Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2017
Автори: Кузьмина, И.Ю., Кузьмина, О.А., Губина-Вакулик, Г.И., Добрунова, И.В.
Формат: Стаття
Мова:Russian
Опубліковано: Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2017
Назва видання:Проблемы криобиологии и криомедицины
Теми:
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138427
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты / И.Ю. Кузьмина, О.А. Кузьмина, Г.И. Губина-Вакулик, И.В. Добрунова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2017. — Т. 27, № 2. — С. 151-155. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-138427
record_format dspace
spelling irk-123456789-1384272018-06-20T03:02:59Z Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты Кузьмина, И.Ю. Кузьмина, О.А. Губина-Вакулик, Г.И. Добрунова, И.В. Краткие сообщения 2017 Article Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты / И.Ю. Кузьмина, О.А. Кузьмина, Г.И. Губина-Вакулик, И.В. Добрунова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2017. — Т. 27, № 2. — С. 151-155. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138427 618.36–092.9:615.361:618.46]:57.086.13-089.6 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
topic Краткие сообщения
Краткие сообщения
spellingShingle Краткие сообщения
Краткие сообщения
Кузьмина, И.Ю.
Кузьмина, О.А.
Губина-Вакулик, Г.И.
Добрунова, И.В.
Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
Проблемы криобиологии и криомедицины
format Article
author Кузьмина, И.Ю.
Кузьмина, О.А.
Губина-Вакулик, Г.И.
Добрунова, И.В.
author_facet Кузьмина, И.Ю.
Кузьмина, О.А.
Губина-Вакулик, Г.И.
Добрунова, И.В.
author_sort Кузьмина, И.Ю.
title Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
title_short Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
title_full Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
title_fullStr Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
title_full_unstemmed Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
title_sort состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты
publisher Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
publishDate 2017
topic_facet Краткие сообщения
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138427
citation_txt Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты / И.Ю. Кузьмина, О.А. Кузьмина, Г.И. Губина-Вакулик, И.В. Добрунова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2017. — Т. 27, № 2. — С. 151-155. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ.
series Проблемы криобиологии и криомедицины
work_keys_str_mv AT kuzʹminaiû sostoânieplacentberemennyhkrysposleimplantaciikriokonservirovannyhfragmentovallogennojplacenty
AT kuzʹminaoa sostoânieplacentberemennyhkrysposleimplantaciikriokonservirovannyhfragmentovallogennojplacenty
AT gubinavakulikgi sostoânieplacentberemennyhkrysposleimplantaciikriokonservirovannyhfragmentovallogennojplacenty
AT dobrunovaiv sostoânieplacentberemennyhkrysposleimplantaciikriokonservirovannyhfragmentovallogennojplacenty
first_indexed 2025-07-10T02:50:11Z
last_indexed 2025-07-10T02:50:11Z
_version_ 1837226594261794816
fulltext Kharkiv National Medical University, Kharkiv, UkraineХарьковский национальный медицинский университет, г. Харь- ков, Украина Поступила 21.11.2016 Принята в печать 19.12.2016 Received November, 21, 2016 Accepted December, 19, 2016 Благодаря достижениям криобиологии и криоме- дицины арсенал лечебных средств регенеративной медицины пополнился криоконсервированными биопрепаратами плацентарного происхождения, созданы их запасы, верифицирована биобезопасность [1, 3]. Результаты многочисленных эксперименталь- ных и клинических исследований показали позитив- ный терапевтический эффект введения плацентарных препаратов на восстановление пораженных или пато- логически измененных органов и тканей [4, 6, 7, 9, 11]. Однако влияние имплантации фрагментов алло- генной плаценты на состояние плаценты реципиента во время беременности, как на наиболее динамично развивающуюся биоструктуру, изучено недостаточно и