Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией

Методами иммуноэлектрофореза проведен скрининг сывороток крови гомо- и гетерозиготных носителей мутации Вильсона. Показано, что наряду с нормальным церулоплазмином (ЦП) в сыворотке носителей вильсоновской мутации присутствует специфический для этой мутации ЦП-подобный белок (вильсоновский). Показано...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1991
Автори:	Пучкова, Л.В., Вербина, И.А., Денежкина, В.В., Гайцхоки, В.С., Нейфах, С.А.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1991
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153527
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией / Л.В. Пучкова, И.А. Вербина, В.В. Денежкина, В.С. Гайцхоки, С.А. Нейфах // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 24-30. — Бібліогр.: 27 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-153527
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1535272019-06-15T01:31:56Z Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией Пучкова, Л.В. Вербина, И.А. Денежкина, В.В. Гайцхоки, В.С. Нейфах, С.А. Методами иммуноэлектрофореза проведен скрининг сывороток крови гомо- и гетерозиготных носителей мутации Вильсона. Показано, что наряду с нормальным церулоплазмином (ЦП) в сыворотке носителей вильсоновской мутации присутствует специфический для этой мутации ЦП-подобный белок (вильсоновский). Показано что у здоровых людей ЦП-подобный белок, идентичный вильсоновскому ЦП. участвует в выведении меди из организма через желчь. Обсуждаются механизмы дефекта выведения меди через желчь у больных гепатолентикулярной дегенерацией. Методами імуноелектрофорезу проведено скринінг зразків сироватки крові гомо- та гетерозіготних носіїв мутації Вільсона. Показано, що поряд з нормальним церулоплазміном (ЦП) у сироватці носіїв вільсонівської мутації присутній специфічний для цієї мутації ЦП-подібний білок (вільсонівський). У здорових людей ідентичний вільсонівському ЦП-подібний білок бере участь у виведенні міді з організму через жовч. Обговорюються механізми дефекту цього процесу у хворих хворобою Вільсона. The screening of the samples of blood serum of homo- and heterozygotes with Wilson's disease gene was using immunoelectrophoretic methods. It was shown that patients with Wilsonian gene alongside with normal ceruloplasmin contain in serum ceruloplasmin-like protein too. The same protein was involved into the process of liver cooper secretion in normal subjects. The molecular defect of biliary excretion of copper in patients with Wilson's disease is discussed. 1991 Article Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией / Л.В. Пучкова, И.А. Вербина, В.В. Денежкина, В.С. Гайцхоки, С.А. Нейфах // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 24-30. — Бібліогр.: 27 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0002CA http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153527 616-0.53.1:577.112:577.122.5 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
description	Методами иммуноэлектрофореза проведен скрининг сывороток крови гомо- и гетерозиготных носителей мутации Вильсона. Показано, что наряду с нормальным церулоплазмином (ЦП) в сыворотке носителей вильсоновской мутации присутствует специфический для этой мутации ЦП-подобный белок (вильсоновский). Показано что у здоровых людей ЦП-подобный белок, идентичный вильсоновскому ЦП. участвует в выведении меди из организма через желчь. Обсуждаются механизмы дефекта выведения меди через желчь у больных гепатолентикулярной дегенерацией.
format	Article
author	Пучкова, Л.В. Вербина, И.А. Денежкина, В.В. Гайцхоки, В.С. Нейфах, С.А.
spellingShingle	Пучкова, Л.В. Вербина, И.А. Денежкина, В.В. Гайцхоки, В.С. Нейфах, С.А. Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией Биополимеры и клетка
author_facet	Пучкова, Л.В. Вербина, И.А. Денежкина, В.В. Гайцхоки, В.С. Нейфах, С.А.
author_sort	Пучкова, Л.В.
