Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс

С помощью методов иммунохимии показано наличие иммунореактивности апопротеина A-I (апо A-I) во фракции суммарного, репрессированного, транскрипционно активного хроматина и ядерного матрикса. Используя иммуноблотинг, удалось выявить два белка, по антигенным свойствам идентичных апо A-І Один с молекул...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1992
Автори:	Панин, Л.Е., Поляков, Л.М., Усынин, И.Ф., Кузьменко, А.П., Потеряева, О.Н.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1992
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Теми:	Клеточная биология
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154313
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс / Л.Е. Панин, Л.М. Поляков, И.Ф. Усынин, А.П. Кузьменко, О.Н. Потеряева // Биополимеры и клетка. — 1992. — Т. 8, № 2. — С. 44-49. — Бібліогр.: 13 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-154313
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1543132019-06-16T01:30:08Z Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс Панин, Л.Е. Поляков, Л.М. Усынин, И.Ф. Кузьменко, А.П. Потеряева, О.Н. Клеточная биология С помощью методов иммунохимии показано наличие иммунореактивности апопротеина A-I (апо A-I) во фракции суммарного, репрессированного, транскрипционно активного хроматина и ядерного матрикса. Используя иммуноблотинг, удалось выявить два белка, по антигенным свойствам идентичных апо A-І Один с молекулярной массой 28 ООО присутствовал во фракции транскрипционно активного хроматина и в ядерном матриксе; второй белок (около 14 000) – только в репрессированном хроматине. Молекулярная масса, электрофоретическая подвижность и иммунохимическая идентичность позволяют считать, что один белок является апо A-I, другой – продуктом его лимитированного протеолиза. З використанням сучасних методів імунохімічного аналізу в хроматині ядер гепатоцитів щурів виявлено два білки, що ідентичні за антигенними властивостями апопротеї, ну А-I (апо А-І). Один з молекулярною масою 28 000 містився у фракції транскрипційно активного хроматину та в ядерному матриксі. Другий .білок (біля 14000) знаходився лише в репресованому; хроматині. Питома імунореактивність апо А-І транскрипційно активного хроматну і ядерного матриксу була удвічі вищою, ніж сумарного і репресованого хроматину. Молекулярна маса, електрофоретична рухомість та імунохімічна ідентичність дозволяють вважати, що один білок є апо А-І, а другий – продуктом його лімітованого, протеолізу. Two proteins of 28000 and 14000 immunologically identifical to apoprotein A-I were found in the chromatin of rat hepatocyte nuclei of using immunoblotting and enzyme-linked immunosorbent assay. The 28 000 protein was present in the trans-criptionally active chromatin and in the nuclear matrix. The 14000 protein was present in the repressed chromatin. The molecular weights of these protein determinated by SDS-PAGE, and immunochemical identity allow us to propose, that one of this proteins is apoprotein A-I, and the other one is probably a product of limited proteolysis of apoprotein A-I. 1992 Article Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс / Л.Е. Панин, Л.М. Поляков, И.Ф. Усынин, А.П. Кузьменко, О.Н. Потеряева // Биополимеры и клетка. — 1992. — Т. 8, № 2. — С. 44-49. — Бібліогр.: 13 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000319 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154313 577.112.856:616.153/078.3 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Клеточная биология Клеточная биология
spellingShingle	Клеточная биология Клеточная биология Панин, Л.Е. Поляков, Л.М. Усынин, И.Ф. Кузьменко, А.П. Потеряева, О.Н. Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс Биополимеры и клетка
description	С помощью методов иммунохимии показано наличие иммунореактивности апопротеина A-I (апо A-I) во фракции суммарного, репрессированного, транскрипционно активного хроматина и ядерного матрикса. Используя иммуноблотинг, удалось выявить два белка, по антигенным свойствам идентичных апо A-І Один с молекулярной массой 28 ООО присутствовал во фракции транскрипционно активного хроматина и в ядерном матриксе; второй белок (около 14 000) – только в репрессированном хроматине. Молекулярная масса, электрофоретическая подвижность и иммунохимическая идентичность позволяют считать, что один белок является апо A-I, другой – продуктом его лимитированного протеолиза.
