Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии

Методами кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии исследована конформация фибронектина при различной ионной силе раствора. Полученные результаты указывают на то, что конформационный переход молекулы фибронектина, обусловленный увеличением ионной силы раст...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	1989
Автори:	Сыкулев, Ю.К., Тэтин, С.Ю., Атамась, С.П., Матульская, Л.И., Панасюк, А.Ф., Троицкий, Г.В.
Формат:	Стаття
Мова:	Russian
Опубліковано:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1989
Назва видання:	Биополимеры и клетка
Теми:	Структура и функции биополимеров
Онлайн доступ:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154981
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии / Ю.К. Сыкулев, С.Ю. Тэтин, С.П. Атамась, Л.И. Матульская, А.Ф. Панасюк, Г.В. Троицкий // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 3. — С. 83-88. — Бібліогр.: 20 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-154981
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1549812019-06-17T01:32:09Z Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии Сыкулев, Ю.К. Тэтин, С.Ю. Атамась, С.П. Матульская, Л.И. Панасюк, А.Ф. Троицкий, Г.В. Структура и функции биополимеров Методами кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии исследована конформация фибронектина при различной ионной силе раствора. Полученные результаты указывают на то, что конформационный переход молекулы фибронектина, обусловленный увеличением ионной силы раствора, не сопровождается изменениями вторичной и третичной структур фрагментов полипептидных цепей, а связан с изменением относительного расположения и взаимодействий доменов в пространстве. Методами кругового дихроїзму і температурно-пертурбаційної диференційної спектрофотометрії досліджено конформацію фібронектину за різної іонної сили розчину. Отримані результати вказують на те, що конформаційний перехід молекули фібронектину, обумовлений збільшенням іонної сили розчину, не супроводжується змінами вторинної і третинної структур фрагментів поліпептидних ланцюгів, а пов’язаний із зміною відносного розташування і взаємодій доменів у просторі. Conformation of plasma fibronectin was determined by circular dichroism and thermal perturbation differential spectroscopy with different ionic strength of the solution. It was found that conformational transition in fibronectin molecule, induced by an increase of the ionic solution strength was followed by no changes in secondary and tertiary structure of protein but was a result of changes in relative arrangement and domain-domain interaction in space. 1989 Article Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии / Ю.К. Сыкулев, С.Ю. Тэтин, С.П. Атамась, Л.И. Матульская, А.Ф. Панасюк, Г.В. Троицкий // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 3. — С. 83-88. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000C7 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154981 577.322.5 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров
spellingShingle	Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров Сыкулев, Ю.К. Тэтин, С.Ю. Атамась, С.П. Матульская, Л.И. Панасюк, А.Ф. Троицкий, Г.В. Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии Биополимеры и клетка
description	Методами кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии исследована конформация фибронектина при различной ионной силе раствора. Полученные результаты указывают на то, что конформационный переход молекулы фибронектина, обусловленный увеличением ионной силы раствора, не сопровождается изменениями вторичной и третичной структур фрагментов полипептидных цепей, а связан с изменением относительного расположения и взаимодействий доменов в пространстве.
format	Article
author	Сыкулев, Ю.К. Тэтин, С.Ю. Атамась, С.П. Матульская, Л.И. Панасюк, А.Ф. Троицкий, Г.В.
author_facet	Сыкулев, Ю.К. Тэтин, С.Ю. Атамась, С.П. Матульская, Л.И. Панасюк, А.Ф. Троицкий, Г.В.
author_sort	Сыкулев, Ю.К.
