Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval
Методом электрофореза в денатурирующих условиях определена молекулярная масса эндодезоксирибонуклеазы MvaL. Показано, что исследованный белок состоит из одной субъединицы молекулярной массы 31 300±400. Близкие значения получены при ультрацентрифугировании фермента в градиенте концентрации сахарозы и...
Gespeichert in:
| Datum: | 1988 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1988
|
| Schriftenreihe: | Биополимеры и клетка |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154051 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval / Л.Г. Овечкина, С.Р. Попова, В.В. Зиновьев, Д.П. Вайткявичюс, А.А. Янулайтис, Ю.А. Горбунов, Э.Г. Малыгин // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 5. — С. 269-272. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-154051 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1540512019-06-16T01:27:23Z Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval Овечкина, Л.Г. Попова, С.Р. Зиновьев, В.В. Вайткявичюс, Д.П. Янулайтис, А.А. Горбунов, Ю.А. Малыгин, Э.Г. Краткие сообщения Методом электрофореза в денатурирующих условиях определена молекулярная масса эндодезоксирибонуклеазы MvaL. Показано, что исследованный белок состоит из одной субъединицы молекулярной массы 31 300±400. Близкие значения получены при ультрацентрифугировании фермента в градиенте концентрации сахарозы и гель-фильтрации. В присутствии олигонуклеотидного субстрата наблюдается увеличение молекулярной массы фермента до 53 000 ± З000 Да, что связано с димеризацией белка при образовании фермент-субстратного комплекса. Методом електрофорезу за денатурувальних умов визначено молекулярну масу ендодезоксирибонуклеази MvaL. Показано, що досліджуваний білок складається з однієї субодиниці з молекулярною масою 31300 ± 400. Близькі значення отримано при ультрацентрифугуванні ферменту в градієнті концентрації сахарози і гель-фільтрації. За присутності олігонуклеотидного субстрату спостерігається збільшення молекулярної маси ферменту до 53000 ± 3000 Да, що пов’язано з димеризацією білка при утворенні фермент-субстратного комплексу. Molecular weight of the endonuclease Mval was determined by the method of gel electrophoresis under denaturing conditions. The enzyme consists of a single polypeptide chain with molecular weight of 31300±400 dalton. Similar data are obtained by gel filtration and sucrose density gradient centrifugation. In the presence of substrate the oligonucleotide molecular weight of endonuclease Mval increases up to 53000±3000 dalton, that is related to protein dimerization during the formation of the enzyme-substrate complex. 1988 Article Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval / Л.Г. Овечкина, С.Р. Попова, В.В. Зиновьев, Д.П. Вайткявичюс, А.А. Янулайтис, Ю.А. Горбунов, Э.Г. Малыгин // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 5. — С. 269-272. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000237 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154051 577.152:577.151 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Краткие сообщения Краткие сообщения |
| spellingShingle |
Краткие сообщения Краткие сообщения Овечкина, Л.Г. Попова, С.Р. Зиновьев, В.В. Вайткявичюс, Д.П. Янулайтис, А.А. Горбунов, Ю.А. Малыгин, Э.Г. Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval Биополимеры и клетка |
| description |
Методом электрофореза в денатурирующих условиях определена молекулярная масса эндодезоксирибонуклеазы MvaL. Показано, что исследованный белок состоит из одной субъединицы молекулярной массы 31 300±400. Близкие значения получены при ультрацентрифугировании фермента в градиенте концентрации сахарозы и гель-фильтрации. В присутствии олигонуклеотидного субстрата наблюдается увеличение молекулярной массы фермента до 53 000 ± З000 Да, что связано с димеризацией белка при образовании фермент-субстратного комплекса. |
