Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте

Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2005
Автори: Водопьянова, Л.А., Жегунов, Г.Ф.
Формат: Стаття
Мова:Russian
Опубліковано: Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2005
Назва видання:Проблемы криобиологии и криомедицины
Теми:
Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138501
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте / Л.А. Водопьянова, Г.Ф. Жегунов // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 581–586. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-138501
record_format dspace
spelling irk-123456789-1385012018-06-20T03:04:23Z Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте Водопьянова, Л.А. Жегунов, Г.Ф. Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине 2005 Article Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте / Л.А. Водопьянова, Г.Ф. Жегунов // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 581–586. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138501 636.7:611.018.46:577.3 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
topic Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине
Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине
spellingShingle Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине
Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине
Водопьянова, Л.А.
Жегунов, Г.Ф.
Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
Проблемы криобиологии и криомедицины
format Article
author Водопьянова, Л.А.
Жегунов, Г.Ф.
author_facet Водопьянова, Л.А.
Жегунов, Г.Ф.
author_sort Водопьянова, Л.А.
title Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
title_short Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
title_full Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
title_fullStr Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
title_full_unstemmed Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
title_sort цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте
publisher Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
publishDate 2005
topic_facet Биологические особенности криоконсервированных клеток крови и их применение в медицине
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/138501
citation_txt Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте / Л.А. Водопьянова, Г.Ф. Жегунов // Проблемы криобиологии. — 2005. — Т. 15, № 3. — С. 581–586. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.
series Проблемы криобиологии и криомедицины
work_keys_str_mv AT vodopʹânovala citohimičeskoevyâvleniefosfolipidovvgematopoétičeskihkletkahkostnogomozgasobakposlezamoraživaniâvžidkomazote
AT žegunovgf citohimičeskoevyâvleniefosfolipidovvgematopoétičeskihkletkahkostnogomozgasobakposlezamoraživaniâvžidkomazote
first_indexed 2025-07-10T05:55:22Z
last_indexed 2025-07-10T05:55:22Z
_version_ 1837238248882044928
fulltext 581ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №3 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №3 УДК 636.7:611.018.46:577.3 Цитохимическое выявление фосфолипидов в гематопоэтических клетках костного мозга собак после замораживания в жидком азоте Л.А. ВОДОПЬЯНОВА, Г.Ф. ЖЕГУНОВ Харьковская государственная зооветеринарная академия Адрес для корреспонденции: Водопьянова Л.