Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками
Разработан метод выделении и разделения гликопротеинов тканей животных с использованием конкапавалина-А и электрофореза. Одновременное электрофоретическое разделение гликопротеинов и остальных тканевых белков дает возможность выявить новые гетерогенные зоны и получить характеристику тканевых гликопр...
Saved in:
| Date: | 1987 |
|---|---|
| Main Authors: | , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1987
|
| Series: | Биополимеры и клетка |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153804 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками / И.Д. Головацкий, Б.А. Савчик // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 3. — С.137-139. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-153804 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1538042019-06-15T01:28:52Z Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками Головацкий, И.Д. Савчик, Б.А. Краткие сообщения Разработан метод выделении и разделения гликопротеинов тканей животных с использованием конкапавалина-А и электрофореза. Одновременное электрофоретическое разделение гликопротеинов и остальных тканевых белков дает возможность выявить новые гетерогенные зоны и получить характеристику тканевых гликопротеинов. Исследованы сыворотка крови и ткань печени крысы, а также сердца быка. Розроблено метод виділення та поділу глікопротеїнів тканин тварин з використанням конканаваліну-А і електрофорезу. Одночасне електрофоретичне розділення глікопротеїнів та інших тканинних білків дає можливість виявити нові гетерогенні зони і отримати характеристику тканинних глікопротеїнів. Досліджено сироватку крові і тканину печінки щура, а також серця бика. A combination of the methods for precipitation of glycoproteins by concanavalin-A. for their release by monosaccharides (glucose, mannose) and for subsequent separation in the polyacrylamide gel has been used for simultaneous and parallel determination of certain glycoproteins and other .tissue proteins. A good reproducibility of the results is established. 10–20 fractions of glycoproteins being, mainly, in bands corresponding to other proteins are shown to be present in different rat and bovine tissues. 1987 Article Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками / И.Д. Головацкий, Б.А. Савчик // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 3. — С.137-139. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. 0233-7657 DOI:http://dx.doi.org/10.7124/bc.0001E2 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153804 547.963.1 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Краткие сообщения Краткие сообщения |
| spellingShingle |
Краткие сообщения Краткие сообщения Головацкий, И.Д. Савчик, Б.А. Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками Биополимеры и клетка |
| description |
Разработан метод выделении и разделения гликопротеинов тканей животных с использованием конкапавалина-А и электрофореза. Одновременное электрофоретическое разделение гликопротеинов и остальных тканевых белков дает возможность выявить новые гетерогенные зоны и получить характеристику тканевых гликопротеинов. Исследованы сыворотка крови и ткань печени крысы, а также сердца быка. |
| format |
Article |
| author |
Головацкий, И.Д. Савчик, Б.А. |
| author_facet |
Головацкий, И.Д. Савчик, Б.А. |
| author_sort |
Головацкий, И.Д. |
| title |
Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками |
| title_short |
Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками |
| title_full |
Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками |
| title_fullStr |
Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками |
| title_full_unstemmed |
Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками |
| title_sort |
применение конканавалина-а для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1987 |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/153804 |
| citation_txt |
Применение конканавалина-А для выделения гликопротеинов и их электрофоретического разделения параллельно с другими белками / И.Д. Головацкий, Б.А. Савчик // Биополимеры и клетка. — 1987. — Т. 3, № 3. — С.137-139. — Бібліогр.: 7 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT golovackijid primeneniekonkanavalinaadlâvydeleniâglikoproteinoviihélektroforetičeskogorazdeleniâparallelʹnosdrugimibelkami AT savčikba primeneniekonkanavalinaadlâvydeleniâglikoproteinoviihélektroforetičeskogorazdeleniâparallelʹnosdrugimibelkami |
| first_indexed |
2025-07-14T05:16:04Z |
| last_indexed |
2025-07-14T05:16:04Z |
| _version_ |
1837598155754962944 |
| fulltext |
УДК 547.963.1 : . • • • • : , і • •
ПРИМЕНЕНИЕ КОНКАНАВАЛИНА-А
ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЛИКОПРОТЕИНОВ
И ИХ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ
ПАРАЛЛЕЛЬНО С ДРУГИМИ БЕЛКАМИ
И. Д. Головацкий, Б. А. Савчик
Введение. В литературе имеются данные о выделении и очистке полиса-
харидов, гликопротеинов и гликопептидов с помощью метода аффинной
хроматографии на конканавалине-А, присоединенном к агарозе или се-
фарозе [1, 2], а также методом двойной иммунодиффузии в агаровом
геле [3].
Механизм взаимодействия конканавалина-А с гликопротеинами
описан [4].
Используемые методы выявления гликопротеинов [5, 6] не дают
возможности охарактеризовать их в сопоставлении с другими белками.