format	Article
author	Панин, Л.Е. Поляков, Л.М. Усынин, И.Ф. Кузьменко, А.П. Потеряева, О.Н.
author_facet	Панин, Л.Е. Поляков, Л.М. Усынин, И.Ф. Кузьменко, А.П. Потеряева, О.Н.
author_sort	Панин, Л.Е.
title	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс
title_short	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс
title_full	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс
title_fullStr	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс
title_full_unstemmed	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс
title_sort	иммунохимическая идентификация апопротеина a-i в хроматине ядер гептоацитов крыс
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1992
topic_facet	Клеточная биология
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154313
citation_txt	Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс / Л.Е. Панин, Л.М. Поляков, И.Ф. Усынин, А.П. Кузьменко, О.Н. Потеряева // Биополимеры и клетка. — 1992. — Т. 8, № 2. — С. 44-49. — Бібліогр.: 13 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT paninle immunohimičeskaâidentifikaciâapoproteinaaivhromatineâdergeptoacitovkrys AT polâkovlm immunohimičeskaâidentifikaciâapoproteinaaivhromatineâdergeptoacitovkrys AT usyninif immunohimičeskaâidentifikaciâapoproteinaaivhromatineâdergeptoacitovkrys AT kuzʹmenkoap immunohimičeskaâidentifikaciâapoproteinaaivhromatineâdergeptoacitovkrys AT poterâevaon immunohimičeskaâidentifikaciâapoproteinaaivhromatineâdergeptoacitovkrys
first_indexed	2025-07-14T05:57:37Z
last_indexed	2025-07-14T05:57:37Z
_version_	1837600769907359744
fulltext	Клеточная биология УДК 577.112.856:616.153/078.3 Л. Е. Панин, Л. М. Поляков, И. Ф. Усынин, А. П. Кузьменко, О. Н. Потеряева ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ АПОПРОТЕИНА A-I В ХРОМАТИНЕ ЯДЕР ГЕПТОАЦИТОВ КРЫС С помощью методов иммунохимии показано наличие иммунореактивности апопротеи- на A-I (апо A-I) во фракции суммарного, репрессированного, транскрипционно актив- ного хроматина и ядерного матрикса. Используя иммуноблотинг, удалось выявить два белка, по антигенным свойствам идентичных апо A-L Один с молекулярной массой 28 ООО присутствовал во фракции транскрипционно активного хроматина и в ядерном матриксе; второй белок (около 14 000) — только в репрессированном хроматине. Моле- кулярная масса, электрофоретическая подвижность и иммунохимическая идентичность позволяют считать, что один белок является апо A-I, другой — продуктом его лимити- рованного протеолиза. Введение. Имеется достаточно оснований предполагать, что липопро- теиновые комплексы играют определенную роль в структурной и функциональной организации хроматина эукариот. Вместе с тем, меха- низмы транспорта липидов в ядра, их физико-химическое состояние в составе хроматина, а также природа белков·, ассоциированных с хрома- тином, до еих пор остаются невыясненными. Ранее нами были прове- дены исследования1 по поглощению и внутриклеточ<ному распределению меченных ПО белковому компоненту ЛИ'ПО'ПрОТеИНОВ (ЛП) в печени и в клетках коры надпочечников крыс. Отмечалось наличие радиоактив- ности в ядерной фракции. Распределение радиоактивности менялось в зависимости от функционального состояния организма. В частности оно изменялось при интенсивной физической нагрузке, а также в опы- тах in vitro при добавлении некоторых гормонов: адреналина, гидро- кортизона или АКТГ [1, 2]. Учитывая, что основным белковым компо- нентом липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) является апопро- теин A-I (апо A-I), мы предприняли попытку обнаружения его в сос- таве ядерных структур