Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона

Разработан иммуноферментный сенсор для определения рекомбинантного интерферона α2 человека на основе рН-чувствительных полевых транзисторов. Датчик дает возможность определения рекомбинантного α2 интерферона в пределах концентраций 10–200 мкг/мл. Предложенный метод позволяет на порядок сократить вре...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1996
Автори:	Сергеева, Т.А., Солдаткин, А.П., Рачков, А.Э., Терещенко, М.И., Пилецкий, С.А., Ельская, А.В.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1996
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154090
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона / Т.А. Сергеева, А.П. Солдаткин, А.Э. Рачков, М.И. Терещенко, С.А. Пилецкий, А.В. Ельская // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 4. — С. 31-37. — Бібліогр.: 8 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-154090
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1540902019-06-16T01:25:51Z Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона Сергеева, Т.А. Солдаткин, А.П. Рачков, А.Э. Терещенко, М.И. Пилецкий, С.А. Ельская, А.В. Разработан иммуноферментный сенсор для определения рекомбинантного интерферона α2 человека на основе рН-чувствительных полевых транзисторов. Датчик дает возможность определения рекомбинантного α2 интерферона в пределах концентраций 10–200 мкг/мл. Предложенный метод позволяет на порядок сократить время анализа по сравнению с традиционными методиками ELISA. Продемонстрирована возможность определения концентрации интерферона в культуральной среде. Полученные данные хорошо согласуются с резуль татами иммуноферментного анализа. Исследована вероятность многоразового использования иммуноферментного сенсора. Розроблено імуноферментний сенсор для визначення рекомбінантного інтерферону α2 людини на основі рН-чутливих польових транзисторів. Датчик дає можливість визначення рекомбінантного інтерферону у межах концентрацій 10 – 200 мкг/мл. Запропонований метод дозволяє на порядок скоротити час аналізу порівняно з традиційними методиками ELISA. Продемонстровано можливість визначення концентрації інтерферону у культуральному середовищі. Отримані дані добре узгоджуються з результатами імуноферментного аналізу. Досліджено вірогідність багаторазового використання імуноферментного сенсора. The effective immunosensor for α2-interferon detection based on ion-sensitive field effect transistor has been developed. A specific sensingelement is fabricated by immobilizing interferon on the gate of pH-sensitive field effect transistor (pH-FET). The interaction of anti-interferon antibodies labelled with β-lactamase with. interferon-pH-FET (in the presence of specific enzyme substrate) leads to a local pH-change and produces electrochemical signal which is in proportion to the conjugate concentration. The main working characteristics of the sensor obtained have been estimated. The competitive electroimmunoassay has been employed for interferon detection in analysed solution. The sensor linear response to interferon concentration is obtained in the range 10–200 (μg/mi This gives a possibility of interferon detection in nondiluted cultural medium. The data of the competitive electroimmunoassay are in a good accordance with the ELISA ones. The possibility of regeneration of the immunosensor obtained has been shown. 1996 Article Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона / Т.А. Сергеева, А.П. Солдаткин, А.Э. Рачков, М.И. Терещенко, С.А. Пилецкий, А.В. Ельская // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 4. — С. 31-37. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000437 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154090 577.15.086:543 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
description	Разработан иммуноферментный сенсор для определения рекомбинантного интерферона α2 человека на основе рН-чувствительных полевых транзисторов. Датчик дает возможность определения рекомбинантного α2 интерферона в пределах концентраций 10–200 мкг/мл. Предложенный метод позволяет на порядок сократить время анализа по сравнению с традиционными методиками ELISA. Продемонстрирована возможность определения концентрации интерферона в культуральной среде. Полученные данные хорошо согласуются с резуль татами иммуноферментного анализа. Исследована вероятность многоразового использования иммуноферментного сенсора.
format	Article
author	Сергеева, Т.А. Солдаткин, А.П. Рачков, А.Э. Терещенко, М.И. Пилецкий, С.А. Ельская, А.В.
spellingShingle	Сергеева, Т.А. Солдаткин, А.П. Рачков, А.Э. Терещенко, М.И. Пилецкий, С.А. Ельская, А.В. Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона Биополимеры и клетка
author_facet	Сергеева, Т.А. Солдаткин, А.П. Рачков, А.Э. Терещенко, М.И. Пилецкий, С.А. Ельская, А.В.
author_sort	Сергеева, Т.А.