Исходя из этого нами проведена разработка метода выделения глико-
протеинов и их разделения электрофорезом в полиакриламидном геле
параллельно с другими белками с использованием конканавалина-А.
Материалы и методы. Исследования проводили на сыворотке крови и печени крыс,
а также сердечной мышце крупного рогатого скота. Гомогенаты готовили из измель-
ченной ткани в жидком азоте, в буферном растворе TKM (0,05 Μ трис-HCl, ρΙΤ 8,0,
0,15 Μ КС1, 0,001 Μ MgCl2) в соотношении 1 : 7. Центрифугировали при 3000 об/мин
10 мин. К надосадочной жидкости ткани или сыворотке крови, разбавленной 1 : 10, до-
бавляли конканавалин-А производства «Fluka» (Швейцария) из расчета 2,5—3,0 мг
препарата на 1 мг белка и выдерживали 4 ч при комнатной температуре. Преципитат
суспендировали и часть пробы (около 200 мкг белка) отбирали для электрофореза всех
белков. Оставшуюся часть пробы центрифугировали при 3000 об/мин 10 мин для пол-
ного осаждения преципитата. Надосадочную жидкость отбирали и часть се, соответст-
вующую взятой ранее суспензии, наносили для электрофоретического разделения над-
осадочных белков. Осадок трижды отмывали буфером ТКМ и суспендировали в том
же буфере. Для выделения из осадка отдельных гликопротеинов суспензию разделяли
на три равные части по 0,3 мл. В одну часть добавляли 0,055 ммоль глюкозы, во вто-
рую столько же маннозы, третья часть суспензии являлась контролем. После 30 мин
выдерживания всех частей суспензии при комнатной температуре их центрифугировали
при 3000 об/мин 10 мин, и надосадочную жидкость наносили на пластинки геля. Элект-
рофорез проб проводили одновременно на одной пластинке размером 120X160X1,5 мм.
Полиакриламидный гель с DS-Na готовили по Лемли [7]. Концентрация разделяюще-
го геля 10 %, концентрирующего — 3 %. Контакт геля с электродным буфером осу-
ществляли с помощью фитиля из отмытой хроматографической бумаги. Напряжение,
подаваемое на пластинку, составляло 20 В на 1 см трека. Время электрофореза 4,5 ч.
Электрофореграммы фиксировали 16—18 ч в смеси этанол : ледяная уксусная кисло-
та : вода ( 4 0 : 5 : 5 5 ) и окрашивали 0,1 %-ным раствором Кумасси R-250 в смеси эта-
нол : ледяная уксусная кислота : вода ( 9 : 2 : 9 ) .
Результаты и обсуждение. В предварительных исследованиях мы
обнаружили, что реактивом Шиффа сначала проявляются 3—4 окра-
шенные полосы, затем на 6—7-й день — все фракции, как при окраши-
вании Кумасси. Это указывает на невысокую специфичность данного
реактива для выявления гликопротеинов в полиакриламидном геле с
DS-Na. В связи с этим для их осаждения был использован конканава-
лин-А с последующими фракционированием, вымыванием моносахари-
дами и электрофоретическим разделением. На рис. 1 приведены элект-
рофореграммы сыворотки крови крысы. Видно, что при обработке кон-
канавалином-А не происходит каких-либо изменений в разделении сум-
марных белков. Полосы конканавалина-А четко ограничены, он в этих
условиях электрофореза выявляется мономером с молекулярной массой
25 000. В надосадочной жидкости отсутствуют по сравнению с осадком
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА — 1987.— т. 3, № 3> 137
высокомолекулярные белки, а также ряд белков средней и низкой мо-
лекулярной массы, причем глюкоза вытесняет только часть белков зоны
альбумина по сравнению с влиянием маннозы. Таким образом, основ-
ное содержание образовавшегося с конканавалином-А осадка — это
Рис. 1. Электрофореграммы сыворотки крови крысы:
1 — сыворотка без добавок; 2 — суспензия сыворотки
и конканавалина-А; 3 — надосадочная жидкость сус-
пензии; 4 — осадок суспензии (контроль); 5 — над-
осадочная жидкость из осадка после обработки глю-
козой; 6 — надосадочная жидкость из осадка после
обработки маннозой. Окраска Кумасси
Fig. 1. Electrophoregrams of the rat blood serum: 1 —
serum without additions; 2 — serum and concanava-
lin-A suspension; 3 — supernatant fraction of the
suspension; 4 — precipitate of the suspension (cont-
rol); 5 — supernatant fraction of the precipitate after
glucose treatment; 6 — supernatant fraction of the
precipitate after mannose treatment. Stained by Coo-
massie
Рис. 2. Электрофореграммы гомогената печени крысы: 1 — суспензия гомогената пече-
ни и конканавалина-А; 2 — надосадочная жидкость суспензии; 3 — осадок суспензии.