представляет особый научно-практический инте- рес. Препараты плаценты широко используются в ре- генеративной медицине, однако в последнее время в Европе и США усиливаются акты, регулирующие их применение [10]. В связи с вышеизложенным яв- ляются актуальными дополнительные исследования по влиянию имплантации фрагментов плаценты на здоровые органы. С этой целью были исследованы морфологические изменения плаценты при физиологической беремен- ности у крыс на фоне имплантации криоконсервиро- ванных фрагментов аллогенной плаценты (КФП). Работу выполняли в соответствии с «Общими принципами экспериментов на животных», одобрен- ными VI Национальным конгрессом по биоэтике (Киев, 2016) и согласованными с положениями «Ев- ропейской конвенции о защите позвоночных живот- Progress in cryobiological and cryomedical investi- gations allowed to supplement medicinal products used for regenerative medicine with cryopreserved biological products of placental origin, to establish the collections and low temperature banks of the samples with verified biosafety [2, 4]. Numerous experimental and clinical studies have shown a positive therapeutic effect of the introduced placental products on restoration of both either affected or pathologically altered organs and tissues [1, 6, 7, 9, 11]. However, the effect of implantation of allo- geneic placenta fragments on the recipient’s placenta during pregnancy as the most dynamically developing biological structure has been poorly studied and is of special scientific and practical interest. Placental pre- parations are widely used in regenerative medicine, howe- ver recently in Europe and the USA the regulatory acts of their application have been strengthened [10]. Due to the above-mentioned additional studies on the effect of placental fragments on healthy organs are quite relevant. With this aim we have studied the morphological changes in the rat placenta during physiological preg- nancy after implantation of cryopreserved placental frag- ments (CPF). The experiments were carried out in accordance with the General Principles of Experiments in Animals, appro- ved by the 5th National Congress in Bioethics (Kyiv, 2016) and statements of the European Convention for the Pro- tection of Vertebrate Animals Used for Experimental and Other Scientific Purposes (Strasbourg, 1986). The research was performed in pregnant female white outbred rats (n = 30). The animals of the main group УДК 618.36–092.9:615.361:618.46]:57.086.13-089.6 И.Ю. Кузьмина*, О.А. Кузьмина, Г.И. Губина-Вакулик, И.В. Добрунова Состояние плацент беременных крыс после имплантации криоконсервированных фрагментов аллогенной плаценты UDC 618.36–092.9:615.361:618.46]:57.086.13-089.6 I.Yu. Kuzmina*, O.A. Kuzmina, G.I. Gubina-Vakulik, I.V. Dobrunova State of Placentas in Pregnant Rats After Implantation of Cryopreserved Allogenic Placental Fragments Ключевые слова: криоконсервирование, плацента, имплантация, беременность, крысы. Ключові слова: кріоконсервування, плацента, імплантація, вагітність, щури. Key words: cryopreservation, placenta, implantation, pregnancy, rats. краткое сообщение short communication This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), which permits unrestricted reuse, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. © 2017 I.Yu. Kuzmina et al., Published by the Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine Probl Cryobiol Cryomed 2017; 27(2): 151–155 https://doi.org/10.15407/cryo27.02.151 *Автор, которому необходимо отправлять корреспонденцию: просп. Науки, 4, г. Харьков, Украина 61022; тел.: (+38 057) 705-07-11 электронная почта: irina.u.kuzmina@gmail.com *To whom correspondence should be addressed: 4, Nauky Ave., Kharkiv, Ukraine 61022; tel.:+380 57 705 0711 e-mail: irina.u.kuzmina@gmail.com 152 проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 27, №/issue 2, 2017 ных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986). Эксперимент проводили на беременных самках белых беспородных крыс (n = 30). Животным основ- ной