До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК

Запропоновано механізм утворення точкових мутацій в ДНК, який враховує флуктуаційну появу в подвійній спіралі привідкритих молекулою води комплементарних пар. У рамках методу функціонала густини проаналізовано можливі переходи протонів у привідкритій парі А • Т і розраховано структури та енергії...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2018
Hauptverfasser:	Крячко, Є.С., Волков, С.Н.
Format:	Artikel
Sprache:	Ukrainian
Veröffentlicht:	Видавничий дім "Академперіодика" НАН України 2018
Schriftenreihe:	Доповіді НАН України
Schlagworte:	Біофізика
Online Zugang:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/143380
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК / Є.С. Крячко, С.Н. Волков // Доповіді Національної академії наук України. — 2018. — № 7. — С. 103-112. — Бібліогр.: 15 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-143380
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1433802018-11-01T01:23:04Z До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК Крячко, Є.С. Волков, С.Н. Біофізика Запропоновано механізм утворення точкових мутацій в ДНК, який враховує флуктуаційну появу в подвійній спіралі привідкритих молекулою води комплементарних пар. У рамках методу функціонала густини проаналізовано можливі переходи протонів у привідкритій парі А • Т і розраховано структури та енергії проміжних станів пари. Показано, що утворення привідкритої пари в ДНК каталізує стабільність нерегулярних форм нуклеїнових основ, які можуть слугувати джерелом точкової мутації. Оцінена ймовірність такої мутації в ДНК (10⁻¹⁰—10⁻¹¹) пояснює відомі експериментальні результати. Предложен механизм образования точечных мутаций в ДНК, учитывающий флуктуационное появление в двойной спирали приоткрытых молекулой воды комплементарных пар. В рамках метода функционала плотности проанализированы возможные переходы протонов в приоткрытой паре А · Т и рассчитаны структуры и энергии промежуточных состояний пары. Показано, что образование приоткрытой пары в ДНК катализирует стабильность нерегулярных форм нуклеиновых оснований, которые могут служить источником точечной мутации. Оценка вероятности такой мутации в ДНК (10⁻¹⁰—10⁻¹¹) объясняет известные экспериментальные результаты. A mechanism for the point mutations formation in DNA is proposed, which takes into account the fluctuating appearance of the complementary pairs preopened by water molecules in the double helix. In the framework of the density functional method, possible transitions of protons in the preopened A · T pair are analyzed, and their structures and energies are calculated. It has been shown that the formation of preopened base pairs in the DNA catalyzes the stability of the non-regular forms of nucleic bases, which can serve as the source of a point mutation. The estimated probability of such mutation occurrence in DNA (10⁻¹⁰—10⁻¹¹) explains the known experimental data. 2018 Article До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК / Є.С. Крячко, С.Н. Волков // Доповіді Національної академії наук України. — 2018. — № 7. — С. 103-112. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 DOI: doi.org/10.15407/dopovidi2018.07.103 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/143380 539.199+577.3 uk Доповіді НАН України Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Ukrainian
topic	Біофізика Біофізика
spellingShingle	Біофізика Біофізика Крячко, Є.С. Волков, С.Н. До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК Доповіді НАН України
description	Запропоновано механізм утворення точкових мутацій в ДНК, який враховує флуктуаційну появу в подвійній спіралі привідкритих молекулою води комплементарних пар. У рамках методу функціонала густини проаналізовано можливі переходи протонів у привідкритій парі А • Т і розраховано структури та енергії проміжних станів пари. Показано, що утворення привідкритої пари в ДНК каталізує стабільність нерегулярних форм нуклеїнових основ, які можуть слугувати джерелом точкової мутації. Оцінена ймовірність такої мутації в ДНК (10⁻¹⁰—10⁻¹¹) пояснює відомі експериментальні результати.
format	Article
author	Крячко, Є.С. Волков, С.Н.
author_facet	Крячко, Є.С. Волков, С.Н.
author_sort	Крячко, Є.С.
title	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК
title_short	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК
title_full	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК
title_fullStr	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК
title_full_unstemmed	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК
title_sort	до розуміння механізму утворення точкових мутацій в днк
publisher	Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
publishDate	2018
topic_facet	Біофізика
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/143380
citation_txt	До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК / Є.С. Крячко, С.Н. Волков // Доповіді Національної академії наук України. — 2018. — № 7. — С. 103-112. — Бібліогр.: 15 назв. — укр.