гепатоцитов крыс с помощью иммунохимических методов. Материалы и методы. Работа выполнена на крысах-самцах ли- нии Вистар массой 180—200 г. Препаративное выделение ЛП из сыво- ротки крови крыс осуществляли! ультрацентрифугированием в раство- рах KB [3] на центрифуге «Beckman L-75» (США), ротор 75 Ti. Делипидирование ЛП осуществляли охлажденной до —16 °С сме- сью этанол—диэтиловый эфир. Апо A-I выделяли методом гель-филь- трации на сефарозе 4В («Pharmacia», Швеция) в 0,01 M трис-НС1-бу- фере, рН 8,6, содержащем 6 M мочевину. Пик II, соответствующий апо A-I, повторно очищали путем ионообменной хроматографии на DEAE-Toyopearl 650М («Тоуо Soda», Япония), уравновешенном 0,01 M трис-HCl, ρ H 8,6, с 6 M мочевиной. Элюирование проводили исходным буфером с линейным градиентом от 0,01 до 0,5 М. Чистоту апо A-I проверяли с помощью электрофореза в ПААГ по Лэммли [4]. В ка- честве маркеров использовали наборы фирмы «Pharmacia». Концент- рацию белка определяли· по Лоури [5]. © Л. Е. ПАНИН, л . М. ПОЛЯКОВ, И. Ф. УСЫНИН, А. П. КУЗЬМЕНКО, O1. Н. ПОТЕРЯЕВА, 1992 44 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 2 4-1-920 44 Для получения поликлональных антител кроликам подкожно вво- дили раствор апо A-II в разіньге точки вершей части спины. Первую иммунизацию осуществляли с полным адъювантом Фрейнда. Каждому кролику вводили смесь 0,5 мл антигена (100 мкг белка) с 0,5 мл пол- ного адъюванта Фрейнда. Последующие две иммунизации проводили через 10 дней по 100 мкг антигена с неполным адъювантом Фрейнда. Последнюю иммунизацию выполняли внутривенным введением раство- ра апо A-I без адъюванта. Гамма-глобулиновую фракцию' получали из сыворотки крови кроликов* трехкратным осаждением 50 %-ным рас- твором сульфата аммония с последующим диализом против 0,01 M фосфатного буфера, рН 7,4, содержащего 0,15 M NaCl и 0,1 % азид натрия. Конечный этап очистки антител включал ионообменную хро- матографию на ДЭАЭ-сефарозе («Pharmacia»). Полученные антитела хранили в замороженном виде при —70 °С. Для идентификации анти- тел использовали реакцию двойной радиальной иммунодиффузии [6]. В процессе работы специфичность антител проверяли с помощью не- прямого метода иммуноферментного анализа (тИФА) или иммунобло- тинга [7]. Количественное определение апо A-I иммунореактивности во фрак- циях хроматина и ядерного матрикса выполнялось методом непрямого тИФА [8]. Пробы по 100 мкл наносили на полистироловые планшеты «Nunc» (Дания) и инкубировали в течение ночи при 4 °С. В качестве стандарта для построения калибровочной кривой использовали раствор апо A-I, содержащий 1, 2, 5, 10, 20, 50 и 100 нг белка © 0,01 M фос- фатно-солевом буфере (ФСБ). После инкубации планшеты трижды от- мывали ФСБ, содержащим 0,05% твин-20 (ФСБТ). Незанятые места сорбции блокировали смесью 1 % бычьего альбумина и 0,5 % яичного альбумина. В обработанные таким образом планшеты добавляли по 100 мкл специфических антиапо A-I антител в разведении 1 : 2500 в 0,01 M ФСБТ. Связавшиеся с ало A-I первые антитела на следующем этапе насыщались вторыми антителами. Для> этого использовали козьи антитела против иммуноглобулинов кролика, меченные пероксидазой («Sigma», США), которые добавляли в количестве 100 мкл в каждую ячейку '(разведение 1 : 1000 в ФСБТ). Планшеты инкубировали в те- чение 1 ч при 23 °С. После 5-кратного отмывания1 ФСБТ проводили ферментативную реакцию. В ячейки вносили по 200 мкл свежеприго^ товленного субстрата — орто-фенилендиамина («Мегск», ФРГ) в кон- центрации 20 мг/100 мл в фосфатно-цитратном буфере, рН 5,0, содер- жащем 0,006 % H2O2 . Через 15 мин ферментативную реакцию