группы (n = 20) в сроке одной недели гестации (оплодотворение определяли по наличию сперма- тозоидов во влагалищном мазке) под кожу в области спины имплантировали КФП. Биоматериал получали в асептических условиях у беременных крыс той же популяции в конце срока беременности, затем его фрагментировали и криоконсервировали по разрабо- танной ранее программе [5]. Контрольную группу составили 10 интактных беременных крыс. На 7- и 14-е сутки после введения КФП животных выводили из эксперимента и извлекали имплантат. Было исследовано 20 участков имплантации КФП, 20 образцов плацент крыс основной группы (с им- плантацией КФП) и 10 образцов плацент крыс конт- рольной группы (без имплантации КФП). Для морфологического исследования фрагментов плаценты (имплантированных под кожу и извлечен- ных из матки) использовали оптический микроскоп «Axiostar Plus» («Сarl Zeiss», Германия). Препараты изучали после заливки в парафин и окраски гематок- силином и эозином по Эйнарсону на нуклеиновые кислоты и постановки ШИК-реакции [2]. Результаты морфологических исследований пока- зали, что имплантированный материал был подвержен лизису. Через 7 суток после имплантации в кусочке подсаженного КФП микроскопическим методом обна- руживали сегментоядерную инфильтрацию и фраг- менты ядер, свидетельствующие о кариорексисе. Через 14 суток лабиринтная часть КФП имела вид эозино- фильного конгломерата. В губчатой (материнской) части обнаруживали сохраненные пласты децидуаль- ных и трофобластных клеток, синцитотрофобласта, несмотря на наличие лейкоцитарной сегментоядерной инфильтрации в строме. Ядра трофобласта КФП име- ли крупный размер (8–20 мкм), овальную форму с диффузно расположенным мелкодисперсным хрома- тином. Цитоплазма эозинофильная с незначитель- ной порозностью. При окрашивании образцов по Эйнарсону на нуклеиновые кислоты в ядрах клеток выявлялась ДНК, а в цитоплазме – небольшое коли- чество РНК. Ткань плаценты крыс-реципиентов при доношен- ной беременности имела лабиринтное гемохориальное строение, свойственное грызунам. В плодовой части на гистологическом срезе она имела соответствую- щий мелкоячеистый вид. Определялись широкие плодовые капилляры. Ядра эндотелиоцитов имели овальную форму, строма балок – многоклеточную структуру (гистиоциты). (n = 20) got the CPF under the skin in the back area after the first week of gestation (fertilization was determined by the presence of spermatozoa in vaginal smear). The biological samples were derived under aseptic conditions from pregnant rats of the same population at the end of pregnancy, then fragmented and cryopreserved according to the previously developed protocol [5]. The control group consisted of 10 intact pregnant rats. At days 7 and 14 after the CPF administration, the animals were sacrificed and the implant was taken out. Twenty sites of CPF implantation, 20 samples of rat placentas of the main group (with implanted CPF) and 10 placental samples of the control rats (without CPF implanted) were examined. Morphological study was performed in the placental fragments (implanted under the skin and removed from the uterus) using Axiostar Plus optical microscope (Carl Zeiss, Germany). Paraffin embedded specimens were studied after staining with hematoxylin and eosin, Einarsson technique for revealing nucleic acids, and PAS reaction [2]. The results of morphological studies showed that the implanted material was subjected to lysis. Seven days after implantation, we have found in the graft of transplanted CPF an infiltration of segmented neutrophils and presence of nuclei fragments, the indicators of karyorrhexis. After 14 days the labyrinth part of the CPF appeared as an eosinophilic conglomerate. In the spongy (maternal) part, we have observed the preserved layers of decidual and trophoblast cells, syncytotrophoblast, at the same time there was a segmented neutrophils infiltration in stroma. The nuclei of the CPF trophoblast were large (8–20 microns) and had an oval shape and a diffusely arranged fine-dispersed chromatin. The