Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus
Определены белки, доступные трипсину, в составе рибосом и рибосомных субчастиц из экстремального термофила T. thermophilus. В 70S рибосомах доступны трипсину 7 белков малой (30S) субчастицы –TS2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 и 5 белков большой (50S) субчастицы – TL5, TL8, TL9, TL23, TL24. Диссоц...
Збережено в:
| Дата: | 1990 |
|---|---|
| Автори: | , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1990
|
| Назва видання: | Биополимеры и клетка |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153692 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus / М.М. Юсупов, Т.Н. Спирина // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 4. — С. 65-69. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-153692 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1536922019-06-15T01:31:00Z Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus Юсупов, М.М. Спирина, Т.Н. Структура и функции биополимеров Определены белки, доступные трипсину, в составе рибосом и рибосомных субчастиц из экстремального термофила T. thermophilus. В 70S рибосомах доступны трипсину 7 белков малой (30S) субчастицы –TS2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 и 5 белков большой (50S) субчастицы – TL5, TL8, TL9, TL23, TL24. Диссоциация 70S рибосом на субчастицы не приводит к появлению дополнительных белков, доступных трипсину. Последнее подтверждает сделанный ранее вывод об отсутствии рибосомных белков между субчастицами. Визначено білки, доступні трипсину, у складі рибосом і рибосомних субчастинок з екстремального термофілу T. thermophilus. У 70S рибосомах доступними трипсину є сім білків малої (30S) субчастинки –TS2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 і п’ять білків великої (50S) субчастинки – TL5, TL8, TL9, TL23, TL24. Дисоціація 70S рибосом на субчастинки не призводить до появи додаткових білків, доступних трипсину. Останнє підтверджує зроблений раніше висновок про відсутність рибосомних білків між субчастинками. Proteins accessible to trypsin in ribosome and in ribosomal subunits from extreme thermophilic Thermus thermophilus have been analyzed. In 70S ribosomes 7 proteins of the small (SOS) subunit, TS2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 and 5 proteins of the large (SOS) subunit, TL5, TL8, TL9, TL23, TL24 were accessible to trypsin. Dissociation of 70S ribosomes into subunits leads to no appearance of proteins accessible to trypsin. This confirms previous conclusion on the absence of ribosomal proteins between the subunits (Yusupov M. and Spirin A., FEES Lett., 1986, 197, 229—233). 1990 Article Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus / М.М. Юсупов, Т.Н. Спирина // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 4. — С. 65-69. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00027F http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153692 577.963.3 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров |
| spellingShingle |
Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров Юсупов, М.М. Спирина, Т.Н. Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus Биополимеры и клетка |
| description |
Определены белки, доступные трипсину, в составе рибосом и рибосомных субчастиц из экстремального термофила T. thermophilus. В 70S рибосомах доступны трипсину 7 белков малой (30S) субчастицы –TS2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 и 5 белков большой (50S) субчастицы – TL5, TL8, TL9, TL23, TL24. Диссоциация 70S рибосом на субчастицы не приводит к появлению дополнительных белков, доступных трипсину. Последнее подтверждает сделанный ранее вывод об отсутствии рибосомных белков между субчастицами. |
| format |
Article |
| author |
Юсупов, М.М. Спирина, Т.Н. |
| author_facet |
Юсупов, М.М. Спирина, Т.Н. |
| author_sort |
Юсупов, М.М. |
| title |
Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus |
| title_short |
Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus |
| title_full |
Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus |
| title_fullStr |
Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus |
| title_full_unstemmed |
Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus |
| title_sort |
доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах thermus thermophilus |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1990 |
| topic_facet |
Структура и функции биополимеров |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153692 |
| citation_txt |
Доступность рибосомных белков трипсину в рибосомах Thermus thermophilus / М.М. Юсупов, Т.Н. Спирина // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 4. — С. 65-69. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT ûsupovmm dostupnostʹribosomnyhbelkovtripsinuvribosomahthermusthermophilus AT spirinatn dostupnostʹribosomnyhbelkovtripsinuvribosomahthermusthermophilus |
| first_indexed |
2025-07-14T05:10:32Z |
| last_indexed |
2025-07-14T05:10:32Z |
| _version_ |
1837597807143288832 |
| fulltext |
8. Buckingham R. H., Kurlatid С. G. Interact ion between UGA-suppressor tRNA T r p and
the ribosome; mechanisms of tRNA selection // Transfer RNA: Biol. Aspects.— New
York: Cold Spr ing Harbor , 1980.—P. 421—426.
