Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре
Сыворотка крови интактных крыс незначительно модифицирует пролиферативную активность нормальных гепатоцитов в первичной культуре. В то же время сыворотка крови интактных и гепатэктомированных крыс в комплексе с эпидермальным фактором роста (ЭФР) и инсулином способна лишь ингибировать синтез ДНК клет...
Gespeichert in:
| Datum: | 1990 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russian |
| Veröffentlicht: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1990
|
| Schriftenreihe: | Биополимеры и клетка |
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154082 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре / Л.И. Кононенко, Т.А. Алексеева, Ю.Д. Иващенко, А.И. Быкорез // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 5. — С. 98-102. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-154082 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1540822019-06-16T01:26:50Z Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре Кононенко, Л.И. Алексеева, Т.А. Иващенко, Ю.Д. Быкорез, А.И. Клеточная биология Сыворотка крови интактных крыс незначительно модифицирует пролиферативную активность нормальных гепатоцитов в первичной культуре. В то же время сыворотка крови интактных и гепатэктомированных крыс в комплексе с эпидермальным фактором роста (ЭФР) и инсулином способна лишь ингибировать синтез ДНК клеток этой культуры. У культивируемых трансформированных гепатоцитов по сравнению с нормальными уменьшается стимулирующий эффект ЭФР и инсулина. Сыворотка крови интактных крыс и крыс, подвергшихся частичной гепатэктомии, при добавлении в первичную культуру трансформированных гепатоцитов оказывает слабо выраженное действие: в одних – ингибирующее, в других – активирующее. Однако после комбинированного применения с ЭФР и инсулином наблюдается значительное снижение чувствительности к митогенному эффекту. Плазма крови интактных и гепатэктомированных крыс сама по себе и в комбинации с ЭФР и инсулином лишь ингибирует синтез ДНК нормальных и трансформированных гепатоцитов в культуре. Сироватка крові інтактних щурів незначно модифікує проліферативну активність нормальних гепатоцитів у первинній культурі. Водночас сироватка крові інтактних і гепатектомованих щурів у комплексі з епідермальний фактором росту (ЕФР) і інсуліном здатна лише інгібувати синтез ДНК клітин цієї культури. У культивованих трансформованих гепатоцитів порівняно з нормальними зменшується стимулювальний ефект ЕФР і інсуліну. Сироватка крові інтактних щурів і щурів, які зазнали часткової гепатектомії, при додаванні в первинну культуру трансформованих гепатоцитів чинить слабко виражену дію: в одних випадках – інгібувальну, в інших – активуючу. Однак після комбінованого застосування з ЕФР і інсуліном спостерігається значне зниження чутливості до мітогенного ефекту. Плазма крові інтактних і гепатектомованих щурів сама по собі і в комбінації з ЕФР і інсуліном лише інгібує синтез ДНК нормальних і трансформованих гепатоцитів у культурі. Blood serum of intact rats slightly modifies proliferative activity of normal hepatocytes in the primary culture. At the same time, the serum from intact and hepatectomized rats effectively inhibits the proliferation of hepatocytes stimulated by epidermal growth factor (EGF) and insulin. Transformed hepatocytes from the liver tumours are less sensitive to mitogenic effects of EGF and insulin. Serum from intact and hepatectomized rats inhibits EGF-stimulated DNA-synthesis in transformed hepatocytes, though serum alone slightly influences the hepatocytes proliferative rate. The same inhibitory activity has been found in the rat blood plasma. 1990 Article Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре / Л.И. Кононенко, Т.А. Алексеева, Ю.Д. Иващенко, А.И. Быкорез // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 5. — С. 98-102. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000295 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154082 577.152.5 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Клеточная биология Клеточная биология |