А. Харьковская государственая зооветеринарная академия, пгт. Малая Даниловка, Харьковская обл., Украина 62341 Среди различных методов исследования клеток костного мозга особое место занимают цитохи- мические, которые сочетают чувствительность биохимических методов с наглядностью цито- логических. Они позволяют выявить клеточную разнородность и изменения цитохимического спектра, так липиды в элементах лимфопоэза в норме не выявляются ни на одной стадии клеточного созревания [1, 4], поэтому некоторые ученые использовали в своих экспериментах окраску суданом черным для идентификации клеток лимфопоэза от недифференцированных бластных клеток [8]. Цитохимическое изучение содержания фосфо- липидов в элементах гемопоэза позволит получить ряд данных, важных для понимания мета- болических особенностей кроветворных клеток, подверженных действию криопротекторов и низких температур (–196°С). Целью исследования являлось цитохимическое выявление и оценка содержания фосфолипидов в клетках костного мозга собак после замора- живания-отогрева. В частности, предлагалось цитохимически оценить содержание фосфолипидов после действия криопротекторов, а также исследо- вать показатели фосфолипидов после замора- живания без применения криопротекторов, и после замораживания под защитой различных концен- траций ДМСО, ПЭО-400, глицерина. Материалы и методы Объектом исследования служил костный мозг половозрелых собак (3-4 летние самцы, массой 5-10 кг). Для получения клеток костного мозга за основу бралась методика [10, 11]. Конечная концентрация ДМСО при добавлении к суспензии костного мозга была 10, 7, 5% , ПЭО-400 – 10, 15, 20% , глицерина – 10, 20, 30%. Инкубация с растворами ДМСО проводилась 10 минут, ПЭО-400 и глицерином 30 минут в условиях 4°С. Замораживание клеток костного мозга проводи- ли в микротюбиках («Еppendorf», Spektar) по методикам [9, 12]. Фосфолипиды в клетках костного мозга собак окрашивали по методике [4, 6]. После действия криопротектора время окраски мазка сокращали [5]. Показатели интенсивности реакции выражали с помощью СГК (среднего гистохимического коэффициента) вычисляемого по формуле: СКГ= 100 3210 cba +++ , где цифры 3, 2, 1 и 0 – степени интенсивности окраски, а буквы – число клеток с той или иной ин- тенсивностью реакции. Цифра 100 в знаменателе – число подсчитанных клеток. СГК дает значитель- но больше информации по сравнению с подсчетом процентного содержания положительно реагирую- щих клеток [5]. Пробы изучали в световом микроскопе (10×100, ZEISS, Germany) с камерой (Microocular for PC connection). Эксперименты проведены в соответствии с «Общими принципами экспериментов на живот- ных», одобренными I Национальным конгрессом по биоэтике (Киев, 2001). Результаты и обсуждение Инкубация клеток костного мозга собак с растворами криопротекторов снижает содержание фосфолипидов в клетках, особенно в клетках эритроцитарного ряда, изначально характе- ризующихся невысоким содержанием фосфо- липидов (табл. 1). Причем, чем выше концентрация криопротекторов, тем ниже СГК. В большей степени это выражено в клетках костного мозга после инкубации с растворами ДМСО. А в клетках, инкубированных с растворами глицерина, СГК наиболее близок к показателям в нативных клетках (табл. 2-4). Показано, что процесс замораживания-отогрева без криопротектора оказывается очень небла- гоприятным для клеток костного мозга собак. После указанного воздействия, содержание фосфолипидов в клетках значительно сокра- щается. В меньшей степени этот процесс выражен в недифференцированных бластах (табл. 1). В клетках эритроцитарного ряда содержится небольшое количество фосфолипидов. Их роль берет на себя холестерол [1, 7]. В данных клетках после замораживания в жидком азоте, даже под защитой криопротекторов, не сохранились фосфо- липиды в количестве, достаточном для опре- деления цитохимическими методами. 582ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №3 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №3 Таблица 1. Показатели СГК фосфолипидов в мазках из суспензии костного мозга собак (самцов 3-4 лет) до и после замораживания в жидком азоте без применения криопротекторов ыммарголеимьлетазакоП витаН ароткеторпоиркзебеинавижаромаЗ )ьлортнок( иктелкеынрялукитеР 350,0±347,0 110,0±523,0 ытсалбеыннаворицнереффидеН 570,0±689,1 680,0±436,1 ытсалболеиМ 920,0±348,1 880,0±689,0 ытицолеиморП 760,0±688,1 620,0±189,0 ытицолеиМ 120,0±859,1 360,0±109,0 ытицолеиматеМ 690,0±833,2 450,0±426,0 еынредяокчолаП 180,0±498,2 - еынредяотнемгеС 990,0±898,2 - дярйынратицоноМ 810,0±552,1 - дярйынратицофмиЛ 0 - игафоркаМ 170,0±212,1 - дярйынратицоиракагеМ 270,0±396,1 - ытицомронорП 810,0±185,0 - еыньлифозабытицомроН 910,0±085,0 - еыньлифотаморхилопытицомроН 150,0±855,0 - еыньлифискоытицомроН 710,0±253,0 - ытицортирэеыньлифотаморхилоП 100,0±570,0 - Примечание: “–” – отсутствие клеток. Глицерин во всех использованных концен- трациях был малоэффективен (табл. 4). Лучше показатели СГК были в клетках, криокон- сервированных с ПЭО-400 (табл. 3). ДМСО оказался наиболее эффективным из примененных криопротекторов. Так, 7%-й раствор ДМСО оказал лучшие защитные свойства. Под его защитой в ретикулярных клетках, недифференцированных бластах, миелобластах, промиелоцитах, миело- цитах, палочкоядерных клетках и клетках моноци- тарного ряда значение СГК было наиболее высоким. Схожие данные у ДМСО 10%. А сегментоядерные клетки и макрофаги только после замораживания с 7, 10%-м ДМСО сохраняли цитохимически определимое количество фосфо- липидов (табл. 2). Скорее всего причиной снижения количества фосфолипидов является перекисное окисление липидов (ПОЛ). Известно, что при разных воздействиях на клетку (в том числе и действии 583ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №3 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №3 ыммарголеимьлетазакоП %5ОСМД %7ОСМД %01ОСМД %5ОСМД %7ОСМД %01ОСМД яинавижаромаззеБ яинавижаромазелсоП иктелкеынрялукитеР 10,0±807,0 320,0±407,0 430,0±986,0 660,0±495,0 20,0±486,0 910,0±286,0 ытсалбеыннаворицнереффидеН 930,0±8,1 320,0±008,1 960,0±687,1 130,0±107,1 380,0±137,1 140,0±327,1 ытсалболеиМ 180,0±25,1 800,0±15,1 840,0±805,1 260,0±182,1 240,0±483,1 570,0±303,1 ытицолеиморП 330,0±6,1 880,0±895,1 670,0±585,1 900,0±1 750,0±503,1 680,0±382,1 ытицолеиМ 960,0±584,1 820,0±314,1 690,0±104,1 160,0±581,1 570,0±481,1 980,0±561,1 ытицолеиматеМ 680,0±179,1 630,0±469,1 460,0±139,1 750,0±801,1 280,0±627,1 280,0±627,1 еынредяокчолаП 850,0±689,1 380,0±597,1 670,0±317,1 200,0±259,0 150,0±530,1 660,0±230,1 еынредяотнемгеС 50,0±959,1 140,0±239,1 550,0±618,1 - 670,0±800,1 550,0±100,1 дярйынратицоноМ 240,0±139,0 390,0±109,0 960,0±418,0 100,0±136,0 420,0±688,0 750,0±497,0 дярйынратицофмиЛ 0 0 0 0 0 0 игафоркаМ 560,0±819,0 360,0±408,0 660,0±857,0 - 220,0±687,0 580,0±647,0 дярйынратицоиракагеМ 670,0±619,0 940,0±248,0 530,0±108,0 - - - ытицомронорП 400,0±541,0 500,0±201,0 310,0±350,0 0 0 0 еыньлифозабытицомроН 400,0±211,0 0 0 0 0 0 ытицомроН еыньлифотаморхилоп 200,0±850,0 0 0 0 0 0 еыньлифискоытицомроН 0 0 0 0 0 