9. Морозов И. AГамбарян А. С., Венкстерн Т. В. тРНК(с.денин-1)-метилтрансфераза
из Thermus thermophilus // Молекуляр. биология.— 1984 — 18, № 5.— С. 1363—1368.
10. Kirillov S. V., Makhno V. I., Semenkov Yu. P. Mechanism of codon-ant icodon inte-
raction in ribosomes. Direct funct ional evidence tha t isolated 30S subuni ts contain 2
codon-specific binding sites for t R N A / / N u c l . Acids R e s — 1980.—8, N 1.—
P. 183—196.
11. Алкилирование TPHK p h e 4- (К-2-хлорэтил-Н-метиламино)бензил-5'-фосфамидом
d (ATTTTCA) I О. И. Гимаутдинова, В. В. Горн, И. И. Горшкова и д р . / / Б и о о р г .
химия.— 1986.— 12, No 4.— С. 490—498.
12. Бабкина Г. Т., Карпова Г. Г., Матасова Н. Б. Аффинная модификация рибосом
Escherichia coli вблизи акцепторного тРНК-связывающего участка // Молекуляр.
биология.— 1984.— 18, № 5 .—С. 1287—1296.
13. Взаимодействие района S4U8 TPHK p h e с ' тРНК(аденин-1)-метилтрансферазой из
Thermus thermophilus / Т. В. Венкстерн, Д . М. Грайфер, Э. А. Грачева и др. //
Биоорг. химия.— 1987.— 13, № 10.—С. 1344—1350.
14. Mechanism of codon-anticodon interact ions in ribosomes. Codon-ant icodon interact ion
of aminoacyl- tRNA at the r ibosomal donor site / S. V. Kirillov, K- Sh. Kemkhadze,
E. M. Makarov et al. // FEBS Lett.— 1980.— 120, N 2.— P. 221—224.
15. Douthwaite S., Garrett R. A., Wagner R. Comparison of Escherichia coli tRNA p h e in
the free state, in the t e rnary complex and in the r ibosomal A and P sites by chemical
probing // Eur. J. Biochem.— 1983.— 131, N 2.— P. 261—269.
16. Bertram SGoringer U., Wagner R. S t ruc tura l invest igat ion of Phe- tRNA p h e f rom
Escherichia coli bound to the ribosomal A site // Nucl. Acids Res.— 1983.— 11, N 3.—
P. 575—585.
17. Peattie D. A., Herr W. Chemical probing of the tRNA-ribosome c o m p l e x / / P r o c . Nat.
Acad. Sci. USA.— 1981.—78, N 4 . — P . 2273—2277.
18. Purification and character izat ion of tRNA (Adenine- l ) -methyl t ransferase f rom Thermus
thermophilus s t ra in 7 1 / 1 . A. Morozov, A. S. Gambaryan , T. N. Lvova et a l . / / E u r .
J. Biochem.— 1982.— 129, N 2 . — P . 429—439.
19. Использование флуоресценции триптофановых остатков тРНК(аденин-1)-метилтран-
сферазы для исследования структуры фермента и его комплексов с т Р Н К /
О. Ф. Борисова, И. А. Морозов, Н. В. Кузнецова и др. // Молекуляр. биология.—
1986.— 20, № 4 .—С. 1126—1137.
