Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК

В работе показано, что СоlE1-родственные сверхскрученные плазмиды, полученные хлорамфениколзависимой амплификацией, можно использовать как для выявления нежелательных примесных эндонуклеаз во (многих продажных и лабораторных препаратах протеаз, ферментов нуклеинового обмена, химических реагентов, та...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1986
Автори:	Дрыгин, Ю.Ф., Жуклис, К.Л.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1986
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Теми:	Структура и функции биополимеров
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153424
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК / Ю.Ф. Дрыгин, К.Л. Жуклис // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 6. — С. 317-322. — Бібліогр.: 6 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-153424
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1534242019-06-15T01:29:51Z Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК Дрыгин, Ю.Ф. Жуклис, К.Л. Структура и функции биополимеров В работе показано, что СоlE1-родственные сверхскрученные плазмиды, полученные хлорамфениколзависимой амплификацией, можно использовать как для выявления нежелательных примесных эндонуклеаз во (многих продажных и лабораторных препаратах протеаз, ферментов нуклеинового обмена, химических реагентов, так и для сравнительной оценки активности некоторых ДНКаз и РНКаз. Показано, що СоlE1-споріднені надскручені плазміди, отримані хлорамфеніколзалежною ампліфікацією, можна використовувати як для виявлення небажаних домішкових ендонуклеаз у багатьох продажних і лабораторних препаратах протеаз, ферментів нуклеїнового обміну, хімічних реагентів, так і для порівняльної оцінки активності деяких ДНКаз і РНКаз. Supercoiled DNA is known to be a sensitive substrate for detecting the endonucleolytic activity. Supercoiled pBR322 and other ColE1-related plasmids are shown to be highly useful both for detecting nonspecific endonucleolytic admixtures in many biochemical preparations and for comparative estimation of certain DNAses and RNAses activity. More than 30 enzymes, proteins and chemical substances (salts, sucrose, eys.) commonly used for nuclear acids and nucleoproteins structural study are analyzed. Certain commercial praparation of proteolytic enzymes, kinases, ligases, polymerases, etc. are found to contain a detectable level of the endonucleolytic activity. 1986 Article Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК / Ю.Ф. Дрыгин, К.Л. Жуклис // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 6. — С. 317-322. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0001CA http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153424 547.963.332:577.1 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров
spellingShingle	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров Дрыгин, Ю.Ф. Жуклис, К.Л. Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК Биополимеры и клетка
description	В работе показано, что СоlE1-родственные сверхскрученные плазмиды, полученные хлорамфениколзависимой амплификацией, можно использовать как для выявления нежелательных примесных эндонуклеаз во (многих продажных и лабораторных препаратах протеаз, ферментов нуклеинового обмена, химических реагентов, так и для сравнительной оценки активности некоторых ДНКаз и РНКаз.
format	Article
author	Дрыгин, Ю.Ф. Жуклис, К.Л.
author_facet	Дрыгин, Ю.Ф. Жуклис, К.Л.
author_sort	Дрыгин, Ю.Ф.
title	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК
title_short	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК
title_full	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК
title_fullStr	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК
title_full_unstemmed	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК
title_sort	выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных днк
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1986
topic_facet	Структура и функции биополимеров
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153424
