Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках
Збережено в:
| Дата: | 2006 |
|---|---|
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2006
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137330 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках / А.А. Лаврик, Б.Т. Стегний, В.С. Белоконь // Проблемы криобиологии. - 2006. - Т. 16, № 4. — С. 443. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-137330 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1373302018-06-18T03:05:23Z Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках Лаврик, А.А. Стегний, Б.Т. Белоконь, В.С. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология 2006 Article Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках / А.А. Лаврик, Б.Т. Стегний, В.С. Белоконь // Проблемы криобиологии. - 2006. - Т. 16, № 4. — С. 443. — рос. http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137330 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Лаврик, А.А. Стегний, Б.Т. Белоконь, В.С. Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Лаврик, А.А. Стегний, Б.Т. Белоконь, В.С. |
| author_facet |
Лаврик, А.А. Стегний, Б.Т. Белоконь, В.С. |
| author_sort |
Лаврик, А.А. |
| title |
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках |
| title_short |
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках |
| title_full |
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках |
| title_fullStr |
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках |
| title_full_unstemmed |
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках |
| title_sort |
система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2006 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/137330 |
| citation_txt |
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся в низкотемпературных банках / А.А. Лаврик, Б.Т. Стегний, В.С. Белоконь // Проблемы криобиологии. - 2006. - Т. 16, № 4. — С. 443. — рос. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT lavrikaa sistemapasportizaciiperevivaemyhkletočnyhlinijhranâŝihsâvnizkotemperaturnyhbankah AT stegnijbt sistemapasportizaciiperevivaemyhkletočnyhlinijhranâŝihsâvnizkotemperaturnyhbankah AT belokonʹvs sistemapasportizaciiperevivaemyhkletočnyhlinijhranâŝihsâvnizkotemperaturnyhbankah |
| first_indexed |
2025-07-10T03:40:11Z |
| last_indexed |
2025-07-10T03:40:11Z |
| _version_ |
1837229741185171456 |
| fulltext |
443
Система паспортизации перевиваемых клеточных линий, хранящихся
в низкотемпературных банках
А.А. ЛАВРИК, Б.Т. СТЕГНИЙ, В.С. БЕЛОКОНЬ
Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины, г.Харьков
Certification System for Recultured Cell Lines, Stored at Low
Temperature Banks
A.A. LAVRIK, B.T. STEGNIY, V.S. BELOKON
Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine, Kharkov
В серии технических докладов ВОЗ определены
требования к линиям клеток, используемым в производ-
ственных и научно-исследовательских целях. Гарантом
выполнения этих требований во всем мире стала система
организации низкотемпературных банков клеток, где каж-
дая культура должна иметь паспорт качества. Основ-
ными такими параметрами являются чистота от конта-
минирующих агентов, аутентичность и стабильность,
однако методическая основа исследований этих пара-
метров до сих пор не стандартизирована и не достаточна
для полной оценки биологических параметров культур.
Цель работы – совершенствование системы паспор-
тизации перевиваемых линий клеток с использованием
молекулярных и цитогенетических методов исследования.
Для индикации микоплазменной контаминации в
сравнении с серологическими методами исследований
в ИЭКВМ был внедрен метод полимеразной цепной
реакции (ПЦР). Применение праймеров к роду Mycoplasma
(AmpliSens, Россия) показало высокую чувствитель-
ность детекции микоплазменной контаминации с
помощью ПЦР. Использованные в качестве контроля 4 вида
микоплазм (Mycoplasma inners, Mycoplasma gallinarum
B-733, Mycoplasma 2795 и Acholeplasma laidlawii) также
подтвердили высокую специфичность метода ПЦР. Дан-
ными видами были экспериментально контаминирова-
ны перевиваемые линии клеток ВНК-21 и FLK-SBBL. С
помощью ПЦР были успешно идентифицированы эти
контаминанты, тогда как при серологическом методе
был получен сомнительный результат, который зависел
от количества микоплазм в исследуемой пробе.