| spellingShingle |
Клеточная биология Клеточная биология Кононенко, Л.И. Алексеева, Т.А. Иващенко, Ю.Д. Быкорез, А.И. Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре Биополимеры и клетка |
| description |
Сыворотка крови интактных крыс незначительно модифицирует пролиферативную активность нормальных гепатоцитов в первичной культуре. В то же время сыворотка крови интактных и гепатэктомированных крыс в комплексе с эпидермальным фактором роста (ЭФР) и инсулином способна лишь ингибировать синтез ДНК клеток этой культуры. У культивируемых трансформированных гепатоцитов по сравнению с нормальными уменьшается стимулирующий эффект ЭФР и инсулина. Сыворотка крови интактных крыс и крыс, подвергшихся частичной гепатэктомии, при добавлении в первичную культуру трансформированных гепатоцитов оказывает слабо выраженное действие: в одних – ингибирующее, в других – активирующее. Однако после комбинированного применения с ЭФР и инсулином наблюдается значительное снижение чувствительности к митогенному эффекту. Плазма крови интактных и гепатэктомированных крыс сама по себе и в комбинации с ЭФР и инсулином лишь ингибирует синтез ДНК нормальных и трансформированных гепатоцитов в культуре. |
| format |
Article |
| author |
Кононенко, Л.И. Алексеева, Т.А. Иващенко, Ю.Д. Быкорез, А.И. |
| author_facet |
Кононенко, Л.И. Алексеева, Т.А. Иващенко, Ю.Д. Быкорез, А.И. |
| author_sort |
Кононенко, Л.И. |
| title |
Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре |
| title_short |
Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре |
| title_full |
Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре |
| title_fullStr |
Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре |
| title_full_unstemmed |
Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре |
| title_sort |
влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1990 |
| topic_facet |
Клеточная биология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154082 |
| citation_txt |
Влияние сыворотки и плазмы крови крыс с регенерирующей печенью на пролиферацию нормальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре / Л.И. Кононенко, Т.А. Алексеева, Ю.Д. Иващенко, А.И. Быкорез // Биополимеры и клетка. — 1990. — Т. 6, № 5. — С. 98-102. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT kononenkoli vliâniesyvorotkiiplazmykrovikryssregeneriruûŝejpečenʹûnaproliferaciûnormalʹnyhitransformirovannyhgepatocitovvpervičnojkulʹture AT alekseevata vliâniesyvorotkiiplazmykrovikryssregeneriruûŝejpečenʹûnaproliferaciûnormalʹnyhitransformirovannyhgepatocitovvpervičnojkulʹture AT ivaŝenkoûd vliâniesyvorotkiiplazmykrovikryssregeneriruûŝejpečenʹûnaproliferaciûnormalʹnyhitransformirovannyhgepatocitovvpervičnojkulʹture AT bykorezai vliâniesyvorotkiiplazmykrovikryssregeneriruûŝejpečenʹûnaproliferaciûnormalʹnyhitransformirovannyhgepatocitovvpervičnojkulʹture |
| first_indexed |
2025-07-14T05:37:34Z |
| last_indexed |
2025-07-14T05:37:34Z |
| _version_ |
1837599507867500544 |
| fulltext |
13. Svab Z., Maliga P. Nicotiana tabacum mutants with chloroplast encoded streptomy-
cin resistance and pirment deficiency//Theor. and Appl. Genet.— 1985 . -72 , N 5.—·
P. 637—643.
14. New cloning vehicles for t ransformation of higher plants / G. An, B. D. Watson,
S. Stachel et al. / / E M B O J.— 1985.—4, N 1,—P. 277—284.
15. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with to-
bacco tissue cu l ture / /Phys io l . Plant.— 1962 — 15, N 3,—P. 473—497.
16. Intertrybal hybrid cell lines of Atropa belladonna+Nicotiana chinensis obtained by
cloning individual protoplast fusion p roduc t s /Y. Y. Gleba, V. P. Momot, N. N. Che-
rep, Μ. V. Skarzhynskaya // Theor. and Appl. Genet.— 1982.—62, N 1,—P. 75—79.
17. Streptomycin resistant and sensitive somatic hybrids of Nicotiana tabacum-\-Nico-
tiana knightiana correlation of resistance to N. tabacum plastids / L. Menczel, F. Na-
gy, Z. R. Kiss, P. Maliga // Ibid.— 1981,— 59, N 2 ,—P. 191—195.