title	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии
title_short	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии
title_full	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии
title_fullStr	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии
title_full_unstemmed	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии
title_sort	конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1989
topic_facet	Структура и функции биополимеров
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/154981
citation_txt	Конформация фибронектина при различной ионной силе раствора по данным методов кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии / Ю.К. Сыкулев, С.Ю. Тэтин, С.П. Атамась, Л.И. Матульская, А.Ф. Панасюк, Г.В. Троицкий // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 3. — С. 83-88. — Бібліогр.: 20 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT sykulevûk konformaciâfibronektinaprirazličnojionnojsilerastvorapodannymmetodovkrugovogodihroizmaitemperaturnoperturbacionnojdifferencialʹnojspektrofotometrii AT tétinsû konformaciâfibronektinaprirazličnojionnojsilerastvorapodannymmetodovkrugovogodihroizmaitemperaturnoperturbacionnojdifferencialʹnojspektrofotometrii AT atamasʹsp konformaciâfibronektinaprirazličnojionnojsilerastvorapodannymmetodovkrugovogodihroizmaitemperaturnoperturbacionnojdifferencialʹnojspektrofotometrii AT matulʹskaâli konformaciâfibronektinaprirazličnojionnojsilerastvorapodannymmetodovkrugovogodihroizmaitemperaturnoperturbacionnojdifferencialʹnojspektrofotometrii AT panasûkaf konformaciâfibronektinaprirazličnojionnojsilerastvorapodannymmetodovkrugovogodihroizmaitemperaturnoperturbacionnojdifferencialʹnojspektrofotometrii AT troickijgv konformaciâfibronektinaprirazličnojionnojsilerastvorapodannymmetodovkrugovogodihroizmaitemperaturnoperturbacionnojdifferencialʹnojspektrofotometrii
first_indexed	2025-07-14T07:01:00Z
last_indexed	2025-07-14T07:01:00Z
_version_	1837604757475164160
fulltext	УДК 577.322.5 Ю. К. Сыкулев, С. Ю. Тэтин, С. П. Атамась, Л. И. Матульская А. Ф. Панасюк, Г. В. Троицкий КОНФОРМАЦИЯ ФИБРОНЕКТИНА ПРИ РАЗЛИЧНОЙ ИОННОЙ СИЛЕ РАСТВОРА ПО ДАННЫМ МЕТОДОВ КРУГОВОГО ДИХРОИЗМА И ТЕМПЕРАТУРНО-ПЕРТУРБАЦИОННОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ Методами кругового дихроизма и температурно-пертурбационной дифференциальной спектрофотометрии исследована конформация фибронектина при различной ионной си- ле раствора. Полученные результаты указывают на то, что конформационный переход молекулы фибронектина, обусловленный увеличением ионной силы раствора, не сопро- вождается изменениями вторичной и третичной структур фрагментов полипептидных цепей, а связан с изменением относительного расположения и взаимодействий доменов в пространстве. Введение. Фибронектин (Фн) — высокомолекулярный гликопротеин, обладающий широким спектром биологической активности. Он играет важную роль в формировании межклеточного матрикса и клеточной адгезии, а также присутствует в плазме крови и может связываться с различными биологически активными молекулами (для обзора см. [1, 2] ) . Молекула Фн обладает необычной структурой и состоит из це- лого ряда функциональных фрагментов, расположенных вдоль двух по- липептидных цепей с молекулярной массой по 220 ООО, соединенных дисульфидными связями вблизи С-конца [3, 4]. Относительная ори- ентация полипептидных цепей белка в растворе зависит от ионной си- лы [5]. При низкой концентрации соли (0,04 М) молекула Фн прини- мает компактную конформацию, при которой фрагменты полипептид- ных цепей, тесно взаимодействуя друг с другом, определенным образом ориентированы в пространстве. Увеличение концентрации соли в ра- створе (0,4 М) приводит к протяженной конформации белка. При этом обе цепи имеют максимальную протяженность и не взаимодействуют друг с другом. Конформационный переход молекулы Фн, индуцирован- ный изменением ионной силы, является обратимым. Ведущую роль в стабилизации компактной конформации Фн играют электростатические взаимодействия. Действительно, расположенные