оетанав·- ливали добавлением 50 мкл 10 N H2SO4 и измеряли экстинкцию при длине волны 492 нм на многоканальном фотометре «Multiscan-Flow» (Англия). В качестве отрицательного контроля принимали значения оптической плотности в ячейках, в которые вместо антигена добавляли по 100 мкл ФСБ. Гепатоциты из печени крыс выделяли с помощью коллагеназы описанным ранее методом [9]. Хроматин и ядерный матрикс получали из клеток после гомогенизации их в· гипотоническом растворе, содер- жащем 1 мМ трие-НС1, рН 7,6, 3 мМ CaCl2, 5 мМ MgCl2 , 1 мМ дитио- треитол (ДТГ), 1 мМ фенилметансульфонилфторид (ФМСФ) и 0,1 % тритон X-100. Гомогенат помещали в лед на 5 мин, добавляли сахаро- зу до концентрации 0,25 M и центрифугировали 10 мин при 800 g. Оса- док после дополнительной промывки в буфере для гомогенизации ре- суспендировали в 50 объемах 2,1 M сахарозы, содержащей 1 мМ трис- HCl, рН 7,6, 3 мМ CaCl2, 5 мМ MgCl2 , 1 мМ ДТГ, 0,5 мМ ФМСФ, и центрифугировали в течение 1 ч при 50 000 g на центрифуге L-80 («Вескшап», США), ротор SW-27. Полученную ядерную фракцию два- жды промывали раствором 0, 25 M сахарозы, 3 мМ CaCl2, 5 мМ MgCl2 , 1 мМ ДТТ, 1 мМ ФМСФ, 1 мМ трис-HCl, рН 7,6. Затем ядра ресуспендировали в растворе, содержащем 0,28 M NaCl, 1 мМ трис-HCl, рН 7,9, 22 мМ ЭДТА-Na,, 1 % тритон Х-100, и ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 2 4-1-920 4 5 центрифугировали 30 мин при 25 000 g. Гелеобразиый осадок хромати- на трижды промывали раствором, содержащим 10 мМ трис-HCl, рН 7,6, 2 мМ ЭДТА-Ыа2 и 1 мМ ФМСФ. Фракции транскрипционно активного и неактивного (репрессированного) хроматина выделяли по методу Готтесфилда [10], используя ДНКазу II фирмы «Serva» (ФРГ). Для получения' ядерного матрикса ядра ресуспендировали в рас- творе, содержащем 0,25 M сахарозу, 5 мМ трис-HCl, рН 7,6, 3 мМ CaCl2, 5 мМ MgCl2 , 1 мМ ДТТ, 1 мМ ФМСФ, 30 ед. на мл ДНКазы I («Serva») так, чтобьг конечная концентрация Д Н К составляла 2,0— Рис. I. Электрофорез в 12,5 %-ном ПААГ по Лэммли: 1 — апо A-I после хроматогра- фической очистки; 2 — суммарные апо-ЛПВП Рис. 2. Двойная радиальная иммунодиффузия по Оухтерлони (в центре—антитела к апо A-I крыс): 1 — апо A-I крыс; 2 — цельная сыворотка крыс; 3— сыворотка крыс после удаления ЛП; 4 — ЛПВП крыс; 5 — ЛПВП человека; 6 — апо A-I человека Рис. 3. Определение специфичности антител с помощью иммуноблотинга: 1 — низкомо- лекулярные белки-стандарты («Pharmacia») фосфорилаза, альбумин, овальбумин, кар- боангидраза, ингибитор трипсина, лактальбумин; 2 — суммарные апо-ЛПВП; 3 — электрофоретический перенос апо-ЛПВП на нитроцеллюлозную мембрану с последую- щей обработкой антиапо A-I антителами 2,5 мг/мл. Смесь инкубировали при 4 °С в течение 16—18 ч и добав- ляли 20 объемов 2,12 M NaCl, 1,1 % тритона X-100. Ядер'ный матрикс осаждали центрифугированием в течение 30 мин при 40 000 g [10]. Результаты и обсуждение. Хроматографически очищенный апо A-I крыс мигрировал в ПААГ одной полосой как гомогенный белок с молекулярной массой около 28000 (рис. 1). Полученные кроличьи ан- титела к апо A-I крыс были охарактер'изованы с помощью' двойной им- мунодиффузия по Оухтерлони (рис. 2). Антитела давали одну полосу преципитации с апо A-I, изолированными ЛПВП крыс, сывороткой крыс и сывороткой крыс, >не содержащей после ультрацентрифугирО'- вания ліипопротеиньї. Отсутствовала преципитация с ЛПВП человека, а также с апо A-I человека, что свидетельствует об иммунохимической гетерогенности апо A-I человека и крысы. Обращает на себя внимание четкая полоса преципитации с сывороткой крыс, не содержащей липо- протеины. Это подтверждает