title	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона
title_short	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона
title_full	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона
title_fullStr	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона
title_full_unstemmed	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона
title_sort	разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1996
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154090
citation_txt	Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона / Т.А. Сергеева, А.П. Солдаткин, А.Э. Рачков, М.И. Терещенко, С.А. Пилецкий, А.В. Ельская // Биополимеры и клетка. — 1996. — Т. 12, № 4. — С. 31-37. — Бібліогр.: 8 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT sergeevata razrabotkapotenciometričeskogoimmunosensoradlâopredeleniâinterferona AT soldatkinap razrabotkapotenciometričeskogoimmunosensoradlâopredeleniâinterferona AT račkovaé razrabotkapotenciometričeskogoimmunosensoradlâopredeleniâinterferona AT tereŝenkomi razrabotkapotenciometričeskogoimmunosensoradlâopredeleniâinterferona AT pileckijsa razrabotkapotenciometričeskogoimmunosensoradlâopredeleniâinterferona AT elʹskaâav razrabotkapotenciometričeskogoimmunosensoradlâopredeleniâinterferona
first_indexed	2025-07-14T05:38:15Z
last_indexed	2025-07-14T05:38:15Z
_version_	1837599553205829632
fulltext	ISSN 0233-7657, Биополимеры и клетка* 1996. Т. 12. № 4 Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона Т. А. Сергеева, А. П. Солдаткин, А. Э. Рачков, М. И. Терещенко, С. А. Пилецкий, А. В. Ельская Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины 252143, Киев ул. Академика Заболотного, 150 Разработан иммуноферментный сенсор для определения рекомбинантного ин- терферона а2 человека на основе рН-чувствительных полевых транзисторов. Датчик дает возможность определения рекомбинантного а2 интерферона в пре- делах концентраций 10—200 мкг/мл. Предложенный метод позволяет на поря- док сократить время анализа по сравнению с традиционными методиками ELISA. Продемонстрирована возможность определения концентрации интерфе- рона в культуральной среде. Полученные данные хорошо согласуются с резуль та- тами иммуноферментного анализа. Исследована вероятность многоразового использования иммуноферментного сенсора. Введение. В последнее время а2-интерферон широко используется в меди- цинской практике для лечения вирусных и онкологических заболеваний [1—3]. Широкому клиническому применению интерферона ранее препятст- вовал крайне низкий его выход при получении обычными методами, т. е. преимущественно из донорской крови человека. Поэтому в лабораториях ряда стран прилагались серьезные усилия к тому, чтобы получать интерферон с помощью генноинженерных методов. В середине 70-х годов такие методы были разработаны. Контроль биотехноло- гических процессов получения интерферона выдвигает задачу разработки быстрых и эффективных способов его количественного определения. Тради- ционное количественное определение интерферона основано на оценке подавления вирусной активности. Однако, несмотря на высокую чувстви- тельность, эти методы сложны в исполнении, трудоемки, не дают информа- ции о типовой принадлежности исследуемого образца, продолжительны во времени, дорогостоящи. Альтернативой им являются иммунохимические методы, в первую очередь, радиоиммунный и твердофазный иммунофермен- тный анализ. Использование последних позволяет упростить анализ, сокра- тить его время до 5—6 ч [4—6 ]. Современные потребности медицины и контроля биотехнологических процессов требуют разработки и создания аналитических систем, сочетаю- щих высокую специфичность и чувствительность определения с коротким (минуты) временем детектирования, удобством, простотой и миниатюрно- стью. Всеми этими преимуществами обладают новые биотехнологические устройства — иммуносенсоры, в которых преобразователь сигнала, возника- Correspondence address. © Т. А. СЕРГЕЕВА, А. П. СОЛДАТКИН, А. Э. РАЧКОВ, М. И. ТЕРЕЩЕНКО, С. А. ПИЛЕЦКИЙ, А. В. ЕЛЬСКАЯ, 1996 31 СЕРГЕЕВА Т. А. И ДР. ющего в процессе биохимического распознавания определенного агента, находится в непосредственном контакте с иммобилизованным высокоспеци- фичным рецептором, представляющим собой антиген или антитело в зави- симости от цели анализа и его схемы. Использованный нами подход при разработке потенциометрического иммуносенсора для определения концентрации интерферона основывается на применении конъюгатов антиинтерфероновых антител с /?