Ин-т биоорг. химии Сиб. отд-ния АН СССР, Новосибирск Получено 28.08.89
Ин-т молекуляр. биологии АН СССР, Москва
УДК 577.963.3
© Μ. М. Юсупов, Т. Н. Спирина, 1990
ДОСТУПНОСТЬ РИБОСОМНЫХ БЕЛКОВ ТРИПСИНУ
В РИБОСОМАХ THERMUS THERMOPHILUS
Определены белки, доступные трипсину, в составе рибосом и рибосомных субчастиц
из экстремального термофила Т. thermophilus. В 70S рибосомах доступны трипсину
7 белков малой (30S) субчастицы —T S2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 и 5 белков
большой (50S) субчастицы — TL5, TL8, TL9, TL23, TL24. Диссоциация 70S рибосом на
субчастицы не приводит к появлению дополнительных белков, доступных трипсину. По-
следнее подтверждает сделанный ранее вывод об отсутствии рибосомных белков меж-
ду субчастицами.
Введение. Метод трипсинолиза был разработан для определения бел-
ков, экспонированных на поверхности рибосом Escherichia coli, и ис-
следования изменений поверхности рибосом в процессе их функциони-
рования [1]. Было показано, что трипсин обладает высокой чувстви-
тельностью к изменениям в структуре рибосом и в то же время не
разрушает рибосому, модифицируя лишь часть белков, расположенных
на поверхности.
Этот метод также был использован для сравнения доступности
трипсину рибосомных белков в рибосомах и диссоциированных субчас-
тицах. Белки, более доступные трипсину в диссоциированных рибосом-
ных субчастицах, были отнесены к белкам, расположенным на контак-
тирующих поверхностях субчастиц [2]. Однако диссоциация рибосомы
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4 5 — 0-239 6 5
на субчастицы при понижении концентрации ионов магния в среде, как
правило, приводит к изменениям в структуре рибосомных субчастиц
[3]. Следовательно, наблюдаемые различия в доступности рибосомных
белков в целой рибосоме и в отдельных субчастицах можно объяснить
изменениями в структуре рибосомных субчастиц.
В настоящей работе использован метод трипсинолиза для сравне-
ния экспонированности рибосомных белков в составе исходных рибо-
сом и в составе диссоциированных рибосомных субчастиц из бактерий
Т. thermophilics. В этом случае ожидали, что ввиду большей стабиль-
ности рибосомной структуры по сравнению с мезофильными рибосома-
ми диссоциация на субчастицы при понижении магния в среде не вы-
зовет изменений в структуре субчастиц. Было показано, что диссоциа-
ция рибосом не приводит к экспонированию дополнительных белков на
поверхности рибосомных субчастиц.
Материалы и методы. 70S Т. thermophilics получали, как описано в работе [4]. Пе-
ред экспериментами по трипсинолизу рибосомы переводили в буфер, содержащий
20 мМ трис- HCl, рН 7,5, 20 мМ MgCl2 , 150 мМ NH4Cl, 1 мМ дитиотреитол и для по-
лучения смеси рибосомных субчастиц концентрацию ионов магния снижали до 5 мМ.
Диссоциацию рибосом на субчастицы контролировали по рассеянию света при 400 нм.
Эксперименты по трипсинолизу проводили, как описано в работе [1], увеличив концент-
рацию трипсина в инкубационной смеси в 40 раз. К рибосомам в соответствующем бу-
фере добавляли трипсин, растворенный в том же буфере в концентрации 1 мг/мл. Ко-
нечная концентрация рибосом в инкубационной смеси 5 мг/мл; объем инкубационной
смеси—100 мкл. Весовое соотношение рибосомы/трипсин было равно 50/1. Смесь ин-
кубировали от 5 до 30 мин при 37 °С. Сохранность рибосомных Р Н К и рибосомных час-
тиц контролировали методом аналитического ультрацентрифугирования. Реакцию оста-
навливали добавлением двух объемов ледяной уксусной кислоты и далее белок экст-
рагировали по методу, описанному в работе [5]. Белок осаждали пятью объемами ох-
лажденного ацетона и анализировали методом двухмерного электрофореза [6].
