1,0±8,0 *1,0±6,0
12 1,0±5,1 *1,0±5,0 яннєогаЗ
gnilaeH
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
155
холодова рана мала рівномірний рожевий колір,
менший набряк. Відмічено значну контрактацію
рани.
На 14-у добу відмінності в загоєнні холодових
ран між групами тварин виражені значно більше.
У тварин групи 1 холодові рани мали острівці фібри-
нозного нальоту, місцями зберігався важко відокре-
млюваний струп. У тварин групи 2 та 3 пошкоджен-
ня мало гладку гранулюючу поверхню рожевого
кольору. На 21-у добу у тварин, яким вводили
ЕШНП, рана загоїлася. При введенні ЕСС у однієї
тварини рана також повністю загоїлася, а в конт-
рольних щурів загоєння ран не спостерігалося.
На 3-ю добу експерименту статистично значу-
щих відмінностей щодо площі ран тварин контроль-
ної та дослідних груп не спостерігалося (табл. 1).
На 7-у добу площа ран у тварин груп 2 та 3 була
відповідно в 1,2 та 1,5 рази меншою, ніж у контроль-
них, а на 14-у добу в 2,9 та 3,8 раза меншою, ніж у
контролі. Отже, з 7-ї доби площа ран у тварин, яким
вводили ЕШНП або ЕСС, була статистично значу-
ще менша, ніж у контрольних.
Відомо, що при експериментальній термічній
травмі в периферичній крові на 3–14-у доби спосте-
реження розвивається лейкоцитоз, обумовлений
збільшенням кількості нейтрофілів [15]. На 3-ю
добу після моделювання холодових ран у щурів
відносна кількість нейтрофільних лейкоцитів була
практично однаковою при всіх умовах експери-
менту. Відносна кількість лімфоцитів периферичної
крові зменшилась із 77,8% (норма) до 52,9%
(контроль) та становила 56,1 і 50,3% при введенні
ЕСС та ЕШНП відповідно. Спостерігалось також
зменшення в крові кількості еозинофілів та моноци-
тів. Через тиждень після початку експерименту у
щурів групи 1 відносна кількість нейтрофілів збіль-
шилася до 50,7%, а в групах 2 та 3 цей показник
був значно меншим. Відносна кількість лімфоцитів
у контролі становила 41,3%, при введенні ЕСС –
62,7%, ЕШНП – 60,0%. У тварин групи 1 також
спостерігалось збільшення кількості еозинофілів у
1,7 раза порівняно з нормою. Такі зміни лейко-
цитарної формули свідчать про позитивний вплив
екстрактів: зменшення запалення в зоні травми та
вираженість некрозу тканин порівняно з контролем.
На 14-у добу експерименту вміст нейтрофіль-
них лейкоцитів в групі 1 складав 30,0% (перевищен-
ня норми в 2,1 раза), а еозинофілів – 7,0%, (пере-
вищення норми в 1,8 раза). У тварин, яким вводили
екстракти, відносна кількість еозинофілів, моноци-
тів та лімфоцитів практично відповідала нормі.
Відомо, що багато захворювань та патологіч-
них станів супроводжуються ендогенною інтокси-
кацією різного ступеня тяжкості, який є непрямим
критерієм загального стану хворих [19]. Не є вик-
And to day 14 this was in 2.9 and 3.8 times, respectively,
less than in the control. Thus, starting from day 7 the
wound area in the animals injected with NPSE or PSE,
was statistically and significantly lower than in the
control rats.
It is known that during experimental thermal lesion
in peripheral blood to days 3–14 of observation the
leukocytosis develops due to increased number of
neutrophils [20]. To day 3 after the making of cold
wounds in rats the relative number of neutrophilic
leukocytes was almost the same under all the expe-
rimental conditions. The relative number of peripheral
blood lymphocytes decreased from 77.8% (norm)
down to 52.9% (control) and was 56.1 and 50.3% in
case of introducing the PSE and NPSE, respectively.
There was also a decrease in the number of blood
eosinophils and monocytes. A week following the start
of experiment the rats of group 1 had a relative number
of neutrophils increased up to 50.7% and in the groups
2 and 3 this index was much lower. The relative
number of lymphocytes in the control was 41.3% and
62.7% when PSE was administered, in case of using
NPSE that was 60.0%. In the animals of group 1 there
was also observed an 1.7-fold increase in the number
of eosinophils if compared with the norm. These
changes in leukogram suggest a positive effect of the
extracts, i. e. a reduced inflammation in the lesion site
and evidence of tissue necrosis if compared to the
control.
To day 14 of the experiment the content of neutro-
philic leukocytes in group 1 made 30.0% (exceeding
the norm by 2.1 times), and for eosinophils it was 7.0%
(exceeding the norm by 1.8 times). In the animals
injected with the extracts, the relative number of
Таблиця 1. Площа холодових ран (см2) у дослідних щурів
Table 1. Area of cold wounds (сm2) in experimental rats
Примітка: * – відмінності статистично значущі порівняно з
контролем, p ≤ 0,05.
