Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов

Исследованы некоторые физико-химические свойства дискретных фрагментов, выявляемых при фракционировании лизированных ядер Crepis capillaris электрофорезом в инвертируемом электрическом поле. Показано, что крупные ДНК-фрагменты способны селективно распадаться на мелкие под влиянием физических и химич...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	1991
1. Verfasser:	Соловьян, В.Т.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1991
Schriftenreihe:	Биополимеры и клетка
Schlagworte:	Структура и функции биополимеров
Online Zugang:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/152941
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов / В.Т. Соловьян // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 1. — С. 85-87 — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-152941
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1529412019-06-14T01:24:53Z Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов Соловьян, В.Т. Структура и функции биополимеров Исследованы некоторые физико-химические свойства дискретных фрагментов, выявляемых при фракционировании лизированных ядер Crepis capillaris электрофорезом в инвертируемом электрическом поле. Показано, что крупные ДНК-фрагменты способны селективно распадаться на мелкие под влиянием физических и химических агентов, а также проявлять аномальную подвижность в присутствии интеркалятора бромистого этидия. Предполагается, что данные свойства могут быть связаны с наличием липких концов, фланкирующих ДНК-фрагменты, позволяющих образовывать топологически замкнутые и мультимерные структуры. Досліджено деякі фізико -хімічні властивості дискретних фрагментів , що виявляються при фракціонуванні лізованих ядер Crepis capillarisелектрофорезом в інвертуємому електричному полі. Показано , що великі ДНК - фрагменти здатні селективно розпадатися на дрібні під впливом фізичних і хімічних агентів, а також проявляти аномальну рухливість у присутності інтеркалятора бромистого етидію . Передбачається , що дані властивості можуть бути пов'язані з наявністю липких кінців , фланкуючих ДНК - фрагменти , що дозволяють утворювати топологічно замкнуті і мультімерной структури . Some properties of discrete DNA-fragments appearing during the fractionation of Crepis capillaris lysed nuclei by FIGE are investigated. It is shown that large DNA-fragnients have a capacity to selective disintegration into small ones under physical and chemical influences and are able to anomalous mobility in the presence of intercalator ethidium bromide. It is supposed that discrete DNA-fragments are flanked by sticking ends permitting them to form multimeric and topologically integrated structures. 1991 Article Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов / В.Т. Соловьян // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 1. — С. 85-87 — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0002B7 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/152941 575.113/577.21 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров
spellingShingle	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров Соловьян, В.Т. Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов Биополимеры и клетка
description	Исследованы некоторые физико-химические свойства дискретных фрагментов, выявляемых при фракционировании лизированных ядер Crepis capillaris электрофорезом в инвертируемом электрическом поле. Показано, что крупные ДНК-фрагменты способны селективно распадаться на мелкие под влиянием физических и химических агентов, а также проявлять аномальную подвижность в присутствии интеркалятора бромистого этидия. Предполагается, что данные свойства могут быть связаны с наличием липких концов, фланкирующих ДНК-фрагменты, позволяющих образовывать топологически замкнутые и мультимерные структуры.
format	Article
author	Соловьян, В.Т.
author_facet	Соловьян, В.Т.
author_sort	Соловьян, В.Т.