наличие «свободного» пула апо A-I, не- давно показанного методом перекрестного иммуноэлектрофореза [11]. Моноспецифичпость полученных антител была доказана с помо- щью иммуноблотинга, по чувствительности значительно превосходяще- го метод Оухтерлони (рис. 3). Для этого апо-ЛПВП крыс были раз- делены электрофоретически в 12,5 %-ном ПААГ в присутств'ии DS-Na 46 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 2 4-1-920 46 Затем белки переносили на нитроцеллюлозную мембрану («Schleicher und Schull», ФРГ) полусухим методом (semi-dry) с использованием плоских угольных электродов [7]. На нижнее графитовое плато, слу- жащее анодом, укладывался «сэндвич»—фильтровальная бумага, нит- роцеллюлозная мембрана, гель, фильтровальная бумага. Сверху «сэнд- вич» закрывали катодом из графита. Перенос белков осуществляли в течение 1 ч при силе тока 0,8 мА/см2 . После блокировки нитроцеллю- Рис. 4. Тестирование антител с помощью тИФА. По оси ординат — поглощение при 492 нм; по оси абсцисс — количество антител в одной ячейке. Связывание антител с апо A-I крыс (1) и человека (2) Рис. 5. Твердофазный ИФА апо A-1-иммунореактивности во фракциях хроматина ядер гепатоцитов крыс: 1 — суммарный хроматин; 2 — репрессированный; 3 — транскрип- ционно активный; 4 — ядерный матрикс Рис. 6. Выявление апо A-I во фракциях хроматина ядер гепатоцитов крыс с помощью иммуноблотинга: 1 — апо A-I крыс (стандарт); 2 — ядерный матрикс; 3— транскрип- ционно активный хроматин; 4 — репрессированный хроматин лом. Полученные антитела взаимодействовали только· с апо A-I и не связывались с другими апопротеинами (апо A-IV, апо Е, апо С). Антитела к апо A-I тестировали с помощью непрямого метода тИФА. Для этого антиген сорбировали на планшет в избыточной кон- центрации. Обр азцы антител ρ аститровыв а ли при последовательном двухкратном разведении буфером, содержащим 0,05 % твин-20 и 0,5 % бычьего сывороточного альбумина. Конечный титр антител был доста- точно высок — 1 : 600 ООО— 1 : 800 000. В данных условиях оптимальная концентрация антител составила 5 мкг/мл, что соответствовал0 раз- ведению 1 : 2000 — 1 : 3000 (рис. 4). Дальнейшие исследования1 в этом Направлении были связаны с иммунохимической идентификацией апо A-I в хроматине ядер гепато- цитов крыс. Материалом для исследования1 служили суммарный хро- матин, фракция репрессированного или транскрипционно неактивного хроматина, транскрипционно активный хроматин, а также ядерный матрикс. Выбор объекта исследования продиктован двумя причинами: во-первых, апо A-I является основным белком ЛПВП и составляет у разных видов животных от 50 до 80—90 %; во-вторых, как было пока- зано нами ранее, ЛПВП могут принимать участие В' регуляции экспрес- сии генов [12]. По отношению к суммарному содержанию количество Д Н К в реп- рессированном хроматине было не менее 80 %, в транскрипционно активном хроматине—11 —15 %, а в> ядерном матрикое — 3—5 %. Ko- ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 2 4-1-920 4 7 личественную оценку апо АЛ-и ммуноре активности во фракциях хрома- тина осуществляли с помощью тИФА (рис. 5). Оказалось, что содер- жание апо A-I (апо A-1-иммунореактивности) в -суммарном хроматине составляло 60 нг на 1 м-г белка фракции. Аналогичный' показатель во фракции репрессированного хроматина был равен 52 нг на 1 мг белка. Апо А-І-иммунореактивность в транскрипционно активном хроматине была почти вдвое въпие. Самой высокой она была в ядерном матриксе и составляла 110 нг на 1 мг белка. Дополнительная информация получена с помощью1 иммуноблотин- га (рис. 6). Оказалось, что в хроматине ядер