title	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией
title_short	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией
title_full	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией
title_fullStr	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией
title_full_unstemmed	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией
title_sort	молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1991
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153527
citation_txt	Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией / Л.В. Пучкова, И.А. Вербина, В.В. Денежкина, В.С. Гайцхоки, С.А. Нейфах // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 24-30. — Бібліогр.: 27 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT pučkovalv molekulârnyjdefektvyvedeniâmedičerezželčʹubolʹnyhgenatolentikulârnojdegeneraciej AT verbinaia molekulârnyjdefektvyvedeniâmedičerezželčʹubolʹnyhgenatolentikulârnojdegeneraciej AT denežkinavv molekulârnyjdefektvyvedeniâmedičerezželčʹubolʹnyhgenatolentikulârnojdegeneraciej AT gajchokivs molekulârnyjdefektvyvedeniâmedičerezželčʹubolʹnyhgenatolentikulârnojdegeneraciej AT nejfahsa molekulârnyjdefektvyvedeniâmedičerezželčʹubolʹnyhgenatolentikulârnojdegeneraciej
first_indexed	2025-07-14T05:00:09Z
last_indexed	2025-07-14T05:00:09Z
_version_	1837597154698330112
fulltext	С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Fagerhol Μ. К., Сох D. W. The Pi po lymorphism: gcntic, biochcmical and clinical aspec ts of h u m a n a l p h a r a n t i t r y p s i n / / A d v . H u m a n Genet.— 1981.— 11, N 1.— P. 1 — 62. 2. The Alphcii-ani{trypsin gene and its imi ta t ions . Clinical consequences and s t r a t eg ies for t h e r a p y / R . G. Crys ta l , M. L. Bran t ly , R. C. Hubba rd et a l . / / C h e s t . — 1989,— 95, N 1.— P. 196—208. 3. Erickson S., Carlson J., Velez R. Risk of liver cirrhosis and p r imary liver cancer in a lpha , -an t i l ryps in d e f i c i e n c y / / N . Eng l . J. Med.— 1986.—314, N 6 — P . 736—739. 4. Prenatal d i agnos i s of a l p h a r a n t i t r y p s i n deficiency by direct ana lys i s of the m u t a n t site in the g e n e / V . J . Kidd, M. S. Golbus, R. B." Wal lace et al. / / Ibid.— 1984.—310, N 5,— P. 5639—5642. 5. Cox D. W., Mansfield T. P rena ta l d iagnos i s of a l p h a r a n t i t r y p s i n deficiency and esti- m a t e s of fetal risk for d i s e a s e / / J . Med. Genet .— 1987.—24, N 1 , — P . 52—59. 6. Prenatal d i agnos i s of a l p h a r a n t i t r y p s i n deficiency u s i n g po lymerase chain react ion ( P C R ) . Compar i son of convent ional R F L P me thods wi th PCR used in combina t ion wi th allele specific o l igonucleot ides or R F L P a n a l y s i s / M . Schwar tz , K. Bruun-Pe te r - sen, N. Gregersen et al. // Clin. Genet.— 1989,—36, N 3 . — P . 419—426. 7. Gyllensten U. B., Erlich H. A. Genera t ion of s ing le -s t randed DNA by the po lymerase chain reaction and its appl icat ion to direct sequencing of the HLA-DQA locus / / P r o c . Nat . Acad. Sci. USA.— 1988—'85, N 20 — P . 7652—7656. 8. Analysis of point muta t ion in DNA. The ampl i f ica t ion re f rac to ry muta t ion sys tem (ARMS) / C. R. Newton, A. Graham, L. E. Hept ins ta l l et a l . / / N u c l . Acids Res.— 1989,— 17, N 7,— P. 2503—2516. Н И И эксперим. медицины АМН СССР, Ленш.трад Получено 05.07.90 Ин-т геиетики человека Польской Акгд?