-лактамазой, способной расщеплять субстрат с выделением протонов, и рН-чувствитель- ных полевых транзисторов (рН-ПТ) с иммобилизованным на их поверхно- сти интерфероном в качестве датчика для оценки реакции антиген — антитело. Материалы и методы. В работе использовали генноинженерную /3-лак- тамазу ТЕМ-1 из Escherichia coli (ЕС 3.5.2.6), генноинженерный лейкоци- тарный а2-интерферон, моноклональные антитела IF 1/92 производства ООО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург, Россия), кроличьи поликлональ- ные антитела против генноинженерного лейкоцитарного интерферона а г человека (IgG-фракция, полученная очисткой на DEAE-целлюлозе фирмы «Whatman», Великобритания), рН-чувствительные полевые транзисторы 50 мВ/рН (Инновационный центр «Эмокон», Киев). Конъюгирование антител с /3-лактамазой. 2,5 мг поликлональных антиинтерфероновых антител и 5 мг /?-лактамазы растворяли в 1 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 6,8, и диализировали против этого буфера в течение ночи при 4 °С. Добавляли 1 %-й раствор глутарового альдегида до конечной концентрации 0,05 %. Инкубация в течение 3 ч при комнатной температу- ре. Далее добавляли L-лизин до 4 % и инкубировали при тех же условиях еще на протяжении 2 ч. Смесь в течение ночи диализировали при 4 °С против 0,01 М фосфатного буфера, рН 7,2, содержащего 0,15 М NaCl. Полученный конъюгат осветляли центрифугированием при 12 000 об/мин в течение 3 мин. Добавляли глицерин до 50 %, БСА — до 5 мг/мл. Хранение при —20 °С. Рабочее разведение конъюгата подбирали в иммуноферментном анализе с использованием смеси I2, KL крахмала и Na-соли бензилпенициллина как субстрата. Оптическую плотность определяли при длине волны 620 нм с помощью микрофотоколориметра Multiscan МСС 340 («Labsystems», Фин- ляндия) . Иммобилизация биоматериала на затворном диэлектрике полевого транзистора. Иммобилизацию биоматериала на поверхности рН-ПТ осу- ществляли двумя способами. 1. Сорбция белка на матрице БСА: 10 мг БСА растворяли в 100 мкл раствора /?-лактамазы (интерферона) в 2 мМ Ыа-фосфатном буфере, рН 7,5, содержащем 150 мМ NaCl (концентрация фермента 0,2 мг/мл, концентра- ция интерферона 1 мг/мл). Полученный раствор наносили капельным методом на затворный диэлектрик полевого транзистора. На контрольный полевой транзистор, необходимый для компенсации неспецифических эф- фектов, наносили раствор БСА в концентрации 100 мг/мл в 2 мМ Na-фосфатном буфере, содержащем 150 мМ NaCl. Транзисторы с нанесен- ными мембранами инкубировали в течение 30 мин в парах глутарового альдегида. 2. Ковалентная пришивка к затворному диэлектрику рН-ПТ: поверх- ность рН-ПТ, предварительно обработанную хромовой смесью и раствором щелочи, активировали инкубацией в парах у-аминопропил-триэтоксисилана (24 ч) и в течение 4 ч — в парах глутарового альдегида. После этого на поверхность транзистора капельным методом наносили раствор /?-лактамазы (интерферона) в концентрации 1 мг/мл. На контрольный полевой транзи- стор наносили БСА в той же концентрации. 32 РАЗРАБОТКА ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОГО ИММУНОСЕНСОРА Измерительная схема и конструкция сенсора, В работе использовали полупроводниковые чипы, на каждом из которых расположена дифферен- циальная пара рН-ПТ. Конструкция датчика и схема измерений приведены в работе [7 ]. Йммуноферментный анализ. Для определения концентрации интерфе- рона использовали «сэндвичный» вариант анализа. Моноклональные анти- тела к интерферону сорбировали на полистирольных планшетах для имму- ноферментного анализа высушиванием из 2 %-го раствора NH4HC03 в течение ночи при 37 °С. Места неспецифического связывания блокировали инкубацией с раствором БСА в концентрации 2 мг/мл. Платы инкубирова- ли с различными разведениями интерферона в 20 мМ фосфатном буфере, содержащем 0,15 М NaCl (PBS), в течение 1 ч при 37 °С. После отмывки платы инкубировали с конъюгатом кроличьих антиинтерфероновых антител с /?