вдоль полипептидных цепей фрагменты молекул имеют последовательно чередующиеся поло- жительные и отрицательные заряды [6]. Таким образом, возможны электростатические взаимодействия между фрагментами как в преде- лах одной молекулы, так и между разными молекулами Фн. Методы кругового дихроизма (КД) и температурно-пертурбацион- ной дифференциальной спектрофотометрии (ТПДС) дают возможность охарактеризовать особенности пространственной структуры белковых молекул [7]. Спектры КД в дальнем ультрафиолете несут информацию о состоянии вторичной структуры белка, в то время как анализ ТПДС и КД в ближнем ультрафиолете позволяет судить об изменениях тре- тичной и четвертичной структур белковых молекул. ТПДС — метод ре- гистрации разностных спектров, возникающих при сравнении двух идентичных образцов с различающейся температурой. Количественный анализ ТПДС дает возможность оценить среднюю жесткость микроок- ружения хромофоров, которую описывают как долю хромофорных ос- татков, пертурбируемых температурой. В настоящей работе оба метода использованы для изучения воз- можных конформационных изменений Фн в зависимости от ионной си- лы раствора. Материалы и методы. В качестве источника Фн использовали плазму крови нор- мальных доноров. Фн выделяли с помощью аффинной хроматографии на желатин-се- фарозе, как описано в работе [8]. Желатин-сефарозу получали конъюгированием ак- тивированной CNBr сефарозы 4В («Pharmacia» , Швеция) с желатином («Sigma», ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя 3 83 США) согласно инструкции фирмы «Pharmacia» . Плазму крови центрифугировали (20000 g, 40 мин) и предварительно пропускали через колонку с сефарозой 4В («Phar- mac ia») , уравновешенную 0,05 M трис-НСІ-буфером, рН 7,5, содержащим Ю - 4 M ЭДТА, 0,02 %-ный NaN 3 , 1 мМ ФМСФ (буфер А) , для удаления компонентов плазмы крови, неспецифически связывающихся с сефарозой. Обработанную таким образом плазму наносили на колонку с желатин-сефарозой, уравновешенную буфером А, про- тив силы тяжести (снизу вверх) . После этого колонку промывали буфером А и сни- мали связанные с Фн белки плазмы 1 M NaCl. Затем элюировали низко- и высокоаф- финный Фн 0,2 и 1 M DL-аргинином соответственно. Растворы 1 M NaCl, 0,2 и 1 M DL-аргинина («Reanal», В Н Р ) готовили на буфере А. Фракцию высокоаффинного Фн собирали и подвергали исчерпывающему диализу против буфера А для удаления ар- гинина. Чистоту полученного Фн контролировали с помощью электрофореза в поли- акриламидном геле (ПААГ, 5 %) в присутствии DS-Na . Перед проведением измере- ний образцы Фн диализовали против 0,005 M Na-фосфатного буфера, р Н 7,2. Ионную силу раствора изменяли, д о б а в л я я соответствующие количества 5 M раствора NaCL Концентрацию Фн определяли спектрофотометрически, принимая Л = 12,8 (для 1 %-но- го раствора в кювете с длиной оптического пути 1 см) [9]. Регистрацию спектров К Д проводили на дихрографе фирмы «Jobin Υνοη» M a r k II I (Франция) в 5 или 1 мм кварцевых кюветах при температуре 25 °С. Удельную эллиптичность рассчитывали по формуле: где AD — разность оптического поглощения право- и левоциркулярнополяризованных по кругу составляющих; М — средняя молекулярная масса одного аминокислотного остатка , принятая за 108; l — длина оптического пути, дм; С — концентрация бел- ка, нг /мл . Т П Д С регистрировали на спектрофотометре Specord U V V I S («Karl Zeiss», Г Д Р ) в 1 см кварцевых кюветах в интервале температур 9—45 °С. Количественный анализ Т П Д С проводили, как ранее описано [10, 11]. Количество хромофоров в молекуле Фн определяли по [20]. Математическую обработку спектров К Д и Т П Д С проводили на микро-ЭВМ «Искра 226.3». Результаты и обсуждение. На рис. 1 представлен спектр КД Фн в области длин волн 200—250 нм. Аналогичный спектр КД был получен ранее другими авторами [12—14]. Спектр КД в этой области характе- ризует асимметрию пептидных хромофоров белка и содержит два хо- рошо разрешенных экстремума — отрицательный (213 нм) и положи- тельный (227 нм). Небольшие величины удельной эллиптичности в