Note: * – the differences are statistically significant if compared
with control, p ≤ 0.05.
ивомУ
утнемирепске
latnemirepxE
snoitidnoc
абод,яннежеретсопскортС
yad,mretnoitavresbO
3 7 41 12
амроН
mroN 12,0
ьлортноK
lortnoC 10,1 94,1 07,0 92,0
ССЕяннедевВ
noitcudortniESP 57,0 15,0 43,0 51,0
яннедевВ
ПНШЕ
ESPN
noitcudortni
98,0 96,0 14,0 32,0
156 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
eosinophils, monocytes and lymphocytes was almost
the same as in the norm.
It is known that many diseases and pathological
states are accompanied with endogenous intoxication
of varying severity, which is an indirect criterion of
general condition of patients [26]. Thermal injury is
not an exception. Integral leukocyte indices, including
the components of leukogram, are considered as the
parameters of the severity of endogenous intoxication
and adaptation potential state of the body.
The determination of these indices, some of which
change already in pre-nosological period or at the
earliest disease stages, enables the dynamic assess-
ment of the status of various links of immune system
without involving of specific research techniques [21].
An increase of LSI in a clinical study may indicate the
activity of inflammatory process and disorders of
immunological reactivity.
To day 3 after making a cold lesion to the control
animals the LSI exceeded the norm by 4.8 times, and
it did 3.6 and 4.2 times after introduction of PSE or
NPSE, correspondingly (Table 2). The most pronoun-
ced differences in LSI were found to day 7 of the
experiment. There was its further improvement in group
1 rats from 1.01 to 1.49, and in other animal groups
there was a decrease if compared to day 3. In the
animals with cold injury introduced with PSE the LSI
value was 34%, and for NPSE it made 46% of the
control values. To day 14 the index decreased in all
the groups of animals. To day 21 the LSI values in the
animals of the groups 2 and 3 reached the normal ones.
This may indicate that the introduction of the extract
to the animals reduced the severity of inflammation
and normalized the immune responses.
LPO consists of free radical reactions, they occur
permanently in an organism and are activated under
many pathological processes. Thermal injury is also
accompanied by activation of lipid peroxidation reaction
[6]. Normally the stimulation of free radical oxidation
of lipids is compensated by adequate increase in acti-
vity of antioxidant system [22]. Pathological changes
in an organism originated due to several reasons are
accompanied with an imbalance between free radical
processes intensity and functional activity of antioxidant
systems. This results in a rapid exhaustion of antioxidant
pool.
To day 3 of the experiment TBARS levels in the
animals administered with PSE exceeded the norm by
1.3 times, and in control and in case of NPSE it was
1.7 times higher than the norm (Table 3). TBARS level
in the control group to day 7 continued to rise from 7.1
to 8.9, and in the groups with introduced PSE and
NPSE it vice versa decreased if compared with the
control (51 and 64%, respectively). In groups 2 and 3
the TBARS level normalized to day 14 of the expe-
riment, and in group 1 this occurred only to day 21.
люченням і термічні травми. Показниками ступеня
вираженості ендогенної інтоксикації та стану адап-
таційного потенціалу організму вважаються інтег-
ральні лейкоцитарні індекси, в яких використано
складові лейкоцитарної формули.
Визначення цих індексів, частина яких змі-
нюється вже в преднозологічний період або на най-
більш ранніх стадіях захворювання, дозволяє
оцінити в динаміці стан різних ланок імунної
системи без використання спеціальних методів
дослідження [16]. При клінічному дослідженні
підвищення ІЗЛК може свідчити про активність
запального процесу і порушення імунологічної
реактивності.
На 3-ю добу після нанесення холодової травми
контрольним тваринам ІЗЛК перевищував норму
в 4,8 раза та в 3,6 і 4,2 раза при введенні ЕСС або
ЕШНП (табл. 2). Найбільш виражені відмінності
ІЗЛК було встановлено на 7-у добу експерименту.
У щурів групи 1 спостерігалося подальше його
підвищення з 1,01 до 1,49, а у тварин інших груп
відбувалося зменшення порівняно з 3-ю добою. Під
час введення тваринам із холодовою травмою ЕСС
величина ІЗЛК складала 34%, а при ЕШНП – 46%
від контрольних значень. На 14-у добу показник
зменшувався в усіх групах тварин. На 21-у добу у
тварин груп 2 та 3 ІЗЛК сягав значень норми. Це
може свідчити про те, що введення тваринам екс-
трактів зменшує вираженість запального процесу
та нормалізує імунні реакції.
