Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом

При помощи реакции специфической амплификации изучена частота делеции F₅₀₈ у 114 больных муковисцидозом (MB) северо-западной части СССР, 31 – с Украины, 14 — из Молдавии и 8 – из Литвы. Установлено, что среди больных смешанной формой MB делеция F₅₀₈ встречается у 65 % пациентов северо-западного реги...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1991
Автори:	Иващенко, Т.Э., Лившиц, Л.А., Гембовская, С.А., Амоаший, Д.С., Веножинекис, М.Т., Горбунова, В.Н., Баранов, В.С.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1991
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153541
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом / Т.Э. Иващенко, Л.А. Лившиц, С.А. Гембовская, Д.С. Амоаший, М.Т. Веножинекис, В.Н. Горбунова, В.С. Баранов // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 49-54. — Бібліогр.: 9 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-153541
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1535412019-06-22T18:03:08Z Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом Иващенко, Т.Э. Лившиц, Л.А. Гембовская, С.А. Амоаший, Д.С. Веножинекис, М.Т. Горбунова, В.Н. Баранов, В.С. При помощи реакции специфической амплификации изучена частота делеции F₅₀₈ у 114 больных муковисцидозом (MB) северо-западной части СССР, 31 – с Украины, 14 — из Молдавии и 8 – из Литвы. Установлено, что среди больных смешанной формой MB делеция F₅₀₈ встречается у 65 % пациентов северо-западного региона и у 77%–Украины . Частота делеции в молдавской и литовской популяциях, по предварительным данным, значительно меньше (26 и 25 % соответственно). Около 96 % больных MB северо-западного региона и 92 % – Украины гомозиготны либо гетерозиготны по делеции F₅₀₈. Более 90 % хромосом с делецией F₅₀₈ имеют гаплотип 2. 2, 2, 1 для полиморфных сайтов КМ19, CS7, Mp6D9, XV2c соответственно. Полученные результаты имеют важное значение для повышения эффективности пренатальной и постнатальной диагностики MB и выявления гетерозиготного носительства. За допомогою реакції специфічної ампліфікації вивчена частота делеції F₅₀₈ у 114 хворих муковісцидозом (MB) північно-західної частини СРСР, 31–з України, 14 –з Молдавії та 8 – з Литви. Встановлено, що серед хворих змішаною формою MB делеція F₅₀₈ зустрічається у 65 % пацієнтів північно-західного регіону та у 77 %–України. Частота делеції в молдавській та литовській популяціях, за попередніми даними, значно менша (26 і 25% відповідно). Близько 96 % хворих MB північно-західного регіону та 92 % – України гомозиготні або гетерозиготні по делеції F₅₀₈. Більш як 90 % хромосом з делецією F₅₀₈ мають гаплотип 2, 2, 2, 1 для поліморфних сайтів KM19, CS7, MP6d9, XV2с відповідно. Одержані результати мають важливе значення для збільшення ефективності пре- та постнатальної діагностики MB і виявлення носіїв гетерозиготності. The ferquency of F₅₀₈ deletion has been studies by polymerase chain reaction in 114 CF patients of North-West part of the USSR, in 31 CF patients from Ukraina, 14 from Moldovia and 8 from Lithuania. 77 % of CF choromosomes from Ukrainian CF patients with severe mixed pancreatic-pulmonar forms of disease and 65 % CF chromosomes of similar CF patients from North-Western part of the USSR carried ΔF₅₀₈ while its frequency in Moldavian and Lithuania CF patients was significantly less (26 and 25 % respectively). 96% Slavonian patients of North-Western part and 92% Slavonian CF patients from Ukraina were either heterozygos or homozygos for the deletion F₅₀₈. 90 % of F₅₀₈ chromosomes possessed haplotype 2, 2, 2, 1 for polymorphic sites KM19, CS7, MP6d9, XV2c, respectively. Obvions significance at these data for the most effective pre- and postnatal diagnosis of CF and carrier detection is discussed. 1991 Article Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом / Т.Э. Иващенко, Л.А. Лившиц, С.А. Гембовская, Д.С. Амоаший, М.Т. Веножинекис, В.Н. Горбунова, В.С. Баранов // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 49-54. — Бібліогр.: 9 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0002CF http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153541 577.213.3 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
description	При помощи реакции специфической амплификации изучена частота делеции F₅₀₈ у 114 больных муковисцидозом (MB) северо-западной части СССР, 31 – с Украины, 14 — из Молдавии и 8 – из Литвы. Установлено, что среди больных смешанной формой MB делеция F₅₀₈ встречается у 65 % пациентов северо-западного региона и у 77%–Украины . Частота делеции в молдавской и литовской популяциях, по предварительным данным, значительно меньше (26 и 25 % соответственно). Около 96 % больных MB северо-западного региона и 92 % – Украины гомозиготны либо гетерозиготны по делеции F₅₀₈. Более 90 % хромосом с делецией F₅₀₈ имеют гаплотип 2. 2, 2, 1 для полиморфных сайтов КМ19, CS7, Mp6D9, XV2c соответственно. Полученные результаты имеют важное значение для повышения эффективности пренатальной и постнатальной диагностики MB и выявления гетерозиготного носительства.