дальнем ультрафиолете не обязательно свидетельствуют о низком со- держании регулярных структур в молекуле Фн. Небольшая интенсив- ность спектра КД может быть связана с тем, что наблюдаемый спектр является суперпозицией нескольких спектров: спектра КД пептидных хромофоров и КД-спектров ароматических хромофоров белка. Такая точка зрения подтверждается двукратным увеличением [Θ]2із при край- них щелочных значениях рН раствора Фн (рН 12) [13], когда арома- тические аминокислотные остатки тирозина ионизируются и теряют оп- тическую активность. Кроме того, попытка моделировать КД-спектр Фн в дальнем ультрафиолете с помощью различных комбинаций извест- ных спектров КД для пептидных хромофоров, включая КД-спектры не- упорядоченного клубка, успеха не имела [12]. Как показал количест- венный анализ спектров КД и спектров в инфракрасной области Фн и его протеолитических фрагментов, основным типом регулярной вторич- ной структуры белка является β-форма, содержание которой составля- ет 30—35 % [15, 16]. Возможно, как и в случае иммуноглобулинов [14, 17], типичный для β-структуры КД-спектр Фн искажается проти- воположно направленным спектром ароматических хромофоров белка. Увеличение концентрации соли в растворе от 0,05 до 0,5 M не сопро- вождалось существенными изменениями спектра КД в области 200—• 84 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя 3 84 250 нм, а значит и изменением количества регулярных структур в мо- лекуле Фн. Другими авторами показано, что повышение величины рН от 7,0 до 11,0 также не приводит к изменению спектра КД раствора Фн в этой области [12, 13]. Следует иметь в виду, что при низкой ин- тенсивности спектра КД в дальнем ультрафиолете небольшие измене- ния в спектре могут не регистрироваться. Однако наиболее вероятно, что хорошо известный переход от компактной к протяженной конфор- мации Фн при увеличении ионной силы раствора [5] не приводит к из- менению регулярной структуры доменов молекулы. Fig. 1. CD spect rum of f ibronect in in the fa r u l t raviole t region. Fibronect in w a s dissol- ved in 0.005 M phospha te buffer , pH 7.2 Рис. 2. Спектр К Д Фн в ближнем ультрафиолете. Растворитель — 0,005 M фосфатный буфер, рН 7,2, и тот ж е буфер с добавлением 0,5 и 0,15 M хлорида натрия Fig . 2. CD spect rum of f ibronect in in near u l t raviole t region. Fibronect in w a s dissolved in 0.005 M of phospha te buffer , pH 7.2 and in addi t ion of 0.5 M, 0.15 M of NaCl На рис. 2 приведен спектр КД Фн в ближнем ультрафиолете (260—360 нм). Эта область спектра характеризует ароматические хро- мофоры белка, находящиеся в асимметричном окружении. Спектр со- держит три линии с отрицательными максимумами—282, 291 и 299 нм. Линии спектра с максимумами 291 и 299 нм, по-видимому, обусловле- ны асимметричными триптофановыми остатками [12]. При изменении ионной силы раствора мы наблюдали незначительные изменения фор- мы и интенсивности спектра КД в этой области, которые вряд ли мо- гут свидетельствовать о существенном изменении микроокружения аро- матических хромофоров. При увеличении рН раствора Фн изменения спектра КД в ближнем ультрафиолете носили выраженный характер. При этом наиболее существенные изменения наблюдались в области 282 нм, в то время как максимумы 291 и 299 нм практически остава- лись неизменными [12]. Наблюдаемый эффект связан, очевидно, с иони- зацией тирозиновых остатков при щелочных значениях рН. При хранении раствора Фн мы наблюдали рост интенсивности спектров КД как в коротко-, так и длинноволновой области, а также изменение формы спектров, которые были более выраженными в даль- нем ультрафиолете. Приводимые в данной работе спектры КД получе- ны для белка, хранящегося не более трех дней. Зависимость парамет- ров спектров КД от времени хранения растворов Фн может быть объ- 84 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя 3 85 яснена способностью этого белка к адгезии и полимеризации. Возмож- но, что в растворе молекулы Фн частично полимеризуются с образо- ванием растворимых, регулярных, надмолекулярных структур, которые