Результаты и обсуждение. М а г н и е в а я з а в и с и м о с т ь д и с -
с о ц и а ц и и р и б о с о м . Степень диссоциации рибосом в инкубаци-
онной смеси определяли по рассеянию света длиной волны 400 нм во
флюориметре, параллельно контролируя состояние рибосом методом
аналитического центрифугирования (рис. 1). Было показано, что при
концентрации ионов магния в среде ниже 6 мМ наблюдается полная
диссоциация рибосом на 30S и 50S
субчастицы. При концентрации ио-
нов магния выше 13 мМ наблюда-
ются только 70S рибосомы.
Рис. 1. Магниевая зависимость диссоциа-
ции рибосом Т. thermophilus по данным
светорассеяния
Fig. 1. Dependence of Т. thermophilus ribo-
. , , t t t t > some dissociation on Mg 2+ concentration
2 3 5 7,5 12,5 20 30 50 MgagtMM by light scattering data
К и н е т и к а т р и п с и н о л и з а рибосом Т. thermophilus. В таб-
лице приведены результаты кинетики трипсинолиза рибосом Т. thermo-
philus. Видно, что даже при кратковременной инкубации рибосом с
трипсином при 0°С некоторые рибосомные белки (TS2, TS3, TS17,
TS20 и TL5) частично модифицируются. Далее при инкубации от 5
до 15 мин при 37 °С картина трипсинолиза не меняется. Оказалось, что
число белков, модифицирующихся в рибосомах Т. thermophilus, не-
сколько выше, чем в рибосомах Е. coli [1]. Белки TS2, TS3, TS7, TS12,
TS17, TS19, TS20, TL5, TL9 и TL23 модифицируются полностью, а бел-
ки TL8 и TL24 частично (таблица, рис. 2, б).
Т р и п с и н о л и з р и б о с о м и р и б о с о м н ы х с у б ч а с т и ц
Т. thermophilus. На рис. 2, б, в, представлены результаты трипсиноли-
6 6 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4 5 — 0-239 66
за рибосом и рибосомных субчастиц Т. thermophilus соответственно.
Видно, что диссоциация рибосом на субчастицы не приводит к появле-
нию дополнительных белков, доступных трипсину. На основании этого
результата можно сделать вывод, что структура рибосомных субчастиц
в составе рибосом и после их диссоциации неизменна и на контактиру-
ющих поверхностях рибосомных субчастиц нет белков, доступных
трипсину.
Известно, что рибосомы и рибосомные субчастицы экстремального
термофильного микроорганизма T. thermophilus отличаются высокой
Рис. 2. Двухмерные электрофоре-
граммы рибосомных белков из рибо-
сом Т. thermophilus: а — рибосомы
без обработки трипсином; б — рибо-
сомы, обработанные трипсином в те-
чение 10 мин; в — смесь рибосомных
субчастиц, обработанных трипсином
в течение 10 мин
Fig. 2. Two-dimensional electrophore-
sis of ribosomal proteins from T. ther-
mophilus ribosome: a — ribosomes
without trypsin treatment; б — ribo-
somes after 10 min trypsin treatment;
в — mixture of ribosomal subunits af-
ter 10 min trypsin treatment
стабильностью. В частности, 30S рибосомные субчастицы не развора-
чиваются в нуклеопротеидные тяжи в среде без ионов магния и для
экстракции рибосомных белков необходимы более высокие концентра-
ции одновалентных катионов, чем в случае рибосом мезофильных бак-
терий (данные не приведены). По-видимому, именно высокая стабиль-
ность рибосом позволила получить в кристаллической форме 70S рибо-
сомы и 30S субчастицы [7]. Рибосомные субчастицы в составе рибосом
и в диссоциированном виде, очевидно, имеют одинаковую натив-
ную структуру. Это предположение хорошо согласуется с результата-
ми настоящей работы, где было показано, что рибосомные белки Т.
thermophilus одинаково доступны трипсину в составе рибосом и в со-
ставе рибосомных субчастиц.
На основании результатов исследования поверхности рибосомных
субчастиц Е. coli методом тритиевой бомбардировки был сделан вы-
вод об отсутствии белков на контактирующих поверхностях рибосом-
ных субчастиц [8]. Этот вывод также хорошо согласуется с выводом
об отсутствии белков, доступных трипсину, на контактирующих поверх-
ностях рибосомных субчастиц Т. thermophilus.