Реакції ПОЛ є вільнорадикальними, вони по-
стійно відбуваються в організмі та активуються
при багатьох патологічних процесах. Термічна
травма також супроводжується активацією реакції
ПОЛ [6]. У нормальному стані стимуляція вільно-
радикального окислення ліпідів компенсується
адекватним підвищенням активності антиокси-
дантної системи [17]. При патологічних змінах в
Таблиця 2. Величина ІЗЛК у дослідних щурів
Table 2. Value of LSI in experimental rats
ивомУ
утнемирепске
latnemirepxE
snoitidnoc
абод,яннежеретсопскортС
yad,mretnoitavresbO
3 7 41 12
амроН
mroN 3,0±2,4
ьлортноK
lortnoC 5,0±1,7 1 7,0±9,8 1 4,0±5,6 3,0±3,4
ССЕяннедевВ
noitcudortniESP 4,0±6,5 2,1 3,0±6,4 2 3,0±1,4 2 4,0±3,4
яннедевВ
ПНШЕ
ESPN
noitcudortni
5,0±2,6 2,1 4,0±7,5 2,1 3,0±4,4 4,0±2,4
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
157
організмі внаслідок різних причин розвивається
дисбаланс між інтенсивністю вільнорадикальних
процесів та функціональною активністю антиокси-
дантних систем. При цьому відбувається швидке
виснаження антиоксидантного потенціалу.
На 3-ю добу експерименту рівень ТБКАП у
тварин, яким вводили ЕСС, перевищував норму в
1,3 раза, а в контролі та при введенні ЕШНП – в
1,7 раза (табл. 3). Рівень ТБКАП у контрольній
групі на 7-у добу продовжував зростати з 7,1 до
8,9, а в групах з введенням ЕСС та ЕШНП навпаки
зменшився порівняно з контролем (51 та 64%
відповідно). У групах 2 та 3 рівень ТБКАП норма-
лізувався вже на 14-у добу експерименту, а в
групі 1 – лише на 21-у добу.
Відомо, що ХЛ супроводжує окислювальні екзо-
термічні реакції, переважно ланцюгові, які розви-
ваються за радикальним механізмом [5]. Показано,
що інтенсивність світіння пропорційна швидкості
рекомбінації вільних радикалів. Оскільки їх власне
світіння дуже слабке, його вимірювати важко. Деякі
дослідники зробили спробу посилити світіння дода-
ванням до плазми крові барвників, перекису водню,
іонів двовалентного заліза тощо [14, 22]. Встанов-
лено, що світлосума ХЛ, яка індукована двовалент-
ним залізом, пропорційна кількості вільних ради-
калів, а індукована перекисом водню – стійкості
біологічної системи до вільнорадикального окис-
лення.
На 3-ю добу в усіх експериментальних групах
світлосума ХЛ сироватки крові, індукованої Fe2+,
була статистично значуще більшою, ніж у нормі
(табл. 4). На 7-у добу цей показник дещо зменшу-
вався, але при введенні екстрактів більш інтенсив-
но. Так, у групі 3 даний показник був у 2,1 раза
меншим, а у групі 2 – в 1,2 раза. На 14-у добу спо-
стерігалося подальше зменшення світлосуми і на
21-у добу в групах 2 та 3 показник повертався до
норми, а в контрольній групі в 1,2 раза перевищував
норму.
Як видно з табл. 5, світлосума індукованої Н2О2
на 3-ю добу в усіх експериментальних групах вища,
ніж у нормі. На 7-у добу цей показник в усіх експе-
риментальних групах дещо зменшився, але при вве-
денні екстрактів виявлено більш значне його змен-
шення: ЕСС – в 1,7 раза, ЕШНП – в 1,3 раза. На
14-у добу експерименту світлосума ХЛ в усіх гру-
пах тварин поступово зменшилася, а на 21-у добу
в групах 2 та 3 цей показник повертався до норми.
Дослідження власної флуоресценції біологічних
матеріалів не завжди дозволяє одержати бажану
інформацію про об’єкт. У такому випадку викорис-
товують штучні флуорофори, тобто спеціально син-
тезовані речовини, які мають специфічний спектр
флуоресценції або в вільному стані, або при зв’язу-
The CL is known to accompany oxidative exo-
thermic reactions, mainly the chain ones, which develop
by involving radicals [5]. It was shown that the lumi-
nescence intensity was proportional to the rate of recom-
bination of free radicals. As their own luminescence is
very weak, it is difficult to be measured. Some resear-
chers have attempted to enhance the luminescence by
supplementing the blood plasma with the dyes, hydrogen
peroxide, ferrous iron ions etc. [19, 23]. It has been
established that the light sum of CL, induced by ferrous
iron is proportional to the amount of free radicals and
the hydrogen peroxide induced one depends on the
resistance of biological system to free radical oxidation.
To day 3 in all the experimental groups the CL light
sum of blood serum induced by Fe2+ was statistically
and significantly higher than normal one (Table 4). By
day 7, this index decreased slightly, and more inten-
sively if the extracts were introduced. In group 3 the
index was 2.1 times lower, and in group 2 this was by
1.2 times. To day 14 there was further reduction of
light sum and to day 21 in the groups 2 and 3 it returned
back to normal one, and in the control group it was 1.2
times higher than normal one.