format	Article
author	Иващенко, Т.Э. Лившиц, Л.А. Гембовская, С.А. Амоаший, Д.С. Веножинекис, М.Т. Горбунова, В.Н. Баранов, В.С.
spellingShingle	Иващенко, Т.Э. Лившиц, Л.А. Гембовская, С.А. Амоаший, Д.С. Веножинекис, М.Т. Горбунова, В.Н. Баранов, В.С. Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом Биополимеры и клетка
author_facet	Иващенко, Т.Э. Лившиц, Л.А. Гембовская, С.А. Амоаший, Д.С. Веножинекис, М.Т. Горбунова, В.Н. Баранов, В.С.
author_sort	Иващенко, Т.Э.
title	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом
title_short	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом
title_full	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом
title_fullStr	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом
title_full_unstemmed	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом
title_sort	сравнительный анализ частоты делеции f₅₀₈ у больных муковисцидозом
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1991
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153541
citation_txt	Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом / Т.Э. Иващенко, Л.А. Лившиц, С.А. Гембовская, Д.С. Амоаший, М.Т. Веножинекис, В.Н. Горбунова, В.С. Баранов // Биополимеры и клетка. — 1991. — Т. 7, № 3. — С. 49-54. — Бібліогр.: 9 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT ivaŝenkoté sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom AT livšicla sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom AT gembovskaâsa sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom AT amoašijds sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom AT venožinekismt sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom AT gorbunovavn sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom AT baranovvs sravnitelʹnyjanalizčastotydeleciif508ubolʹnyhmukoviscidozom
first_indexed	2025-07-14T05:00:30Z
last_indexed	2025-07-14T05:00:30Z
_version_	1837597176591548416
fulltext	с т а т е в о ю диференційністю, а т а к о ж у окремих с п е р м а т о з о ї д а х людини. О б г о в о р ю ю т ь с я перспективи в и к о р и с т а н н я не інвазивних методів д л я визначення статі внутр ішньоутроб- ного п л о д у за д о п о м о г о ю П Л Р і ол ігопраймерів , специфічних д л я X- та Y-хромосом. S u m m a r y The r e s u l t s of f e t u s s e x i n g by p o l y m e r a s e cha in reac t ion ( P C R ) w i t h d i f f e r e n t Y chro- m o s o m e specif ic o l i g o p r i m e r s in chor ion ic vil l i s amp le s , a m n i o c y t e s , in c h r o m o s o m e pre- p a r a t i o n s l ide s c r a t c h e s a s wel l a s in m a t e r n a l b lood s a m p l e s a re s u m m e r i s e d . De tec t ion of Y c h r o m o s o m e specif ic s equences in i nd iv i dua l h u m a n s p e r m s a s we l l a s in p e r s o n s wi th p h e n o t y p i c a n d g e n o t y p i c d e r i v a t i o n s in sex d i f f e r e n t i a t i o n a r e ca r r i ed ou t . P e r s p e - ct ive fo r n o n i n v a s i v e i n t r a u t e r i n e f e t u s s e x i n g by m e a n s of P C R w i t h X a n d Y c h r o m o - s o m e specif ic o l i g o p r i m e r s a re d i s cus sed . С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Enzymatic a m p l i f i c a t i o n of b e t a - g l o b i n g e n o m i c s equences a n d r e s t r i c t ion s i te analy- s is f o r d i a g n o s i s of s i d e cell a n e m i a / R. Saiki , S. S c h a r f , F. F a l o o n a et al . / / Sci- ence.— 1987.— 230, N 1 8 . — P . 1350—1354. 2. Prenatal d i a g n o s i s of cys t ic f i b ros i s f o r de tec t ion of KM-19 p o l y m o r p h i s m / G. L. FeI- d m a n , R. W i l l i a m s o n , A. L. B e a u d e t , W . E. O ' B r i e n / / L a n c e t . — 1988.