66 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4 5 — 0-239 6 7
Кинетика трипсинолиза рибосом
Trypsinolysis kinetics of Т. thermophilus ribosomes
Белок
Время инкубации, мин
Белок
Время инкубации, ι мин
Белок
0 5 10 15
Белок
0 5 10 15
TS2
+- +-
TLl + + + +
TS3 +- — — — TL2 + + + +
TS4 + + + + TL3 + + +
TL6/TS5 + Π- + + TL4 + + + +
TS6 + Η- + + TL5 -h
TL9/TS7 -ь ΞΗ TL7 + + + +
TS8 + + + + TL8 + + ± ±
TS9 + + + + TLlO + + + +
TSlO + + + + TLll + + + +
TLH/TS11 + + + + TL12 + + + + +
TS12 + — TL13 +
+ + + +
TL16/TS13 + H- + + TL15 + + + +
TS14 + + + + TL17 + + + +
TS15 + + + + TL18 + + + +
TS16 + + + + TL19 + + + +
T S17 ± — — — TL20 + + + +
TS18 + + + + TL21 + + + +
TS19 + — — TL22 + + + +
TS20 +- — — TL23 +
TL29/TS21 + + + + TL24 + + ± ±
TL25 + + + +
TL26 + + + +
TL27/TL28 + + + +
TL30
П р и м е ч а н и е . ( + ) — б е л о к не модифицируется; ( — ) — б е л о к модифицируется пол-
ностью, т. е. отсутствует на электрофореграмме; ( ± ) — б е л о к модифицируется час-
тично, т. е. на электрофореграмме обнаруживается только часть белка; ( ) — белок
не анализировали.
Авторы выражают благодарность профессору А. С. Спирину за
стимулирование и поддержку этих исследований; А. Т. Гудкову и
М. Г. Бубуненко — за плодотворное обсуждение результатов и посто-
янный интерес к работе; О. И. Кондрахиной — за техническую помощь
в проведении экспериментов.
ACCESSIBILITY OF RIBOSOMAL PROTEINS ТО TRYPSIN
IN THERMOS THERMOPHILUS RIBOSOMES
M. M. Yusupov, T. N. Spirina
Institute of Protein, Academy of Sciences
of the USSR, Pushchino, Moscow Region
S u m m a r y
Proteins accessible to trypsin in ribosome and in ribosomal subunits from extreme thermo-
philic Thermus thermophilus have been analyzed. In 70S ribosomes 7 proteins of the
small (30S) subunit, TS2, TS3, TS7, TS12, TS17, TS19, TS20 and 5 proteins of the large
(50S) subunit, TL5, TL8, TL9, TL23, TL24 were accessible to trypsin. Dissociation of 7 0 S
ribosomes into subunits leads to no appearance of proteins accessible to trypsin. This con-
firms previous conclusion on the absence of ribosomal proteins between the subunits
{Yusupoν M. and Spirin A., FEBS Lett., 1986, 197, 229—233).
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Gudkov А. Т., Gongadze G. Μ. The L7/L12 proteins change their conformational upon
interaction of EF-G with r ibosomes / /FEBS Lett.— 1984.— 176, N 1.—P. 32—36.
2. Crichton R. R., Wittmann H. G. Ribosomal proteins. Trypsin digestion as a possible
probe of the conformation of E. coli r ibosomes//Mol. and Gen. Genet. — 1971. — 114,
N 2. — P . 95—104.
6 8 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4 5 — 0-239 68
3. Юсупов Μ. M., Спирин А. С. Исследование поверхности рибосом и рибосомных суб-
частиц Е. coli методом тритиевой бомбардировки//Биохимия.— 1986. — 51, № 11.—
С. 1858—1867.
4. Гогия 3. В., Юсупов М. M., Спирина Т. Н. Структура рибосом Thermus thermophilus.