Table 5 shows that the light sum of CL induced by
H2O2 to day 3 in all the experimental groups was higher
than normal one. To day 7 the index in all the expe-
rimental groups decreased slightly, and the introduction
of the extracts resulted in its significant decrease: with
PSE in 1.7 times and in 1.3 times with NPSE. To day
14 of the experiment the CL light sum in all the groups
of animals gradually decreased, and to day 21 it retur-
ned to norm in the groups 2 and 3.
Таблиця 3. Рівень ТБКАП (мкмоль/л) у сироватці
крові дослідних щурів
Table 3. TBARS level (µmol/l) in blood serum
of experimental rats
Примітка: відмінності статистично значущі (p ≤ 0,05) порів-
няно з: 1 – нормою; 2 – контролем.
Note: the differences are statistically significant (p ≤ 0.05) if
compared with: 1 – norm; 2 – control.
ивомУ
утнемирепске
latnemirepxE
snoitidnoc
абод,яннежеретсопскортС
yad,mretnoitavresbO
3 7 41 12
амроН
mroN 11±371
ьлортноK
lortnoC 84±605 1 14±054 1 02±542 1 61±291
ССЕяннедевВ
noitcudortniESP 23±114 1 12±172 2,1 41±991 51±481
яннедевВ
ПНШЕ
ESPN
noitcudortni
93±634 1 03±143 2,1 61±502 21±661
ивомУ
утнемирепске
latnemirepxE
snoitidnoc
абод,яннежеретсопскортС
yad,mretnoitavresbO
3 7 41 12
амроН
mroN 6±97
ьлортноK
lortnoC 13±573 1 22±292 1 01±531 1 7±89
ССЕяннедевВ
noitcudortniESP 22±452 1 11±241 2,1 7±48 2 5±86
яннедевВ
ПНШЕ
ESPN
noitcudortni
42±692 1 32±452 1 6±98 2 7±58
158 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
Studies of intrinsic fluorescence of biological samp-
les do not allow the persisent obtaining of the expected
information about the object. To overcome such ob-
stacles one uses artificial fluorophores, i.e. purpose-
fully synthesized substances with a specific spectrum
of fluorescence either in a free state or if being bound
to one or another research object [16]. Fluorescence
of these substances (probes) typically has a high
quantum yield and satisfactory lifetime.
Fluorescent probes are sensitive to structural and
functional changes in biological membranes, microvis-
cosity of their lipid bilayer, binding to proteins and other
substances, structural rearrangements in proteins,
alterations in membrane potential and calcium concent-
ration inside a cell etc. Fluorescent probes are used
for the diagnosis and prognosis of a disease develop-
ment, identifying the risk factors and monitoring the
treatment efficiency [27].
The method developed by G.E. Dobretsov et al.
for determining the level of an organism intoxication
by the substances formed during vital activity or
entered from the environment [15] is based on ability
of low molecular ligands to displace the fluorescent
probe K-35 from the binding centers situated on a
molecule of human serum albumin. It was shown that
the dye K-35 could be used to assess the level of rat
serum albumin loading by ligands of different origin
[12]. The probe fluorescence intensity is the lower,
the more loaded albumin by ligands is.
Assessing the fluorescence intensity of probe K-35
in blood serum of rats allowed to found that to day 3
the fluorescence intensity of the probe in all the expe-
rimental groups of animals was in 1.5–1.7 times lower
ванні з тим чи тим об’єктом дослідження [12].
Флуоресценція таких речовин (зондів), як правило,
має високий квантовий вихід та достатньо великий
термін життя.
Флуоресцентні зонди чутливі до структурно-
функціональних змін у біологічних мембранах,
мікров’язкості їх ліпідного бішару, зв’язування з
білками та іншими речовинами, структурних пере-
будов у білках, зміни мембранного потенціалу та
концентрації внутрішньоклітинного кальцію та ін.
Флуоресцентні зонди використовуються для діаг-
ностики та прогнозу розвитку захворювань, вияв-
лення факторів ризику та контролю ефективності
лікування [24].
На здатності низькомолекулярних лігандів
витісняти флуоресцентний зонд К-35 із центрів
зв’язування на молекулі сироваткового альбуміну
людини ґрунтується розроблений Г.Є. Добрецовим
і співавт. метод визначення ступеня інтоксикації
організму речовинами, які утворюються в процесі
життєдіяльності або надходять із зовнішнього
середовища [1]. Також було показано, що барвник
К-35 може бути використаний для оцінки ступеня
навантаження лігандами різного походження сиро-
ваткового альбуміну щурів [10]. Інтенсивність
флуоресценції цього зонда тим менша, чим більше
альбумін навантажений лігандами.
При визначенні інтенсивності флуоресценції
зонда К-35 у сироватці крові щурів було встанов-
лено, що на 3-ю добу в усіх експериментальних
групах тварин інтенсивність флуоресценції зонда в
1,5–1,7 раза нижча норми (табл. 6). На 7-у добу
вона дещо збільшилася, але в групі з введенням
Таблиця 4. Світлосума ХЛ сироватки крові дослідних
щурів, індукованої Fe2+
Table 4. Fe2+-induced CL light sum in blood serum
of experimental rats
Примітка: відмінності статистично значущі (p ≤ 0,05) порів-
няно з: 1 – нормою; 2 – контролем.