citation_txt	Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК / Ю.Ф. Дрыгин, К.Л. Жуклис // Биополимеры и клетка. — 1986. — Т. 2, № 6. — С. 317-322. — Бібліогр.: 6 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT dryginûf vyâvlenieéndonukleaznyhprimesejvkommerčeskihilaboratornyhbiohimičeskihpreparatahspomoŝʹûsverhskručennyhdnk AT žukliskl vyâvlenieéndonukleaznyhprimesejvkommerčeskihilaboratornyhbiohimičeskihpreparatahspomoŝʹûsverhskručennyhdnk
first_indexed	2025-07-14T04:57:42Z
last_indexed	2025-07-14T04:57:42Z
_version_	1837596999684194304
fulltext	УДК 547.963.332:577.1 ВЫЯВЛЕНИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗНЫХ ПРИМЕСЕЙ В КОММЕРЧЕСКИХ И ЛАБОРАТОРНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАХ С ПОМОЩЬЮ СВЕРХСКРУЧЕННЫХ ДНК Ю. Ф. Дрыгин, К. Л. Жуклис Введение. При выделении интактных плазмид и фаговых Д Н К в сверх- скрученной форме и изучении структуры природных нуклеопротеидов возникает необходимость выявления нежелательных примесных эндо- нуклеаз в используемых ферментативных и химических препаратах. В качестве субстрата для определения неспецифической эндонукле- азной примеси в течение ряда лет мы с успехом используем сверхскру- ченные бактериальные плазмиды, полученные хлорамфениколзависимой амплификацией, главным образом, плазмиду pBR322. Ранее [1—3] было показано, что сверхскрученные Д Н К являются субстратом не только для ДНКаз, специфичных в отношении двуни- тевых ДНК, но и для эндонуклеаз, гидролизующих преимущественно однонитевые нуклеиновые кислоты. Известно также, что при хлорамфе- никольном блоке в бактериальных плазмидах — производных плазми- ды ColE1 — консервируются полирибонуклеотидные «праймеры» реп- ликации плазмиды [4], и такие плазмиды гидролизуются панкреатиче- ской РНКазой. Сверхскрученные Д Н К могут быть высокочувствительным репор- тером активности эндонуклеаз, поскольку разрыв лишь одной фосфо- диэфирной связи в сверхскрученной Д Н К переводит ее в топологически отличную открытую кольцевую форму. Более глубокий гидролиз при- водит к появлению линейной Д Н К или ее фрагментов. Как исходная сверхскрученная ДНК, так и продукты ее гидролиза четко разделяют- ся и идентифицируются методом электрофореза Д Н К в агарозном геле в присутствии бромистого этидия. Цель настоящей работы — показать, что сверхскрученные Д Н К являются универсальным субстратом для обнаружения примесной эндо- нуклеазной активности в самых разнообразных коммерческих и лабо- раторных биохимических препаратах, используемых для работы с Д Н К и дезоксинуклеопротеидами. Материалы и методы. Выделение сверхскрученной Д Н К pBR322, амплифициро- ванной хлорамфениколом, проводили, как описано в [5]. Для обнаружения эндонукле- аз аликвоту сверхскрученной плазмиды (0,2 мкг) инкубировали с данным препаратом в условиях его применения. Реакцию останавливали резким охлаждением реакционной смеси. Продукты превращения плазмиды анализировали методом горизонтального электрофореза Д Н К в слое 0,7 %-ного агарозного геля (3X130X160 мм), 100 В, 2 ч в буферном растворе (40 мМ трис-HCl, рН 7,7; 5 мМ CH3COONa; 1 мМ ЭДТА; 0,5 мкг/мл бромистого этидия). Анализированные препараты представлены в табл. 1—3. Результаты и обсуждение. В табл. 1 и на рис. 1 , Л приведены ре- зультаты определения эндонуклеазных примесей в протеолитических ферментах, используемых при изучении структуры нуклеопротеидов. Как видно из рисунка, в стандартных, рекомендуемых фирмой-изгото- вителем, условиях применения папаин и бромелаин обладают значи- тельной эндонуклеазной активностью, гидролизующей двунитевую Д Н К (треки 2,3), в то время как под влиянием эндонуклеазы в препарате проназы Ρ (особенно заметной в долго хранившихся замороженных растворах этого фермента) предпочтительно происходят однонитевые разрывы в сверхскрученной Д Н К (трек 9). Препарат протеиназы из Thermoactinomyces vulgaris, очищенный аффинной хроматографией на бацитрацин-силохроме и бацитрацин-сефарозе, не содержит примеси эндонуклеаз (трек 6). Опытные препараты карбоксипептидазы из БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 317 Т а б л и ц а 1 Определение примеси эндонуклеазной активности