series	Доповіді НАН України
work_keys_str_mv	AT krâčkoês dorozumínnâmehanízmuutvorennâtočkovihmutacíjvdnk AT volkovsn dorozumínnâmehanízmuutvorennâtočkovihmutacíjvdnk
first_indexed	2025-07-10T17:03:23Z
last_indexed	2025-07-10T17:03:23Z
_version_	1837280271114698752
fulltext	103ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2018. № 7 ОПОВІДІ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ БІОФІЗИКА doi: https://doi.org/10.15407/dopovidi2018.07.103 УДК 539.199+577.3 Є.С. Крячко, С.Н. Волков Інститут теоретичної фізики ім. М.М. Боголюбова НАН України, Київ E-mail: eugene.kryachko@ulg.ac.be, snvolkov@bitp.kiev.ua До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК Представлено академіком НАН України А.Г. Загороднім Запропоновано механізм утворення точкових мутацій в ДНК, який враховує флуктуаційну появу в подвійній спіралі привідкритих молекулою води комплементарних пар. У рамках методу функціонала густини проаналізовано можливі переходи протонів у привідкритій парі А · Т і розраховано структури та енергії проміжних станів пари. Показано, що утворення привідкритої пари в ДНК каталізує стабільність нере- гулярних форм нуклеїнових основ, які можуть слугувати джерелом точкової мутації. Оцінена ймовірність такої мутації в ДНК (10−10—10−11) пояснює відомі експериментальні результати. Ключові слова: точкові мутації, ДНК, нуклеїнові основи, таутомери, квантова хімія. Спадкові властивості біологічних систем визначаються безпосередньо збереженням гене- тичної інформації в молекулі ДНК, точністю її передачі до молекул РНК і далі до білків. Пошкодження біологічних макромолекул, що охоплюють довгі ділянки ДНК або РНК, можуть спричинити значні зміни в білках — мутації, однак без зовнішнього впливу вони відбуваються з дуже малою ймовірністю і не є регулярними. Більший інтерес викликають точкові зміни в генетичному апараті клітини, які зазвичай пов’язані з помилками на рівні окремих нуклеїнових основ, — зміна (або заміна) форми основи в комплементарній парі. Це так звані точкові мутації, які можуть обумовлювати появу ряду хронічних захворювань і мати систематичний характер. Незважаючи на великий науковий і практичний інтерес до досліджень точкових мута- цій, механізм їх виникнення до теперішнього часу вивчений недостатньо. Це обумовлено складністю макромолекулярних комплексів, умовами, в яких відбувається передача інфор- мації, та труднощами прямого спостереження за утворенням нерегулярних форм нуклеїно- вих основ in vivo. Відповідно до гіпотези Уотсона і Крика [1], точкові мутації в подвійній спіралі ДНК можуть виникати в результаті таутомерних перетворень нуклеїнових основ в комплемен- тарних (WC) парах і реалізуються за рахунок зміни місць зв’язування атомів водню (їх про- тонів) в основах. До подібного висновку прийшов Льовдін [2], який вважав що таутомерні зміни нуклеїнових основ відбуваються завдяки одночасним двопротонним переходам по © Є.С. Крячко, С.Н. Волков, 2018 104 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2018. № 7 Є.С. Крячко, С.Н. Волков водневих зв’язках між основами в парах. Тобто, в парі А · Т водень H6(A) переходить до О4(Т), а водень Н3(Т) — до N1(А) (рис. 1, а). У результаті утворюється пара з основами в таутомерних формах: [A · T]WC ⇔ A* · T, де А — іміноформа аденіну, а T* — енольна форма тиміну. Гіпотези [1, 2] до цього часу остаточно не підтверджені. Відомо, що таутомерні перетворення нуклеїнових основ у фізіологічному розчині відбуваються з імовірністю ~10−4—10−5, а в організмах реалізуються з імовірністю ~10−9—10−12 на пару основ [3, 4]. Квантово-хімічні розрахунки процесів утворення точкових мутацій зазвичай зводяться до вивчення переходів протонів по водневих зв’язках у парах основ ДНК в умовах вакууму або істотної дегідратації середовища [5—7] без врахування, що окремі молекули води можуть відігравати важливу роль у процесах обміну протонів у нуклеїнових основах [8]. Особливу увагу привертають дослідження протонних переходів у комплементарній парі А · Т ДНК. Як показали достатньо грунтовні квантово-хімічні розрахунки двопротонних переходів у цій парі [5, 6], профіль вільної енергії переходу протонів має тільки один мінімум, який відповідає основному стану нуклеїнових основ у парі (аміноформа для А і кето для Т). Та- ким чином, теоретичні розрахунки вказують на неможливість таутомерного перетворення в парі А · Т. Аналогічні розрахунки для пари G · C [6] свідчать про існування метастабіль- ного стану пари таутомерів і, відповідно, про можливість таутомерного перетворення пари за реалістичних значень енергії бар’єра переходу (~13—14 ккал/моль). Водночас наведені в роботі [7] розрахунки таутомерних перетворень пар показують аномально високі значен- ня бар’єрів таутомерних переходів протонів як у парах А · Т (~20 ккал/моль), так і в па- рах G · C (~35 ккал/моль), що унеможливлює неупереджену інтерпретацію експерименту [3, 4]. Підкреслимо також, що, хоча результати розрахунків у роботах [6, 7] для пар А · Т і для пар G · C значно різняться, в експериментальних дослідженнях не виявлено будь-яких відмінностей у процесах утворення точкових мутацій для макромолекул ДНК з різним вмістом пар А · Т і G · C [3, 4]. Зважаючи на відзначені розбіжності теоретичних і експериментальних досліджень, виникає