гепатоцитов крыс присут- ствуют два белка, иммунологически идентичных апопротеину A-I: один из них с молекулярной массой 28 000, другой — с молекулярной мас- сой около 14 000. Первый белок по электрофоретической подвижности соответствует апо A-I. Он присутствует во фракции транскрипционно активного хроматина и в ядерном матриксе. Второй, низкомолекуляр- ный белок, имеющий антигенные детерминанты апо A-I, присутствует только во фракции репрессированного хроматина. По-видимому, это продукт лимитированного протеолиза апо A-I. Где происходит протео- лиз, сказать трудно. Возможно, в макрофагах. Однако в настоящее время в ядре обнаружены как нейтральные, так и кислые протеазы, в том числе катепсины D, В, H и др. [13]. Это делает воолне реальной частичную деградацию апо A-I с молекулярной массой 28 ООО и обра- зование белка с молекулярной' массой около 14 ООО непосредственно в ядре. Судьба последнего белка пока остается нежной. Полученные результаты чрезвычайно интересны с точки зрения анализа условий, создающих или поддерживающих транскрипционно активную конформацию хроматина независимо от того, обусловлено это собственно апопротеинами или липидами, которые они переносят в ядро. Обнаружение высокой апо А-І-иммунореактивности в ядерном матриксе чрезвычайно важно, ибо сегодня последний рассматривается как место РНК-транскрипции или репликации ДНК. Решение данного вопроса требует дальнейших исследований. S u m m a r y . Two proteins of 28 000 and 14 000 immunologically identifical to apopro- tein A-I were found in the chromatin of rat hepatocyte nuclei of using immunoblotting and enzyme-linked immunosorbent assay. The 28 000 protein was present in the trans- criptionally active chromatin and in the nuclear matrix. The 14 000 protein was present in the repressed chromatin. The molecular weights of these protein determinated by SDS-PAGE, and immunochemical identity allow us to propose, that one of this proteins is apoprotein A-I, and the other one is probably a product of limited proteolysis of apo- protein A-I. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Влияние кортизола, адреналина и АКТГ на поглощение и внутриклеточное распре- деление меченных по белку липопротеидов тканями печени и надпочечников крыс / Л. Е. Панин, Л. М. Поляков, Е. Э. Войдеховская, М. М. Биккина / / Цитология.— 1980.—23, № 11.—С. 1257—1262. 2. Поляков JI. M., Панин JI. E., Войцеховская Е. Э. Поглощение и внутриклеточное распределение липопротеидов в надпочечниках крыс при физической нагрузке / / Пробл. эндокринологии.— 1984.—30, № 4 — С . 60—63. 3. Hatch F. Т., Lees R. S. Practical methods for plasma lipoprotein analysis 11 Adv. Li- pid Res.— 1968.—6. N 1.—P. 2—68. 4. Laemmli JJ. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / /Nature .— 1970.—227, N 5259.—P. 680—685. 5. Protein measurement with the Folin phenol reagent / О. H. Lowry, N. J. Rosenbrough, A. L. Farr, R. J. R a n d a l l / / J . Biol. Chem.— 1951.— 193, N 1.—P. 265—275. 6. Ouchterlony O. Diffusion in the gel methods for immunological a n a l y s i s / / P r o g r . Allergy.— 1958.—5, N 1.—P. 1—77. 7. Tovey E., Baldo A. Comparison of semi-dry and conventional tank-buffer electro- t ransfer of proteins from polyacrylamide gels / Electrophoresis.— 1987.— 8, N 2.— P. 384—387. 8. Поляков JI. M., Потеряева О. П., Панин JI. Е. Определение апопротеина A-I мето- дом иммуноферментного а н а л и з а / / В о п р . мед. химии.— 1991.— № 1.— С. 89—92. 48 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 2 4-1-920 48 9. УCbiHUH И. Φ. Новые методы научных исследований в клинической и эксперимен- тальной медицине.