-лактамазой в разведении 1:200 в тех же условиях. После каждой из стадий планшеты отмывали в PBS, содержащем 0,05 % твина-20. В качестве субстратной смеси использовали смесь 0,1 % водорастворимого крахмала, 0,16 % KI, 0,006 % 12, 0,003 % бензилпенициллина (Na-соль). Результаты и обсуждение. В качестве метки для создания иммунофер- ментного сенсора на основе рН-ПТ была выбрана /?-лактамаза, обладающая следующими преимуществами перед другими ферментами: 1) односубъеди- ничная структура; 2) малая молекулярная масса — около 28 кДа; 3) свойство расщеплять субстрат — бензилпенициллин с образованием сильной кислоты, что дает возможность легко регистрировать реакцию связывания антигена с мечеными антителами; 4) высокая стабильность, в том числе термостабильность, как самого фермента, так и конъюгатов /3-лактамазы с антителами (конъюгаты хранятся около года практически без потери активности); 5) высокая удельная активность в широком диапазоне рН. Для подтверждения принципиальной возможности создания иммуно- ферментного сенсора с использованием /?-лактамазной метки предваритель- но была предпринята попытка создания энзимосенсора на основе данного фермента и оценки его рабочих характеристик. Фермент иммобилизовали на поверхности рН-ПТ в матрице БСА, как описано выше. Для компенсации неспецифических эффектов, например, реакции транзистора на изменения освещенности измерения проводили в режиме дифференциальной пары (относительно контрольного полевого транзистора, на который наносили БСА-матрицу без фермента). Полученный энзимосенсор демонстрировал возможность определения субстрата (Na-соли бензилпенициллина) в области концентраций 0,1 — 1,5 мМ (с линейным участком 0,1—0,75 мМ в линейных координатах и 0,1—1,5 мМ — на полулогарифмической шкале) (рис. 1). Рис. 1. Зависимость величины сенсорного от- клика (мВ) /?-лактамазного энзимосенсора от концентрации субстрата (Na-соли бензилпени- циллина) : 1 — линейная шкала; 2 — полулога- рифмическая шкала. По оси ординат — сен- сорный отклик, мВ 33 СЕРГЕЕВА Т. А. И ДР. Следует отметить, что полученные зависимости величины отклика энзимосенсора от концентрации субстрата можно использовать для опреде- ления содержания основного вещества в препарате пенициллина. В отличие от традиционных [8] методов этот подход не является сложным, трудоем- ким, не требует большого количества реактивов и может быть успешно применен для определения бензилпенициллина в препарате антибиотика, а также для контроля технологического процесса его производства. Время отклика датчика составляло всего 3—4 мин, а продолжитель- ность функционирования — 14 сут без существенного снижения активности. Детально исследовали оптимальные условия работы /2-лактамазного сенсора: влияние рН, ионной силы и буферной емкости раствора (рис. 2—4). Максимальные отклики были получены в 2,5 мМ фосфатном буфере, рН 7,5, и при концентрации NaCl 150 мМ, т. е. оптимальные условия работы энзимосенсора близки к таковым проведения иммунохимической реакции. В дальнейшем была предпринята попытка создания иммуносенсора с использованием интерферона и конъюгата /3-лактамазы с антиинтерферо- новыми антителами. Дифференциальная пара полевых транзисторов с иммобилизованным биоматериалом (интерферон на одном транзисторе, БСА на другом — контрольном) представляет собой биодатчик. Для опре- деления оптимальной концентрации конъюгата антиинтерфероновых ан- тител с /S-лактамазой была исследована зависимость величины сенсорного отклика от концентрации конъюгата (рис. 5). Как видно, иммуносенсор Рис. 2. Зависимость величины сен- сорного отклика (мВ) /?-лактамаз- нош энзимосенсора от рН среды. Измерения проводили в 2,5 мМ Na- фосфатном буфере для концентра- ции субстрата: 7 — 1,25; 2 — 1; 3 — 0,75; 4 — 0,5; 5 — 0,25 мМ Рис. 3. Зависимость величины сенсорного отклика (мВ) /?-лактамазного энзимосенсора от концентрации NaCl в среде. Измерения проводили в 2,5 мМ Na-фосфатном буфере при концентрации субстрата (Na-соли бензилпенициллина) 0,5 мМ Рис. 4. Зависимость величины сенсорного отклика (мВ) ^-лактамазного энзимосенсора от концентрации буфера. Концентрация субстрата (Na-соли бензилпенициллина) 0,5 мМ 34 РАЗРАБОТКА ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОГО ИММУНОСЕНСОРА Рис. 5. Зависимость величины иммуносенсорного отклика (мВ) от концентрации конъюгата анти- интерфероновых антител с /?