— N 8610.— P . 102. 3. Kogan S. C., Doneity M., Gitschier J. A n i m p r o v e d m e t h o d f o r p r e n a t a l d i a g n o s i s of gene t i c d i s e a s e s by a n a l y s i s of a m p l i f i e d D N A s e q u e n c e s / / N e w E n g l . J . M e d . — 1987 .—317 , N 1 6 . — P . 985—990. 4. У-90, a DNA probe for the sensitive detection of Y-derived marker chromosomes and m o s a i c i s m / U. Mul l e r , T. A. D o n l o n , S . H. K u n k e l et al. / / H u m . G e n e t . — 1987.— 75, N 2.—P. 109—113. 5. Fetal l y m p h o c y t e s and t r o p h o b l a s t ce l l s in the m a t e r n a l c i r cu la t ion / A. E. Covone , D. M u t t o n , A. D. v a n D a m et al . / / P roc . of t he In t . s y m p . on e a r l y p r e n a t a l d i a g n o - sis: p r e sen t and f u t u r e (12—13 Oc tobe r 1984).— Naples , 1 9 8 4 . — P . 108. 6. Selypes A., Lorencz R. A n o n i n v a s i v e m e t h o d fo r d e t e r m i n a t i o n of the sex a n d ka - r y o t y p e of the f e t u s f r o m the m a t e r n a l b lood / / H u m . Gene t . — 1988 — 7 9 , N 6.— P. 357—359. 7. Prenatal sex d e t e r m i n a t i o n by D N A a m p l i f i c a t i o n f r o m m a t e r n a l pe r iphe ra l b l o o d / Y.-M. D. Lo, J . S. W a i n s c o a t , M. D. G. Gi l lmer et a l . / / L a n c e t . — 1 9 8 9 , — N 8676.— P . 1363—1365. 8. Маниатис Т., Фрич Э., Сембрук Дж. М о л е к у л я р н о е клонирование . — М. : Мир, 1986,— 420 с. 9. Баранов В. С. М е т о д с т р я х и в а н и я — о т п е ч а т ы в а н и я — н а д е ж н ы й способ приготов- ления п р е п а р а т о в х о р и о н а / / Ц и т о л о г и я . — 1989.— 31, № 2 . — С. 251—254. 10. Fine s t r u c t u r e gene t i c s m a p p i n g of h u m a n c h r o m o s o m e s u s i n g the p o l y m e r a s e cha in reac t ion on s i n g l e spe rm: e x p e r i m e n t a l d e s i g n c o n s i d e r a t i o n s / M. Boehnke , N. A r n - heim, H . Li, F. S. Co l l ins // Amer . J . H u m . Gene t .— 1989 ,—45, N 1 . — P . 21—32. Ин-т а к у ш е р с т в а и гинекологии А М Н С С С Р , Л е н и н г р а д П о л у ч е н о 05.07.90 У Д К 577.213.3 ' · Т. Э. Иващенко, Л. А. Лившиц, С. А. Гембовская, Д. С. Амоаший, М. Т. Веножинекис, В. Н. Горбунова, В. С. Баранов СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЧАСТОТЫ ДЕЛЕЦИИ F 508 У БОЛЬНЫХ МУКОВИСЦИДОЗОМ * При помощи реакции специфической амплификации изучена частота делеции F508 у 114 больных муковисцидозом (MB) северо-западной части СССР, 31 — с Украины, 14 — из Молдавии и 8 — из Литвы. Установлено, что среди больных смешанной фор- мой MB делеция F508 встречается у 65 % пациентов северо-западного региона и у * Р а б о т а частично финансируется Всемирной О р г а н и з а ц и е й З д р а в о о х р а н е н и я ( Г р а н т G 3 / 1 8 1 / 1 3 9 ) . © Т. Э. ИВАЩЕНКО, Л. А. Л И В Ш И Ц . С. А. ГЕМБОВСКАЯ, Д . С. АМОАШИЙ, М. Т. В Е Н О Ж И Н С К И С , В. Н. ГОРБУНОВА, В. С. БАРАНОВ, 1991 ISSN 0233-7G57. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 3 4 — 1-129 49 7 7 % — У к р а и н ы . Частота делеции в молдавской и литовской популяциях, по предва- рительным данным, значительно меньше (26 и 25 % соответственно). Около 96 % боль- ных MB северо-западного региона и 92 % — Украины гомозиготны либо гетерозигот- ны по делеции F508. Более 90 % хромосом с делецией F508 имеют гаплотип 2. 