Note: the differences are statistically significant (p ≤ 0.05) if
compared with: 1 – norm; 2 – control.
Таблиця 5. Світлосума ХЛ сироватки крові дослідних
щурів, індукованої Н2О2
Table 5. Н2О2 -induced CL light sum in blood serum
of experimental rats
Примітка: відмінності статистично значущі (p ≤ 0,05) порів-
няно з: 1 – нормою; 2 – контролем.
Note: the differences are statistically significant (p ≤ 0.05) if
compared with: 1 – norm; 2 – control.
ивомУ
утнемирепске
latnemirepxE
snoitidnoc
абод,яннежеретсопскортС
yad,mretnoitavresbO
3 7 41 12
амроН
mroN 92±804
ьлортноK
lortnoC 71±432 1 12±672 1 92±203 1 13±963
ССЕяннедевВ
noitcudortniESP 91±542 1 01±942 1 71±993 2,1 63±873
яннедевВ
ПНШЕ
ESPN
noitcudortni
32±662 1 9±592 1 51±314 2 23±693
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
159
ЕСС це збільшення незначне. Та вже на 14-у добу
в групах з введенням екстрактів цей показник дося-
гає норми, тоді як в контрольній групі нормалізація
відбувається лише на 21-у добу експерименту.
Отже, у тварин, яким вводили екстракти, наванта-
женість альбуміну лігандами зменшується швид-
ше, ніж у контрольних тварин.
Таким чином, як видно з наведених даних,
починаючи з 7-ї доби площа ран у тварин, яким
вводили ЕШНП або ЕСС, статистично значуще
менша, ніж у контрольних щурів. Отже, досліджу-
вані екстракти прискорюють загоєння холодових
ран в експерименті. Проте, механізм їх дії, скоріше
за все, різний. Можна припустити, що тканиноспе-
цифічні пептиди, які входять до складу ЕШНП,
нормалізують або стимулюють проліферативну ак-
тивність клітин шкіри при травмі. А введення твари-
нам ЕСС позитивно впливає на імунний статус
організму, в тому числі і на лімфоцити, відповідна
частина яких бере участь у регуляції клітинного
росту соматичних тканин [9]. Таке припущення опо-
середковано підтверджується тим, що у тварин,
яким вводили ЕСС, відносна кількість лімфоцитів
на 14-у добу практично відповідала нормі, на
відміну від контролю. Отримані дані також свід-
чать, що у тварин із холодовою травмою, яким
вводили екстракти, зменшується інтенсивність
вільнорадикального окислення ліпідів та рівень
ТБКАП у сироватці крові, а отже і вираженість про-
цесу запалення. У цих тварин також зменшується
навантаженість альбуміну лігандами.
У подальшому планується дослідити вплив
спільного введення ЕШНП та ЕСС на процес
загоєння холодових ран у щурів.
Висновки
Уведення тваринам ЕШНП або ЕСС прискорює
загоєння холодових ран, сприяє більш ранній нор-
малізації формули крові та зменшенню ендогенної
інтоксикації організму. У тварин із холодовою трав-
мою, яким уводили екстракти, інтенсивність віль-
норадикального окислення ліпідів і концентрація
ТБКАП у сироватці крові зменшуються більш
швидкими темпами порівняно з цими показниками
у контрольних тварин, яким уводили фізіологічний
розчин. У тварин із холодовою раною збільшується
навантаженість альбуміну лігандами, а при введен-
ні досліджених екстрактів цей показник нормалі-
зується в більш ранні строки.
than the norm (Table 6). To day 7 it increased slightly,
but in the group with the PSE introduction this rise
was insignificant. Already to day 14 in the groups with
the introduced extracts the index approached the norm,
while in the control group the normalization occurred
only to day 21 of the experiment. Thus, in the animals
injected with the extracts, the albumin loading with
ligands decreased faster than in the control animals.
Thus, as the provided data demonstrate, the area
of wounds in the animals injected with NSEP or PSE
was statistically and significantly lower than in the
control rats starting from day 7. So, the studied extracts
accelerate the healing of cold wounds in the experi-
mental conditions. However, mechanism of their action
is likely different. We can assume that tissue specific
peptides, which are the components of NSEP, stimulate
or normalize a proliferative activity of skin cells post
trauma. The introduction of PSE to the animals
positively affects an immune status of the body,
including lymphocytes, the relevant part of which is
involved into regulation of cell growth in somatic tissues
[11]. This assumption is indirectly confirmed by the
fact that in the animals which were administered with
PSE, the relative number of lymphocytes to day 14
was almost equal to the norm, in contrast to the control.
The findings also show that in the animals with cold
injury treated with extracts the intensity of free radical
oxidation of lipids and TBARS level in serum reduce,
and hereby the severity of the inflammation process
does. In these animals albumin loading with ligands is
also reduced.