cyto- plasm was eosinophilic and slightly porous. Einars- son staining for nucleic acids allowed to reveal DNA in the nuclei of the cells and a small amount of RNA in cytoplasm. The placenta tissue of the recipient rats in case of full-term pregnancy had a labyrinth hemochoric structure peculiar to rodents. In histological section of fetal part we saw specific fine mesh pattern. Wide fetal capillaries were found. The nuclei of the endotheliocytes were of oval shape, stroma of the bands had a multicellular structure (mainly of histiocytes). It was found that after the implantation of CPF to pregnant rats the number of trophoblast cells with a large dark nucleus of irregular shape with the nuc- leolus was increased in the placenta, whereas in the most placental trophoblast cells of the control animals no nucleoli were present. This fact may indicate a slo- wed placental tissue aging, the preservation of its проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 27, №/issue 2, 2017 153 Установлено, что после имплантации КФП в плаценте беременных крыс увеличивалось количество трофобластных клеток, имеющих крупное темное ядро неправильной формы с ядрышком, тогда как в клетках трофобласта плацент животных контрольной группы в большинстве случаев ядрышко отсутство- вало. Этот факт может свидетельствовать о замедле- нии старения плацентарной ткани, сохранении ее гормональных и других функций. Кроме того, после имплантации КФП в плодовой части плаценты и просвете лабиринта резко уменьшались количество и объем очагов фибриноида, что может служить дока- зательством уменьшения повреждений и замедлении старения синцитиотрофобластной выстилки балок лабиринтной части плаценты. Трофобласт губчатой части в основном сохранялся, при этом, если у животных без имплантации КФП ядра трофобласта чаще имели вытянутую форму и интенсивную гипер- хромную окраску (рис. 1), то после имплантации КФП размер ядер увеличивался, более четко просмат- ривались ядрышки с мелкодисперсным хроматином и определялось небольшое количество двуядерных трофобластных клеток (рис. 2). Выявлялись также клетки неправильной формы с темными круглыми ядрами и крупными оптически прозрачными вакуо- лями в цитоплазме. Цитоплазма трофобластных клеток плацент основной группы животных под действием ультрафиолетовых лучей имела выраженное бело- желтое свечение, которое свидетельствовало о значи- тельном содержании РНК, характерном для активных синтетических процессов. Свечение в клетках трофо- бласта плацент животных контрольной группы было менее интенсивным. Рис. 1. Слабо представленный клеточный элемент материнской части плаценты у крыс без имплантации КФП. Окраска гематоксилином и эозином. Fig. 1. Poorly presented cell element of maternal placental part of rats with implanted CPF. Hematoxynin-eosin stai- ning. Рис. 2. Хорошо сохранившиеся клетки материнской части плаценты у животных с имплантацией КФП. Ок- раска гематоксилином и эозином. Fig. 2. Well preserved cells of maternal part of placenta of animals with implanted CPF. Hematoxylin-eosin stai- ning. hormonal and other functions. In addition, the implan- tation of CPF resulted in sharp decrease of the num- ber and volume of fibrinoid foci in the fetal part of the placenta and the labyrinth lumen, which could be the evidence of reduced injury and the aging slowing down of the syncytiotrophoblast lining of the labyrinthine part of placenta. The trophoblast of the spongy part was mostly preserved, whereas in the animals without implanted CPF the trophoblast nuclei were more of- ten elongated and had intensive hyperchromic co- lor (Fig. 1). After the implantation of CPF the size of the nuclei increased, nucleoli with finely dispersed chromatin were more clearly visible and a small num- ber of binuclear trophoblast cells was found (Fig. 2). Irre- gularly shaped cells with dark round nuclei and large optically transparent vacuoles in the cytoplasm were noted. The cytoplasm of trophoblastic cells of placen- tas in the main group animals had a significant