2, 2, 1 для полиморфных сайтов КМ19, CS7, Mp6D9, XV2c соответственно. Полученные ре- зультаты имеют важное значение для повышения эффективности пренатальной и пост- натальной диагностики MB и выявления гетерозиготного носительства. Введение. Муковисцидоз (MB) относится к числу моногенных наслед- ственных заболеваний с аутосомно-рецессивным типом наследования. Поскольку каждый 20-й представитель белой расы является гетерози- готным носителем мутантного гена MB и один из 2000 детей рождается с этим заболеванием, MB представляет собой серьезную медицинскую и социальную проблему во многих странах мира, в том числе и в нашей стране [1, 2]. Ген MB локализован на 7-й хромосоме в области 7q31. Выделен ряд ДНК-маркеров , тесно сцепленных с геном MB в локусах IRP, D7S23, D7S399, выявляющих полиморфизм длины рестрикцион- ных фрагментов ( П Д Р Ф ) . Аллели этих локусов обнаруживают выра- женное неравновесное сцепление с MB мутациями. Установлено также, что частоты этих аллелей (гаплогипов) на нормальных и M B + хромо- сомах существенно варьируют в различных популяциях и этнических группах [3]. На этом основании высказана гипотеза о том, что в се- веро-европейской популяции существует одна доминирующая мутация гена MB, тогда как в южно-европейской — есть по крайней мере одна или несколько других мутаций [3]. В 1989 году совместными усилиями канадских и американских исследователей удалось не только осуще- ствить точную молекулярную идентификацию гена MB, но и выделить его к Д Н К , определить ее первичную структуру, детально охарактери- зовать ранее неизвестный мембранный белок класса Р-гликопротеинов, наследственный дефект которого и является непосредственной причи- ной MB [4]. Этот гликопротеин получил название трансмембранного регуляторного белка MB — Т Р Б М В [5J. Сам ген MB имеет размеры 250 тыс. пар оснований (п. о.) и содержит 26 экзонов, его к Д Н К со- стоит из 6 129 п. о. [4, 5] . Этими же авторами в 70 % MB+ хромосом была обнаружена однотипная мутация, которая представляет собой делецию трех нуклеотидов 10-го экзона гена MB. Мутация получила название AF508, так как приводит к исчезновению фенилаланина в 508-м положении Т Р Б М В [6]. Установлено, что у большинства пациен- тов с недостаточностью функций поджелудочной железы мутация AF508 присутствует в гомозиготном состоянии [6]. Обнаружено так- же, что частота AF508 варьирует в различных популяциях [7]. При этом наблюдается ярко выраженный градиент распределения частот этой мутации с северо-запада Европы на юго-восток. В настоящей ра- боте приводятся результаты изучения частоты AF508 у больных MB в некоторых районах европейской части нашей страны, а также сцепле- ния ее с гаплотипами Д Н К локусов IRP, D7S23, D7S399, выявляемых зондами (XV2c , КМ19, MP6d9, CS7) при помощи метода полимераз- ной цепной реакции синтеза Д Н К . Материалы и методы. Исследование проведено на 167 пациентах с MB из северо-западной части СССР (114), Украины (31), Молдавии (14) и Литвы (8). Во всех случаях клинический диагноз MB подтверж- ден биохимическим тестом на хлориды пота. В зависимости от клини- ческого проявления различали смешанную форму (более тяжелая , с поражением легких и поджелудочной железы) и легочную (преоблада- ние легочной патологии). В качестве биологического материала использовали лейкоциты периферической крови больных. Часть исследо- ваний проведена на материале, полученном для пренатальной диагно- стики от беременных женщин группы высокого риска после установле- ния и верификации биохимическими методами диагноза MB у плода. Реакцию специфической амплификации проводили при помощи автоматического циклера Perkin — Elmer («Cetus», США) с использо- ванием термофильной ДНК-полимеразы Thermus thermophilics (произ- 50 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 