IS. Kao K. N., Michayluk M. R. Nutritional requirements for growth of Vicia hajastsna
cells and protoplasts at a very low population density in liquid m e d i a / / P l a n t a . —
1975,— 126, N 2 ,—P. 105—110.
19. Caboche M. Nutritional requirements of protoplast-derived haploid tobacco cell grown
at low densities in liquid medium // Ibid.— 1980 — 149, N 1.— P. 7—18.
20. Transmission genetics of the somatic hybridization process in Nieotiana. II. P las tome
heterozygotes / Y. Y. Gleba, I. K. Komarnitsky, N. N. Kolesnik et a l . / /Мої . and Gen.
Genet.— 1985,— 198, N 4 — P . 476—481.
21. Archer Ε. K., Bonnett H. T. Characterization of a virescent chloroplast mutant of
t obacco / /P l an t Physiol.— 1987 . -83 , N 3 ,—P. 920—925.
22. Larkin P. J., Seowcroft W. R. Somaclonal variation — a novel source of variability
from cell cultures for plant improvement / /Theor . and Appl. Genet.— 1981.— 60,
N 2.— P. 197—214.
23. Medgyesy P., Fejes E., Maliga P. Interspecific chloroplast recombination in a Nieo-
tiana somatic hybr ids / /P roc . Nat. Acad. Sci. U S A — 1985,—82, N 7 — P . 6960—6964.
Отд-ние клеточ. биологии и инженерии Получено 21.03.90
Ин-та ботаники им. Н. Г. Холодного АН УССР, Киев
УДК 577.152.5
© Л. И. Кононенко, Т. А. Алексеева, Ю. Д. Иващенко,
А. И. Быкорез, 1990
ВЛИЯНИЕ СЫВОРОТКИ И ПЛАЗМЫ КРОВИ КРЫС
С РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ ПЕЧЕНЬЮ НА ПРОЛИФЕРАЦИЮ
НОРМАЛЬНЫХ И ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ ГЕПАТОЦИТОВ
В ПЕРВИЧНОЙ КУЛЬТУРЕ
Сыворотка крови интактных крыс незначительно модифицирует пролиферативную актив-
ность нормальных гепатоцитов в первичной культуре. В то же время сыворотка кро-
ви интактных и гепатэктомированных крыс в комплексе с эпидермальным фактором
роста (ЭФР) и инсулином способна лишь ингибировать с интез ДНК клеток этой
культуры.
У культивируемых трансформированных гепатоцитов по сравнению с нормальными
уменьшается стимулирующий эффект ЭФР и инсулина. Сыворотка крови интактных
крыс и крыс, подвергшихся частичной гепатэктомии, при добавлении в первичную куль-
туру трансформированных гепатоцитов оказывает слабо выраженное действие: в од-
них — ингибирующее, в других — активирующее. Однако после комбинированного при-
менения с ЭФР и инсулином наблюдается значительное снижение чувствительности к
митогенному эффекту.
Плазма крови интактных и гепатэктомированных крыс сама по себе и в комбина-
ции с ЭФР и инсулином лишь ингибирует синтез ДНК нормальных и трансформиро-
ванных гепатоцитов в культуре.
Введение. Установлено, что в регенерации печени принимает участие
ряд митогенных полипептидов. К ним относятся эпидермальный фактор
роста (ЭФР) и группа гепатотропных веществ, обнаруженных в ткани
печени [1] и сыворотке крови [2—4]. Одним из таких веществ являет-
ся трансформирующий фактор роста типа β(ΤΦΡ-β), выделенный из
тромбоцитов [5]. Выяснилось, что в системе in vitro ΤΦΡ-β бифункцио-
нален, и в зависимости от применяемой модели он может либо активи-
ровать, либо ингибировать пролиферацию. В первичной культуре гепа-
98 ISSN №33-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 5 7* 98
тоцитов реализуется ингибиторное действие этого полипептида, при
этом наблюдается активация мембранных рецепторов ЭФР и синергизм
в действии ΤΦΡ-β и ЭФР [6]. ΤΦΡ-β практически не выявляется в плаз-
ме крови, находясь в сывротке в латентном состоянии [7] и будучи свя-
занным с аг-макроглобулином [8].