— Новосибирск, 1980.— С. 96—98. 10. Sequence composition of the template active fraction of rat liver chromat in / J. M. Gottesfeld, G. Bagi, P. Berg, J. Bonner // Biochemistry.— 1976.— 15, N 11.— P. 2472—2483.' •11. Neary R. H., Gotland E. The effect of renal failure and haemodialisis on the con- centration of free apolipoprotein A-I in serum and the implications for the catabolism of high-density lipoproteins / /Cl in . chim. acta.— 1988.— 171, N 2—3.—P. 239—246. 12. Панин JI. E., Свечникова И. Г., Маянская Η. Η. Роль плазменных липопротеидов высокой плотности как модуляторов специфического гормонального эффекта гид- рокортизона / / В о п р . мед. химии.— 1990.— 3, № 3.— С. 600—622. 13. Панин Л. E., Маянская Η. Н. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении.— Новосибирск : Наука, 1987.— 198 с. Ин-т биохимии Сиб. отд-ния АМН СССР, Получено 29.05.91 Новосибирск УДК 591 М. Р. Столина, JI. М. Морозова, А. П. Соломко ОПТИМИЗАЦИЯ СИСТЕМЫ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ГЕНЕТИКО-ЭМБРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ НА ИНБРЕДНЫХ ЛИНИЯХ МЫШЕЙ. 1. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СЕЗОННОЙ ПЛОДОВИТОСТИ САМОК МЫШЕЙ ЛИНИЙ BALB/cLac C57BL6/j и ICR Изучено влияние сезонного фактора на фертильность и плодовитость самок мышей инбредных линий BALB/cLac, C57BL/6j и ICR. Данные экспериментов указывают на то, что планирование работ в биологической системе, связанных с естественной репро- дуктивной функцией животных, необходимо проводить с учетом сезона года и линей- ной принадлежности мышей. Самки контрастных по окраске линий C57BL и ICR ха- рактеризуются стабильно высокой фертильностью и плодовитостью. Мыши C57BL предложены в качестве доноров гамет и зигот в исследованиях, связанных с оплодо- творением и культивированием зародышей в системе in vitro, а самки ICR — как ре- ципиенты для трансплантаций эмбрионов. Введение. Оптимизация условий проведения экспериментов в биоло- гических системах определяется большим числом вне- и виутриорга- ни зменньгх факторов, оказывающих существенное влияние на физио- логический, гормональный, биохимический и т. п. статус объекта изу- чения. Для эффективности исследований и получения корректных ре- зультатов необходимо вычленить и учесть из множества факторы, име- ющие в определенной системе ключевое значение. Современные генетические и молекулярно-биологические исследо- вания на гаметах и эмбрионах млекопитающих (клонирование заро- дышей, консервация уникальных геномов, изучение ядерно-цитоплаз- менных взаимоотношений, процессов метилирования, регуляции экс- прессии генов и т. д.), включающие этапы- оплодотворения и культи- вирования эмбрионов in vitro, требуют выполнения ряда условий. 1. В эксперименте должны участвовать лабораторные животные инбредных линий, характеризующихся высокой плодовитостью и сезон- ной стабильностью. 2. Необходимо отсутствие стрессовых воздействий! на организм донора гамет, в том числе гормональной суперовуляции, увеличиваю- щей частоту резорбированных и отстающих в развитии плодов [1, 2], а также вызывающей активацию определенных генов гамет и зигот в ответ на действие стероидных гормонов [3]. 3. Получение оплодотворенных яйцеклеток и обеспечение доста- точного количества эмбрионов, синхронно развивающихся в культуре. © М. Р. СТОЛИНА, Л. М. МОРОЗОВА, А. П. СОЛОМКО, 1992 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1992. Т. 8. № 2 4 - 1 - 9 2 0 49

Иммунохимическая идентификация апопротеина A-I в хроматине ядер гептоацитов крыс

Репозитарії

Схожі ресурси