3 водство кооператива «Плодородие») в соответствии с ранее описанной схемой [8]. Олигопраймеры (каждый длиной 20 нуклеотидов) для амплификации участков Д Н К , несущих полиморфные сайты рестрик- ции локусов I R P (XV2c), D7S23 (КМ19, С57) , D7S399 (MP6d9), а так- ж е олигопраймеры, фланкирующие участок делеции F508 гена MB, синтезированы Н П К «Энзим» (Вильнюс). После амплификации обла- сти делеции F508 отбирали аликвоты (10—15 мкл) , которые подвер- гали электрофорезу в 12 %-ном полиакриламидном геле (ПААГ) с Т а б л и ц а 1 Частота AF508 в различных регионах СССР The frequency of AF508 in different population's of European part of the USSR Форма MB Севе- р о - з а - лад- ная часть СССР Укра- ина Мол- д а в и я Литва Форма MB Севе- ро-за - падная часть СССР Укра- ина Мол- д а в и я Литва Смешанная , % 65 77 33 25 Легочная, % 5 η 22» 6 2 28 16 η 44 длиной разгона 30 см и обрабатывали бромистым этидием. У особей, не имеющих делеции F508, на электрофореграмме определялась одна полоса, соответствующая 83 п. о., у гомозигот по делеции была видна т а к ж е одна полоса — 80 п. о., а у гетерозигот присутствовали обе. Полиморфные сайты рестрикции для ДНК-зондов XV2c, КМ19, CS7, MP6d9 определяли после обработки амплифицированных фрагмен- тов Д Н К рестрикционными эндонуклеазами TaqIj PstI, Hinfcl, MspI соответственно и электрофореза в 8 %-ном ПААГ с последующей ок- раской бромистым этидием. Результаты эксперимента обрабатывали по правилам вариацион- ной статистики. Результаты и обсуждение. Данные по изучению частоты AF508 на мутантных (MB+) хромосомах больных из различных популяций евро- пейской части страны представлены в табл. 1. Н а и б о л ь ш а я частота му- т а ц и и — 77 % — н а б л ю д а е т с я в украинской популяции, тогда как в се- веро-западной части С С С Р частота достоверно ниже — 65 % (χ2 = 3,25). Возможно, в определенной мере это связано с тем, что часть северных славян имеет угро-финское происхождение. В этой этнической группе MB встречается реже и частота делеции снижена [9]. Частота AF508 в молдавской и литовской популяциях о к а з а л а с ь примерно одинаковой и в среднем в 2—3 раза ниже, чем в славянской. Отчасти, по-видимому, это связано с малой величиной выборок. Вмес- те с тем в отношении молдавской популяции наши результаты хорошо согласуются с обобщенными европейскими данными, указывающими на прогрессивное снижение частоты делеции F508 в направлении север—юг при одновременном увеличении доли иных мутаций гена MB, приво- дящих к заболеванию [7]. Низкая частота мутации AF508 в литовской популяции может ре- ально указывать на уникальные генетические особенности этой этни- ческой группы, что подтверждается результатами П Д Р Ф - а н а л и з а Д Н К локусов, связанных с геном MB литовской популяции. Однако это предположение нуждается в серьезной проверке на большем клиниче- ском материале, с хорошей биохимической верификацией диагноза MB. Анализ данных по частоте AF508 при различных клинических фор- мах MB (см. табл. 1) т а к ж е показывает, что эта мутация особенно ха- рактерна для смешанной формы, тогда как при более легкой легочной форме она встречается лишь в 5 %. случаев и только в гетерозиготном состоянии. Вместе с тем уместно подчеркнуть, что наличие неидентифи- цированных мутаций гена M B можно предполагать и при смешанных I S S N 0233-7G57. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 3 4 — 1-129 51 формах заболевания. Так, анализ генотипов больных смешанной фор- мой MB, при которой, как правило, поражается и поджелудочная же- леза, свидетельствует о том, что только 36 % больных в северо-запад- ном регионе и 61 % больных с Украины гомозиготны по делеции F508, т. е. только эта мутация определяет наличие заболевания (табл. 2) . В то же время у остальных пациентов делеция представлена в гетеро- зиготном состоянии, а у некоторых, число которых невелико ( 4 — 6 % ) , Т а б л и ц а 2' Распределение AF 508 в генотипах больных при смешанной форме MB в различных популяциях Европейской части СССР Distribution of AF508 in genotypes of CF patients (mixed clinical forms) in different populations of European part of the USSR Генотип Северо-западная часть СССР (%) Украина (%) Молдавия (%) Литва (%) A F / A F 41 (36) 19 (61,3) 5 (35) A F / + 69 (60) 10 (32,3>) — 4 (50) +/+ 4 ( 4 ) 2 (6,4) 9 (65) 4 (50) Всего 114 31 14 S Т а б л и ц а 3 Корреляция AF508 с различными гаплотипами локцсов IRP (XV2c/TaqI), D7S23 (KM19/PstI, CS7/Hin6I) и D7S399 (MP6d9/MspI) Correlation of AF508 deletion with various haploiypes of the loci IRP (XV2c/TaqI) , D7S23 (КМ19/PstIу CS7/Hin6I) and D7S399 (MP6d9/MspI) П р и м е ч а н и е . 1, 2 — отсутствие и наличие сайта рестрикции соответственно. делеции вообще не обнаружено. Интересно, что в молдавской группе больных смешанной формой MB 5 оказались гомозиготами и 9 не имели мутации AF508, тогда как в литовской группе из 8 больных 4 были гетерозиготами, гомозиготных носителей делеции не обнаружено. Таким образом, именно среди больных MB литовской и молдавской популяции поиски новых мутаций гена MB, отличных от мутации AF508, особенно перспективны. Существенно также отметить, что наличие мутации зарегистриро- вано в общей сложности у 96 % всех больных, имеющих смешанную, форму MB, в северо-западном регионе СССР и у 94 % больных украин- ской группы. Следовательно, выявление делеции в генотипе больного с подозрениями на MB в случае неясной симптоматики и неоднознач- ных результатов потового теста может служить достаточно надежным диагностическим признаком заболевания для славянской популяции Украины и северо-западного региона страны. В значительно меньшей степени этот критерий приемлем для этнических групп Молдавии и Литвы. Однако данный вывод требует тщательной проверки на боль- шем клиническом материале. Сопоставляя результаты молекулярного анализа AF508 с данными клинического течения заболевания, нельзя не обратить внимания на то, что при тяжелых формах MB как мини- мум одна из мутантных хромосом больного несет AF508, тогда как при M B средней тяжести лишь 50 % пациентов имеют эту мутацию в гете- розиготном состоянии, а в гомозиготном — она не встречается. 52 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 3 Анализ сцепления AF508 с аллелями Д Н К локусов IRP, D7S23, D7S399, хромосомы 7 при помощи маркеров XV2c, КМ19, CS7, MP6d9 (табл. 3) показывает, что эта мутация всегда сцеплена с гаплотипом, характеризующимся наличием сайта рестрикции для КМ19, CS7, MP6d9 [2] и в подавляющем большинстве случаев (91 %) с отсутст- вием сайта рестрикции для XV2с [1]. Следовательно, в наших исследо- ваниях, так же как и в многочисленных наблюдениях зарубежных ав- торов [8], мутация AF508 в большинстве случаев ассоциируется с гап- лотипом 1, 2, 2, 2 для XV2c, КМ19, CS7, MP6d9 соответственно. Это подтверждает предположение о том, что именно с хромосомой данного гаплотипа связано возникновение мутации AF508 у представителей бе- лой расы. Случаи ассоциации мутации AF508 с другими гаплотипами этих локусов следует трактовать как результат митотических рекомби- наций [6]. Полученные в работе результаты позволяют уже сейчас существен- но увеличить эффективность диагностики MB и открывают принципи- ально