необхідність більш детального аналізу механізмів утворення точкових мутацій в ДНК. У представленій роботі наведено результати досліджень механізму утворення точкових мутацій для пари А · Т. Новий механізм утворення мутації. Вочевидь в аналізі даних експериментальних і тео- ретичних досліджень точкових мутацій у ДНК необхідно враховувати, що у фізіологічних умовах водневі зв’язки в парах не є стабільними. У разі певних флуктуацій у структурі по- двійної спіралі стають імовірними розриви водневих зв’язків поміж основами в парах [10]. У парі А · Т вважаються можливими розриви водневого зв’язку між аміногрупою аденіну і киснем тиміну (N6—H6···O4). Такі флуктуації в структурі пар А·Т мають досить високу ймовірність, 10−2—10−3 [10—12] і спостерігаються в експериментах з водневого обміну та формальдегідної кінетики. У роботі [9] показано, що флуктуації в структурі пари А · Т можуть сприяти вбудовуванню молекули води на місце водневого зв’язку N6—H6⋅⋅⋅O4 і утворенню привідкритої водою пари (див. рис. 1, б). Пара [А · w · T]0 залишається стабільною в структурі ДНК і істотно не порушує регулярності подвійної спіралі [9]. Можливість утворення пар [А · w · T]0 у ДНК було підтверджено в роботах з молекулярно-динамічного моделювання рухливості основ у парах ДНК у водному розчині [13]. 105ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2018. № 7 До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК Перехід уотсон-криківської пари А · Т у привідкритий стан може значно полегшити протонні переходи в парі, знизити бар’єри переходів для протонів Н6(А) і Н4(Т) та спричи- нити зміни таутомерного стану основ у парі. Тобто привідкритий стан пари [А · w · T]0 може стати джерелом точкової мутації в ДНК. Для обгрунтування можливого механізму утворення мутації нами розраховано енер- гії і структури станів привідкритої молекулою води пари А · Т на шляху переходу прото- нів від іміногрупи тиміну (N3H3) до N1 аденіну, потім від аміногрупи аденіну (N6H6) до молекули води (OwHw) і далі до кисню O4 тиміну. В результаті привідкрита пара [A · w · T]0 перетворюється на пару таутомерів [A* · w · T], де А перебуває в своїй імінній формі, а Т — в енольній формі. Відзначимо, що обрана траєкторія переходів протонів є обґрунтованою результатами досліджень кінетики водневого обміну в нуклеїнових основах [14], згідно з якими вивільнення протона H6(A) відбувається після протонування N1(А). Методи і результати. Усі розрахунки з оптимізації геометрії, без обмежень на можливу планарність, проведено з використанням пакета програм GAUSSIAN [15], методом функціонала густини Лі—Янга—Парра (Lee—Yang—Parr), B3LYP, в базисі 6-311++G(d, p), який є задовільним для даної системи і адекватно описує як нейтральні, так і протоновані структури. Розраховано енергії (E) і структури привідкритої пари вздовж траєкторії пере- ходів протонів у парі. Для отриманих структур розраховано також відповідні нескаліровані енергії нульових коливань (ZPE), а також частоти гармонійних (теж нескалірованих) коли- вань, які дають змогу характеризувати положення таутомерних структур на загальній енер- гетичній поверхні таутомерних переходів. З результатів розрахунків випливає, що вбудова молекули води в область водневого зв’язку пари N6—H6(A)⋅⋅⋅O4(T) спричинює заміну цього зв’язку на ланцюжок двох послі- довних водневих містків N6(A)—H6(A)⋅⋅⋅Ow—Hw та Ow—Hw⋅⋅⋅O4(T). При цьому один з ато- мів водню молекули води не бере участі в жодному зв’язку, залишаючись, по суті, “віль- ним”. Відзначимо, що область привідкриття пари A · T є недостатньою для вбудови моле- кули води в площині пари. Тому вода лежить поза її площиною і виникає два енергетично Рис. 1. Структура канонічної уотсон-криківської пари [А · Т]WC (a), відстань R визначає характерний роз- мір пари, стрілками вказано одинарні переходи протонів по водневих зв'язках. Структура привідкритої водою пари А · Т ([А · w · T]0) в ДНК (б), молекула води вбудовується з боку великого жолоба подвійної спіралі на місце зовнішнього водневого зв’язку [9] 106 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2018. № 7 Є.С. Крячко, С.Н. Волков еквівалентних ізомери, в яких молекула води лежить або вище, або нижче площини пари. Для кожного ізомеру “вільний” атом водню спрямований вгору або вниз відносно площини N6(A)—Ow—O4(T). Бар’єр між ізомерами описується перехідним станом [A · w · T]0 TS, який лежить вище ізомерів на 0,34 ккал ⋅моль−1 без ZPE і 0,01 ккал ⋅моль−1 з ZPE. Таким чином, висота бар’єра є досить малою і можна вважати, що обидва ізомери реалізуються однаковою мірою, а положення вільного водню не впливає на переходи протонів. Як свідчать отримані результати, перехід [A · w · T]0 ⇒ [A · w · T] здійснюється в два етапи (рис. 2) (обидва етапи зображено окремо на рис. 3 і 4). На першому етапі (рис. 3) відбувається одинарне перенесення протона через перехідний стан [A · w · T]01 TS вздовж водневого містка N3(T)—H3(T)⋅⋅⋅N1(A): N3(T)—H3(T)⋅⋅⋅N1(A) ⇒ N3(T)⋅⋅⋅H3(T)—N1(A) . (1) У результаті утворюється хімічний зв’язок [H3(T)—N1(A)], який за допомогою містка (1) пов’язує аденін з тиміном в не-уотсон-криківську пару. При цьому відбувається зміна від- стані між атомами N1(A) і N3(T) в парі і перехід водню H3 до атома N1(A) з утворенням но- вого хімічного