Наши попытки выделить и охарактеризовать стимуляторы проли-
ферации гепатоцитов из сыворотки крови крыс после частичной гепа-
тэктомии (ЧГЭ) окончились неудачей, так как мы не выявили веществ,
сравнимых по митогенному действию с ЭФР и инсулином. Поэтому бы-
ли предприняты эксперименты с использованием цельной сыворотки и
плазмы крови крыс, подвергнутых ЧГЭ. При этом была поставлена за-
дача выяснить, как они влияют на пролиферативную активность нор-
мальных и трансформированных гепатоцитов в первичной культуре.
Материалы и методы. В опытах использовали белых беспородных крыс разводки
вивария Ин-та проблем онкологии им. Р. Е. Кавецкого АН УССР весом 150—200 г. Сы-
воротку и плазму крови брали через 5, 17 или 24 ч после ЧГЭ, которую проводили
классическим способом, удаляя 2 / 3 печени под эфирным наркозом. В первичную куль-
туру высаживали гепатоциты, полученные от нормальных животных и от крыс, кото-
рым в течение 3 месяцев ежедневно давали для питья 0,02 %-ный раствор N-диэтилнит-
розамина (ДЭНА). При выделении трансформированных гепатоцитов использовали пе-
чень, пораженную опухолевым процессом, ткань которой была почти полностью заме-
щена узлами гепатокарцином различной степени дифференцировки. Как нормальные,
так и трансформированные гепатоциты выделяли перфузией печени раствором коллаге-
назы [9], затем их отделяли от детрита и непаренхиматозных клеток мягким центри-
фугированием.
После промывки в среде Игла клетки высаживали по IO5 в 1 мл среды в 24-лу-
ночные пластиковые платы, предварительно покрытые крысиным коллагеном. Гепато-
циты культивировали в среде Игла с антибиотиками, добавляя в первые 18—20 ч 20 %
сыворотки крупного рогатого скота. Затем среду заменяли бессывороточной средой
(БС) Игла и вносили в нее 2 5 % тестируемых образцов (ТО). Ими были: сыворотка и
плазма крови нормальных крыс, а также сыворотка и плазма крови крыс, полученные
в различные сроки после ЧГЭ. ТО применяли отдельно или в комплексе с ЭФР
(30 нг/мл среды) и инсулином (200 нг/мл среды). ЭФР получали из слюнных желез
самцов мышей [10].
ДНК-синтезирующую активность гепатоцитов оценивали, используя 3Н-тимидин.
Через 18—20 ч после роста гепатоцитов в среде Игла с 20 % бычьей сыворотки клетки
отмывали БС, затем в нее добавляли 25 % ТО и митогены на 24 ч, после чего в куль-
туральную среду вносили метку в концентрации 111 кБк/мл и выдерживали при 37 °С
24 ч. Гепатоциты разрушали кислотным гидролизом, снимали с лунок раббером и перено-
сили на фильтры для просчитывания радиоактивности на β-счетчике. Для каждого ва-
рианта опыта использовали суммарно клетки не менее четырех лунок. Уровень синте-
за Д Н К в первичной культуре нормальных и трансформированных гепатоцитов после
внесения ТО относили к таковому соответствующих гепатоцитов, находящихся в БС —·
ТО/БС. Если ТО вносили одновременно с ЭФР и инсулином, то полученные при этом
данные, характеризующие репликацию ДНК, относили к таковым, полученным при ис-
пользовании только БС—· ( Т О + Э Ф Р + и н с у л и н ) / Б С или к БС с ЭФР и инсулином —
(ТО+ЭФР+инсулин) / Б С + Э Ф Р + и н с у л и н ) .
Результаты и обсуждение. Вначале мы попытались, ответить на
вопрос, насколько увеличивается уровень синтеза Д Н К в нормальных
и трансформированных гепатоцитах после добавления в БС митогенов
ЭФР и инсулина? Оказалось, что в нормальных клетках он увеличился
в 7,3 раза, а в трансформированных-—в 4,8 раза (Р < 0,05), т. е. у
последних чувствительность к действию указанных митогенов ниже
(рис. 1, а, б).