новые возможности для выявления гетерозиготного носительст- ва мутантного гена в популяциях, что может иметь решающее значе- ние в профилактике этого тяжелого наследственного заболевания. P е з ю м е З а допомогою реакції специфічної ампліфікації вивчена частота делеції F508 у 114 хворих муковісцидозом (MB) північно-західної частини С Р С Р , 3 1 — з України, 14 — з Молдаві ї та 8 — з Литви. Встановлено, що серед хворих змішаною формою MB деле- ція F508 зустрічається у 6 5 % пацієнтів північно-західного регіону та у 7 7 % — У к р а ї - ни. Частота делеції в молдавській та литовській популяціях, за попередніми даними, значно менша (26 і 2 5 % відповідно). Близько 9 6 % хворих MB північно-західного регіону та 92 % — України гомозиготні або гетерозиготні по делеції F508. Більш як 90 % хромосом з делецією F508 мають гаплотип 2, 2, 2, 1 д л я поліморфних сайтів KM19, CS7, MP6d9, XV2с відповідно. Одержані результати мають важливе значення д л я збільшення ефективності пре- та постнатальної діагностики MB і виявлення но- сіїв гетерозиготності. S u m m a r y The f^rquency of F508 deletion has been s tudies by po lymerase chain reaction in 114 C F pa t i en t s of Nor th-West par t of the U S S R , in 31 C F pa t ien t s f r o m Ukra ina , 14 f rom Moldovia and 8 f rom Li thuania . 77 % of C F choromosomes f rom Ukra in ian C F pa t i en t s wi th severe mixed pancrea t i c -pu lmonar fo rms of disease and 65 % C F chromosomes of s imilar C F pa t ien t s f rom Nor th-Western par t of the U S S R carried AF508 while its fre- quency in Moldav ian and Li thuania C F pa t ien ts w a s s ign i f ican t ly less (26 and 25 % respect ively) . 9 6 % Slavon ian pa t ien t s of Nor th -Wes te rn par t and 9 2 % S lavon ian C F pa t i en t s f rom Ukra ina were cither he te rozygos or h o m o z y g o s for the deletion F508. 90 % of F508 chromosomes possessed haplo type 2, 2, 2, 1 for polymorphic si tes KM19, CS7, MP6d9, XV2c, respectively. Obvions s igni f icance at these da ta for the mos t ef- fective pre- and pos tna ta l d i agnos i s of C F and carr ier detect ion is discussed. С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Капранов H. Я . Течение и исход муковисцидоза у детей после современного лече- ния и реабилитации: Автореф. дис. . . . д-ра мед. наук.— M., 1986.— 37 с. 2. Morris Α., Super Μ. Cyst ic f ibrosis . The fac ts .— Oxford : Univ. press , 1987.— 264 p. 3. Lineage disequil ibrium between cystic f ibrosis and linked DNA po lymorph i sms in I ta l ian famil ies: a co l labora t ive s t u d y / X . Estivil l , M. Far ra l l , R. Wi l l i amson et a l . / / Amer. J. Hum. Genet .— 1988,—43, N 1 , — P . 23—28. 4. Identification of the cystic f ibros is gene: chromosome w a l k i n g and j u m p i n g / J . Rom- mens, M. Iannuzzi , B. Kerem et al. / / Science.— 1 9 8 9 . — 2 4 5 . — P . 1059—1065.. 5. Identification of cystic f ibrosis gene: c lon ing and charac te r iza t ion of complemen ta ry D N A / J . Riordan, J. Rommens t B. Kerem et a l . / / I b i d . — P . 1066—1073. 6. Identification of the cystic f ibros is gene: genet ic ana lys i s / B. Kerem, J. Rommens r J . B u c h a n a n et a l . / / I b i d . — P . 1073—1080. I S S N 0233-7G57. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 3 4 — 1-129 53 7. Devoto Μ. Gradient of distr ibution in Europe of the m a j o r C F muta t ion and of i ts associated h a p l o t y p e / / H u m . Genet.— 1990 — 8 3 , N 2 . — P . 317—325. •8. Анализ рестрикционного полиморфизма ДНК-локуса D7S23 при помощи зонда KM-19 методом цепной реакции синтеза Д Н К в популяции и в семьях больных му- ковисцидозом / Т. Э. Иващенко, В. Н. Горбунова, М. В. Асеев и др. / / Биополимеры и клетка,— 1990.