в препаратах протеолитических ферментов Detection of endonucleolytic admixtures in some industrial and extra purified proteolytic enzymes. See fig. 1, A. № пробы (рис. 1, А) К , J Препарат [^Условия инкубации Наличие эн- донуклеазной активности 1 Исходная сверхскрученная плазмида pBR322 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН: 10 мМ трис-HCl, рН 7,5; 10 мМ NaCl, 1мМ ЭДТА Контроль 2 Папаин («Мегск», ФРГ) 1 мг/мл, 1 ч, 25°С, буфер: 15 мМ цистеин-HCl, рН 6,2; 100 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА Полный гид- ролиз Д Н К 3 Бромелаин («Sigma», США) 1 мг/мл, 1 ч, 25°С, буфер: 100 мМ ацетат натрия, рН 4,5 Есть 4 Трипсин-ТРСК («Serva», ФРГ) 50 мкг/мл, 1 ч, 25 °С, буфер: 40 мМ трис-HCl, рН 8,0, 10 мМ СаС12 Нет 5 α-Химотрипсин (НПО «Био- химреактив», Олайне, СССР) 50 мкг/мл, 1 ч, 25 °С, буфер ТЭН Нет 6 Протеиназа из Thermoactino- myces vulgaris (предоставле- на Г. Η. Руденской, МГУ) 1 мг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 7 Протеиназа К («Мегск», ФРГ) 2 мг/мл, 2 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 8 Протеиназа К («Мегск», ФРГ) 200 мкг/мл, 2 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 9 Проназа Ρ («Serva», ФРГ) 1 мг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Есть 10 Проназа Ε («Мегск», ФРГ) 1 мг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 11 Карбоксипептидаза из Actino- myces species (НПО «Биохим- реактив») 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 10 мМ трис-HCl, рН 7,5, 10 мМ NaCl, 1 мМ Са++, 0,1 мМ Со++ Нет 12 Карбоксипептидаза У (НПО «Биохимреактив», Олайне, СССР) 50 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 100 мМ Na-фосфат, рН 6,5 Нет Streptomyces griseus и аминопептидазы из Aspergillus oryzae производ- ства НПО «Биохимреактив» полностью гидролизовали плазмиду до низкомолекулярных фрагментов, тогда как аминопептидаза из Strep- tomyces griseus не содержала эндонуклеазной активности (данные не приведены). Обнаружение эндонуклеазных примесей в препаратах протеолити- ческих ферментов (даже после их предварительного «самоперевара» или длительного хранения) приводит к выводу о необходимости ана- лиза препаратов протеаз непосредственно перед выделением высоко- молекулярных нуклеиновых кислот или исследованием структуры нук- леопротеидов. Одновременное присутствие в вышеупомянутых препаратах протео- литической и эндонуклеазной активностей можно объяснить высокой устойчивостью последней к соответствующей протеазе, поскольку нам не известны индивидуальные ферменты, катализирующие гидролиз и пептидной, и фосфодиэфирной связей. Мы не знаем также, возникает ли такой ассоциат активностей в процессе очистки препарата протеазы или он исходно присутствует в клетке в виде прочного, слабодиссоци- ирующего комплекса для координированного гидролиза природного нуклеопротеида. 318 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 318 Рис. 1. Электрофорез сверхспиральной Д Н К после инкубации с препаратами протеоли- тических ферментов (Л), химическими препаратами и ферментами, используемыми для выделения нуклеиновых кислот (Б). Номера треков соответствуют номерам проб в табл. 1 и 2. Fig. 1. Electrophoresis of supercoiled DNA after incubation with preparations of prote- olytic enzymes (Л), chemical preparations and enzymes commonly used for nucleic acid isolation (Б). The lane numbers correspond to the numbers in Tables 1 and 2. В табл. 2, 3 и на рис. 1 , 5 и 2 приведены результаты анализа ком- мерческих химических препаратов (трис-буфер, сахароза) и фермен- тов, используемых при выделении Д Н К фага 0X174, плазмид и их ковалентных соединений с белками. Легко заметить, что вышеперечис- ленные отечественные препараты по отсутствию примесных эндонукле- Т а б л и ц а 2 Определение примеси эндонуклеазной активности в химических препаратах и ферментах, используемых для выделения нуклеиновых кислот Detection of endonucleolytic admixtures in some enzymes and chemical preparations commonly used for nucleic acid isolation. See Fig. 1, Б. № пробы (рис. 1, Б) Препарат Условия инкубации Наличие эн- донуклеазной активности 1 Исходная