-лактамазой. На по- верхностй трансдъюсера иммобилизован интер- ферон. Измерения проводили в 2,5 мМ Na-фос- фатном буфере, рН 7,5, 150 мМ NaCl давал возможность определения концентрации конъюгата антиинтерфероно- вых антител с /?-лактамазой в пределах 1 — 1000 мкг/мл. Были изучены также оптимальные условия работы иммуноферментного сенсора. Показано, что для различных величин рН и концентраций буфера зависимости были подобны таковым для иммобилизованного фермента. Однако увеличение ионной силы, приводящее к усилению сенсорного отклика в случае иммобилизованного фермента, значительно снижало величину иммуносенсорного отклика. Это можно объяснить тем, что увели- чение ионной силы раствора ведет к частичной десорбции конъюгата, специфически связавшегося с иммобилизованным на поверхности трансдъю- сера интерфероном, за счет разрушения ионных связей, участвующих в стабилизации взаимодействия антиген — антитело. С другой стороны, поло- жительно заряженные ионы Na+ могут экранировать заряд отрицательно заряженной в таких словиях БСА-мембраны и, таким образом, замедлять диффузию протонов, образующихся в процессе работы фермента, к повер- хности трансдъюсера. Следует отметить, что способ иммобилизации интерферона на затвор- ном диэлектрике полевого транзистора не влиял на величину сенсорного сигнала, однако при иммобилизации путем ковалентной пришивки время сенсорного отклика сокращалось вдвое. Это выглядит вполне закономерным, поскольку диффузия субстрата и продукта (Na-соли бензилпенициллина и протонов) к поверхности полевого транзистора сквозь матрицу БСА требует большего времени, чем в случае ковалентно пришитого к поверхности интерферона. Для определения концентрации интерферона использовали вариант анализа, основанный на конкуренции иммобилизованного на поверхности Рис. 6. Калибровочная кривая для определения концентрации интерферона в исследуемом об- разце в конкурентном варианте анализа. Изме- рения проводили в 2,5 мМ Na-фосфатном буфе- ре, 150 мМ NaCl. По оси ординат — сенсорный отклик, мкВ 35 СЕРГЕЕВА Т. А. И ДР. рН-ПТ и свободного (в исследуемой пробе) интерферона за связывание с антиинтерфероновыми антителами, меченными ферментом. Как результат, наблюдали снижение отклика сенсора, пропорциональное концентрации интерферона в исследуемой пробе в пределах 10—200 мкг/мл (рис. 6). Продемонстрирована возможность определения концентрации интерферона в культуральной среде. Полученные результаты хорошо согласовались с результатами иммуноферментного анализа (ошибка в пределах 10 %). Следует отметить, что предложенный метод уступает по чувствительности традиционному иммуноферментному анализу, однако позволяет сократить на порядок время анализа, является более технологичным, а достигнутая чувствительность достаточна для контроля биотехнологического процесса производства интерферона. Как правило, при иммуносенсорном анализе используют один сенсор- ный чип для одного измерения. Это является недостатком данного метода, так как влечет за собой возрастание стоимости анализа, а также недоста- точно высокую воспроизводимость метода при количественном анализе, что особенно важно. Регенерация поверхности покрытого антигеном сенсора путем удаления связавшихся антител — один из подходов, дающих возможность решить эти проблемы. Комплекс антиген — антитело формируется за счет нековалент- ных связей (водородных, ионных, ван-дер-ваальсовых, гидрофобных). Для эффективной диссоциации комплекса антиген — антитело необходимо уменьшить силу этих взаимодействий. В большинстве случаев для этого используют буферные растворы с высоким или низким значением рН, хаотропные агенты, поверхностно-активные вещества. Растворы элюентов в иммуноферментном анализе подбирали, приме- няя в качестве твердой фазы полупроводниковые пластины Si3N4, соответ- ствующие поверхности рН-ПТ. Результаты, отражающие эффективность использования различных элюирующих растворов, представлены ниже: Буфер, используемый для элюции Элюированный конъюгат, °/0 Как видно, наиболее эффективными элюирующими растворами явля- ются буферы с низкими значениями рН. В дальнейшей работе для элюиро- вания антител, связавшихся с антигеном, иммобилизованным на поверхно- сти рН-ПТ, использовали 0,03 М