Following investigation would be targeted to the
impact of a combined administering of NPSE and PSE
on cold wound healing in rats.
Таблиця 6. Інтенсивність флуоресценції (умовн. од.)
зонда К-35 у сироватці крові дослідних щурів
Table 6. Fluorescence intensity (arb.units) of К-35 probe
in blood serum of experimental rats
Примітка: відмінності статистично значущі (p ≤ 0,05) порів-
няно з: 1 – нормою; 2 – контролем.
Note: the differences are statistically significant (p ≤ 0.05) if
compared with: 1 – norm; 2 – control.
Література
1. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине /
Под ред. Ю.А. Грызунова и Г.Е. Добрецова. Кн. 2. – М.:
ГЭОТАР, 1998. – 440 с.
160 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
Conclusions
Treatment of the animals with either NPSE or PSE
accelerated the cold wound healing, promoted an
earlier normalization of blood counts and decreasing
an endogenous intoxication. In the animals with cold
lesion, which were administered with the extracts, the
intensity of free radical oxidation of lipids and TBARS
concentration in blood serum decreased more rapidly
if compared with the indices in the control animals
administered with physiological saline. In the animals
with cold wound the albumin loading with ligands
increased, and when introducing the studied extracts
the value was normalized at earlier terms.
References
1.Arefyeva T.I., Sokolov V.O., Pylaeva E.A. et al. Peptide fragment
of 29-40 of amino acid sequence of monocytic chemotactic
protein-1 (MPC-1) stimulates the migration of monocytes in
vivo and provides wounds healing. Doklady Akademii Nauk
2012; 446 (1): 106–109.
2. Arford S. Treatment of frostbite: a cold-induced injury. J Wound
Ostomy Continence Nurs 2008; 35 (6): 625–630.
3. Arutyunyan A.V., Dubinina E.E., Zybina N.N. Methods of asses-
sing of free radical oxidation and antioxidant system of a
body. Metod. Recommendations. St. Petersburg: Foliant; 2000.
4.Askarov T.A., Memetov F.U., Batyrbekov A.A. et al. Influence of
Lacto Flor at immune status of animals with burn disease and
hormone-induced immune deficiency. Problemy Biologii i
Meditsiny 2003; 1–3: 14-17.
5. Babenko G.A., Gonskiy Ya.I., Antonik I.M. et al. About role of
metals in the process of free radical oxidation in organism's
tissues on data of spontaneous and induced chemilumi-
nescence. In: Chemiluminescence. Moscow: Nauka; 1983.
p. 164–178.
6. Babskaya Y.E., Lavrov V.A., Omonina N.A. Intensity of free
radical oxidation of lipids in acute period of burn disease.
Khirurgiya 1985; 11: 95–97.
7. Bespalova I., Belochkina I., Galchenko S., Sandomirsky B. Orga-
nospecific influence of the extract of cryopreserved piglet's
skin fragments. Biological effect of cNPSE and cPSE in fibro-
blast culture. Periodicum Biologorum 2014; 116 (1): 99–103.
8. Byzov V.V., Vysekantsev I.P., Galchenko S.Ye. et al. Effect of
endobronchial introduction of extracts of cryopreserved xeno-
spleen fragments on some local immunity factors in complex
therapy of patients with lungs abscesses. Problems of Cryo-
biology 2001; 4: 65–70.
9.Chadaev A.P., Sviridov S.V., Klimiashvili A.D. et al. Cold injury.
Ros Med Zhurnal 2005; 35: 20–23.
10.Chorna I.O., Ligonenko O.V., Girin L.V. Changes at the system
of homeostasis under the influence of peptidic bioregulators
in the time of injury treatment. Klin Khirurgiya 2002; (11–12):
77–78.
11.Dontsov V.I. Regulation of cell growth of somatic tissues by
lymphocytes and new theory of aging. Review. Profilaktika
Stareniya 1998; 1: 40–63.
12.Dyubko T.S., Sidorov V.I., Sokolik O.A. et al. Comparative ana-
lysis of fluorescent stain K-35 and K7-1045 interaction with
proteins of rat's blood serum. Journal of V.N. Karazin Kharkiv
National University. Series: biology. 2009; 9 (856): 11–18.
13.Eming S.A., Whitsitt J.S., He L. Particle-mediated gene transfer
of PDGF isoforms promotes wound repair. J Invest Dermatol
1999; 112 (3): 297–302.
2. Арефьева Т.И., Соколов В.О., Пылаева Е.А. и др. Пеп-
тидный фрагмент 29–40 аминокислотной последователь-
ности моноцитарного хемотоксического белка-1 (МРС-1)
стимулирует миграцию моноцитов in vivo и способствует
ранозаживлению // Доклады Академии Наук. – 2012. –
Т. 446, №1. – С. 106–109.
3. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н. Методы оценки
свободнорадикального окисления и антиоксидантной сис-
темы организма: Метод. pекомендации. – СПб.: Фолиант,
2000. – С. 46–50.??