title	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов
title_short	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов
title_full	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов
title_fullStr	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов
title_full_unstemmed	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов
title_sort	фракционирование днк эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1991
topic_facet	Структура и функции биополимеров
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/152941
citation_txt	Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов / В.Т. Соловьян // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 1. — С. 85-87 — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT solovʹânvt frakcionirovaniednkéukariotvinvertiruemomélektričeskompolesvojstvadiskretnyhfragmentov
first_indexed	2025-07-14T04:23:44Z
last_indexed	2025-07-14T04:23:44Z
_version_	1837594862992490496
fulltext	УДК 575.113/577.21 В. Т. Соловьян ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ ДНК ЭУКАРИОТ В ИНВЕРТИРУЕМОМ ЭЛЕКТРИЧЕСКОМ ПОЛЕ. СВОЙСТВА ДИСКРЕТНЫХ ФРАГМЕНТОВ Исследованы некоторые физико-химические свойства дискретных фрагментов, выявляе- мых при фракционировании лизированных ядер Crepis capillaris электрофорезом в инвертируемом электрическом поле. Показано, что крупные ДНК-фрагменты способны селективно распадаться на мелкие под влиянием физических и химических агентов, а также проявлять аномальную подвижность в присутствии интеркалятора бромистого этидия. Предполагается, что данные свойства могут быть связаны с наличием липких концов, фланкирующих ДНК-фрагменты, позволяющих образовывать топологически замкнутые и мультимерные структуры. Ранее мы представили данные, показывающие, что при фракционирова- нии ядерных Д Н К в инвертируемом электрическом поле появляется набор дискретных фрагментов (ДФ), представляющих собой, вероятно, различные фрагменты хромосом, унифицированные по размеру (см. Биополимеры и клетка, 1990, № 3 , с. 97—99). В настоящем сообщении приведены результаты, касающиеся фи- зико-химических СЕ ой ств дискретных фрагментов. Рис. 1. Селективный р а с п а д дискретных ф р а г м е н т о в при физических воздействиях . Яд- ра к у л ь т и в и р у е м ы х клеток С. capillaris ( / ) л и з и р о в а л и и ф р а к ц и о н и р о в а л и , к а к описа- но в тексте. А г а р о з н ы е блоки,^ с о д е р ж а щ и е Д Н К - ф р а г м е н т ы р а з м е р о м 250—300 (2) и 50—100 (5) т. п. н., в ы р е з а л и и р е ф р а к ц и о н и р о в а л и в тех ж е условиях ; 4, 5 — те ж е ф р а г м е н т ы р а з м е р о м соответственно 250—300 и 50—100 т. п. н., р е ф р а к ц и о н и р о в а н н ы е после УФ-облучения («LKB», M a c r o V u e , 1 мин) . M — м а р к е р ы м о л е к у л я р н ы х масс : к о н к а т а м е р ы ф а г а λ. Р а з м е р ы ф р а г м е н т о в здесь и д а л е е д а н ы в т. п. н. F ig . 1. Se lec t ive d i s i n t e g r a t i o n of d iscre te D N A - f r a g m e n t s u n d e r s o m e phys ica l i n f l u - ences. Nuclei of C. capillaris cu l t i va t ed cel ls w e r e f r a c t i o n a t e d by F I G E ( l ine / ) . A g a - rose b locks c o n t a i n i n g D N A - f r a g m e n t s w e r e cu tud a n d r e - f r a c t i o n a t e d u n d e r the s a m e con- d i t i o n s ( l ines 2 a n d 5 ) . L ines 4 a n d 5 — the s a m e b locks a f t e r U V - i r r a d i a t i o n ( L K B , M a c r o V u e , 1 m i n ) . M — l a m b d a o l i g o m e r s Рис. 2. Д в у х м е р н ы й гель -электрофорез в инвертируемом электрическом поле Д Н К рас- тения ( / ) и к у л ь т и в и р у е м ы х клеток (2) R. serpentina. Д Н К ф р а к ц и о н и р о в а л и , как опи- сано в тексте. Гель п о в о р а ч и в а л и на 90 ° и ф р а к ц и о н и р о в а л и в тех ж е у с л о в и я х в при- сутствии 20 %-ного ф о р м а м и д а ; M-— к о н к а т а м е р ы ф а г а λ Fig . 