мии H іук, По:шаіг> У Д К 616-0.53.1:577.112:577.122.5 Л. В. Пучкова, И. А. Вербина, В. В. Денежкина, В. С. Гайцхоки, С. А. Нейфах М О Л Е К У Л Я Р Н Ы Й Д Е Ф Е К Т В Ы В Е Д Е Н И Я МЕДИ Ч Е Р Е З Ж Е Л Ч Ь У Б О Л Ь Н Ы Х Г Е Н А Т О Л Е Н Т И К У Л Я Р Н О Й Д Е Г Е Н Е Р А Ц И Е Й Методами иммуноэлектрофореза проведен скрининг сывороток крови гомо- и гетерози- готных носителей мутации Вильсона. Показано, что наряду с нормальным церулоплаз- мином (ЦП) в сыворотке носителей вильсоновской мутации присутствует специфиче- ский для этой мутации ЦП-подобный белок (вильсоновский). Показано что у здоро- вых людей ЦП-подобный белок, идентичный вильсоновскому ЦП. участвует в выведе- нии меди из организма через желчь. Обсуждаются механизмы дефекта выведения меди через желчь у больных гепатолентикулярной дегенерацией. Введение. Гепатолентикулярная дегенерация ( Г Л Д ) , или болезнь Виль- сона (6В) , представляет собой наследственное аутосомио-рецессивное моногенное заболевание, при котором происходит нарушение обмена меди, выражающееся в задержке выведения меди из организма и отло- жении ее в токсических количествах в жизненно важных органах [1]. Основными патогномическими признаками 6В являются снижение скорости выведения меди через желчь, увеличение содержания ее в моче и крови, образование в клетках различных органов электронно- плотных гранул, содержащих медь. При этом содержание меди в гепа- тоцитах увеличивается в 30—50 раз до развития клинической картины заболевания. Главными клиническими признаками Г Л Д являются цирроз печени и дегенерация подкорковых ядер мозга, что является следствием ток- сического действия меди [2]. Специфической биохимической манифестацией заболевания являет- ся наследственный дефицит медьсодержащего гликопротеина сыворот- ки крови — церулоплазмина ( Ц П ) , что позволило сформулировать предположение о локализации молекулярного дефекта 6В в гене Ц П © л . В. ПУЧКОВА, И. А. В Е Р Б И Н А , В. В. Д Е Н Е Ж К И Н А , В. С. ГАЙЦХОКИ, С. А. НЕЙФАХ, 1991 24 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. λ* 3- [З, 4]. Однако анализ сцепления вильсоповского гена с маркерными белками и Д Н К в больших семьях, несущих эту мутацию, показал, что 6В сцеплена с хромосомой 13 [5, 6], тогда как ген Ц П , по данным со- матической гибридизации, находится на хромосоме 3 [7]. В то же вре- мя при 6В наблюдается снижение содержания Ц П - м Р Н К в печени [8], связанное с нарушением экспрессии гена Ц П на уровне транскрипции [9]. При этом в структуре ЦП, выделенного из сыворотки больных 6ВУ изменений не обнаружено [10]. Приведенные данные позволяют отнести 6В к наследственным болезням с «плюс»-формой дефицита белка, в данном случае Ц П , и предположить, что вильсоновская мутация локализована вне гена Ц П и затрагивает ген, осуществляющий регуляцию экспрессии гена Ц П [11]. С другой стороны, сопоставление содержания Ц П в сыворотке больных Г Л Д , членов их семей (облигатных гетерозигот и здоровых людей) , определенного иммунологическим методом, с величиной со- держания Ц П , по данным оксидазной активности, показало, что в сы- воротке носителей вильсоновского гена может присутствовать Ц П , не обладающий оксидазной активностью [12], т. е. мутантный Ц П , специ- фический для 6В. Идентификация, выделение и изучение свойств этого белка может привести к пониманию молекулярного дефекта 6В. Материалы и методы. В работе использованы образцы сыворотки крови больных, находившихся на обследовании в Неврологическом от- делении клиники Н И И Э М АМН СССР; биоптат печени, полученный при операции по поводу невильсоновского цирроза печени; желчь из желчных протоков, катетеризированных после удаления желчного пу- зыря в связи с желчно-каменной болезнью; коммерческий препарат ЦП, изготовленный Институтом эпидемиологии и микробиологии М З Р С Ф С Р им. Л. Пастера. Двухмерный иммуноэлектрофорез, выделение вильсоновского Ц П , получение мопоспецифических антител к нему описаны в нашей преды- дущей работе [13]. Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях проводили по методу [14]. Перепое белков после электрофореза на нитроцеллюлозную плен- ку (GSWP, «Мііііроге», США) осуществляли полусухим способом [15]. В качестве жидкой фазы при иммуноблотинге использовали смесь двух частей обезжиренного молока с одной частью 0,15 M раствора NaCl , содержащего 10 мМ калий-фосфатного буфера, рН 7,4. Иммунный комп- лекс идентифицировали с помощью [125I] белка А, иодированного хи- мическим способом в присутствии хлорамина Т. Фракцию мембран гепатоцитов получали по методу [16]. Результаты и обсуждение. И м м у н о э л е к т р о ф о р е т и ч е с - к и й а н а л и з м о л е к у л я р н ы х ф о р м Ц П в с ы в о р о т - к е н о с и т е л е й в и л ь с о н о в с к о г о г е н а . В связи с изложен- ными выше соображениями нам представлялся перспективным имму- нологический скрининг сывороток носителей вильсоновского гена с целью выявления молекулярных форм Ц П с неполной иммунологиче- ской идентичностью по отношению к ЦП. Из широкого набора иммунологических методов анализа как наи- более чувствительный был выбран метод двухмерного перекрестного иммуноэлектрофореза [17]. Иммунологическому скринингу были подвергнуты сыворотки 83 пациентов обоего пола в возрасте от 8 до 67 лет из разных регионов СССР, находящихся под наблюдением в клинике Н И И Э М АМН С С С Р . Обследуемые составили две группы. В первую группу вошли 48 боль- ных с диагнозом Г Л Д , точно установленным на основании клинической симптоматики и согласующихся с ней результатов биохимического и офтальмологического обследования, а также 13 членов их семей—- облигатных гетерозигот. Таким образом, эту группу составили носители вильсоповского гена. Вторую, контрольную, группу составили 5 больных 25 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И К Л Е Т К А . 1991. Т. 7. λ* 3- € атопичсской бронхиальной астмой, характеризующейся незначитель- ным, по устойчивым наследственным снижением содержания Ц П в сы- воротке крови [18], 9 человек с хроническими заболеваниями нервной системы и 8 больных с хроническим гепатитом пенаследственпой этио- логии. То есть вторую группу составили больные с клинической симпто- матикой, напоминающей 6В, но не несущие вильсоновской мутации. В a S Рис. 1. Обнаружение ЦП-подобного белка в сыворотке носителей вильсоновского гена методом двухмерного перекрестного иммуноэлектрофореза. Вверху — схема распреде- ления агарозных слоев на иммуноэлектрофореграмме: а — 1 % - н ы й гель, разделяющий зоны; б — 1 , 5 %-ный агарозный гель с предварительно разделенным электрофорезом образцом сыворотки; в — 1 %-ный агарозный гель, содержащий 255 мкл донорской сы- воротки в 1 мл агарозного раствора; г — 1 %-ный агарозный гель, содержащий 0,04 м г / м л фракции IgG из сыворотки кроликов, иммунизированных нормальным Ц П . А — типичная иммуноэлектрофореграмма донорской сыворотки; Б — то же, сыворотка боль- ного 6В Рис. 2. Электрофорез препарата ЦП, выделенного из сыворотки донора (1) и больного Г Л Д (2): а — окрашено орто-дианизидином; б — окраска белка качестве сыворотки «здорового донора» использовали смесь 70 образ- цов донорской сыворотки, полученных на Ленинградской станции пере- ливания крови № 1. На рис. 1, Ay представлена типичная иммуноэлектрофореграмма сыворотки обследуемого из контрольной группы, в данном случае сы- воротки больного с диагнозом болезни Паркинсона. Видно, что в сы- воротке пациента присутствует одна молекулярная форма ЦП, иден- тичная Ц П сыворотки здоровых людей. Аналогичные иммунограммы по- лучены при обследовании всех пациентов, входивших в контрольную группу. Различия между иммунограммами выражались только в высоте пиков, что отражает индивидуальные колебания концентрации Ц П в периферической крови. На иммунограммах, полученных при скрининге сывороток носите- лей вильсоновского гена, над общим фронтом преципитации обнаружи- вается дополнительный пик иммунопреципитации, не окрашивающийся орто-дианизидином, специфическим хромогенным субстратом для Ц П (рис. 1, Б ) . В пределах группы обследованных носителей вильсоновско- го гена нами не обнаружены качественные различия иммуноэлектро- фореграмм, что позволило сделать заключение о присутствии в сы- воротке носителей вильсоновской мутации наряду с нормальным Ц П специфической молекулярной формы ЦП. Вильсоновский Ц П иммуно- логически не идентичен ЦП, отличается от него по электрофоретичес- кой подвижности и ферментативным свойствам. 