| format |
Article |
| author |
Овечкина, Л.Г. Попова, С.Р. Зиновьев, В.В. Вайткявичюс, Д.П. Янулайтис, А.А. Горбунов, Ю.А. Малыгин, Э.Г. |
| author_facet |
Овечкина, Л.Г. Попова, С.Р. Зиновьев, В.В. Вайткявичюс, Д.П. Янулайтис, А.А. Горбунов, Ю.А. Малыгин, Э.Г. |
| author_sort |
Овечкина, Л.Г. |
| title |
Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval |
| title_short |
Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval |
| title_full |
Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval |
| title_fullStr |
Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval |
| title_full_unstemmed |
Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval |
| title_sort |
индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы mval |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1988 |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154051 |
| citation_txt |
Индуцируемая олигонуклеотидным субстратом димеризация эндодезоксирибонуклеазы Mval / Л.Г. Овечкина, С.Р. Попова, В.В. Зиновьев, Д.П. Вайткявичюс, А.А. Янулайтис, Ю.А. Горбунов, Э.Г. Малыгин // Биополимеры и клетка. — 1988. — Т. 4, № 5. — С. 269-272. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT ovečkinalg induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval AT popovasr induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval AT zinovʹevvv induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval AT vajtkâvičûsdp induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval AT ânulajtisaa induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval AT gorbunovûa induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval AT malyginég induciruemaâoligonukleotidnymsubstratomdimerizaciâéndodezoksiribonukleazymval |
| first_indexed |
2025-07-14T05:33:36Z |
| last_indexed |
2025-07-14T05:33:36Z |
| _version_ |
1837599263035490304 |
| fulltext |
Транспозоноподобная структура генома вируса саркомы Рауса — наличие флан-
кирующих LTR, гена sarc, находящегося под сильным промотором, обусловливают пер-
спективность использования плазмиды pATV-8 в исследованиях стадие- и тканеспеци-
фичиости экспрессии генов, стабильности структуры трансгеномов, взаимодействия
трансгеномов и генома клеток организма, несущего трансгеном.
THE TRANSGENIC MICE CONTAINING pATV-8 AND pBR322 PLASMIDS
A. P. Solomko, Α. V. Ryndich, T. G. Titok, L. M. Morozova, I. N. Vagina,
L. /. Chashchitia, S. V. Evsykov, I. V. Kirichenko, N. A. Sarapina
Inst i tute of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S u m m a г у
The t ransgenic mice conta in ing recombinant pATV-8 plasmid, produced by insertion of
the provirus DNA of RSV into pBR322 were obtained. The type of the i ransgene DNA
inheritance cannot be explained by the insertion of its copies into one chromosomal site.
In certain t ransgenic mice lines the phenotypic disorders were observed.
1. Хесин P. Б. Непостоянство генома.— Μ. : Наука , 1984.—472 с.
2. Restriction endonuclease and nucleotide sequence analysis of molecularly cloned unin-
tegrated avian tumor virus DNA: s t ructure of large terminal repeats in circle juncti-
ons / R. A. Katz, C. A. Omer, G. H. Weis et a l . / / J . Gen. Virol.—1982,—42, N 1.—
P. 346—351.
3. Rescue of a tk-plasmid f rom t ransgenic mice reveals its episomal t ransmiss ion / U. Ki-
essling, R. Becker, M. S t rause et a l . / / М о ї . and Gen. Genet.— 1986,—204, N 2,—
P. 328—333.
4. Germ line t ransmiss ion of au tonomous genetic elements in t ransgenic mouse s t ra ins /
M. Rassoulzadegan , P. Leopold, J. Vailly, F. Cuzin / / Cell.— 1986,—46, N 4,—
P. 513—519.
5. Gordon J. W. A foreign dihydrofolate reductase gene in t ransgenic mice acts as a
dominant m u t a t i o n / / М о ї . and Cell. Biol.— 1986.—6, N 6 . — P . 2158—2167.
