Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр

Спустя 15–3 ч после однократного γ-облучения крыс общий характер ЕсоRI-распределения остается неизменным, но доля некоторых рестрикционных фрагментов варьи­рует. Вклад фрагментов размером 2300 и 1500 пар нуклеотидов увеличивается в 2–3,5 раза, фрагмента 345 п. н.– уменьшается в 5–10 раз. В тимусе из...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:1994
Hauptverfasser: Личина, М.В., Костюк, Г.В., Митрохин, Ю.И., Шугалий, А.В.
Format: Artikel
Sprache:Russian
Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1994
Schriftenreihe:Биополимеры и клетка
Online Zugang:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/152796
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр / М.В. Личина, Г.В. Костюк, Ю.И. Митрохин, А.В. Шугалий // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 1. — С. 31-36. — Бібліогр.: 21 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-152796
record_format dspace
spelling irk-123456789-1527962019-06-13T01:25:57Z Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр Личина, М.В. Костюк, Г.В. Митрохин, Ю.И. Шугалий, А.В. Спустя 15–3 ч после однократного γ-облучения крыс общий характер ЕсоRI-распределения остается неизменным, но доля некоторых рестрикционных фрагментов варьи­рует. Вклад фрагментов размером 2300 и 1500 пар нуклеотидов увеличивается в 2–3,5 раза, фрагмента 345 п. н.– уменьшается в 5–10 раз. В тимусе изменения происходят через 3 ч, в селезенке – через 1,5 ч после облучения с дальнейшей тенденцией к нормализации. Через 1,5—3 годпісля одноразового γ-опромінення щурів загальний характер EcoRI-розподілення залишаеться незмінним, але частка декотрих рестрикційних фраг­ментів варіює. Вклад фрагментів розміром 2300 i 1500 пар нуклеотидів збільшується у 2–3,5 раза, фрагмента 345 п. н.– зменшуеться у 5–10 разів. У тимусі зміни відбуваються через 3 год., у селезінці –через 1,5 год. після опромінення з подальшою тенденщцією до нормалізації. 1,5–3 hours after a single γ-irradiation of a rat the common pattern of EcoRI-restriction is unchanged but the parts some restriction fragments varied. The concentration of a fragments 2300 and 1500 base pairs rises in 2–3,5 times, fragment 345 base pair declines in 5–10 times. In a thymus the variations are occured after 3 hours, in a spleen – 1,5 hours after γ-irradiation with a future tendency to normalization. 1994 Article Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр / М.В. Личина, Г.В. Костюк, Ю.И. Митрохин, А.В. Шугалий // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 1. — С. 31-36. — Бібліогр.: 21 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00038D http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/152796 577.113.4:577.336 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
description Спустя 15–3 ч после однократного γ-облучения крыс общий характер ЕсоRI-распределения остается неизменным, но доля некоторых рестрикционных фрагментов варьи­рует. Вклад фрагментов размером 2300 и 1500 пар нуклеотидов увеличивается в 2–3,5 раза, фрагмента 345 п. н.– уменьшается в 5–10 раз. В тимусе изменения происходят через 3 ч, в селезенке – через 1,5 ч после облучения с дальнейшей тенденцией к нормализации.
format Article
author Личина, М.В.
Костюк, Г.В.
Митрохин, Ю.И.
Шугалий, А.В.
spellingShingle Личина, М.В.
Костюк, Г.В.
Митрохин, Ю.И.
Шугалий, А.В.
Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр
Биополимеры и клетка
author_facet Личина, М.В.
Костюк, Г.В.
Митрохин, Ю.И.
Шугалий, А.В.
author_sort Личина, М.В.
title Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр
title_short Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр
title_full Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр
title_fullStr Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр
title_full_unstemmed Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр
title_sort рестрикционный анализ днк тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 гр
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 1994
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/152796
citation_txt Рестрикционный анализ ДНК тимуса и селезенки крыс, облученных в дозе 5 Гр / М.В. Личина, Г.В. Костюк, Ю.И. Митрохин, А.В. Шугалий // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 1. — С. 31-36. — Бібліогр.: 21 назв. — рос.
series Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv AT ličinamv restrikcionnyjanalizdnktimusaiselezenkikrysoblučennyhvdoze5gr
AT kostûkgv restrikcionnyjanalizdnktimusaiselezenkikrysoblučennyhvdoze5gr
AT mitrohinûi restrikcionnyjanalizdnktimusaiselezenkikrysoblučennyhvdoze5gr
AT šugalijav restrikcionnyjanalizdnktimusaiselezenkikrysoblučennyhvdoze5gr
first_indexed 2025-07-14T04:17:19Z
last_indexed 2025-07-14T04:17:19Z
_version_ 1837594459269758976
fulltext УДК 577.113.4:577.336 М. В. Личина, Г. В. Костюк, Ю. И. Митрохин, А. В. Шугалий РЕСТРИКЦИОННЫЙ АНАЛИЗ ДНК ТИМУСА И СЕЛЕЗЕНКИ КРЫС, ^ОБЛУЧЕННЫХ В ДОЗЕ 5 Гр * Спустя 15—3 ч после однократного у-облучения крыс общий характер ЕсоЩ-распре- деления остается неизменным, но доля некоторых рестрикционных фрагментов варьи­ рует. Вклад фрагментов размером 2300 и 1500 пар нуклеотидов увеличивается в 2— 3,5 раза, фрагмента 345 п. н.— уменьшается в 5—10 раз. В тимусе изменения про­ исходят через 3 ч, в селезенке — через 1,5 ч после облучения с дальнейшей1 тенденцией к нормализации. Введение. В исследованиях молекулярных основ действия ионизирую­ щего облучения на ДНК основное внимание уделялось, как правило, структурным нарушениям. К ним относились радиационно-химические изменения оснований, разрывы сахаро-фосфатного остова, одно- и дву- нитчатые разрывы, дестабилизация вторичной и надмолекулярной структуры, изменения характера ДНК-белкового взаимодействия в со­ ставе хроматина. Возникновение большинства этих повреждений носит обратимый характер, поскольку их окончательный вклад существенно модулируется системами репарации. Указанные аспекты достаточно подробно отражены в ряде обзоров и монографий (см., напри­ мер, [1—4]). В последние годы при анализе возможных реакций генома на об­ лучение интерес вызывает проблема его нестабильности. Некоторые структурные перестройки, связанные, прежде всего, с амплификацией генов и онкогенов в облученных клетках, проанализированы в одном из обзоров [5]. Приведенные там данные касаются лишь ограниченного круга объектов — культур трансформированных клеток млекопитаю­ щих, в которых в результате облучения происходит амплификация ин­ дикаторной последовательности, чаще всего ДНК SV40. В то же время, кроме специфической генной амплификации (наиболее яркий пример — возникновение лекарственной устойчивости в результате селекции), реализуется, как правило, ситуация, когда амплификации подвергают­ ся участки генома, состоящие суммарно из десятков и сотен тысяч пар нуклеотидов [6]. Изменения такого масштаба в ДНК животных доступ­ ны для регистрации уже на уровне суммарного препарата. Для получения информации о возможном геномном ответе при об­ лучении организма мы проанализировали характер рестрикционного расщепления ДНК двух радиочувствительных органов облученной кры­ сы — тимуса и селезенки. Подобный подход уже был использован для анализа области рДНК клеток S. uvarum, растущих 24 ч после облуче­ ния рентгеновскими лучами, но каких-либо изменений не обнаружено из-за возможной, как считают авторы, репарации [7]. Мы провели £со/?/-рестрикцию суммарной ДНК спустя 1,5 и 3 ч после v-облучения. Чтобы получить возможность детализации рестрик­ ционного распределения для электрофореза была использована не ага- роза, в которой для животной ДНК наблюдается сплошной мазок, а j * Представлена членом редколлегии Н. В. Желтовским. © М. В. Личина, Г. В. Костюк, Ю. И. Митрохин, А. В. Шугалий, 199Ф ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 1 31 градиент концентрации полиакриламидного геля (ПААГ). В нем четко регистрируется набор £со#/-рестрикционных полос ДНК крысы [8]. Выбранная доза у-облучения д л я крысы близка к параметру ^-^50/30 [ 2 ] . Материалы и методы. у-Облучение беспородных крыс-самцов мас­ сой 150—180 г проводили на кобальтовой установке с мощностью дозы 0,25 Гр/мин. В опыте использовали материал органа, полученный из 2—3 крыс. ДНК выделяли гуанидинтиоцианатным методом [9] с по­ следующей очисткой смесью хлороформ : изоамиловый спирт. Метод обеспечивает исключительно высокую степень