4. Аскаров Т.А., Меметов Ф.Ю., Батырбеков А.А. и др. Влия-
ние Лакто Флор на иммунный статус животных с ожого-
вой болезнью и гормониндуцированным иммунодефици-
том // Проблемы биологии и медицины. – 2003. – №1–3. –
С. 14–17.
5. Бабенко Г.А., Гонский Я.И., Антоник И.М. и др. О роли
металлов в процессах свободнорадикального окисления
в тканях организма по данным спонтанной и индуцирован-
ной хемилюминесценции // Хемилюминесценция. – М.:
Наука, 1983. – C. 164–179.
6. Бабская Ю.Е., Лавров В.А., Омонина Н.А. Интенсивность
свободно-радикального окисления липидов в острый период
ожоговой болезни // Хирургия. – 1985. – №11. – С. 95–97.
7. Бызов В.В, Высеканцев И.П., Гальченко С.Е. и др. Влияние
эндобронхиального введения экстракта криоконсерви-
рованных фрагментов ксеноселезенки на некоторые фак-
торы местного иммунитета в комплексной терапии боль-
ных с абсцессами легких // Проблемы криобиологии. –
2001. – №4. – С. 65–70.
8. Гальченко С.Є. Екстракти кріоконсервованих фрагментів
ксеноорганів: одержання та біологічна дія // Проблемы
криобиологии. – 2005. – Т. 15, №3. – С. 403–406.
9. Донцов В.И. Регуляция лимфоцитами клеточного роста
соматических тканей и новая иммунная теория старения.
Обзор // Профилактика старения. – 1998. – Вып. 1. – С. 40–
63.
10.Дюбко Т.С., Сидоров В.И., Соколик О.А. и др. Сравнитель-
ное изучение взаимодействия флуоресцентных красите-
лей К-35 и К7-1045 с белками сыворотки крови крыс //
Вісник ХНУ ім. В.Н. Каразіна. Серія: біологія. – 2009. – Вип. 9,
№856. – С. 11–18.
11.Емельянов А.Ю., Липатов К.В., Фархат Ф.А. Отмороже-
ния: актуальные вопросы патогенеза, диагностики и
лечения // Хирургия. – 2002. – №12. – С. 59–63
12.Иванова С.В., Кирпиченок Л.Н. Использование флуо-
ресцентных методов в медицине // Мед. новости. – 2008. –
№12. – С. 56–61.
13.Козинец Г.П., Слесаренко С.В., Радзиховский А.П. и др.
Ожоговая интоксикация. Патогенез, клиника, принципы
лечения. – М.: МЕДпресс. информ. – 2005. – 22 с.
14.Лопухин Ю.М., Владимиров Ю.А., Молоденков М.Н. и др.
Регистрация хемилюминесценции составных частей сыво-
ротки крови в присутствии двухвалентного железа // Бюл.
эксперим. биологии и медицины. – 1983.– №2. – С. 61–63.
15.Осиков М.В., Лихачева А.Г., Телешева Л.Ф. Показатели
врожденного иммунитета и морфология очага повреж-
дения при экспериментальной термической травме //
Мед. науки. Фундаментальные исследования. – 2012. –
№8. – С. 381–386.
16.Островский В.К., Мащенко А.В., Янголенко Д.В. и др. Пока-
затели крови и лейкоцитарного индекса интоксикации в
оценке тяжести и определении прогноза при воспали-
тельных, гнойных и гнойно-деструктивных заболева-
ниях // Клин. лаб. диагностика. – 2006. – №6. – С. 50–53.
17.Петрович Ю.Н., Гуткин Д.В. Свободнорадикальное окисле-
ние и его роль в патогенезе воспаления, ишемии и стрес-
са // Патолог. физиол. – 1986. – №5. – С. 85–92.
18.Слесаренко С.В., Бадюл П.А. К вопросу о необходимости
стандартизации медицинской помощи при отмороже-
ниях // Хірургія України. – 2007. – №4. – С. 6–10.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 25, №/issue 2, 2015
161
19.Сперанский И.И., Самойленко Г.Е., Лобачева М.В. Общий
анализ крови – все ли его возможности исчерпаны? Ин-
тегральные индексы интоксикации как критерии оценки
тяжести течения эндогенной интоксикации, ее ослож-
нений и эффективности проводимого лечения // Здоровье
Украины. – 2009. – Т. 19, №6. – С. 51–57.
20.Чадаев А.П., Свиридов С.В., Климиашвили А.Д. и др.
Холодовая травма // Рос. мед. журнал. – 2005. – №35. –
С. 20–23.
21.Чорна І.О., Лігоненко О.В., Гірін Л.В. Зміни у системі гемо-
стазу під впливом пептидних біорегуляторів при загоєнні
рани в експерименті // Клін. хірургія. – 2002. – №11–12. –
С. 77–78.
22.Шестаков В.А., Бойчевская Н.О., Шерстнев М.П. Хеми-
люминесценция плазмы крови в присутствии перекиси
водорода // Вопр. мед. химии. – 1979. – №2. – С. 132–137.