6. An inherited limb deformity created by insertional mutagenes i s in t ransgenic m o u s e /
R. P. Woychik, T. A. Stewart , L. Y. Davis et a l . / / N a t u r e . — 1985—318, N 6041.—
P. 36—40.
7. Prenatal lethalities in mice homozygous for h u m a n growth hormone sequences inte-
grated in the germ line / E. F. Wagner , L. Covarrubias , T. A. Stewart , B. M i n t z / /
Cell.— 1983.—35, N 3 . — P . 647—655.
8. Insertion of retrovirus into first intron of I / I -co l lagen gene leads to embryonic lethal
muta t ion in mice / K. Harbers , M. Kuehn, H. Delius, R. J a e n i s c h / / P r o c . Nat. Acad.
Sci. USA.— 1984,—81, N 5 , — P . 1504—1508.
9. Covarrubias L., Nishido Y., Mintz B. Ear ly pos t implanta t ion embryo lethali ty due to
DNA rea r rangements in a t ransgenic mouse s t r a i n / / I b i d . — 1986.—83, N 16.—:
P. 6020—6024.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН УССР, Киев Получено 17.06.87
УДК 577.152:577.151
ИНДУЦИРУЕМАЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫМ СУБСТРАТОМ
ДИМЕРИЗАЦИЯ ЭНДОДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗЫ Mval
Л. Г. Овечкина, С. Р. Попова, В. В. Зиновьев, Д. П. Вайткявичюс,
А. А. Янулайтис, Ю. А. Горбунов, Э. Г. Малыгин
Эндонуклеазы типа II, как правило, узнают симметричную нуклеотидную последова-
тельность и имеют димерную структуру типа а 2 [1]. Имеются, однако, исключения —
например, для эндодезоксирибонуклеаз Bgll и Bspl показано, что они являются моно-
мерными белками [1].
Исследование таких эндонуклеаз представляет специальный интерес, так как
структура фермента, взаимодействующего с симметричным субстратом, должна иметь
элементы симметрии. Один из возможных способов образования симметричной струк-
БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА— 1988,—Т. 4. № 5 269
туры—димеризация субъединиц, что было показано, например, для метилазы Ecodam,
имеющей симметричный сайт узнавания [2].
Целью данной работы являлось определение молекулярной массы эндонуклеазы
ΜυαΙ в денатурирующих и нативных условиях, а также в присутствии синтетических
олигонуклеотидов.
Олигодезоксирибонуклеотиды 5'-dAACCTGGAA (I), 5'-dTTCCAGGTT (II) и
5'-dCGGATCCG (III) были синтезированы фосфотриэфирным методом [3] и содержали
на 5'-конце свободную гидроксильную группу. Эквимолярная смесь олигонуклеотидов
Определение молекулярной массы эндонуклеазы ΜυαΙ (Ε) и комплекса этого фермента
с субстратом (Е + S) при температуре 5—7 °С: а — ультрацентрифугирование в гради-
енте концентрации сахарозы; б — гель-фильтрация на сефакриле S-200. В качестве суб-
страта (5) использовали двухцепочечный олигонуклеотид, содержащий участок узнава-
ния для эндонуклеазы ΜυαΙ в концентрации 1,5 мкМ. 1—3 — положение маркерных
белков: БСА (68000), овальбумин (45000) и химотрипсиноген (25000) соответственно
Molecular weight determination endonuclease ΜυαΙ (Ε) and its complex with the sub-
strate (E + S) at the temperature of 5-7 °С: a — sucrose density gradient centrifugation;
6 — gel filtration on sephacryl S-200 column. Oligonucleotide complex (1.5 μΜ) con-
taining recognition site of endonuclease ΜυαΙ was used as a substrate (5) . 1-3 — the
marker proteins: bovine serum albumin (68000), ovalbumin (45000) and chymotrypsino-
gen (25000), respectively
1 и II приводит к образованию дуплекса, содержащего в центре последовательность
узнавания 5'...С—С—Τ—G—G—... для эндонуклеазы ΜυαΙ. Самокомплементарный ок-
...G—G—А—С—С—...5'
тануклеотид III образует двухцепочечную структуру, в которой отсутствует участок
узнавания для этого фермента.