очистки от клеточных компонентов и полимерность ДНК. Подготовленные для рестрикции препараты ДНК имели следующие характеристики: отношения ^260/̂ 280 = 2,1+0,1; ^2бо/^2зо=2,5+0,1, степень гиперхромизма 38—• 41 %. Использовали рестриктазу EcoRI (НПО «Фермент», Вильнюс), отношение фермент/ДНК, если не оговаривалось, составляло 16:1 . Градиент концентрации ПААГ был 3—8 %, электрофорез осуществля­ ли при напряжении 35 В в течение 14—16 ч. Сканирование геля про­ водили на денситометре ДМ-1 (СССР) с последующей оценкой доли каждого фрагмента взвешиванием. Результаты и обсуждение. На рис. 1 и 2 представлены типичная £со/?/-рестрикционная картина ДНК печени крысы и ее сканограмма. Распределение имеет отчетливые полосы, их взаимное расположение и относительный вклад в точности совпадают с Есо/?/-распределением в работе [8], поэтому мы сохранили прежнюю маркировку полос. Вид­ но, что достаточно хорошо разрешаются фрагменты 90—500 п. н. (рис. 2, кривая 1), а более протяженные — маскируются из-за значительного фонового сигнала. Для его уменьшения мы снизили нагрузку на полосу 32 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 1 по сравнению с обычно используемой при контрастировании животной ДНК бромистым этидием и применили альтернативный прием контрас­ тирования азотнокислым серебром [10] с нашей модификацией регист­ рации— фотометрированием непосредственно геля [11]. Это позволило при снижении количества нанесенного материала в ~ 103 раз достичь удовлетворительного разрешения фрагментов вплоть до ~2000 п. н. (рис. 2, кривая 2). Сканограммы обрабатывали следующим образом. Для каждого препарата (тимуса или селезенки) были получены сканограммы конт­ рольной ДНК и спустя 1,5 и 3 ч после облучения. Затем вычисляли Рис. 3. Относительный вклад фрагментов £со#/-рестрикции ДНК тимуса и селезенки крыс спустя 1,5 (/) и 3 ч (2) после у-облучения. По оси ординат — величина отношения доли фрагментов, по оси абсцисс — обозначения фрагментов, как на рис. 2. Штриховая линия на уровне отношения 1,0 отвечает постоянству вклада фрагмента в опыте и кон­ троле. Указана величина стандартной ошибки определения Рис. 4. Изменение относительного вклада фрагментов £со/?/-рестрикции после частич­ ной гепатэктомии: / — фрагмент Б, 1500 п. н.; 2 — фрагмент С, 900 п. н.; 3 — фрагмент F, 345 п. н. По оси ординат—величина отношения доли фрагмента (опыт/контроль), по оси абсцисс — сроки (ч) после гепатэктомии. Штриховая линия и ошибка, как на рис. 3 относительный вклад каждого фрагмента в распределение и составляли отношение этих величин (опыт/контроль). Неизменность вклада при переходе от контроля к опыту означала бы, что отношение должно под­ держиваться на уровне 1,0. Данные рис. 3 иллюстрируют результаты подобного расчета для каждого из фрагментов. Отметим, что слаборазрешаемые на скано- граммах фрагменты D', D, С и В' (рис. 2, кривая 2) не вошли в окон­ чательный расчет, поскольку точность их определения не слишком вы­ сока. Средняя ошибка определения отношения для остальных фраг­ ментов составляет 10—15 % величины, т. е. неизменному вкладу фраг­ мента отвечает отношение 0,85—1,15. Эта ситуация реализуется для большинства фрагментов, что подтверждает корректность предложен­ ного способа оценки. На этом фоне выделяются фрагменты А, В и F, для них происходит изменение вклада. Для тимуса реакция на у-облу- чение наступает через 3 ч, при этом доля фрагментов А и В увеличива­ ется в 2—2,5 раза, а фрагмента F—снижается в ~ 1 0 раз. Для селе­ зенки эффект проявляется уже через 1,5 ч, а через 3 ч ситуация приоб­ ретает тенденцию к нормализации. Подобное изменение относительного вклада рестрикционных фраг­ ментов не является уникальным для у-облучения. На рис. 4 приведены результаты аналогичного расчета для нескольких фрагментов EcoRI- реетрнкции ДНК печени крысы в различные сроки после частичной ISSN 02.53-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 1 3 — 3-804 33 гепатэктомии. В отличие от ^-облучения доля фрагмента В не изменяется (кривая / ) , зато доля фрагмента С к 12-му ч увеличивается в ~ 3 раза (кривая 2), хотя при облучении его вклад был постоянным. В то же время тенденция для фрагмента F остается той же—эффект проявля­ ется только в уменьшении его вклада (кривая 3). Одним из возможных факторов, влияющих на характер рестрикии- онного расщепления, является метилирование сайтов. В более общем плане вопрос стоит о влиянии на рестрикцию модифицированных, в том числе и аддуктных, дезоксинуклеотидов, которые могут появиться в сайтах рестрикции при различных воздействиях на клетку [12, 13]. Из полученных нами £со/?