При добавлении в БС сыворотки крови интактных крыс уровень
синтеза Д Н К в культивируемых нормальных гепатоцитах оказывается
несколько выше, чем в гепатоцитах, культивируемых в БС, но более
чем в 3 раза меньше, чем этот показатель при действии ЭФР и инсу-
лина. Следовательно, сама по себе сыворотка интактных крыс обла-
ISSN №33-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 5 7* 99
дает слабой стимулирующей активностью или даже скорее модифици-
рует синтез ДНК. Добавление к сыворотке крови интактных крыс ЭФР
и инсулина угнетает стимулированный этими факторами роста синтез
Д Н К нормальных гепатоцитов в культуре.
Синтез Д Н К в нормальных гепатоцитах ингибируется также после
добавления в БС сыворотки животных, подвергнутых ЧГЭ. При этом
наибольшую ингибирующую активность имеет сыворотка крыс через
Рис. 1. Уровень синтеза Д Н К нормальных (а) и трансформированных (б) гепатоцитов
при применении одной сыворотки крови интактных или гепатэктомированных крыс
(ТО), а также в комбинации с ЭФР и инсулином, отнесенный к таковому при культи-
вировании гепатоцитов в БС (принят за 1): I—(ЭФР+инсулин)/БС; II—ТО/БС;
III— ( Т О + Э Ф Р + и н с у л и н ) / Б С . Влияние ЭФР и инсулина на синтез Д Н К в культиви-
руемых гепатоцитах (./); влияние одной сыворотки крови нормальных крыс и в комби-
нации с ЭФР и инсулином на синтез Д Н К в культивируемых гепатоцитах (2); влияние
сыворотки крови крыс, полученной через 4 (<?), 17 (4) и 24 ч (5) после ЧГЭ, а также
в комбинации с ЭФР и инсулином на синтез Д Н К в культивируемых гепатоцитах; χ —
один эксперимент
Fig. 1. The level of DNA synthesis in normal (a) and transformed (6) hepatocytes in
the primary culture under the following culture conditions: TO — serum of normal or
hepatectomized rats, T O + E G F + i n s u l i n — as above but with EGF and insulin added.
All results are expressed in relation to the DNA/synthet izing level of hepatocytes culti-
vated in serum-free medium (БС)—accep ted for 1.0: I — EGF-insulin/БС; Π — TO/'БС;
III— T O + E G F + i n s u l i n / Б С . The Influence of EGF and insulin on the DNA synthesis
in the cultivated hepatocytes (1); influence of the serum alone or in combination with
EGF and insulin on the DNA synthesis in cultivated hepatocytes (2); effect of serum
obtained af ter 4 h (3), 17 h (4) or 24 h (5) after partial hepatectomy (serum alone or
in combination with ERF and insulin); χ — one experiment
17 ч после операции. Однако добавление одноровременно с сывороткой
крыс после ЧГЭ ЭФР и инсулина позволяет достичь некоторой стиму-
ляции синтеза ДНК, хотя она в 2—3 раза меньше, чем стимуляция, на-
блюдаемая при действии одних митогенов. Кроме того, если в качестве
контроля использовать уровень стимуляции, достигаемый при добавле-
нии ЭФР и инсулина в БС, а не уровень синтеза Д Н К в БС, то оказы-
вается, что во всех случаях сыворотка как интактных, так и гепатэкто-
мированных крыс обладает ингибирующим действием (рис. 2 , а ) .
Таким образом, сыворотка интактных и особенно гепатэктомирован-
ных животных способна ингибировать синтез Д Н К в первичной культуре
нормальных гепатоцитов, активированных ЭФР и инсулином.
Сыворотка интактных крыс и крыс, подвергшихся ЧГЭ, при добав-
лении в первичную культуру трансформированных гепатоцитов оказы-
вает слабо выраженное действие — в одних случаях стимулирующее, в
других — ингибирующее (рис. 1,6). Поэтому усреднение данных иногда
приводит к получению значений с ошибкой, превышающей само сред-
нее значение. При этом после комбинированного применения ТО и ми-
тогенов у трансформированных гепатоцитов наблюдается снижение чув-
100 ISSN №33-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 5 7* 100
ствительности к митогенному эффекту ЭФР и инсулина, что отчетливо
видно при сравнении данных на рис. 1, а, б, а также на рис. 2, б.