23.Шкодовская Н.Ю., Гойденко Н.И., Гальченко С.Е., Сандо-
мирский Б.П. Экспериментальные холодовые раны кожи
при терапии экстрактами плаценты официнальным и
кожи новорожденных поросят // Проблеми мед. науки та
освіти. – 2005. – №4. – С.41–45.
24.Яворская В.А., Белоус А.М., Мохамед А.Н. Исследование
уровня молекул средней массы и процессов перекисного
окисления липидов в крови больных с разными формами
инсульта // Журнал неврологии и психиатрии . –2000. –
№1.– С. 48–51.
25.Arford S. Treatment of frostbite: a cold-induced injury //
J. Wound Ostomy Continence Nurs. – 2008. – Vol. 35, №6. –
Р. 625–630.
26.Bespalova I., Belochkina I., Galchenko S., Sandomirsky B. Orga-
nospecific influence of the extract of cryopreserved piglet's
skin fragments. Biological Effect of cNPSE and cPSE in
Fibroblast Culture // Periodicum Biologorum. – 2014. – Vol. 116,
№1. – P.99–103.
27.Eming S.A. Whitsitt J.S. He L. Particle-mediated gene transfer
of PDGF isoforms promotes wound repair // J. Invest. Der-
matol. – 1999. – Vol. 112, №3. – P. 297–302.
28.Kinoshita M., Seki S., Ono S. Paradoxical effect of IL-18 therapy
on the severe and mild Escherichia coli infections in burn-inju-
red mice // Ann. Surg. – 2004. – Vol. 240, №2. – P. 313–320.
14.Galchenko S.Ye. Extracts of cryopreserved fragments of
xenoorgans: obtaining and biological effect. Problems of Cryo-
biology 2005; 15 (3): 403–406.
15.Gryzunov U.A. and Dobretsov G.E., editors. Blood serum
albumin in clinical medicine. Book 2. Moscow: GEOTAR; 1998.
16.Ivanova S.V., Kirpichonok L.N. Application of fluorescent me-
thods in medicine. Med Novosti 2008; 12: 56-61.
17.Kinoshita M., Seki S., Ono S. Paradoxical effect of IL-18 therapy
on the severe and mild Escherichia coli infections in burn-inju-
red mice. Ann Surg 2004; 240 (2): 313–320.
18.Kozinets G.P., Slesarenko S.V., Radzihovsky A.P. et al. Burn
intoxication. Pathogenesis, clinical picture, principle of treat-
ment. Moscow: MEDpress-inform. 2005.
19.Lopukhin Yu.M., Vladimirov Yu.A., Molodenkov M.N. et al.
Chemiluminescence registration of blood serum components
in bivalent iron presence. Bul Experim Biologii i Meditsiny 1983;
(2): 61–63.
20.Osikov M.V., Likhacheva A.G., Telesheva L.F. Inherent immunity
rates and injury focus morphology at experimental thermal
injury. Med Nauki Fundamentalnye Issledovaniya 2012; 8: 381–
386.
21.Ostrovskiy V.K., Maschenko A.V., Yangolenko D.V. et al. Blood
and leukocytic intoxication rates when assessing the severity
and estimating the prognosis at inflammatory, purulent and
pyo-destructive diseases. Klin Lab Diagnostika 2006; 6: 50–
53.
22.Petrovich Yu.N., Gutkin D.V. Free radical oxidation and its role
in inflammation, ischemia and stress pathogenesis. Patolog
Fiziologia 1986; 5: 85–92.
23.Shestakov V.A., Bojchevskaya N.O., Sherstnyov M.P. Che-
miluminescence of blood plasma in presence of hydrogen
peroxide. Vopr Med Khimii 1979; 2: 132–137.
24.Shkodovskaya N.Yu., Gojdenko N.I., Galchenko S.Ye., Sando-
mirsky B.P. Experimental skin cold injuries in therapy by placen-
ta extracts, officinal one and newborn piglets' skin. Problemy
Med Nauky ta Osvity 2005; (4): 41–45.
25.Slesarenko S.V., Badul P.A. To the question for necessity of
standardizing of medical aid at frostbite. Khirurgiya Ukrainy
2007; 4: 6–10.
26.Speranskiy I.I., Samoilenko G.E., Lobachova M.V. General
blood analysis – are all its facilities exhausted? Integral indices
of intoxication as criterion of assessing the severity of endo-
genous intoxication, its complication and efficiency of treatment
implemented. Zdorovie Ukrainy 2009; 19(6): 51–57.
27.Yavorskaya V.A., Belous A.M., Mohamed A.N. Study of middle
mass molecules level and processes of lipid peroxidation in
the blood of patients with different forms of stroke. Zhurnal
Nevrologii i Psikhiatrii 2000; 1: 48–51.
28.Yemelyanov A.Yu., Lipatov K.V., Farhat F.A. Frostibites: actual
questions of pathogenesis, diagnosis and treatment. Khirur-
giya 2002; 12: 59–63.
|