Эндонуклеазу ΜυαΙ выделяли по методу [4, 9]. Для определения молекулярной
массы фермента использовали методы электрофореза в денатурирующих условиях [5],
гель-фильтрации [6] и центрифугирования в градиенте концентрации сахарозы от 10
до 30 % [7, 8].
Растворы сахарозы готовили в буфере А (20 мМ К-фосфат, рН 7,5, 10 мМ ЭДТА,
7 нМ 2-меркаптоэтанол, 0,6 Μ NaCl). На градиент сахарозы объемом 5 мл наслаивали
100 мкл препарата эндонуклеазы ΜυαΙ с концентрацией белка около 10 мкг/мл. Цент-
рифугирование проводили на ультрацентрифуге «Beckman» L5-75 (США) со скоростью
45000 об/мин при температуре 5 °С в течение 20 ч. После центрифугирования градиент
раскапывали на фракции по 80 мкл. Активность фермента определяли по методу, при-
веденному в работе [9]. По калибровочному графику определяли молекулярную массу
фермента.
Для гель-фильтрации использовали колонку (h—10 см, d — 0,25 см) с сефакри-
лом S-200, уравновешенную буфером А с добавлением 100 мкг/мл БСА, и наносили
2 мкл препарата эндонуклеазы с концентрацией белка 50 мкг/мл. Собирали фракции
по 25—30 мкл и определяли в каждой ферментативную активность [9]. Все необходи-
мые измерения оптической плотности при 280 нм проводили на спектрофотометре
«Обь» (СССР).
По данным электрофореза, в денатурирующих условиях полученный препарат эн-
донуклеазы ΜυαΙ представляет собой гомогенный белок, состоящий из одной субъеди-
ницы с молекулярной массой 313004=400 (п = 3). Близкие значения получены при цент-
рифугировании фермента в градиенте концентрации сахарозы 277004=2300 (п — 3)
(рисунок, а) и методом гель-фильтрации 27400=Ы900 (п = 4) (рисунок, б).
Следует отметить, что при понижении концентрации NaCl до 0,1 Μ в буфере А
наблюдается значительное увеличение молекулярной массы фермента в несколько раз
270 Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА.— 1988.—Т. 4. № 5
и одновременно падение его активности. Это, по-видимому, связано с агрегацией белка.
Уменьшение активности фермента в связи с его агрегацией ранее было показано для
эндонуклеазы EcoRI [10]. Влияние концентрации NaCl на изменение субъединичной
структуры фермента и его активность требует дальнейших исследований.
При центрифугировании фермента в градиенте концентрации сахарозы, содержа-
щем равнораспределенный по всему объему девятичленный олигонуклеотидный дуплекс,
наблюдается увеличение молекулярной массы фермента до 531004=3000 (п — 7) (рису-
нок, а). При добавлении 1,5 мкМ олигонуклеотида III, не содержащего участка узна-
вания рестриктазы ΜυαΙ, молекулярная масса фермента также увеличивается до 51000.
Ранее мы наблюдали димеризацию метилазы Ecodam в присутствии олигонуклеотидно-
го дуплекса, не содержащего участка узнавания [2]. Таким образом, димеризация эн-
донуклеазы ΜυαΙ и метилазы Ecodam происходит, по-видимому, при взаимодействии
с любым участком двухцепочечной ДНК.
При гель-фильтрации рестриктазы ΜυαΙ на колонке с сефакрилом S-200, предва-
рительно промытым буфером А и содержащим девятичленный олигонуклеотидный
дуплекс, получено значение молекулярной массы фермента 52500 (рисунок, б), что
полностью совпадает с данными, которые дает метод ультрацентрифугирования.