і водневого зв’язків. Бар’єр переходу (1) становить 8,6 ккал ⋅ моль−1 (з ZPE), відповідна перехідна частота νTS = 98,9i см−1 свідчить про “гострий” характер ба р’є ра. Перехід протона супроводжує зміна геометрії привідкритої пари (таблиця). Так, відстань R[N3(T)— N1(A)] поступово зменшується і досягає мінімального значення в області бар’єра переходу [A · w · T]01 TS, а водень Н3 на бар’єрі займає проміжне положення з аномально великим значенням довжини водневого зв’язку. Після переходу привідкритої пари в стан [A · w · T]1 відстані R[N3(T)—H3] та R[N3(T)—N1(A)] збільшуються, але незначно (див. таблицю). У цілому, на першому етапі переходу водню Н3 відстань між атомами центрального вод- невого зв’язку N3(T) і N1(A) значно зменшується, також зменшується розмір R самої пари, а кут відносного нахилу основ у парі збільшується (див. таблицю). Як випливає з наведених Рис. 2. Профіль енергії переходу протонів у привідкритій молеку- лою води парі А · Т відповідно до траєкторії [А · w · T]0 ⇒ [А · w · T]1 ⇒ [А · w · T]2 ≡ [A · w · T]. Вказано енергії (ккал ⋅моль−1), розраховані з ZPE 107ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2018. № 7 До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК результатів, пара стискається вздовж центрального водневого зв’язку і розвертається в бік великого жолоба подвійної спіралі. На другому етапі (рис. 4) має місце перехід [A · w · T]1 ⇒ [A · w · T]2 ≡ [A · w · T], здійснюваний з перехідним станом [A · w · T]12 TS з невеликим бар’єром ≈ 2,5 ккал ⋅ моль−1 і перехідною частотою νTS ≈ 1102,6i cм−1. Така величина перехідної частоти свідчить про плавність переходу. Це пов’язано з тим, що перехід є фактично одночасним двопротонним переносом через перехідний стан [A · w · T]12 TS вздовж водневих зв’язків, які зв’язують вбудовану молекулу води з привідкритою парою (див. рис. 4): N6(A)—H6(A)⋅⋅⋅O(w) ⇒ N6(A)⋅⋅⋅H6(A)—O(w), (2) O4(T)⋅⋅⋅H—O(w) ⇒ O4(T)—H⋅⋅⋅O(w). (3) Рис. 4. Профіль енергії перехо- дів протонів в парі А · Т, привід- критої молекулою води, на дру- гому етапі. Висота бар’єра дана набором двох величин (ккал × × моль−1): верхнє підраховано без ZPE, нижнє — з ZPE Рис. 3. Профіль енергії перехо- дів протонів у парі А · Т, привід- критої молекулою води, на пер- шому етапі. Висота бар’єра дана набором двох величин (ккал × × моль−1): верхнє підраховано без ZPE, нижнє — з ZPE 108 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2018. № 7 Є.С. Крячко, С.Н. Волков У результаті на другому етапі утворюється привідкрита водою таутомерна пара A · w · T, стабільність якої визначається висотою правої стінки бар’єра (або глибиною ями), рівної ≈ 3,6 ккал ⋅ моль−1, що відповідає ≈ 1260 см−1, і таким чином вміщує основний стан низько розташованої коливальної моди Н-зв’язку. В цій парі її розмір (R) і відстань між атомами центрального водневого зв’язку набувають близьких до звичайних значень, але кут розкриття пари в бік великого жолоба стає значно більшим, α ~ 14° (див. таблицю). Така геометрія привідкриття пари сприяє збереженню стекінг-контактів з сусідніми парами в подвійній спіралі і забезпечує стабільність ДНК. Оцінка ймовірності появи таутомерного стану пари А · Т. Використовуючи результати розрахунків енергії привідкритої пари з різними положеннями протонів і молекули води, можна визначити ймовірність появи таутомерного стану привідкритої пари А · w · Т, де А і Т* — нерегулярні таутомери нуклеїнових основ. Ця ймовірність може бути оцінена за формулою ,po po ptP w= ρ (4) де перший множник — ймовірність появи відкритої молекулою води пари основ в ДНК, а другий — імовірність переходу протонів у привідкритій парі і утворення таутомерного ста- ну пари. Як показує аналіз експериментальних даних, імовірність утворення привідкритих пар (див. рис. 1, б) у ДНК оцінюється значенням 2 3 10 10 po − −ρ = − [11]. Другий множник у вира- зі (4) — ймовірність переходу протонів по водневих зв’язках у привідкритих парах, яка може бути визначена за результатами квантово-хімічних розрахунків, наведеними в цій роботі. З отриманих результатів видно, що таутомерні перетворення основ у парі А · Т відбу- ваються в два етапи. Перший етап (див. рис. 3) — це перехід протона H3 тиміну до адені- ну (стан [А · w · Т]1) через перехідний стан пари [А · w · Т]01 TS, який відіграє роль бар’єра переходу. Ймовірність утворення стану [А · w · Т]1 дорівнює 1 1exp( / )bw E kT= − , (5) де 1bE — енергія бар’єра переходу, різниця енергій станів [А · w · Т]0 і [А · w · Т]01 TS. Енергетичні та геометричні параметри привідкритої молекулою води пари А · Т на етапах переходу протонів по водневих зв’язках і утворення таутомерів в імінній (А) та енольній (Т) формах (у першому рядку для порівняння наведено розраховані параметри комплементарної пари A · T. R — відстань між H9(A) та H1(T), α1 = N9(A)Н9H1(T), α2 = N1(T)H1H9(A) визначено на рис. 1, а) Стан A · T пари Відносна енергія (ΔE), ккал⋅моль−1 Відносна енергія з ZPE, ккал⋅моль−1 Відстань між атомами [N3(T)—N1(A)] ([N3(T)—H3]), Å R, Å Α = (α2−α1), o [A · T]WC — — 2,88 (1,04) 10,18 0,6 [А · w · Т]0 0 0 3,08 (1,04) 9,51 2,4 [А · w · Т]01 TS 10,71 8,63 2,65 (1,52) 9,13 7,4 [А · w · Т]1 10,15 7,75 2,75 (1,69) 9,16 5.9 [А · w · Т]12 TS 15,81 10,24 3,03 (2,01) 9,14 12,4 [А · w · Т]2= [A* · w · T] 12,26 9,85 3,30 (2,29) 9,33 14,4 109ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2018. № 7 До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК Другий етап (див. рис. 4) — перехід пари основ зі стану [А · w · Т]1 у стан [А · w · Т]2, відбувається через перехідний стан [А · w · Т]12 TS, який у даному випадку відіграє роль бар’єра переходу. Відповідно, ймовірність переходу має такий вигляд: 2 2exp( / )bw E kT= − , (6) де 2bE — різниця енергій станів [А · w · Т]1 та [А · w · Т]12 TS. Повна ймовірність переходу привідкритої пари в стан з нерегулярними таутомерами основ відповідає добутку ймовірностей (5) і (6): exp( / )pt bW E kT= − , (7) де 1 2b b bE E E= + — енергія ефективного бар’єра переходу пари з основного стану [А · w · Т]0 у метастабільний [А · w · Т]2. За результатами розрахунку енергій переходів з урахуванням нульових коливань маємо Eb = (8,63 + 2,49) ккал ⋅ моль−1 = 11,12 ккал ⋅ моль−1 (див. табли- цю). Розраховане за формулою (7) значення ptW становить 1,6 · 10−8 і визначає ймовірність переходу привідкритої пари до метастабільного стану з нерегулярними таутомерами. Вико- ристовуючи значення ptW і наведене вище значення ймовірності утворення привідкритого стану пари po ρ , оцінюємо ймовірність появи в ДНК пари [А · w · Т], де нуклеїнові основи знаходяться в нерегулярних таутомерних формах: 10 11 1,6 (10 10 )poP − −≈ ⋅ − . Зрозуміло, що пара [А · w · Т*] слугує джерелом появи точкової мутації в ДНК. Суттєво, що молекула води, яка привідкриває пару А·Т, каталізує стабільність нерегулярних форм нуклеїнових основ у ДНК. Отримана оцінка ймовірності появи таких пар в ДНК відповідає експериментальним значенням імовірності утворення точкових мутацій у розрахунку на пару основ ДНК [3, 4] і підтверджує справедливість запропонованого механізму. Таким чином, показано можливість переходу нуклеїнових основ у нерегулярні тау- томерні форми в привідкритих молекулою води комплементарних парах А · Т. Виконані оцінки ймовірності появи нерегулярних форм нуклеїнових основ у парі показують реаліс- тичність запропонованого механізму утворення спонтанних точкових мутацій у парах А · Т ДНК і добре узгоджуються з відомими експериментальними значеннями. Відповідні оцінки ймовірності мутації для пари G · C, які можуть бути виконані на основі результатів роботи [6], дають близьке значення ймовірності утворення точкової мутації (~10−10). Отже, можна вважати, що ймовірність появи точкової мутації в комплементарних парах ДНК мало зале- жить від нуклеотидного складу, але відбувається за різними сценаріями: або як двопротон- ний перехід в парі G · C, або як перехід до привідкритого стану в парі А · Т з подальшими таутомерними перетвореннями основ. Робота частково підтримана програмою “Grid-інфраструктура та Grid-технології для наукових та прикладних застосувань” (проект 0117U003429). ЦИТОВАНА ЛІТЕРАТУРА 1. Watson J.D., Crick F.H.C. The structure of DNA. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1953. 18. Р. 123–131. doi: https://doi.org/ 10.1101/SQB.1953.018.01.020 2. Löwdin P.-O. Proton tunneling in DNA and its biological implications. Rev. Mod. Phys. 1963. 35. P. 724—732. doi: https://doi.org/10.1103/RevModPhys.35.724 3. Данилов, В.И., Квенцель, Г.Ф. Электронные представления в теории точечных мутаций. Киев: Наук. думка, 1971. 84 с. 110 ISSN 1025-6415. Dopov. Nac. akad. nauk Ukr. 2018. № 7 Є.С. Крячко, С.Н. Волков 4. Friedberg E.C., Walker G.C., Siede W., Wood R.D., Schultz R.A., Ellenberger T. DNA repair and mutagenesis. Washington: ASM Press, 2006. 1118 p. 5. Florián J., Hrouda V., Hobza P. Proton transfer in the adenine-thymine base pair. J. Am. Chem. Soc. 1994. 116. P. 1457—1460. doi: https://doi.org/10.1021/ja00083a034 6. Gorb L., Podolyan Y., Dziekonski P., Sokalski J., Leszczynski W.A. Double-proton transfer in adenine-thy- mine and guanine-cytosine base pairs. A Post-Hartree-Fock ab Initio Study. J. Am. Chem. Soc. 2004. 126. P. 10119-10129. doi: https://doi.org/10.1021/ja049155n 7. Brovarets’ O.O., Hovorun D.M. New structural hypostasis of the A · T and G · C Watson—Crick DNA base pairs caused by their mutagenic tautomerisation in a wobble manner: A QM/QTAIM prediction. RSС Adv. (2015). 5. P. 99594—99605. doi: https://doi.org/10.1039/C5RA19971A 8. Полтев В.И., Косевич М.В., Шелковский В.С., Пашинская В.А., Гонзалес E., Teплухин A.В., Maленков Г.Г. Механизм таутомеризации нуклеиновых оснований в условиях дегидратации. Moлекуляр. биология. 1995. 29. С. 220—223. 9. Kryachko E.S., Volkov S.N. Preopening of the DNA base pairs. Int. J. Quantum Chem. 2001. 82. P. 193—204. doi: https://doi.org/10.1002/qua.1040 10. Франк-Kaменецкий M.Д. Флуктационная подвижность ДНК. Moлекуляр. биология. 1983. 17. С. 639— 652. 11. Волков С.Н. Приоткрытое состояние двойной спирали ДНК. Moлекуляр. биология. 1995. 29. С. 1086— 1094. 12. Frank-Kamenetskii M.D., Prakash S. Fluctuations in the DNA double helix: A critical review. Phys. Life. Rev. 2014. 11, № 2. P. 153—170. doi: https://doi.org/10.1016/j.plrev.2014.01.005 13. Giudice E., Várnai P., Lavery R. Base pair opening within B-DNA: free energy pathways for GC and AT pairs from umbrella sampling simulations. Nucl. Acids Res. 2003. 