white- yellow fluorescence under the UV excitation, which indi- cated a significant presence of RNA, characteristic of active synthetic processes. Fluorescence in trophoblast placental cells of the animals in the control group was less intense. In samples of the placenta of the animals with implan- ted CPF, the decidual cells that separated from the pla- centa were large and clearly structured. PAS reaction in the cytoplasm of placental cells of the animals of the main group revealed a higher number of glycogen gra- nules comparing to the cytoplasm of the placental cells of intact animals. The experiment allowed the comparison of morpho- functional state of own rat placenta and the one of im- planted CPF. The changes in recipient’s placentas were 50 µµµµµm 10 µµµµµm 154 проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 27, №/issue 2, 2017 References 1. Goltsev A.N., Yurchenko T.N., editors. Placenta: cryopreser- vation, clinical application. Kharkiv; 2013. 2. Grischenko V.I., Prokopyuk O.S., Shepitko V.I. et al. Use of cryopreserved placenta in therapeutic practice. Transplan- tologiya 2002; 3(2): 32–37. 3. Grischenko V.I., Prokopyuk O.S., Yurchenko T.N., Grischen- ko N.G. Fundamental and clinical aspects of cell therapy. Doctor 2004; (4): 5–8. 4. Korzhevskiy D.E., Gilyarov A.V., Merkulov A.V. Bases of histological technique. St-Petersburg: SpetsLit; 2010. 5. Prokopyuk V.Yu., Prokopyuk O.S., Musatova I.B. et al. Estimation of preservation of placental explants, cord and fetal memb- ranes after cryopreservation. Cell and Organ Transplantology 2015; 3(1): 28–38. 6. Trifonov V.Yu., Prokopyuk V.Yu., Zaychenko A.V. Cryopreser- ved cord blood serum for reproductive function restoration during antiphospholipid syndrome. Probl Cryobiol 2011; 21(1): 75–84. 7. Shevchenko N.O., Somova K.V., Volina V.V. et al. Dynamics of activity and duration of functioning of cryopreserved cryo- extract, placental cells and fragments in the organism of experimental animals. Morphologia 2016; 10(2): 93–98. 8. Liu W., Morschauser A., Zhang X. et al. Human placenta-derived adherent cells induce tolerogenic immune responses. Clin Transl Immunology 2014; 3(5):14. В образцах плацент животных с имплантацией КФП децидуальные клетки, отделившиеся вместе с плацентой, были крупными и четко структуриро- ванными. При проведении ШИК-реакции в цито- плазме клеток плацент животных основной группы было выявлено большее количество гранул глико- гена, чем в цитоплазме клеток плацент интактных животных. Результаты эксперимента позволили сравнить морфофункциональное состояние собственных пла- цент крыс и имплантированных КФП. Изменения в плацентах животных-реципиентов отмечались как в ближайшие сроки после имплантации КФП (7-е сут- ки), так и в более отдаленные (14-е сутки). Полученные данные подтверждают функциональную сохранность имплантата КФП в указанные сроки и характеризуют его воздействие на организм не как одномоментное, а как пролонгированное. Обнаруженные эффекты могут быть объяснены поступлением в организм реци- пиента комплекса биологически активных соединений из КФП на протяжении всего периода наблюдения. Такое многоплановое, позитивное и продолжительное действие КФП обусловлено поступлением в организм реципиента репродуктивных иммуномодуляторов, гормонов, ростовых и пролиферативных, релизинг- и других регуляторных факторов, содержащихся в плаценте в физиологически сбалансированном соот- ношении [7, 8]. Следует отметить, что ни в одном из образцов пла- цент животных, которым во время физиологической беременности были имплантированы КФП, признаки гиперстимуляции, патологической пролиферации или атипические клетки не были обнаружили, что под- тверждает биобезопасность данного вида терапии. Таким образом, имплантация криоконсервиро- ванных фрагментов плаценты оказывает положитель- ное влияние на морфофункциональное состояние плаценты крысы при физиологической беременности. Наши дальнейшие исследования будут направлены на изучение влияния имплантации КФП на систему «мать-плацента-плод» в эксперименте, что может определить перспективу применения данного вида лечения беременных. Литература 1. Грищенко В.