0 еыньлифотаморхилоП ытицортирэ 0 0 0 0 0 0 Таблица 2. Показатели СГК фосфолипидов в мазках из суспензии костного мозга собак (самцов 3-4 лет) после действия криопротектора ДМСО без замораживания и после замораживания в жидком азоте с применением в качестве криопротектора растворов ДМСО растворов криопротекторов, замораживания) усиливается перекисное окисление фосфолипидов [3]. Таким образом, содержание фосфолипидов снижается уже после инкубации с криопротектором и чем токсичнее криопротектор и выше его концентрация, тем интенсивнее идет окисление фосфолипидов. В биохимических реакциях перекиси липидов выступают как активные окислители. Они повреждают клеточные мемб- раны и органеллы. Процессы ПОЛ особенно активно протекают в структурах, содержащих катализаторы ПОЛ – Fe-содержащие белки (цитохромы) [3]. Как результат, повреждающее действие перекисей на митохондрии выражено в 584ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №3 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №3 ыммарголеимьлетазакоП 004-ОЭП %01 004-ОЭП %51 004-ОЭП %02 004-ОЭП %01 004-ОЭП %51 004-ОЭП %02 яинавижаромаззеБ яинавижаромазелсоП иктелкеынрялукитеР 380,0±127,0 720,0±27,0 310,0±917,0 410,0±86,0 300,0±806,0 130,0±525,0 ытсалбеыннаворицнереффидеН 180,0±618,1 390,0±318,1 380,0±508,1 840,0±27,1 120,0±817,1 880,0±556,1 ытсалболеиМ 450,0±536,1 660,0±536,1 610,0±425,1 180,0±3,1 490,0±492,1 910,0±100,1 ытицолеиморП 140,0±816,1 610,0±716,1 560,0±106,1 590,0±672,1 320,0±102,1 930,0±489,0 ытицолеиМ 920,0±216,1 920,0±495,1 90,0±894,1 450,0±531,1 880,0±672,1 650,0±329,0 ытицолеиматеМ 880,0±140,2 480,0±40,2 430,0±579,1 270,0±527,1 640,0±131,1 900,0±600,1 еынредяокчолаП 550,0±813,2 780,0±313,2 270,0±889,1 201,0±120,1 980,0±989,0 400,0±109,0 еынредяотнемгеС 670,0±180,2 290,0±589,1 630,0±69,1 - - - дярйынратицоноМ 580,0±520,1 110,0±1 120,0±139,0 760,0±887,0 960,0±587,0 0 дярйынратицофмиЛ 0 0 0 0 0 0 игафоркаМ 220,0±510,1 600,0±1 820,0±529,0 - - - дярйынратицоиракагеМ 20,0±142,1 910,0±811,1 610,0±619,0 - - - ытицомронорП 960,0±304,0 170,0±833,0 330,0±813,0 0 0 0 еыньлифозабытицомроН 710,0±804,0 980,0±283,0 10,0±803,0 0 0 0 ытицомроН еыньлифотаморхилоп 430,0±273,0 120,0±463,0 940,0±503,0 0 0 0 еыньлифискоытицомроН 0 0 0 0 - - еыньлифотаморхилоП ытицортирэ 0 0 0 0 - - Таблица 3. Показатели СГК фосфолипидов в мазках из суспензии костного мозга собак (самцов 3-4 лет) после действия криопротектора ПЭО-400 без замораживания и после замораживания в жидком азоте с применением в качестве криопротектора растворов ПЭО-400 большей степени, чем на лизосомы, тем самым, нарушая энергетический баланс в клетке [7]. Выводы Таким образом, криопротекторы и процесс замораживания-отогрева оказывает отрица- тельный эффект на фосфолипиды мембран, что может быть причиной нарушения барьерно- транспортных свойств мембран клеток. Замораживание-отогрев приводит к снижению количества фосфолипидов в клетках костного мозга собак. Инкубация клеток костного мозга собак с растворами криопротекторов приводит к снижению содержания фосфолипидов в клетках. В недифферинцированных клетках костного мозга, замороженных без защиты криопро- текторов, ПОЛ фосфолипидов выражены меньше 585ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №3 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №3 Таблица 4. Показатели СГК фосфолипидов в мазках из суспензии костного мозга собак (самцов 3-4 лет) после действия криопротектора глицерина