Окраска Кумасси
Fig. 2. Electrophoregrams of the rat liver homogenate: 1 — the liver homogenate and
concanavalin-Λ suspension; 2 — supernatant fraction of the suspension; 3 — precipitate
of the suspension. Stained by Coomassie
Рис. 3. Электрофореграммы сердечной мышцы быка: 1 — суспензия гомогената и кон-
канавалина-А; 2 — надосадочная жидкость суспензии; 3 — осадок суспензии. Окраска
Кумасси
Fig. 3. Electrophoregrams of the bovine heart muscle: 1 — homogenate >and concanava-
lin-A suspension; 2 — supernatant fraction of the suspension; 3 — precipitate of the
suspension. Stained by Coomassie
гликопротеины, имеющие в своем составе маннозу. В целом в сыворот-
ке крови крысы обнаруживаются 16 зон гликопротеинов. Обработка
экстракта печени крысы конканавалином-А (рис. 2) сопровождается
осаждением около 20 зон белков с иной электрофоретической подвиж-
ностью, чем в сыворотке крови (рис. 1). Электрофореграммы гликопро-
138 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. - 1987.—т. 3, № 3
теинов осадков из сердечной мышцы крупного рогатого скота (рис. 3)
т а к ж е отличаются от печени и сыворотки крысы. Полученные результа-
ты хорошо воспроизводимы. Применение конканавалина-А с последу-
ющей обработкой осажденных гликопротеинов моносахаридами (глю-
коза, манноза) , их фракционирование и окрашивание фореграмм можно
использовать для выделения и анализа гликопротеинов при одновремен-
ном сопоставлении с суммарными белками и надосадочной фракцией.
Метод дает возможность получить характеристики соотношений глико-
протеинов с другими белками без дополнительной затраты времени.
CONCANAVALIN-A APPLICATION FOR THE ISOLATION
OF GLYCOPROTEINS AND THEIR ELΕСΤRΟΡHORETIС SEPARATION
PARALLEL WITH OTHER PROTEINS
I. D. Golovatsky, B. A. Savchik
Α. V. Palladin Institute of Biochemistry,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Lvov Branch
S u m m a r y
A combination of the methods for precipitation of glycoproteins by concanavalin-A, for
their release by monosaccharides (glucose, mannose) and for subsequent separation in
the polyacrylamide gel has been used for simultaneous and parallel determination of cer-
tain glycoproteins and other tissue proteins. A good reproducibility of the results is esta-
blished. 10-20 fractions of glycoproteins being, mainly, in bands corresponding to other
proteins are shown to be present in different rat and bovine tissues.
1. Lis H., Sharon N. The biochemistry of plant lectins (phytohemagglutinins) / / A n n .
Rev. Biochem.— 1973.—42 — P. 541—547.
2. Лццик Μ. Д., Панасюк Ε. Η., Луцик Α. Д. Лектины.— Львов : Вища школа, 1981.—
153 с.
3. Методы исследования углеводов / Под ред. Н. Я. Хорлина.— М . : Мир, 1975.—445 с.
4. Хьюз Р. Гликопротеины.·—М. : Мир, 1985.—140 с.
5. Гааль Э., Медьиши Г., Верецкей Л. Электрофорез в разделении биологических мак-
ромолекул.— М. : Мир, 1982.—446 с.
6. Faye L.t Chrispeels Μ. J. Characterization of N-linked olygosaccharides by affinoblot-
ting with concanavalin-A — peroxydase and treatment of the blots with g l y c o s i d a s e s / /
Analyt. Biochem.— 1985.—149, N 2 .—P. 218—224.
7. Laetnmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of
bacteriophage T-4 11 Nature.— 1970.—227, N 5259.— P. 680—685.
ІІн-т биохимии им. А. В. Палладина АН УССР, Львов, отд-ние Получено 28.03.86
УДК 575.24.577.352
РОЛЬ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ
В ФОРМИРОВАНИИ КОМПЕТЕНТНОСТИ ДРОЖЖЕВЫХ
ПРОТОПЛАСТОВ К ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ
10. И. Горлов, В. С. Кириллова, Л. Г. Жарова
Введение. Известно, что клетки микроорганизмов способны взаимодей-
ствовать с экзогенной Д Н К (генетически трансформироваться) только в
определенном, компетентном, состоянии. В нашей предыдущей работе
[1] сообщалось об индукции у дрожжевых клеток компетентности к
трансформации плазмидной Д Н К после их обработки хелаторами, кото-
рые вызывают интенсификацию эндогенного перекисного окисления
(ПО) липидов у этих организмов. Ингибирование окисления липидов
антиоксидантом ионолом приводило к значительному снижению часто-
ты трансформации дрожжевых клеток в случае индукции их компетент-
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА,— 1987.— т. З, № і 139
|