І., Прокопюк О.С., Шепітько В.І. та ін. Вико- ристання кріоконсервованої плаценти в лікувальній прак- тиці // Трансплантологія. – 2002. – Т. 3, №2. – С. 32–37. 2. Грищенко В.И., Прокопюк О.С., Юрченко Т.Н., Грищенко Н.Г. Фундаментальные и клинические аспекты клеточной те- рапии // Doctor. – 2004. – № 4. – С. 5–8. noted both shortly after implantation of CPF (day 7) and in more distant terms (day 14). The obtained data confirm the functional integrity of the CPF graft within the indicated time periods and characterize its effect on the body not as ‘one-shot’, but as broad one. The observed effects can be explained by the transfer of biologically active compounds from the CPF into the recipient body during the observation period. This ver- satile, positive and prolonged effect of CPF we could associate with the delivery of the reproductive immune modulators, hormones, growth and proliferative, relea- sing and other regulatory factors contained in the placenta in a physiologically balanced ratio [7, 8]. It should be noted that none of the placental samp- les of the animals implanted with CPF during phy- siological pregnancy showed signs of hyperstimula- tion, pathological proliferation or atypical cells, that confirmed the biological safety of this type of therapy. Thus, the implantation of cryopreserved fragments of placenta had a positive effect on morphofunctional state of rat placenta during physiological pregnancy. Our further studies will be aimed at investigation of the CPF implantation effect on the ‘mother-placenta- fetus’ system in experiment, that could determine the prospect of using this type of treatment for pregnant women. 3. Коржевский Д.Э., Гиляров А.В., Меркулов А.В. Основы гистологической техники. – СПб.: СпецЛит, 2010. – 95 c. 4. Плацента: криоконсервирование, клиническое применение / Под. ред. А.Н. Гольцева, Т.Н. Юрченко. – Харьков, 2013. – 318 с. 5. Прокопюк В.Ю., Прокопюк О.С., Мусатова И.Б. и др. Оценка сохранности эксплантов плаценты, пуповины и плодных оболочек после криоконсервирования // Клеточная и ор- ганная трансплантология. – 2015. – Т. 3, №1. – С. 28–38. 6. Трифонов В.Ю., Прокопюк В.Ю., Зайченко А.В. Криоконсер- вированная сыворотка кордовой крови в восстановлении репродуктивной функции при антифосфолипидном синд- роме // Проблемы криобиологии. – 2011. – Т. 21, №1. – С. 75–84. 7. Шевченко Н.О., Сомова К.В., Воліна В.В. та ін. Динаміка активності та тривалості функціонування кріоконсервова- них кріоекстракту, клітин та фрагментів плаценти у орга- нізмі експериментальних тварин // Морфологія. – 2016. – Т. 10, №2. – С. 93–98. 8. Liu W., Morschauser A., Zhang X. et al. Human placenta-derived adherent cells induce tolerogenic immune responses // Clin. Transl. Immunology. – 2014. – Vol. 3, №5. – P. 14. 9. Silini A.R., Cargnoni A., Magatti M. et al. The long path of hu- man placenta, and its derivatives, in regenerative medicine // Biotechnology. – 2015. – Vol. 19, №3. – P. 162. 10. Tiedemann G., Sethe S. Regulatory frameworks for cell and tissue based therapies in Europe and the USA // Regen. Med. – 2010 – P. 937–968. 11.Zheng J. Recent advances in research on the human placenta. Croatia. [Electron resource]: http://www.intechopen.com/ books/recent–advances–in–research–on–the–human– placenta (March 07, 2012). 9. Silini A.R., Cargnoni A., Magatti M. et al. The long path of hu- man placenta, and its derivatives, in regenerative medicine. Biotechnology 2015; 9(3): 162. 10.Tiedemann G., Sethe S. Regulatory Frameworks for Cell and Tissue Based Therapies in Europe and the USA. Regen Med; 2010: 937–968. 11.Zheng J. editor. Recent advances in research on the human placenta. Croatia. Available from: URL: http:// www.intechopen.com/books/recent–advances–in–research– on–the–human–placenta (March 07, 2012). проблемы криобиологии и криомедицины problems of cryobiology and cryomedicine том/volume 27, №/issue 2, 2017 155