31. P. 1434—1443. doi: https://doi.org/10.1093/ nar/gkg239 14. Mаndаl C., Kallеnbach N.R., Englandеr S.W. Base-pair opening and closing reactions in the double helix: A stopped-flow hydrogen exchange study in poly(rA) • poly(rU). J. Mol. Biol. 1979. 135. P. 391—411. doi: https://doi.org/10.1016/0022-2836(79)90443-1 15. Frisch M.J., Trucks G.W., Schlegel H.B., Scuseria G.E., Robb M.A., Cheeseman J.R., Scalmani G., Barone V., Mennucci B., Petersson G.A., Nakatsuji H., Caricato M., Li X., Hratchian H.P., Izmaylov A.F., Bloino J., Zheng G., Sonnenberg J.L., Hada M., Ehara M., Toyota K., Fukuda R., Hasegawa J., Ishida M., Nakajima T., Honda Y., Kitao O., Nakai H., Vreven T., Montgomery Jr. J.A., Peralta J.E., Ogliaro F., Bearpark M., Heyd J.J., Brothers E., Kudin K.N., Staroverov V.N., Keith T., Kobayashi R., Normand J., Raghavachari K., Rendell A., Burant J. C., Iyengar S.S., Tomasi J., Cossi M., Rega N., Millam J.M., Klene M., Knox J.E., Cross J.B., Bak- ken V., Adamo C., Jaramillo J., Gomperts R., Stratmann R.E., Yazyev O., Austin A.J., Cammi R., Pomelli C., Ochterski J.W., Martin R.L., Morokuma K., Zakrzewski V.G., Voth G.A., Salvador P., Dannenberg J.J., Dap- prich S., Daniels A.D., Farkas O., Foresman J.B., Ortiz J.V., Cioslowski J., Fox D.J. Gaussian 09, Revision C.01. Wallingford CT: Gaussian, Inc., 2010. Надійшло до редакції 04.04.2018 REFERENCES 1. Watson, J. D. & Crick, F. H. C. (1953). The structure of DNA. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 18, pp. 123-131. doi: https://doi.org/ 10.1101/SQB.1953.018.01.020 2. Löwdin, P.-O. (1963). Proton tunneling in DNA and its biological implications. Rev. Mod. Phys., 35, pp. 724- 732. doi: https://doi.org/10.1103/RevModPhys.35.724 3. Danilov, V. I., Kvencel’, G. F. (1971). Electronic representations in the theory of point mutations. Kiev: Nau- kova Dumka (in Russian). 4. Friedberg, E. C., Walker, G. C., Siede, W., Wood, R. D., Schultz, R. A. & Ellenberger, T. (2006). DNA repair and mutagenesis. Washington: ASM Press. 5. Florián, J., Hrouda, V. & Hobza, P. (1994). Proton transfer in the adenine-thymine base pair. J. Am. Chem. Soc., 116, pp. 1457-1460. doi: https://doi.org/10.1021/ja00083a034 6. Gorb, L., Podolyan, Y., Dziekonski, P., Sokalski, J. & Leszczynski, W.A. (2004). Double-proton transfer in ad- enine-thymine and guanine-cytosine base pairs. A Post-Hartree-Fock ab Initio Study. J. Am. Chem. Soc., 126, pp. 10119-10129. doi: https://doi.org/10.1021/ja049155n 111ISSN 1025-6415. Допов. Нац. акад. наук Укр. 2018. № 7 До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК 7. Brovarets’, O. O., Hovorun, D. M. (2015). New structural hypostasis of the A · T and G · C Watson-Crick DNA base pairs caused by their mutagenic tautomerisation in a wobble manner: A QM/QTAIM prediction. RSС Adv., 5, pp. 99594-99605. doi: https://doi.org/10.1039/C5RA19971A 8. Poltev, V. I., Kosevich, M. V., Shchelkovskii, V. S., Pashinskaya, V. A., Gonzalez, E., Teplukhin, A. V., & Malen- kov, G. G. (1995). Mechanism of nucleic base tautomerization upon dehydration. Molekulyar. biologiya, 29, pp. 220-223 (in Russian). 9. Kryachko, E. S. & Volkov, S. N. (2001). Preopening of the DNA base pairs. Int. J. Quantum Chem., 82, pp. 193- 204. doi: https://doi.org/10.1002/qua.1040 10. Frank-Kamenetskii, M. D. (1983). Fluctuation mobility of DNA. Molekulyar. biologiya, 17, pp. 639-652 (in Russian). 11. Volkov, S. N. (1995). Preopened state of DNA double helix. Molekulyar. biologiya, 29, pp. 1086-1094 (in Rus- sian). 12. Frank-Kamenetskii, M. D. & Prakash, S. (2014). Fluctuations in the DNA double helix: A critical review. Phys. Life. Rev., 11, No. 2, pp. 153-170. doi: https://doi.org/10.1016/j.plrev.2014.01.005 13. Giudice, E., Várnai, P. & Lavery, R. (2003). Base pair opening within B-DNA: free energy pathways for GC and AT pairs from umbrella sampling simulations. Nucl. Acids Res., 31, pp. 1434-1443. doi: https://doi. org/10.1093/nar/gkg239 14. Mаndаl, C., Kallеnbach, N. R. & Englandеr S. W. (1979). Base-pair opening and closing reactions in the double helix: A stopped-flow hydrogen exchange study in poly(rA) • poly(rU). J. Mol. Biol., 135, pp. 391- 411. doi: https://doi.org/10.1016/0022-2836(79)90443-1 15. Frisch, M. J., Trucks, G. W., Schlegel, H. B., Scuseria, G. E., Robb, M. A., Cheeseman, J. R., Scalmani, G., Bar- one, V., Mennucci, B., Petersson, G. A., Nakatsuji, H., Caricato, M., Li, X., Hratchian, H. P., Izmaylov, A. F., Bloino, J., Zheng, G., Sonnenberg, J. L., Hada, M., Ehara, M., Toyota, K., Fukuda, R., Hasegawa, J., Ishida, M., Nakajima, T., Honda, Y., Kitao, O., Nakai, H., Vreven, T., Montgomery Jr., J. A., Peralta, J. E., Ogliaro, F., Bearpark, M., Heyd, J. J., Brothers, E., Kudin, K. N., Staroverov, V. N., Keith, T., Kobayashi, R., Normand, J., Raghavachari, K., Rendell, A., Burant, J. C., Iyengar, S. S., Tomasi, J., Cossi, M., Rega, N., Millam, J. M., Klene, M., Knox, J. E., Cross, J. B., Bakken, V., Adamo, C., Jaramillo, J., Gomperts, R., Stratmann, R. E., Yazyev, O., Austin, A. J., Cammi, R., Pomelli, C., Ochterski, J. W., Martin, R. L., Morokuma, K., Zakrzewski, V. G., Voth, G. A., Salvador, P., Dannenberg, J. J., Dapprich, S., Daniels, A. D., Farkas, O., Foresman, J. B., Ortiz, J. V., Cioslowski, J., Fox, D. J. (2010). Gaussian 09, Revision C.01. Wallingford CT: Gaussian, Inc. Received 04.04.2018 Е.