плазмида pBR322 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Контроль 2 Исходная плазмида pBR322 1 ч, 37°С, буфер: 50 мМ трис- НС1, рН 8,0 Контроль 3 Бактериальная щелочная фос- фатаза («Worthington», США) 50 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 8,0 Нет 4 Сахароза чда (СССР) 20 %-ный раствор в буфере ТЭН, 1 ч, 37 °С Нет 5 Сахароза («Serva», ФРГ) 20 %-ный раствор в буфере ТЭН, 1 ч, 37 °С Нет 6 Сахароза чда (СССР) 20 %-ный раствор в буфере: 50 мМ трис-HCl, рН 8,0 Нет 7 Сахароза («Serva», ФРГ) 20 %-ный раствор в буфере: 50 мМ трис-HCl, рН 8,0 Нет 8 Лизоцим («Boehringer», ФРГ) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 9 Лизоцим (НПО «Биохимреак- тив», Олайне, СССР) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 10 Лизоцим («Boehringer», ФРГ) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 8,0 Есть незнач. 11 Лизоцим (НПО «Биохимреак- тив», Олайне, СССР) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 8,0 Нет БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 319 Т а б л и ц а З Определение эндонуклеазной активности ряда препаратов ферментов нуклеинового обмена и БСА Analysis of endonucleolytic activities of some enzymes and BSA used for nucleic acid isolation and study. See Fig. 2 № пробы (рис. 2) Препарат Условия инкубации Наличие эн- донуклеазной активности 1 Исходная плазмида pBR322 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Контроль 2 БСА, фракция V («Sigma», США) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 3 БСА, фракция V («Serva», ФРГ) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер ТЭН Нет 4 Т4-полинуклеотидкиназа (НПО «Фермент», СССР) 1000 ед/мл, 2 ч, 37 °С, буфер: 100 мМ трис-HCl, рН 8,0, 10 мМ MgCl2, 5 мМ ДТТ, 0,05 мМ АТР Есть 5 74-ДНК-лигаза (НПО «Фер- мент», СССР) 1000 ед/мл, 2 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 10 мМ MgCl2 , 10 мМ ДТТ, 0,1 мМ АТР Есть 6 РНК-полимераза (СКТБ БАВ, Новосибирск) 10 ед/мл, 2 ч, 37°С, буфер: 40 мМ трис-HCl, рН 8,0, 10 мМ MgCb, 0,1 мМ ЭДТА, 0,1 мМ ДТТ, 0,15 Μ КС1, 0,15 мМ ΝΤΡ Есть 7 Г4-РНК-лигаза (ИМБ АН СССР) 1000 ед/мл, 2 ч 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 10 мМ MgCl2, 10 мМ ДТТ, 0,2 мМ АТР Есть 8 РНКаза A («Worthington», США) 100 мкг/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ ЭДТА Есть 9 РНКаза РЬ2 (НПО «Биохим- реактив», СССР) 30 ед/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 10 мМ ацетат аммония, рН 4,5 Есть 10 РНКаза Т)2 («Sankyo»,, Япо- ния) 30 ед/мл, 1 ч, 37°С, буфер: 10 мМ ацетат аммония, рН 4,5 Есть 11 РНКаза Т1 («Sankyo», Япо- ния) 500 ед/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ ЭДТА Нет 12 РНКаза Т1 («Sankyo», Япо- ния) 50 ед/мл, 1 ч, 37 °С, буфер: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ ЭДТА Нет аз не уступают импортным. Препараты лизоцима, образующие устой- чивые (в условиях анализа) комплексы с плазмидой, обладают некото- рой эндонуклеазной активностью, которая подавляется добавлением ЭДТА (рис. треки 8—11). Высокоочищенный препарат бычьего сывороточного альбумина (БСА), используемого для уменьшения сорбции на поверхностях иссле- дуемых комплексов НК — белок или как соосадитель НК из сильно разбавленных растворов, практически не содержит эндонуклеазной при- меси (табл. 3, рис. 2, треки 2, 3). Препараты лигаз и полинуклеотидки- назы фага Т4 отечественного производства обладают небольшой, но четко детектируемой эндонуклеазной активностью (табл. 3, рис. 2, тре- ки 4, 5 и 7). Как и ожидалось, РНК-полимераза Е. coli образует устой- чивые в условиях электрофореза комплексы Д Н К — белок. Появление двух четко выраженных полос в геле, возможно, связано с частичным гидролизом сверхскрученной плазмиды и образованием комплекса РНК-полимеразы уже с открытой кольцевой Д Н К (табл. 3, рис. 2, трек 6). 