/-фрагментов достаточно хорошо известен лишь фрагмент / [14]. Он представляет собой тандемно организован­ ный сателлит I крысы (92/93 п. н.), в виде тетрамера фрагмент ассо­ циирован с фракцией ядерного матрикса [15]. В составе / частота CpG превышает средний показатель для суммарной ДНК крысы в 2,3 раза [14], причем появление 5теС в составе динуклеотидов или непосред­ ственно затрагивает сайты fco^Z-расщепления тетрамера 370 п. н., или соседствует с ними. В отсутствие изошизомера EcoRI мы попытались косвенным путем оценить возможность влияния метилирования, проводя рестрикцию при различных соотношениях фермент/ДНК. Видно (таблица), что при ис­ пользуемом нами максимальном соотношении 16 : 1 доля фрагмента / в опыте и контроле совпадает, хотя при меньшем соотношении скорость рестрикции в опыте несколько замедляется в соответствии с возмож­ ным влиянием метилирования остатков цитозина в EcoRI-саитах [14]. Другим фактором, влияющим на рестрикционное распределение, могут быть ДНК-связывающие белки, которые прочно ассоциированы с дуплексом и не диссоциируют при выделении ДНК. Известен, напри­ мер, класс белков с молекулярной массой 43 000, которые активируют­ ся в культуре клеток человека ^-облучением и транспортируются из цитоплазмы в ядро [16]. Участком их связывания на ДНК является достаточно специфическая нуклеотидная последовательность, выявлен­ ная в модельном эксперименте с энхансером SV40 — она включает аде- ниновый динуклеотид, как, кстати, в сайте £со/?/-рестрикции GAATTC. При этом ДНК-связывающие белки не обязательно должны маскиро­ вать сайт рестрикции непосредственно — для изменения узнавания дос­ таточно вариации конформации двухспиральной ДНК в окрестностях этого сайта [17]. Указанные факторы, несомненно, могут влиять на рестрикционное узнавание, однако при прогнозировании или оценке их вклада следует учесть, что в наших экспериментах мы имеет дело не с уникальным фрагментом, а с семейством повторов с частотой 5-Ю3—104, как у F, или ~106 , как у / [8]. Координированное влияние на них перечислен­ ных факторов при дисперсном распределении по геному весьма мало­ вероятно, для подобного влияния они должны формировать многочис­ ленные тандемные кластеры и быть локализованными в специфических участках генома. В принципе, такую возможность нельзя полностью исключить, тем более что для фрагмента / реализуется сходная си­ туация [15]. Наконец, причиной вариации числа сайтов узнавания некоторых по­ вторяющихся фрагментов может являться амплификация — элимина­ ция, обусловленная сверх- или ошибочной репликацией (replicon misfi- Доля фрагмента J = 93 п. н. (в % генома) при различных соотношениях фермент / ДНК ДНК Соотношение 2:1 6:1 16:1 Печени, контроль 0,55 1,05 1,0 После частичной гепатэктомии, 12 ч 0,36 0,70 1,1 34 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 1 ring, no терминологии автора работы [18]), а также иными клеточны­ ми механизмами, включающими транслокации и делеции [19]. Этот феномен ассоциирован с широким кругом воздействий как естествен­ ных — старение, тепловой шок, гипоксия, гормоны, так и искусствен­ ных — лекарственные соединения, облучение различной природы, кан­ церогены [6, 19—21]. Поэтому не выглядит случайным обнаруженное нами изменение количества рестрикционных фрагментов клеточной ДНК для воздействий различного рода — ингибирования белкового син­ теза, облучения, стимулирования пролиферации. Перечисленные факторы — изменение конкретной нуклеотидной пос­ ледовательности в рестрикционном сайте, маскирование расщепления за счет белкового компонента или конформационного влияния самой ДНК, изменение копийности — способны каждый в отдельности или # комбинации привести к вариации числа тех или иных фрагментов ре­ стрикции. Кроме потенциальной амплификации — элиминации, осталь­ ные факторы, в сущности, приводят к одному и тому же результату — нарушению исходной доступности определенных сайтов ДНК для узна­ вания рестриктазой и вариации картины £со/?