—6, JVb 2 .—С. 55—60. 9. Cystic f ibrosis in F in land a molecular and genealogical s t u d y / J . Kere, R. Norio, E. Savi laht i et a l . / / H u m . Genet.— 1989.—83, N 1 . — P . 20—25. Ин-т акушерства и гинекологии АМН СССР, Ленинград Получено 05.07.90 Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев УДІС 577.212:577.352.27 С. П. Шпилевая, И. Е. Костецкий, Т. В. Столяр, Л. И. Лихачева, Л. Г. Жарова, И. М. Спивак, В. Д. Жестянников, В. А. Кордюм, Д. М. Иродов ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ RecA-БЕЛКА С ХРОМАТИНОМ ЯДЕР (ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТ) Πродемонстрирована возможность использования гена гесА в качестве модельного ге- на при изучении экспрессии экзогенной ДНК in vitro и in vivo. Визуализация ЯесА-белка в цитоплазме и ядрах проведена непрямым иммуно- флюоресцентным методом. Бактериальный RecA-белок тестировали в культуре HeLa после ее обработки чистым ЯесА-белком или белком, заключенным в липосомы, а так- же после трансфекции культуры сконструированной плазмидой pKCR2. Отмечена ви- зуализация RecA-белком хроматина ядер, которая зависела от прохождения клеткой фаз митотического цикла. В системе in vivo бактериальная β-галактозид аза и RecA-белок обнаруживались через 48 ч после проведения котрансформации печени мышей плазмидами pGA293A и pKCR2, заключенными в липосомы. Высокий уровень экспрессии гесА-гена в гепато- цитах экспериментальных животных позволяет использовать его в модельных системах при изучении экспрессии экзогенной ДНК in vivo. Введение. В клетках эукариот, как и в клетках прокариот, могут су- ществовать некоторые SOS-функции. Уже в ранних работах было по- казано, что клетки млекопитающих способны отвечать на ингибирова- ние репликации индукцией новых белков (в клетках Escherichia coli в этом случае генерируется сигнал, вызывающий индукцию RecA-белка) [1]. Могут ли продукты генов гесА (или их аналогов), имеющих раз- личное происхождение, функционально замещать друг друга? Белок RecA Е. coli представляет собой небольшой по молекулярной массе белок, принимающий участие в процессах рекомбинации, репликации, репарации, мутагенеза, клеточного деления и др. [2]. В ряде работ показано наличие у эукариот белковых факторов, функционально ана- логичных белку Е. coli [3—6]. В реакциях in vivo эти белки могут осуществлять гомологичное спаривание сверхспиральной Д Н К одно- нитчатой Д Н К [3, 4], перенос нитей Д Н К между соответствующими ДНК-субстратами [5]. Некоторые из них, например RRAI [6], лока- лизованы в районе внутренней мембраны ядра. Белок RecA E. coli мо- жет использовать в качестве субстрата эукариотическую Д Н К . Представлялось интересным изучение возможности функциониро- вания этого белка в эукариотических клетках in vivo. С этой целью' была изучена вероятность проникновения белка RecA через цитоплаз- матическую мембрану в клетку и ядро. Материалы и методы. Д л я введения в культуру HeLa и проведе- ния опытов in vivo использованы плазмиды pKCR2, pGA293A и RecA- белок. Конструкция pKCR2 представляет собой плазмиду pKCR [7] с клонированным по BamHI-сайту полноразмерным гесА-геном Е. coli. С) с . П. Ш П И Л Е В А Я , и . Е. КОСТЕЦКИЙ, Т. В. СТОЛЯР, Л. И. ЛИХАЧЕВА, Л. Г. Ж А Р О В А , И. М. СПИВАК, В. Д . Ж Е С Т Я Н Н И К О В . В. А. КОРДЮМ, Д . М. И Р О Д О В , 1991 54 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1991. Т. 7. № 3

Сравнительный анализ частоты делеции F₅₀₈ у больных муковисцидозом

Репозитарії

Схожі ресурси