26 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. λ* 3- В ы д е л е н и е и а н а л и з в и л ь с о п о в с к о г о Ц П . Выделе- ние электрофоретически чистого препарата Ц П из сыворотки донорской крови методом аффинной хроматографии, разработанным в пашей ла- боратории [13], осуществляется в один этап (рис. 2, а). Препарат Ц П , полученный тем же методом из сыворотки больного Г Л Д , наряду с нор- мальным ЦП содержит ЦП-подобный белок, не обладающий оксидаз- ной активностью (рис. 2 , 6 ) . Иден- тичность этого белка и белка, об- разующего дополнительную зону преципитации при двухмерном пе- рекрестном иммуноэлектрофорезе сыворотки больного Г Л Д (см. рис. 1 ,6) , была продемонстрирова- на при сравнении иммунограмм, представленных на рис. 3. Видно, что полученный препарат Ц П и сыворотка больного, из которой был получен этот препарат, содержат оди на ков ы й набор м ол е кул яρ н ых форм ЦП. Вильсоновский Ц П выделен в чистом виде при дополнительной электрофоретической очистке. К не- му получены антитела, перекрестно Рис. 3. Двухмерный перекрестный иммунбэлектрофорез сыворотки больного Г Л Д (а) и препарата ЦП, выделенного из этой сыворотки аффинным способом (б) Рис. 4. Денситометрический анализ иммуноблотинга пептидов ЦП-подобного белка. 45 мкг белка обработаны трипсином в соотношении 165 : 11 в течение 30 мин при 37 °С. Затем образцы разделены электрофорезом в 10% -ном ПААГ с 0,1 %-ным DS-Na в трех параллельных дорожках , перенесены на нитроцеллюлозный фильтр и выявлены пммунореактивные полипептиды с помощью антител к Ц П (а), к ЦП-подобному белку (б) и моноспецифических антител к ЦП-подобному белку (в). В качестве белков-мар- керов использовали: Ц П человека (130 000), бычий сывороточный альбумин (65 000) , птичий овальбумин (43 000), т я ж е л у ю и легкую цепи IgG (55 000 и 22 000 соответ- ственно) взаимодействующие также и с нормальным ЦП. Моноспецифические антитела к вильсоновскому Ц П были получены после истощения анти- сывороток на сорбенте с ковалентно связанным нормальным Ц П [13]. В дальнейшем для идентификации специфической антигенной де- терминанты в вильсоновском Ц П использовали антитела к оксидазному ЦП, вильсоновскому ЦП, а также моноспецифические антитела к пос- леднему. Электрофоретически чистый препарат вильсоновского Ц П был подвергнут мягкой протеолитической обработке трипсином в присут- ствии ингибитора химотрипсина. Затем аликвоты белка в трех пара- 27 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. λ* 3- ллельных дорожках были разделены электрофорезом в 10 %-ном ПААГ с 0,1 %-ным DS-Na и перенесены на нитроцеллюлозные фильтры. Им- мунореактивные полипептиды идентифицировали с помощью техники иммупоблотинга с использованием перечисленных выше трех типов антител. Результаты, представленные на рис. 4, показывают, что анти- тела к оксидазиому Ц П не выявляют полипептида с молекулярной мас- сой (м. м.) 80 ООО, с которым преимущественно взаимодействуют неистощенные антитела к вильсоновскому ЦП. За этим исключением оба типа антител взаимодействуют с одними и теми же полипептидами. Мопоспецифические антитела к вильсоновскому Ц П взаимодействуют Рис. 5. Иммуноблотннг белков внутриклеточных мембран из печени здорового человека с моноспецифическими антителами к вильсоновскому Ц П . 