Метод выделения и очистки рибосом//Молекуляр. биология. — 1986. — 20, JVb 2 .—
С. 519—526.
5. Purification of the 30S ribosomal proteins // S. J. S. Hardy, G. G. Kurland, P. Voynow
et al. / /Biochemistry. — 1969. )—S, N 7. — P. 2897—2905.
6. Kanny / . W., Lambert J. M„ Traut R. R. Cross^linking of ribosomes using 2-iminothio-
Iane and identification of cross-linked proteins by diagonal polyacrylamide / sodium
dodecyl sulfate gel electrophoresis//Meth. Enzymol. — 1979. — 59. — P. 539—650.
7. Crystallization of 70S ribosomes and 30S ribosomal subunits from Thermus thermophi-
lus / C. D. Trakhanov, Μ. M. Yusupov, S. Ch. Agalarov et a l . / / F E B S Lett.— 1987.—
220, N 2 — P . 319—322.
8. Yusupov M. M., Spirin A. S. Are there proteins between ribosomal subunits? / / Ibid.—
1986. — 197, N 2. — P. 229—233.
Ин-т белка АН СССР, Пущино Получено 21.08.89
Ин-т молекуляр. генетики АН СССР, Москва
УДК 577.112.4:577.113.4
© Т. И. Головина, В. М. Солошенко, М. Г. Безруков, 1990
РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ
И НУКЛЕИНОВЫХ КОМПОНЕНТОВ БИОМАССЫ ДРОЖЖЕЙ.
1. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ГЛУТЕЛИНОВОЙ ФРАКЦИИ БЕЛКОВ
И НУКЛЕИНОВЫХ КОМПОНЕНТОВ
В работе рассмотрены основные способы денуклеинизации биомассы дрожжей: гидро-
лиз эндонуклеазами, взаимодействие с хаотропными солями, кислотная обработка. По-
казано, что при взаимодействии белков и нуклеиновых кислот определяющую роль иг-
рают гидрофобные взаимодействия. Для предотвращения соосаждения в изоэлектри-
ческой точке белков и нуклеиновых кислот последние должны быть гидролизованы до
олигонуклеотидов с молекулярной массой около 800 и переведены в гидрофильное со-
стояние, возможно, за счет отщепления гидрофобных оснований. Показано, что опти-
мальным способом достижения этого результата является кислотная обработка.
Введение. Биомасса микроорганизмов обычно содержит от 6 до 15 %
нуклеиновых кислот. Белковые продукты пищевого назначения, полу-
ченные из микробной биомассы, согласно требованиям ФАО-ВОЗ, дол-
жны содержать не более 2 % нуклеиновых кислот [1]. Поэтому стадия
разделения белков и нуклеиновых кислот имеет определяющее значение.
Принципиально возможным способом разделения таких компонен-
тов является их фазовое распределение. Так, белки типа глобулинов
и глутелинов могут быть переведены в твердую фазу путем изоэлектри-
ческого осаждения, а нуклеиновые кислоты оставлены в растворе, если
они предварительно подвергнуты ферментативному или химическому
гидролизу [2, 3], а также при наличии в системе хаотропных солей [4].
Настоящая работа посвящена исследованию механизмов взаимо-
действия глутелиновой фракции белков и нуклеиновых кислот в про-
цессе выделения из биомассы микроорганизмов.
Материалы и методы. Работу проводили с нативной биомассой пекарских дрож-
жей Saccharomyces cercvisiae, имеющей состав (%): белок — 48, нуклеиновые кисло-
ты — 8, липиды — 10, углеводы — 20.
Для выделения внутриклеточных компонентов 10%-ную суспензию биомассы
дрожжей дезинтегрировали на баллистическом дезинтеграторе MJI-I (СКБ БП
АН СССР, Пущино), рН дезинтегрированной биомассы доводили до нужного значения
1 н. HCl или NaOH, суспензию выдерживали при комнатной температуре в течение
30 мин и отделяли осадок центрифугированием. Экстракты являлись объектом даль-
нейшего исследования.
ISSN 0233-7057. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 4 6 9
|