При добавлении к культивируемым нормальным и трансформиро-
ванным гепатоцитам плазмы крови крыс после ЧГЭ также наблюдается
ингибирование синтеза ДНК. Ингибиторная активность плазмы оказы-
вается выше, чем сыворотки крови крыс. Она выражена в наибольшей
степени после добавления к нормальным гепатоцитам плазмы крови,
Рис. 2. Уровень синтеза Д Н К нормальных (а) и трансформированных (б) гепатоцитов
при применении сыворотки крови интактных и гепатэктомированных крыс в комбина-
ции с ЭФР и инсулином, отнесенный к таковому после добавления в БС ЭФР и инсу-
лина (принят за 1). Влияние сыворотки крови интактных (1) и гепатэктомированных
крыс через 4 (2), 17 (3) и 24 ч (4) после ЧГЭ на синтез Д Н К культивируемых гепа-
тоцитов, стимулированных введением в среду ЭФР и инсулина
Fig 2. The level of DNA synthesis in the normal (a) and t ransformed (6) hepatocytes
in the primary culture under the influence of the same factors as in Fig. 1. All results
are expressed in the relation to the DNA-synthetizing level of hepatocytes stimulated by
EGF and insulin (accepted for 1.0). Serum from intact ( / ) , or hepatectomized rats: 4 h
(2), 17 h (3), 24 h (4) after the surgery
Рис. 3. Уровень синтеза Д Н К нормаль-
ных (α) и трансформированных (б) ге-
патоцитов при применении одной плазмы
крови крыс (1) и в комбинации с ЭФР
и инсулином (2) через 4 ч после ЧГЭ,
отнесенный к таковому в БС (принят за
1); χ — один эксперимент
Fig. 3. The level of the DNA synthesis
of normal (a) and transformed (6) he-
patocytes under the influence of the rat
blood plasma while applying plasma alo-
ne (1) or in combination with EGF and
insulin (2) (plasma has been obtained 4 Ii
after partial hepatectomy). All results
are expressed in relation to the DNA-synthetizing activity of hepatocytes cultured
the serum-free medium (accepted for 1.0); χ — one experiment
полученной у крыс через 17 ч после ЧГЭ. Чувствительность к подавле-
нию синтеза Д Н К не уменьшается после введения экзогенных митоге-
нов. Для примера приведем данные влияния плазмы крови крыс, полу-
ченной через 4 ч после ЧГЭ, и экзогенных ЭФР и инсулина на уровень
пролиферации культивируемых нормальных и трансформированных
гепатоцитов (рис. 3, а, б).
Следовательно, наши данные указывают на присутствие в сыворот-
ке и плазме крови интактных и гепатэктомированных крыс (в первые
сутки после операции) ингибиторов пролиферации гепатоцитов. Приро-
да их неясна. Возможно, они имеют отношение к тромбоцитарным инги-
биторам пролиферации типа ΤΦΡ-β. Однако, так как плазма эффектив-
нее ингибирует спонтанный и стимулированный факторами роста синтез
ДНК, вероятно, эти факторы отличны от ΤΦΡ-β.
Следует отметить, что наши попытки выделить из сыворотки крови
крыс с использованием различных способов фракционирования митоге-
ны типа ЭФР или инсулина были безуспешными. Выраженное подавле-
ние митогенной активности экзогенного ЭФР и инсулина сывороткой
(плазмой) крови в культивируемых гепатоцитах может быть обуслов-
100 ISSN №33-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 5 7* 101
леио высокой концентрацией в крови а2-макроглобулинов и связыва-
нием ими ЭФР. Это подтверждают наши данные [11] о том, что ЭФР
способен образовывать ковалентные комплексы с белками сыворотки
крови и тромбоцитов (с молекулярной массой около 180 000). У транс-
формированных гепатоцитов по сравнению с нормальными повышается
чувствительность к ингибирующему действию сыворотки крови.