200 мкг белка мембран фрак- ционировали в 7,5 %-ном ПААГ с 0,1 %-ным DS-Na. По оси абсцисс: длина геля; по оси ординат: денситометрический профиль радиоавтографа Рис. 6. Ракетный иммуноэлектрофорез препарата Ц П больного Г Л Д ( / ) , вильсонов- ского Ц П (2) и желчи (3) против антител к нормальному Ц П (/) и к вильсоновскому Ц П ( / / ) : а — окрашено орто-дианизидином; б — окраска белка только с фрагментом размером 80 000. Известно, что в наборе протео- литических фрагментов Ц П нет полипептида с м. м. 80 000 [19]. Таким образом, в сыворотке носителей вильсоновского гена наряду с неизмененным оксидазным ЦП, содержание которого снижено, при- сутствует специфическая молекулярная форма ЦП, отличающаяся по первичной структуре от нормального ЦП. В отдельной серии опытов по изучению биосинтеза Ц П у экспе- риментальных животных мы показали, что в печени крыс, кроме Ц П , секретируемого в кровоток, синтезируется также изоформа ЦП, ос- тающаяся связанной с эндоплазматическими мембранами и не секрети- руемая в кровяное русло [20]. Обе изоформы Ц П образуются в резуль- тате посттрансляционной модификации из одинаковых по молекулярной массе пребелков [21]. Эти данные, а также полученные нами ранее сведения о нарушении созревания Ц П у больных Г Л Д [22—24] и ре- зультаты других авторов о блоке секреции Ц П при 6В [25] позволили нам предположить, что вильсоновский Ц П является не мутантным сы- вороточным Ц П , а мутантной формой несекретируемого в кровоток Ц П . Это предположение подтвердилось данными опыта, в котором с помощью моноспецифических антител к вильсоновскому Ц П было об- наружено присутствие специфического для вильсоновского Ц П 80 000- фрагмента в мембранах гепатоцитов здорового человека. В этом экспе- рименте фракцию мембран гепатоцитов, выделенных из операционного биоптата печени, подвергли электрофорезу в 7,5 %-ном ПААГ с 0,1 %-ным DS-Na. После переноса разделенных полипептидов среди них методом иммуноблотинга с моноспецифическими антителами был обна- 28 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. λ* 3- ружен полипептид размером 80 000 — специфический компонент виль- соновского Ц П (рис. 5). Ф и з и о л о г и ч е с к а я р о л ь н е с е к р е т о р н о й и з о φ о ρ - м ы Ц П . Приведенные выше данные показывают, что в печени челове- ка, кроме ЦП, секретируемого в кровь, синтезируется также мембрано- связанная изоформа ЦП. Более 30 лет назад высказано предположение о существовании внутриклеточного ЦП-подобного белка, осуществля- ющего медьтранспортную функцию в клетке [26]. А в недавней работе [27] было показано, что медь выводится из организма через желчь в комплексе с ЦП, который не обнаруживается в желчи больных Г Л Д . Фракция Ц П желчи здорового человека гетерогенна и, по мнению ав- торов, содержит наряду с Ц П , иммунологически идентичным сыворо- точному Ц П , также фрагменты этого Ц П , проявляющие лишь частич- ное иммунологическое сродство. Наше предположение состояло в том, что обнаруженный внутри- клеточный Ц П участвует в выведении меди из организма через желчь и идентичен ЦП-подобному белку, описанному авторами [27]. Это предположение было проверено в опытах, где методом ракетного иммупоэлектрофореза с использованием антител к оксидазному Ц П и моиоспецифических антител к вильсоновскому Ц П были сравнены ан- тигенные свойства препарата Ц П из сыворотки больного, высокоочи- щеппого вильсоновского Ц П и Ц П желчи. Результаты представлены на рис. 6. Видно, что желчь, как и препарат Ц П из сыворотки больно- го, содержит две молекулярные формы Ц П , одна из которых взаимо- действует с антителами к оксидазному Ц П и окисляет орто-дианизи- дип, а другая взаимодействует с моноспецифическими антителами к вильсоновскому Ц П и не обладает оксидазной активностью. Эти, а также приведенные выше данные по обнаружению внутри- клеточного ЦП, доказывающие структурное и функциональное сходство этих белков, позволяют считать, что ЦП-подобный белок желчи, виль- соновский Ц П и внутриклеточный Ц П идентичны друг другу. Таким образом, с большой долей