320 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 320 С помощью сверхскрученной плазмиды проводили также качествен- ное сравнение активности коммерческих препаратов разнообразных Д Н К а з и РНКаз. В стандартных, рекомендуемых производителем усло- виях, под действием РНКазы РЬ2 отечественного производства (табл. 3, рис. 2, трек 9) сверхскрученная Д Н К переходила в открытую кольце- вую с эффективностью, близкой к таковой для импортного аналога — РНКазы Т2 (табл. 3, рис. 2, трек 10). Анализ показывает, что даже Рис. 2. Электрофорез сверхспиральной Д Н К после инкубации с БСА и некоторыми ферментами, используемыми для выделения и изучения нуклеиновых кислот. Номера треков соответствуют номерам проб в табл. 3. Fig. 2. Electrophoresis of supercoiled DNA after incubation with BSA and cer- tain enzymes used for nucleic acid isolation and study. The lane numbers correspond to the numbers in Table 3. 10-кратное увеличение (по сравнению со стандартной) концентрации РНКазы 77, используемой при выделении плазмид в сверхскрученной форме [6], не приводит к заметному расщеплению Д Н К pBR322. Таким образом, при выделении сверхскрученных Д Н К даже жесткая обработ- ка их РНКазой Т1 не снижает доли сверхскрученной ДНК. В заключение можно сказать, что небольшие сверхскрученные ДНК, содержащие рибонуклеотидные «праймеры», производные плаз- миды ColEl, амплифицированные в присутствии хлорамфеникола, яв- ляются высокочувствительным и универсальным субстратом для обна- ружения примесных эндонуклеаз в разнообразных лабораторных и ком- мерческих препаратах ферментов, белков и низкомолекулярных веществ, а также для сравнительного анализа активности Д Н К а з и не- которых РНКаз. С помощью этого субстрата (в сочетании с высоко- производительным методом электрофореза Д Н К в агарозных гелях) можно проанализировать одновременно практически полный набор пре- паратов, реагентов и условий обработок, используемых при структур- ном исследовании нуклеиновых кислот и нуклеопротеидов. SUPERCOILED DNA AS A SUBSTRATE FOR DETECTION OF ENDONUCLEOLYTIC ACTIVITIES IN COMMERCIAL AND LABORATORY BIOCHEMICAL PREPARATIONS Yu. F. Drygin, K. L. Zuklys A. N. Belozersky Laboratory of Molecular Biology and Bioorganic Chemistry, Μ. V. Lomonosov State University, Moscow S u m m a r y Supercoiled DNA is known to be a sensitive substrate for detecting the endonucleolytic activity. Supercoiled pBR322 and other ColEl-related plasmids are shown to be highly useful both for detecting nonspecific endonucleolytic admixtures in many biochemical preparations and for comparative estimation of certain DNAses and RNAses activity. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 321 More than 30 enzymes, proteins and chemical substances (salts, sucrose, etc.) commonly used for nucleic acids and nucleoproteins structural study are analyzed. Certain com- mercial preparations of proteolytic enzymes, kinases, ligases, polymerases, etc. are found to contain a detectable level of the endonucleolytic activity. 1. Characterization of the single-strand specific nuclease SI activity on double-stran- ded supercoiled polyoma D N A / J . E. Germont, G. N. Godson, V. M. Vogt, B. H i r t / / Eur. J. Biochem.— 1974.—43, N 2.—P. 591—600. 2. Sensitivity of superhelical DNA to a single-strand specific endonuclease / A. C. Kato, K. Bartok, M. J. Fraser, D. T. Denhardt / / Biochim. et biophys. acta.— 1973.—308, N 1.—P. 68—78. 3. Дрыгин Ю. Φ., Зверев В. В. Применение нуклеазы S1 для определения молекуляр- ной массы Д Н К в мультиплазмидных штаммах Escherichia coli // Молекуляр. био- логия.—1982.—16, № 3.—С. 633—638. 4. Isolation of supercoiled colicinogenic factor El DNA sensitive to ribonuclease and al- k a l i / D . G. Blair, D. J. Sherrat, D. B. Clewell, D. R. He l in sk i / /P roc . Nat. Acad. Sci. USA.— 1972.—69, N 4.—P. 2518—2521. 5. Maniatis Т., Fritsch E. F., Sambrook J. Molecular cloning — New York: Cold Spring Harbor Lab., 1982.—545 p. 6. Purification of nucleic acids by RPC-5 analog chromatography: peristaltic and gra- vity flow applications / J. A. Thompson, R. W. Blakesley, K. Doran et a l . / / M e t h . Enzymol.— 1983.—100.—P. 368—399. МГУ им. Ломоносова Получено 25.07.85 322 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА, 1986, т. 2, № 6 322

Выявление эндонуклеазных примесей в коммерческих и лабораторных биохимических препаратах с помощью сверхскрученных ДНК

Репозитарії

Схожі ресурси