Это значение несколько меньше теоретически возможной молекулярной массы,
равной 62000, для фермент-субстратного комплекса, содержащего две субъединицы
фермента. Такое различие может быть связано с существованием равновесия между
комплексом и свободным ферментом [2]. Возможно также, что это несоответствие яв-
ляется следствием использования белковых калибровочных кривых для определения
молекулярной массы белок-нуклеинового комплекса. Однако, поскольку в настоящей
работе использовали девятичленный олигонуклеотидный субстрат с небольшой молеку-
лярной массой по сравнению с ферментом, трудно предположить значительные измене-
ния глобулярности белково-нуклеиновых частиц. Использование белковых маркеров при
определении константы диссоциации фермент-субстратных комплексов методом гель-
фильтрации в литературе известно [11].
Таким образом, наблюдаемое увеличение (практически в два раза) молекуляр-
ной массы рестриктазы ΜυαΙ в присутствии двухцепочечного дуплекса по сравнению
со свободным ферментом связано с образованием димерной формы фермента. По-види-
мому, димеризация эндонуклеазы ΜυαΙ при взаимодействии с Д Н К является необходи-
мой стадией образования каталитически активной формы фермент-субстратного комп-
лекса. Возможно, это утверждение справедливо и для рестриктаз Bgll и Bspl, выде-
ленных в виде мономерных белков [1].
ENDONUCLEASE ΜυαΙ DIMERIZATION INDUCED
BY THE OLIGONUCLEOTIDE SUBSTRATE
L. G. Ουechkinα, S. R. Ροpουα, V. V. Ζinουieυ, D. Ρ. Vaitkevicius *.
A. A. Janulaitis *, Yu. Α. Gorbunου, Ε. G. Malygin
Ail-Union Research Institute of Molecular Biology,
Koltsovo, Novosibirsk Region
* Research and Production Amalgamation «Ferment», Vilnius
S u m m a r y
Molecular weight of the endonuclease ΜυαΙ was determined by the method of gel electro-
phoresis under denaturing conditions. The enzyme consists of a single polypeptide chain
with molecular weight of 31300+400 dalton. Similar data are obtained by gel filtration
and sucrose density gradient centrifugation. In the presence of substrate the oligo-
nucleotide molecular weight of endonuclease ΜυαΙ increases up to 53000+3000 dalton,
that is related to protein dimerization during the formation of the enzyme-substrate
complex.
1. Modrich P. Studies on sequence recognition by type II restriction and modification
e n z y m e s / / C r i t . Revs Biochem.— 1982.—13, N 3 .—P. 287—323.
2. Изучение индуцированных субстратом изменений в состоянии метилазы Ecodam ме-
тодом малоуглового рентгеновского рассеяния / Ф. В. Тузиков, Л. Н. Яшина,
В. В. Зиновьев и д р . / / М о л е к у л я р . биология.— 1986.—20, № 4.— С. 1002—1007.
3. Hirose Т., Crea R., Itakura К. Rapid synthesis of trideoxyribonucleotide blocks / /
Tetrahedron Lett.— 1978,—28.—P. 2449—2452.
Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА — 1SS8.— Т. 4, № 5 271
4. investigation of restriction-modification enzymes from M. variaus RFL19 with a new
type of specificity toward modification of subst ra te / V. Butkus, S. Klimasauskas,
D. Kersulyte et al. // Nucl. Acids Res.— 1985.— 13, N 16.—P. 5727—5746.
5. Laemmli U. K. Cleavage of s t ructure proteins dur ing the assembly of the head bacte-
r iophage Ύ4 Ц Nature.— 1970,—227, N 5259.—P. 680—685.
6. Siegel L. M., Monty K. G. Determinat ion of molecular weights and trictional rat ios
of proteins in impure systems by use of gel-f i l t rat ion and density gradient centri-
fuga t ion / / Biochim. et biophys. acta.— 1966,—112, N 2 . — P . 346—362.
7. Herman G. E., Modrich P. Escherichia coli dam methylase. Physical and catalyt ic
propert ies of the homogeneous e n z y m e / / J . Biol. Chem.— 1982.—257, N 5.—
P. 2605—2612.
8. Martin R. G., Ames B. N. A method for determining the sedimentat ion behavior of
enzymes: application to protein m i x t u r e s / / I b i d . — 1961 .—236, N 5 . — P . 1372—1379.