2. T w o - d i m e n s i o n a l F I G E of n u c l e a r D N A f r o m in t ac t p l a n t s (1) a n d c u l t u r e d ce l l s (2) of R. serpentina DNA w a s f r a c t i o n a t e d by FIGE1 gel w a s t u r n e d f o r 90° a n d c o n t i n u e d to be f r a c t i o n a t e d u n d e r t he s a m e c o n d i t i o n s in the p re sence of 20 % f o r m a m i d e . M — l a m b d a o l i g o m e r s Препараты ядерных Д Н К из интактного растения и культивируе- мых клеток Crepis capillaris и Rauwolfia serpentina получали, как опи- сано в вышеуказанной работе. Лизированные препараты фракциониро- вали с помощью электрофореза в инвертируемом электрическом поле в © В. Т. СОЛОВЬЯН, 1991 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 1 85 постоянном режиме инверсии (24 с «вперед» и 8 с «назад») в 0,5X χ Τ Β Ε - б у ф е р е при градиенте напряжения 3 0 В/см на протяжении 18 ч. Из рис. 1 следует, что крупные Д Ф способны селективно распа- даться па мелкие фрагменты под воздействием УФ-облучепия. К тако- му же эффекту приводит обработка крупных Д Ф другими физически- ми факторами (замораживание в жидком азоте или расплавление бло- ков легкоплавкой агарозы при 65 °С). Мелкие ДНК-фрагменты, раз- мер которых составляет ~ 5 0 — і 0 0 т. п. п., при этом не распадаются. Представленные па рис. 2 результаты двухмерного пульс-электро- форезного фракционирования в присутствии 20 %-формамида во II на- правлении свидетельствуют о том, что крупные Д Ф состоят из мелких, соединенных слабыми связями. Рис. 3. Д в у х м е р н ы й гель-электрофорез в инвентирусмом электрическом поле Д Н К ра- стения (1) и различных линии культивируемых клеток. С. capillaris (2—4). Относитель- ная ПОДВИЖНОСТЬ Д Н К - ф р а г м е н т о в (т. П. Н.) ПО отношению К соответствующему KOII- к а т а м е р у фага λ составляет соответственно д о р о ж к а м : а — 1,2 (50—100) ; 1,3 (250— 300) ; 1 "(400—450); 6 — 2, З, 3, 3 (50—100); 1, 1, 1, 1 (250—300) ; 1, 1, 1, 1 (400—450). Концентрация бромистого этидия 1 (а) и (б) м к г / м л во II направлении Fig . 3. The a n o m a l o u s mobi l i ty of d i scre te D N A - f r a g m e n t s in the p resence of e th id ium bromide . D N A farom in tac t p l a n t s (1) and v a r i o u s cu l tu red cell l ines of C. capillaris (2— 4) we re f r a c t i o n a t e d by t w o - d i m e n s i o n a l FIGE. P a n e l A — 1 μς./ml e th id ium b romide in t h e second d imens ion ; P a n e l B — 5 ^ ig /ml e th id ium b r o m i d e in the second d imens ion . Да::;;ые, приведенные на риє. 1 и 2, позволяю! высказать предпо- ложение, что крупные Д Ф являются производными (возможно, муль- тимериыми) формами фрагментов, соединенных слабыми, вероятней всего, водородными связями. Из рис. 3 видно, что дискретные фрагменты способны проявлять аномальную подвижность в присутствии бромистого этидия, причем величина ее зависит от концентрации интеркалятора. Это может озна- чать, что дискретные фрагменты способны образовывать топологически замкнутые структуры. Нельзя не отметить, что свойства дискретных фрагіментов, обнару- женные нами, напоминают свойства Д Н К фага λ. Последнее обстоя- тельство позволяет высказать предположение о том, что Д Ф фланки- рованы липкими концами, позволяющими образовывать мультимеопые или кольцевые структуры. T H E F R A C T I O N A T I O N O F E U K A R Y O T I C D N A BY F I E L D I N V E R S I O N G E L E L E C T R O P H O R E S I S . P R O P E R T I