вероятности можно предполо- жить, что физиологическая функция внутриклеточного Ц П состоит в выведении меди из организма через желчь, а при вильсоновской мута- ции происходит нарушение направления секреции специфической изо- формы ЦП. Детальный молекулярный механизм вильсоновской мутации может быть, следовательно, выявлен только после получения сравнительных данных о первичной структуре вильсоновского Ц П из сыворотки боль- ных Г Л Д и ЦП-подобного белка из желчи здорового человека, а также из сравнения структуры генов, кодирующих эти белки. Р е з ю м е Методами імуноелектрофорезу проведено скринінг зразків сироватки крові гомо- та ге- терозіготних носіїв мутації Вільсона. Показано, що поряд з нормальним церулоплазмі- ном (ЦП) у сироватці носіїв вільсонівської мутації присутній специфічний для цієї мутації ЦП-подібний білок (вільсонівський). У здорових людей ідентичний вільсо- нівському ЦП-подібний білок бере участь у виведенні міді з організму через жовч. Обговорюються механізми дефекту цього процесу у хворих хворобою Вільсона. S u m m а г у The screening of the samples of blood serum of homo- and he te rozygotes wi th Wi l son ' s d i sease gene w a s us ing imrnunoelectrophoret ic methods . It w a s shown tha t pa t i en t s w i t h Wilsonian gene a longs ide wi th normal ceru loplasmin conta in in serum ceruloplas- тпіп-like protein too. The same protein w a s involved into the process of liver cooper sec- ret ion in normal subjects . The molecu la r defect of bi l iary excretion of copper in pa t i en t s wi th Wilson ' s disease is discussed. ISSN t 0233-7G57. Б И О П О Л И М Е Р Ы II КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № З 29 С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Owen С. A. Wi l son ' s disease: the et iology, clinical aspec ts and t r ea tmen t of inheri- ted copper to toxicosis .— New York: Acad, press, 1981.— 682 p. 2. ЛЪкарь Π. Г., Макарова В. А. Гепатоцерсбральная дистрофия. — Л. : Медицина , 1984,—204 с. 3. Siernlieb J., Van den aHmer, Morrell A. G. Lysosomal defect of hepat ic copper ex- cret ion of Wi l son ' s d i sease (hepa to len t i cu la r d e g e n e r a t i o n ) / / G a s t r o e n t e r o l o g y . — 1973,— 64, N 1 . — P . 99—105. 4. Neifakh S. A., Vassiletz I. M., Shavlovski Μ. M. Molecu la r p a t h o l o g y of ce ru lop las - min / / Biochem. G e n e t . — 1 9 7 2 . — 6 , N 2 . — P . 231—238. 5. Assignment of the gene of Wilson d isease to ch romosome 13: l inkage to the e s t e ra se D l o c u s / M . F r y d m a n , B. Bonne-Tamir , L. A. F a r r e r et a l . / / P r o c . Nat . Acad. ScL USA.— 1985,—82, N 7 . — P . 1819—1821. 6. Carrier detect ion and ear ly d i agnos i s of Wi l son ' s d isease by res t r ic t ion f r a g m e n t l eng th po lymorph i sm a n a l y s i s / A . Ficus, R. Lampis , M. Devoto et al. / / J . Med. Ge- n e t . — 1 9 8 9 . — 2 6 , N 1 . — P . 78—82. 7. Characterization, m a p p i n g and express ion of the h u m a n ce ru lop la smin g e n e / F. Yang, S. L. Naylor , J . B. Lum et a l . / / P r o c . Nat . Acad. Sci. USA.— 1986,—83, N 1 1 , — P . 3257—3261. 8. Молекулярная структура гена церулоплазмина человека и его экспрессия при му- тации Вильсона—• Коновалова / А. Л . Шварцман , В. Г. Вахарловский, В. С. Гайц- хоки, С. А. Н е й ф а х / / Д о к л . А Н С С С Р . — 1 9 8 1 . — 3 , № 3 . — С . 717—720. 9. Molecular s tudies of ce ru lop lasmin (deficiency in W'ilson's disease) / / M . J . C z a j a , F. R. Wreiner, S. J. S c h w a r z e n b e r g et a l . / / J . Clin. Invest . — 1987.—66, N 7. — P . 1200—1205. 10. Нейфах С. Α., Шавловский Μ. Μ. Генетически обусловленные нарушения обмена меди при гепатолентикулярной дегенерации / / Прогресс в мед. генетике.— М. : Ме- дицина, 1978,—С. 106—150. 