С. Крячко, С.Н. Волков Институт теоретической физики им. Н.Н. Боголюбова НАН Украины, Киев E-mail: eugene.kryachko@ulg.ac.be, snvolkov@bitp.kiev.ua К ПОНИМАНИЮ МЕХАНИЗМА ОБРАЗОВАНИЯ ТОЧЕЧНЫХ МУТАЦИЙ В ДНК Предложен механизм образования точечных мутаций в ДНК, учитывающий флуктуационное появление в двойной спирали приоткрытых молекулой воды комплементарных пар. В рамках метода функционала плотности проанализированы возможные переходы протонов в приоткрытой паре А · Т и рассчитаны структуры и энергии промежуточных состояний пары. Показано, что образование приоткрытой пары в ДНК катализирует стабильность нерегулярных форм нуклеиновых оснований, которые могут служить источником точечной мутации. Оценка вероятности такой мутации в ДНК (10−10—10−11) объясняет из- вестные экспериментальные результаты. Ключевые слова: точечные мутации, ДНК, нуклеиновые основания, таутомеры, квантовая химия. Є.С. Крячко, С.Н. Волков E.S. Kryachko, S.N. Volkov Bogolyubov Institute for Theoretical Physics of the NAS of Ukraine, Kiev E-mail: eugene.kryachko@ulg.ac.be, snvolkov@bitp.kiev.ua TO THE UNDERSTANDING OF THE MECHANISM OF FORMATION OF POINT MUTATIONS IN DNA A mechanism for the point mutations formation in DNA is proposed, which takes into account the fluctuating appearance of the complementary pairs preopened by water molecules in the double helix. In the framework of the density functional method, possible transitions of protons in the preopened A · T pair are analyzed, and their structures and energies are calculated. It has been shown that the formation of preopened base pairs in the DNA catalyzes the stability of the non-regular forms of nucleic bases, which can serve as the source of a point mutation. The estimated probability of such mutation occurrence in DNA (10−10—10−11) explains the known experimental data. Keywords: point mutation, DNA, nucleic bases, tautomers, quantum chemistry. << /ASCII85EncodePages false /AllowTransparency false /AutoPositionEPSFiles true /AutoRotatePages /None /Binding /Left /CalGrayProfile (Dot Gain 20%) /CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1) /CalCMYKProfile (Uncoated FOGRA29 \050ISO 12647-2:2004\051) /sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1) /CannotEmbedFontPolicy /Error /CompatibilityLevel 1.4 /CompressObjects /Tags /CompressPages true /ConvertImagesToIndexed true /PassThroughJPEGImages true /CreateJobTicket false /DefaultRenderingIntent /Default /DetectBlends true /DetectCurves 0.0000 /ColorConversionStrategy /CMYK /DoThumbnails false /EmbedAllFonts true /EmbedOpenType false /ParseICCProfilesInComments true /EmbedJobOptions true /DSCReportingLevel 0 /EmitDSCWarnings false /EndPage -1 /ImageMemory 1048576 /LockDistillerParams false /MaxSubsetPct 100 /Optimize false /OPM 1 /ParseDSCComments true /ParseDSCCommentsForDocInfo true /PreserveCopyPage true /PreserveDICMYKValues true /PreserveEPSInfo true /PreserveFlatness true /PreserveHalftoneInfo false /PreserveOPIComments false /PreserveOverprintSettings true /StartPage 1 /SubsetFonts true /TransferFunctionInfo /Apply /UCRandBGInfo /Preserve /UsePrologue false /ColorSettingsFile () /AlwaysEmbed [ true ] /NeverEmbed [ true ] /AntiAliasColorImages false /CropColorImages true /ColorImageMinResolution 300 /ColorImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleColorImages true /ColorImageDownsampleType /Bicubic /ColorImageResolution 1200 /ColorImageDepth -1 /ColorImageMinDownsampleDepth 1 /ColorImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeColorImages false /ColorImageFilter /DCTEncode /AutoFilterColorImages true /ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG /ColorACSImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /ColorImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /JPEG2000ColorACSImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /JPEG2000ColorImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /AntiAliasGrayImages false /CropGrayImages true /GrayImageMinResolution 300 /GrayImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleGrayImages true /GrayImageDownsampleType /Bicubic /GrayImageResolution 1200 /GrayImageDepth -1 /GrayImageMinDownsampleDepth 2 /GrayImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeGrayImages false /GrayImageFilter /DCTEncode /AutoFilterGrayImages true /GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG /GrayACSImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /GrayImageDict << /QFactor 0.15 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1] >> /JPEG2000GrayACSImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /JPEG2000GrayImageDict << /TileWidth 256 /TileHeight 256 /Quality 30 >> /AntiAliasMonoImages false /CropMonoImages true /MonoImageMinResolution 1200 /MonoImageMinResolutionPolicy /OK /DownsampleMonoImages true /MonoImageDownsampleType /Bicubic /MonoImageResolution 1200 /MonoImageDepth -1 /MonoImageDownsampleThreshold 1.50000 /EncodeMonoImages false /MonoImageFilter /CCITTFaxEncode /MonoImageDict << /K -1 >> /AllowPSXObjects false /CheckCompliance [ /None ] /PDFX1aCheck false /PDFX3Check false /PDFXCompliantPDFOnly false /PDFXNoTrimBoxError true /PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXSetBleedBoxToMediaBox true /PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [ 0.00000 0.00000 0.00000 0.00000 ] /PDFXOutputIntentProfile (None) /PDFXOutputConditionIdentifier () /PDFXOutputCondition () /PDFXRegistryName () /PDFXTrapped /False /CreateJDFFile false /Description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> /CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000410064006f006200650020005000440046002065876863900275284e8e9ad88d2891cf76845370524d53705237300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002> /CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef69069752865bc9ad854c18cea76845370524d5370523786557406300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002> /CZE <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> /DAN <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> /DEU <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> /ESP <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> /ETI <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> /FRA <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> /GRE <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a stvaranje Adobe PDF dokumenata najpogodnijih za visokokvalitetni ispis prije tiskanja koristite ove postavke. Stvoreni PDF dokumenti mogu se otvoriti Acrobat i Adobe Reader 5.0 i kasnijim verzijama.) /HUN <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> /ITA <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> /JPN <FEFF9ad854c18cea306a30d730ea30d730ec30b951fa529b7528002000410064006f0062006500200050004400460020658766f8306e4f5c6210306b4f7f75283057307e305930023053306e8a2d5b9a30674f5c62103055308c305f0020005000440046002030d530a130a430eb306f3001004100630072006f0062006100740020304a30883073002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee5964d3067958b304f30533068304c3067304d307e305930023053306e8a2d5b9a306b306f30d530a930f330c8306e57cb30818fbc307f304c5fc59808306730593002> /KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020ace0d488c9c80020c2dcd5d80020c778c1c4c5d00020ac00c7a50020c801d569d55c002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e> /LTH <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> /LVI <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> /NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken die zijn geoptimaliseerd voor prepress-afdrukken van hoge kwaliteit. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.) /NOR <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> /POL <FEFF0055007300740061007700690065006e0069006100200064006f002000740077006f0072007a0065006e0069006100200064006f006b0075006d0065006e007400f300770020005000440046002000700072007a0065007a006e00610063007a006f006e00790063006800200064006f002000770079006400720075006b00f30077002000770020007700790073006f006b00690065006a0020006a0061006b006f015b00630069002e002000200044006f006b0075006d0065006e0074007900200050004400460020006d006f017c006e00610020006f007400770069006500720061010700200077002000700072006f006700720061006d006900650020004100630072006f00620061007400200069002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e0030002000690020006e006f00770073007a0079006d002e> /PTB <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> /RUM <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> /SKY <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> /SLV <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> /SUO <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> /SVE <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> /TUR <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> /UKR <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> /RUS <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> /ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents best suited for high-quality prepress printing. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.) >> /Namespace [ (Adobe) (Common) (1.0) ] /OtherNamespaces [ << /AsReaderSpreads false /CropImagesToFrames true /ErrorControl /WarnAndContinue /FlattenerIgnoreSpreadOverrides false /IncludeGuidesGrids false /IncludeNonPrinting false /IncludeSlug false /Namespace [ (Adobe) (InDesign) (4.0) ] /OmitPlacedBitmaps false /OmitPlacedEPS false /OmitPlacedPDF false /SimulateOverprint /Legacy >> << /AddBleedMarks false /AddColorBars false /AddCropMarks false /AddPageInfo false /AddRegMarks false /ConvertColors /ConvertToCMYK /DestinationProfileName () /DestinationProfileSelector /DocumentCMYK /Downsample16BitImages true /FlattenerPreset << /PresetSelector /MediumResolution >> /FormElements false /GenerateStructure false /IncludeBookmarks false /IncludeHyperlinks false /IncludeInteractive false /IncludeLayers false /IncludeProfiles false /MultimediaHandling /UseObjectSettings /Namespace [ (Adobe) (CreativeSuite) (2.0) ] /PDFXOutputIntentProfileSelector /DocumentCMYK /PreserveEditing true /UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged /UntaggedRGBHandling /UseDocumentProfile /UseDocumentBleed false >> ] >> setdistillerparams << /HWResolution [2400 2400] /PageSize [612.000 792.000] >> setpagedevice

До розуміння механізму утворення точкових мутацій в ДНК

Institution

Ähnliche Einträge