E S O F D I S C R E T E F R A G M E N T S V. T. Solovyan In s t i t u t e of Molecu la r B io logy and Genet ics , A c a d e m y of Sciences of the U k r a i n i a n SSR, Kiev 86 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 1 S u m in я ι ν S o m e proper t i e s of d iscre te D N A - f r a g m e n t s a p p e a r i n g d u r i n g the f r ac t iona t ion of Crcpis capillaris lysed ішсіеі by F I G E are inves t iga t ed . It is shown tha t l a rge D N A - f r a g m e n i s h a v e a capac i ty to select ive d i s i n t e g r a t i o n into s m a l l ones unde r physica l and chemical in f luences and are able to a n o m a l o u s mobi l i ty in the presence of i n t e r ca l a to r e lh id ium bromide . It is supposed tha t discrete D N A - f r a g m e n t s are f l anked by s t i ck ing e n d s p c r n i i u i n g them to fo rm milKimeric and topo log ica l ly i n t eg ra t ed s t ruc tu res . УДК .577.112.5 + 578.841 Η. В. Родшш, Т. Л. Левитина, Η. М. Гусак, Э. А. Козлов РЕКОНСТРУКЦИЯ ПОЛИПЕПТИДНОЙ Ц Е П И Г Р А Н У Л И Н А ВИРУСΛ ГРАНУДЕЗА ОЗИМОЙ СОВКИ, AGROTIS SEGETUM ПОЛНАЯ АМИНОКИСЛОТНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ Полипептидная цепь грану лина вируса гранулеза озимой совки, Agrolis segeium, ре- конструирована на основании данных по строению и составу триптических и химотрип- тических пептидов немодифицировенного белка, триптических фрагментов малеил-белка и химотриптических пептидов одного из малеил-фрагментов. Полипептидная цепь построе- на из 247 остатков аминокислот и имеет молекулярную массу 29135. Обсуждаются особенности реконструкции полипептидной цепи данного белка, связанные с его рас- цеплением протеазой гранул. Введение. Бакуловирусы подразделяются на две серологически родст- венные группы, различающиеся по форме тел включения (ТВ): А — вирусы ядерного полиэдроза (ВЯП, форма ТВ — многогранники) и В — вирусы грапулеза (ВГ, ТВ овальной формы). Распространение бакуло- вирусов в природных популяциях насекомых в значительной степени зависит от белка ТВ, защитный супервириокапсид из которого предох- раняет вирус от воздействий среды при передаче его от насекомого к насекомому. Инфекционность вируса в значительной мере определяет- ся способностью ТВ растворяться в кишечнике личинок насекомых. Этот процесс идет при участии протеазы ТВ [1\|]. В течение ряда лет нами была определена первичная структура нескольких полиэдринов (белок полиэдров) ряда ВЯП [1], а также изучены взаимоотношения протеазы полиэдров с белком ТВ [.1—3]. То обстоятельство, что про- теаза ТВ и ее естественный субстрат (белки ТВ) находятся в комплек- се, значительно затрудняет выделение перасщепленного белка и иссле- дование его первичной структуры. Если в группе А бакуловирусов известны первичные структуры де- сяти белков ТВ [1, 4, 5], выясненные как путем определения амино- кислотной последовательности белка, так и секвенированием соответ- ствующих генов, то в группе В бакуловирусов к настоящему моменту просеквенированы лишь гены гранулинов Trichoplusia пі и Pieris bras- sicae [7]. В данном сообщении подробно описан принцип реконструк- ции полипептидной цепи гранулина ВГ A. segetum на основании опуб- ликованных нами ранее данных по составам и строению триптических и химотриптических пептидов восстановленного и карбоксиметилиро- ванного гранулина [8] и триптических фрагментов малеил-гранулина © Н. в . РОДНИН, Т. л . ЛЕВИТИНА, Η. М. ГУСАК, Э. А. КОЗЛОВ, 1991 ISSN 0233-7657. БПОПОЛИ.МЕРЫ И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 1 87

Фракционирование ДНК эукариот в инвертируемом электрическом поле. свойства дискретных фрагментов

Institution

Ähnliche Einträge