11. Гайцхоки В. С. М о л е к у л я р н а я гетерогенность наследственных болез-ггей человека и проблемы генной т е р а п и и / / Б и о п о л и м е р ы и клетка.— 1990.— 6, № 1.— С. 31—46. 12. Reduced ox idase act iv i ty in the ce ru lop lasmin of two famil ies wi th Wi l son ' s d i s e a s e / G. L. Gollon, G. Stocks, T. L. Dor inandy , S. S h e r l o c k / / J . Clin. Pa tho l .— 1977.—30, N 1.— P. 81—83. 13. Опыт выявления гетерозигот по мутации Вильсона — Коновалова на основе иссле- дования молекулярных форм церулоплазмина / Л . В. Пучкова , И. А. Вербина , В. Г. Вахарловский и др.//Жури, невропатологии и психиатрии .— 1989. — 89, № 12.—С. 14—18. 14 Laetnmli U. К. C l e a v a g e of s t ruc tu ra l p ro te ins d u r i n g the a s sembly of the head of bac t e r iophage T 4 / / N a t u r e . — 1970.—227, N 5 2 5 9 . — P . 680—685. 15. Improved t echnique u t i l iz ing n o n f a t dry milk for a n a l y s i s of p ro te ins and nucleic ac ids t r a n s f e r r e d to n i t roce l lu lose / D. A. Johnson , J . W. Gautsch , J . R. S p o r t s m a n , J. H. E l d e r / / G e n e Anal . Techn.— 1984.— 1, N 1 . — P . 3—8. 16. Fleischer B., Fleischer S. G lucos idase act iv i ty of bovine liver p l a sma m e m b r a n e s / / Biochim. et biophys. ac ta .— 1969.— 183, N 2 . — P . 265—275. 17. A manual of q u a n t i t a t i v e Immunoe lec t rophores i s / E d s N. H. Axelsen, J . Kroll , B. Weeke.— Oslo; Berge r ; Tromso: Univ. S to r l age t , 1973.— 216 p. 18. Снижение уровня церулоплазмина в сыворотке крови — показатель атопии при бронхиальной астме / С. С. Ж и х а р е в , Т. Ф. Субботина, М. А. Петрова и др. / / Те- рапевт. архив.— 1984.—56, № 3 . — С . 23—26. 19. Нейфах С. АВасильев В. Б., Шавловский Μ. М. Структура , каталитические свой- ства и эволюция церулоплазмина и других голубых белков / / Успехи биол. хи- мии.— 1988.— 28.— С. 102—124. 20. Экспрессия гена церулоплазмина в различных органах крысы / В. С. Гайцхоки^ О. В. Воронина, В. В. Д е н е ж к и н а и д р . / / Б и о х и м и я . — 1990.— 55, № 5 . — С. 927. 21. Биосинтез церулоплазмина в различных органах крысы / Л . В. Пучкова , В. В. Де- нежкина , Е. Т. З а х а р о в а и д р . / / Т а м же.— № 10.— С. 1798—1809. 22. Внутриклеточные белки — предшественники церулоплазмина / С . А. Нейфах, Т. Д . Алейникова, В. С. Гайцхоки и д р . / / Д о к л . А Н СССР.— 1979.— 244, № 1.— C. 238—240. 23. Молекулярный дефект синтеза и созревания церулоплазмина при болезни Виль- сона — Коновалова / Л . В. Пучкова , В. Г. Вахарловский, В. С. Гайцхоки и др. / / Генетика,— 1982.— 18, № 5 . — С . 703—712. 24. Intracellular s t a g e s in b iosyn thes i s and m a t u r a t i o n of ce ru lop lasmin / L. V. Puchko - va, V. S. Gai t skhoki , V. M. L 'vov et a l . / / M a c r o m o l e c u l a r in the f u n c t i o n i n g c e l l / Ed. A. A. B a y e v . — M o s c o w : Nauka , 1982 — P t 2 . — P . 209—227. 25. Immunocytochemical ident i f ica t ion of ce ru lop lasmin in hepa tocy tes of pa t i en t s w i t h Wi l son ' s d i s e a s e / R . S. Grau l , O. Epste in , S. Sherlock, P. J . Scheuer / / Liver .— 1982.—2, N 2 . — P . 207—211. 26. Deure C. J., Stone M. /., Frenkel E. P. Trace m e t a l s in h e m a t o p o i e s i s / / A m e r . J . He- ma to l .— 1981.— 11, N 2 . — P . 309—331. 27. Studies of cho lecys tok in in-s t imula ted bi l iary secre t ions reveal a h igh molecu la r we - ight copper -b ind ing subs t ance in no rma l sub jec t s t ha t is absen t in pa t i en t s w i t h Wi l son ' s d i s e a s e / V . Iyenga r , G. I. Brewer , R. D. Dick, C. O w y a n g / / J . Lab. C l in . Med.— 1988,—111, N 3 . — P . 267—274. Н И И эксперим. медицины А М Н СССР, Ленинград Получено 05.07.90 30 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. λ* 3-

Молекулярный дефект выведения меди через желчь у больных генатолентикулярной дегенерацией

Репозитарії

Схожі ресурси