При исследовании стабильности кариотипа переви-
ваемых клеточных культур, хранящихся в криобанке
ИЭКВМ, использовали классический цитогенетический
метод и метод учета митотического режима клеток,
который с этой целью применялся в системе паспорти-
зации культур впервые. Было исследовано 17 переви-
ваемых линий клеток, имеющих различное видовое
происхождение (SPEV, PK-15-IECVM, PTP, LEK, MDBK,
PT, MDCK, BHK-21/ 2-17, ВНК clone 13/04, Vero, CV, NGUK,
F-81, PO-2, PO-2/04, RK-13 и PS-FGM). В большинстве
случаев наличие модального класса (группы) хромосом
в клетках исследуемых культур прямо коррелировало с
минимальным процентом патологических митозов (не
выше 20% от делящихся клеток). Оба критерия свиде-
тельствуют о стабильном кариотипе клеток. В то же
время наблюдались исключения, когда в культурах РТР
и MDCK наличие модальной группы хромосом сочета-
лось с повышенным количеством патологических
митозов (>20 %).
Таким образом, было показано, что для оценки
стабильности кариотипа клеточных линий применение
одного классического цитогенетического метода недо-
статочно, поэтому необходимо использовать с этой
целью метод оценки митотического режима клеток. Так-
же доказана эффективность метода ПЦР для иденти-
фикации микоплазменной контаминации клеточных
культур, что требует его внедрения в систему паспорти-
зации клеток.
In the series of the WHO technical reports there were
defined the requirements to cell lines, used in production
and for scientific-research purposes. The guarantee of
meeting these requirements all over the world became the
system for establishing low temperature banks of cells,
where the quality for each culture should be certified. These
main parameters are such as: purity from contaminating
agents, authenticity and stability, but the methodical
grounds for studying these parameters have not been
standardized yet and are insufficient for a complete
estimation of culture biological parameters.
This research was targeted to improve the certification
system for recultured cell lines with using molecular and
cytogenetic research methods.
The PCR method was introduced into the Institute of
Experimental and Clinical Veterinary Medicine to indicate
mycoplasm contamination in comparison with serological
research methods. Applying the primers to Mycoplasma
genera (AmpliSens, Russia) has demonstrated a high
sensitivity to mycoplasm contamination using PCR. Used
as the control 4 mycoplasm species (Mycoplasma inners,
Mycoplasma gallinarum B-733, Mycoplasma 2795 and
Acholeplasma laidlawii) confirmed a high specificity of
PCR method as well. Recultured BHK-21 and FLK-SBBL
cell lines were experimentally contaminated with these
species. These contaminants were successfully identified
using PCR, meanwhile at a serological method a contro-
versial result, depending on mycoplasm amount in studied
sample was obtained.
When investigating the karyotype stability of recultured
cell cultures, stored at the cryobank of Institute of Experi-
mental and Clinical Veterinary Medicine there were used
the standard cytogenetic method and that for counting
mitotic cell regimen, which was firstly applied with this aim
in certification system. We investigated 17 recultured cell
lines, having different specific origin (SPEV, PK-15-IECVM,
PTP, LEK, MDBK, PT, MDCK, BHK-21/ 2-17, BHK clone
13/04, Vero, CV, NGUK, F-81, PO-2, PO-2/04, RK-13 and PS-
FGM). In the majority of cases the presence of modal class
(group) of chromosomes in cells of studied cultures directly
correlated with a minimum percentage of pathological
mitosis (not higher than 20% of dividing cells). Both criteria
testify to a stable cell karyotype. At the same time the
exclusions, where in PTP and MDCK cultures the presence
of modal group of chromosomes was combined with an
increased amount of pathological mitoses (>20%).
Thus, the application of one standard cytogenetic
method has been demonstrated to be insufficient for
estimating karyotype stability of cell lines, therefore using
the method of cell mitotic regimen evaluation for this
purpose is needed. The PCR method efficiency to identify
mycoplasm contamination in cell cultures is also proved,
that requires its introduction into the system of cell certifi-
cation.
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 16, 2006, №4
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 16, 2006, №4
|