/-рестрикции. Выяснение роли облучения как одного из воздействий, инициирующх подобные из­ менения, представляется нам достаточно перспективным для понимания молекулярных механизмов его действия на клетку. М. В. Личина, Г. В. Костюк, Ю. I. Митрохш, О. В. Шугалш РЕСТРИ.КЦШНИИ АНАЛ13 ДНК ТИМУСА I СЕЛЕЗШКИ ЩУР1В, Y-ОПРОМГНЕНИХ У Д031 5 Гр Р е з ю м е Через 1,5—3 год теля одноразового у-опромшення uiypiB загальний характер £со#/-розподшення залишаеться незмшним, але частка декотрих рестрикщйних фраг­ ментов варше. Вклад фрагментов розм1ром 2300 i 1500 пар нуклеотвдв збьльшуеться у 2—3,5 раза, фрагмента 345 п. н.— зменшуеться у 5—10 раз1в. |У тимуЫ змши вщ- буваються через 3 год., у селезшщ — через 1,5 год. шеля опромшення з подальшою тенденщею до нормал1зацп. М. V. Lichina, G. V. Kostuk, Yu. I. Mitrochin, A. V. Shugalii THE RESTRICTION ANALYSIS OF THYMUS AND SPLEEN DNA OF A RAT y-IRRADIAiTED AT DOSE 5 Gy S u m m a r y 1,5—3 hours after a single v-irradiation of a rat the common pattern of EcoRf-resirl- ction is unchanged but the parts some restriction fragments varied. The concentration of a fragments 2300 and 1500 base pairs rises in 2—3,5 times, fragment 345 base pair declines in 5—10 times. In a thymus the variations are occured after 3 hours, in a spleen — 1,5 hours after y-irradiation with a future tendency to normalization. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Комар В. Е., Хансон К. П. Информационные макромолекулы при лучевом пора­ жении клеток.— М. : Атомиздат, 19'>80.— 175 с. 2. Коггл Дж. Биологические эффекты радиации / Под ред. А. Н. Деденкова.— М. : Энергоатомиздат, 1986.— 184 с. 3. George A. M., Cramp W. А. // Progr. Biophys. and Mol. Biol.—1987.—50 N 3 — P. 121 — 169. 4. Москалева Е. Ю., Ильюшина H. A. // Итоги науки и техники.— М. : ВИНИТИ 1990.—С. 5—113.— (С. Радиац. биология; Т. 9). 5. Сынзыныс Б. И., Саенко А. С, Пелевина И. И. // Там же.— С. 114—213 6. Stark G. /?., Wahl G. M. // Annu. Rev. Biochem.—1984.—53.—P. 447—491. 7. Kreiss M., Вaumstark-Khan C., Rink H. // Int. J. Radiat. Biol.—1986 — 49 N 4 — P. 702. 8. Lapeyre J.-M., Becker F. F. // Biochim. et biophys. acta.—1980.—607 N 1 — P. 23—34. ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ II КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 1 3 * 35 9. Спитковский Д. Д., Зборовская И. Б., Киселев Ф. Л. // Молекуляр. биология.— 1986.—20, № 5.—С. 1409—1421. 10. Lomholt В., Frederiksen S. // Anal. Biochem.—1987.—164, N 1.—P. 146—149. 11. Личина М. В., Шугалий А. В., Тодоров И. Н. VI Конф. по спектроскопии биопо­ лимеров.— Харьков, 1988.— С. 194—195. 12. Voigt /. M.t Topal M. D. // Biochemistry.—1990.—29, N 6.—Р. 1632—1637. 13. Richardson F. С, Richardson К. К. II Mol. Carcinogenesis.—1991.—4, N 2.— P. 162—168. 14. Peck Af.f Igo-Kamenes Т., Zachau H. G. // Nucl. Acids Res.—1979.—7, N 2 - P. 417—432. 15. Asano S.f Hibino Y., Ikeda Y. et al // Biochem. Int.—1989.—19, N 4.—P. 871—«80. 16. Singh S. P., Lavin M. F. // Mol. and Cell. Biol.—1990.—10, N 10.—P. 5279—5285. 17. Azorin F.t Hahn R., Rich A. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—1984.—81, N 18.— P. 5714—5718. 18. Varshavsky A. // Ibid.—1981.—78, N 6.—P. 3673—3677. 19. Stark G. #., Debatisse M., Giulotto E., Wahl G. H. // Cell.—1989.—57, N 6.— P. 901—908. 20. Schimke R. Т., Sherwood S. W., Hill А. В., Johnston R. N. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA —1986.—87, N 7.—P. 2157—2161. 21. Schimke R. T. /J J. Biol. Chem.—1988.—263, N 13.—P. 5989—5992. Ин-т хим. физики РАН, Черноголовка Получено 22.09.9Я ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 1