9. Янулайтис Α. Α., Вайткявичюс Д. П. Новый методический подход к разработке по-
лучения рестрикционных эндонуклеаз. Разработка схемы выделения гомогенного
препарата рестриктазы M v a l / / Биотехнология.— 1985.— № 1.— С. 39—51.
10. Alves / . Mechanist ische Untersuchungen zur Spa l tung von Oligodesoxynucleotiden
durch die Restr ikt ionsendonuklease EcoRI.— Hannover : Universi tat Hannover , 1984.—
S. 16—24.
11. Frankel A. D., Ackers G. K-, Smith H. O. Measurement of DNA-protein equilibria
us ing gel chromatography: application to the Hinfl restriction e n d o n u c l e a s e / / B i o -
chemistry.—1985.—24, N 12,—P. 3049—3054.
В Н И И молекуляр. биологии, Получено 14.07.87
пос. Кольцово Новосиб. обл.
Н П О «Фермент», Вильнюс
УДК 577.112.855
ПОДОБИЕ ДНК-УЗНАЮЩИХ СТРУКТУР
АКТИВАТОРА КООРДИНИРОВАННОЙ ТРАНСКРИПЦИИ ГЕНОВ,
КОДИРУЮЩИХ ФЕРМЕНТЫ БИОСИНТЕЗА АМИНОКИСЛОТ
У ДРОЖЖЕЙ, РЕГУЛЯТОРОВ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ КЛЕТОК
ДРОЖЖЕЙ И РЕГУЛЯТОРОВ РАЗВИТИЯ И МОРФОГЕНЕЗА
Б. В. Шестопалов
Введение. У дрожжей Saccharomyccs ccrevisiae существует координация транскрипции
генов, кодирующих ферменты биосинтеза аминокислот [1]. Непосредственным актива-
тором координированной транскрипции является белок GCN4 [2], причем активация
связана с узнаванием белком TGACTC последовательности в регуляторных участках
активируемых генов [3]. Авторы работы [4] предприняли попытку определить, к ка-
кому из двух известных видов ДНК-узнающей структуры, «пальцевидной» или спи-
раль—изгиб—спираль, относится ДНК-узнающая структура белка GCN4 и где она
локализована. В результате выяснено следующее: ДНК-узнающая структура заключе-
на в С-концевом домене белка — сегменте 222—281; «пальцевидная» структура в Д Н К -
узнающем домене невозможна, так как в его аминокислотной последовательности пет
ключевых для нее остатков; присутствие структуры спираль—изгиб—спираль, локализо-
ванной по данным предсказания вторичной структуры ДНК-узнающсго домена
(спираль 244—261, изгиб 262—265, спираль 266—278), сомнительно: спирали длиннее
обычных, аминокислотная последовательность не гомологична аминокислотным после-
довательностям структур спираль—изгиб—спираль. В итоге авторы пришли к выводу,
что вопрос о виде ДНК-узнающей структуры белка GCN4 и ее локализации остается
открытым.
В настоящей работе представлены данные, на основании которых сделано заклю-
чение, что белок GCN4, возможно, узнает Д Н К с помощью ДНК-узнающей структуры
спираль—изгиб—спираль, локализованной в сегменте аминокислотной последователь-
ности 256—278, и Д Н К - у з н а ю щ а я структура белка GCN4 подобна ДНК-узнающим
структурам белков MATal и МАТа2 — регуляторов дифференцировки клеток дрожжей,
и гомеодоменсодержащих белков — регуляторов развития и морфогенеза.
Методы. Использовали необходимые стереохимические условия существования
ДНК-узнающей структуры спираль — изгиб — спираль, описанные в нашей статье [5]
272 Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА,— Н:88,— Т. 4, Л'.< 5
|