цитратный буфер, рН 2,6. После регенерации активной поверхности пластин тестирование способ- ности иммобилизованного антигена к последующему взаимодействию со специфическими антителами проводили в ИФА. Следует подчеркнуть, что обработка вышеуказанными элюирующими растворами практически не сказывается на функциональной активности 36 РАЗРАБОТКА ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОГО ИММУНОСЕНСОРА иммобилизованного антигена. Последний выдерживал 10 циклов связыва- ния с конъюгатом без снижения ативности. Полученные результаты позволяют рассчитывать на многоразовое ис- пользование иммуноэнзимного сенсора. Т. А. Сергеева, О. П. Солдаткін, О. Е. Рачков. М. І. Терещенко, С. А. Пілецький, Г. В. Єльська / Розробка потенціометричного імуносенсора для визначення інтерферону Резюме Розроблено імуноферментний сенсор для визначення рекомбінантного інтерферону а2 людини на основі рН-чутливих польових транзисторів. Датчик дає можливість визначення рекомбінантного інтерферону у межах концентрацій 10 — 200 мкг/мл. Запропонований метод дозволяє на порядок скоротити час аналізу порівняно з традиційними методиками EL1SA. Продемонстровано можливість визначення концентрації інтерферону у культу рольному середовищі. Отримані дані добре узгоджуються з результатами імуноферментного аналізу. Досліджено вірогідність багаторазового використання імуноферментного сенсора. Т. A. Sergeyeva, A. P. Soldatkin, А. Е. Rachkov, М. І. Tereschenko, S. A. Piletsky, А. V. El'skaya Development of potentiometric immunosensor for interferon detection Summary The effective immunosensor for a2-interferon detection based on ion-sensitive field effect transistor has been developed. A specific sensing element is fabricated by immobilizing interferon on the gate of pH-sensi- tive field effect transistor (pH-FET). The interaction of anti-interferon antibodies labelled with /?-lac- tamase with interferon-pH-FET (in the presence of specific enzyme substrate) leads to a local pH-change and produces electrochemical signal which is in proportion to the conjugate concentration. The main work- ing characteristics of the sensor obtained have been estimated. The competitive electroimmunoassay has been employed for interferon detection in analysed solution. The sensor linear response to interferon con- centration is obtained in the range 10—200 (fig/ mi This gives a possibility of interferon detection in nondiluted cultural medium. The data of the competitive electroimmunoassay are in a good accordance with the EL1SA ones. The possibility of regeneration of the immunosensor obtained has been shown. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Intron A recommended by EC committee / / Appl. Genet. News.—1991.—11, N 12—P. 6. 2. Wong R.y Morejon А. у Ivonne O.R. et al Treatment with human leukocyte interferon versus recombinant alpha 2 interferon in Cuban patients with combined infection HBsAG/YIH / / Interferon Biotechnologia: Symp. 1, Int. Conf. Ctr. (Apr. 17—22, 1989, Havana).— Havana, 1989.—P. SOI—001. 3. Ludwig Ch. U. Moglichkeiten und Grenzen der Anvendung von Interferonen in der Klinik / / Schweiz. med. Wochenschr.—1989.—119, N 44.—S. 1539—1543. 4. Пилявская E. А., Бабоиіко Ю. А. Иммуноферментная двухсайтовая тест-система для определения альфа-интерферона / / Материалы науч. конф., посвященной 85-летию Томск. НИИ вакцин и сывороток НПО «Вирион».— Томск, 1991.—4. 2..—С. 40—42. 5. Иовлев В. И. у Соловьева И. Е., Степанов А. Н. Количественное определение интерферо- на методом иммуноферментного анализа / / Тр. Ленинград. НИИ эпидемиологии и микробиологии.—1988.—64.—С. 108—113. 6. Соловьева И. Е., Вербов В. Я., Кондратьева Г. А. Разработка иммуноферментного тестирования альфа-интерферона человека / / Генно-инженер. человеч. альфа-интерфе- рон.—Л., 1988.—С. 101—105. 7. Boubriak О. A , Soldatkin А. P., Starodub N. F. Determination of urea in blood serum by urease biosensor based on an ion-sensitive field-effect transistor / / Sensors and Actuators В.—1995.—N 26-27.—P. 429-431 8. Государственная фармакопея СССР.—M.: Медицина, 1968.—С. 980—982. удк 577.15.086:543 Поступила в редакцию 16.11. 95 37

Разработка потенциометрического иммуносенсора для определения интерферона

Репозитарії

Схожі ресурси