без замораживания и после замораживания в жидком азоте с применением в качестве криопротектора растворов глицерина ыммарголеимьлетазакоП нирецилГ %01 нирецилГ %02 нирецилГ %03 нирецилГ %01 нирецилГ %02 нирецилГ %03 яинавижаромаззеБ яинавижаромазелсоП иктелкеынрялукитеР 460,0±47,0 530,0±837,0 400,0±217,0 130,0±295,0 780,0±195,0 660,0±495,0 ытсалбеыннаворицнереффидеН 350,0±389,1 13,0±289,1 280,0±597,1 470,0±996,1 190,0±7,1 130,0±107,1 ытсалболеиМ 050,0±48,1 550,0±48,1 740,0±805,1 180,0±502,1 830,0±532,1 260,0±182,1 ытицолеиморП 640,0±88,1 440,0±468,1 420,0±685,1 980,0±299,0 230,0±499,0 900,0±1 ытицолеиМ 880,0±259,1 780,0±698,1 970,0±304,1 620,0±579,0 910,0±1 160,0±581,1 ытицолеиматеМ 550,0±233,2 440,0±471,2 590,0±259,1 930,0±361,1 980,0±711,1 750,0±801,1 еынредяокчолаП 130,0±988,2 830,0±185,2 980,0±867,1 850,0±529,0 160,0±339,0 200,0±259,0 еынредяотнемгеС 250,0±787,2 760,0±783,2 170,0±209,1 - - - дярйынратицоноМ 940,0±152,1 180,0±832,1 150,0±378,0 520,0±106,0 500,0±226,0 100,0±136,0 дярйынратицофмиЛ 0 0 0 0 0 0 игафоркаМ 980,0±212,1 190,0±312,1 180,0±108,0 - - - дярйынратицоиракагеМ 160,0±286,1 710,0±645,1 170,0±528,0 - - - ытицомронорП 540,0±185,0 300,0±814,0 800,0±1,0 0 0 0 еыньлифозабытицомроН 560,0±344,0 830,0±901,0 200,0±201,0 0 0 0 ытицомроН еыньлифотаморхилоп 820,0±134,0 800,0±180,0 0 0 0 0 еыньлифискоытицомроН 0 0 0 0 0 - еыньлифотаморхилоП ытицортирэ 0 0 0 0 0 0 Литература Абрамов Г. Гематологический атлас.– М.: Медицина, 1985.– 344с. Белоус А.М., Грищенко В.И. Криобиология.– Киев. Наукова думка, 1994.– 430с. Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен). Учебное пособие/ Под ред. М.И. Прохоровой.– Л., 1982.– 272с. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов / В.Г. Пинчук.– Киев: Наукова думка, 1974.– 248с. 1. 2. 3. 4. чем в других гематопоэтических клетках. Из криопротекторов наиболее эффективным оказался 7, 10%-й ДМСО, после криоконсервиро- вания с этими растворами показатели содержания фосфолипидов были наиболее высокие. 586ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 15, 2005, №3 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 15, 2005, №3 Цитохимия костного мозга при криоконсервировании: Атлас/ Обозная Э.И., Панков Е.Я.– Киев: Наукова думка, 1989.– 256 с. Энергетика биологических мембран/В. П. Скулачев.– М.: Наука, 1989.– 564 с. Янович В.Г., Лагодюк П.З. Обмен липидов у животных в онтогенезе.– М.: Агропромиздат, 1991.– 317с. Guo Z. K., Yang J. Q., Liu X. D. et al. Biological features of mesenchimal stem cells from human bone marrow // Clin. Med. J.– 2001.– Vol. 114, N9.– P. 950-953. Kawano Y., Lee C.L., Watanabe T. et al. Cryopreservation of mobilized blood stem cells concentration without the use of a programmed freezer // Ann. Hematol.– 2004.– Vol.83, N1.– P. 50-54. Kushida T., Inaba M., Ikebukuro K. et al. A new method for bone marrow harvesting // Stem Cells.– 2000.– Vol. 18, N6.– P. 453-456. Kushida T., Inaba M., Ikebukuro K. et al. Comparison of bone marrow cells harvested from various bones of cynomolgus monkeys at various ages by perfusion or aspiration methods: a preclinical study for human BMT // Stem Cells.– 2002.– Vol. 20.– P. 155-162. Stiff P.J., Murgo A.J., Zaroulis C.G. et al. Ulfractionated human marrow cell cryopreservation usin dimethylsuifoxide and hydroxyethyl starch // Cryobiology.– 1983.– Vol.20, N1.– P. 17-24. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.

Схожі ресурси