EFFECT OF BLOOD SERUM AND PLASMA IN RATS WITH REGENERATING LIVER
ON PROLIFERATION OF NORMAL AND TRANSFORMED HEPATOCYTES
IN THE PRIMARY CULTURE
L. I. Kononenko, T. A. Alekseeva, Yu. D. Ivashchenko, A. I. Bykorez
R. E. Kavetsky Institute of Oncology Problems,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev
S m m а r у
Blood serum of intact rais slightly modifies proliferative activity of norma! hcpalocytcs
in the primary culture. At the same time, the serum from intact and hepatectomized rats
effectively inhibits the proliferation of hepatocytes stimulated by epidermal growth fac-
tor (EGF) and insulin. Transformed hepatocytes from the liver tumours are less sensitive
to milogenic effects of EGF and insulin. Serum from intact and hepatectomized rats
inhibits EGF-stimulated DNA-synthesis in transformed hepatocytes, though serum alone
slightly influences the hepatocytes proliferative rate. The same inhibitory activity has
been found in the rat blood plasma.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. LaBreque D. Jn vitro stimulation of cell growth bv heoatic stimulator subs tance/ /
Amer. J. Physiol.'— 1982,—242, N 5 ,—P. 289—295.
2. Morley C., Kingdon H. The regulation of cell growth. 1. Identification and partial
characterization of a DNA synthesis stimulation factor from the serum of partiallv
hepatectomized r a t s / / B i o c h e m . et biophys. acta.— 1973 — 308, N 2,—P. 260—275.
3. Nakamura T., Nawa K., Ichihara A. Partial purification and characterization of he-
patocyte growth factor from serum of hepatectomized r a t s / / B i o c h e m . and Biophys.
Res. C o m m u n s . - 1984,— 122, N 3 ,—P. 1450—1459.
4. Control of hepatocyte replication by two serum factors / G. Michalopoulos. K. Houck,
M. Dolan, N. L u e t t e k e / / C a n c e r Res.— 1984,—44, N 10,—P. 4414—4419.
5. Nakamura T., Teramoto H., Jchihara A. Purification and characterization of a growth
factor rat platelets from mature parenchymal hepatocytes in primary cultures / / Proc.
Nat. Acad. Scu. USA.— 1 9 8 6 . - 8 3 , N 18,— P. 6489—6493.
6. Shiota K., Nakamura T., Jehihara A. Distinct effects of t ransforming growth factor-p
on EGF receptors and EGF-induced DNA synthesis in primary cultured rat hepato-
c y t e s / / B i o c h e m . Int.— 1986,—13, N 5 ,—P. 893—901.
7. Lowrence A. Transforming growth factors — an overview / / Cell. Biol.— 1985.— 53.—
P. 93—98.
8. Purification and properties of epidermal growth inhibitor (EGF) from human plate-
letes its separation from type t ransforming growth factor (TGF-β) / W. Huang,
T. Kimura1 K. Mashima et al. / / J. Biochem.— 1986,— 100. N 2,— P. 687—696.
9. Гринчииіин В. П., Oeunoea JI. Α., Винарчук Μ. П. Получение изолированных гепа-
тоцитов и их оценка / /Цитология и генетика.—1981.— 15, № 3.— С. 29—31.
10. Ускоренное получение высокоочшценного эпидермального фактора роста с помощью
жидкостной хроматографии / / Ю. Д. Иващенко, Л. А. Осипова, И. 'Г. Гут, Л. В. Гар-
м а н ч у к / / Эксперим. онкология.— 1985.— 15, № 3.— С. 29—31.
11. Изучение белков, связывающий эпидермальный фактор роста в тромбоцитах и сы-
воротке крови крыс / Ю. Д. Иващенко, А. И. Быкорез, Л. В. Гарманчук и др. / /
Докл. АН СССР,— 1989,— № 3.— С. 67—71.
Ин-т проблем онкологии им. Р. Е. Кавецкого Получено 17.10.89
АН УССР, Киев
102 ISSN №33-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1990. Т. 6. № 5 7* 102
|