обладают сильной асимметрией. Такие структуры вряд ли являются стабильными и могут быстро образовываться и разрушаться. Поэтому в растворе существует дина- мическое равновесие между мономерной и полимерной формами Фн. Величина ди- хроизма и форма спектра та- кого раствора может меняться с течением времени. Точная интерпретация и количествен- ный анализ приведенных спектров КД затруднены из-за отсутствия адекватных моделей. Рис. 3. Т П Д С Фн, растворенного в 0,005 M фосфатном буфере, рН 7,2 Fig. 3. T P D S of f ibronect in dissolved in 0.005 M of phospha te buffer , pH 7.2 Для исследования возможных конформационных изменений чет- вертичной структуры Фн при различной ионной силе раствора были изучены ТПДС Фн в тех же растворителях. На рис. 3 представлен вид типичного ТПДС Фн при физиологической концентрации NaCl (0,15 М) и разности температур 9—41 °С. Тирозиновый максимум ТПДС нахо- дится при 288,5 нм, триптофановый — при 294 нм. Имеется также длин- новолновый максимум (ДМ) при 305 нм, который обнаруживается в Результаты количественного анализа ТПДС Фн в растворах с различной ионной силой при рН 7,2 (0,005 M Ма-фосфатный буфер) Results of quantitative analysis of Fn TPDS in different ionic strength solution at pH 7.2 (0,005 M Na-phosphate buffer) NaCl , M Количество хромофоров , пертурбируемых температурой NaCl , M Тирозин Триптофан I тд* 0,05 51,3 1,5 1,9 0,15 81,3 5,6 1,7 0,5 89,5 7,5 1,9 Общее количество хромофоров в молекуле ** 171 51 — * Депротонированные остатки тирозина [10]; ** определено, как описано в работе [20]. спектрах ТПДС и других белков [10]. Его происхождение связано с наличием в белках либо триптофановых остатков в неполярном окру- жении, либо депротонированных тирозиновых радикалов. Последний фактор может быть единственной причиной появления ДМ в ТПДС [10]. Результаты количественного анализа ТПДС Фн при различной концентрации NaCl в растворе представлены в таблице. Очевидно, что с увеличением ионной силы количество хромофоров, пертурбируемых температурой, значительно возрастает. Как указывалось выше, при увеличении ионной силы раствора молекула Фн принимает протяжен- ную конформацию. Поэтому уменьшение жесткости микроокружения тирозиновых и триптофановых остатков Фн по данным ТПДС связано с этим конформационным переходом и является следствием изменения междоменных взаимодействий в молекуле. Возможность переориента- ции доменов молекулы в пространстве предполагает их способность к 86 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя 3 86 относительно независимому вращению. Действительно, расчет времен вращательной коррекции Фн методом ЭПР спин-меток показал, что мо- лекула Фн является гибкой, т. е. фрагменты молекулы способны отно- сительно независимо перемещаться в пространстве [13]. Из приведенных в таблице данных следует, что уже при физиоло- гической концентрации соли (0,15 М) число пертурбируемых хромофо- ров близко к таковому при 0,5 M NaCl в растворе. Это позволяет пред- положить, что Фн существует в протяженной конформации уже при физиологических значениях ионной силы. Однако при 0,5 M NaCl чис- ло пертурбируемых хромофоров достоверно выше такового при 0,15 M NaCL Очевидно, увеличение ионной силы раствора свыше физиологи- ческой приводит либо к дальнейшему разворачиванию полипептидных цепей Фн, либо к увеличению числа молекул в развернутой конфор- мации. Число пертурбируемых остатков депротонированного тирозина не зависело от ионной силы раствора Фн (см. таблицу). Такой результат указывает на то, что ионизированные остатки тирозина находятся в глубине белковой глобулы и недоступны растворителю. Депротониро- ванный тирозин обладает высокой свободной энергией и может участ- вовать в комплексах с переносом заряда [10]. Известно, что эти комп- лексы принимают непосредственное участие в функционировании ак- тивных центров сериновых протеаз [18]. В этой связи существенно, что протеолитические фрагменты Фн обладают ферментативной активно- стью и могут приводить к автолизу молекулы [19]. Таким образом, анализ полученных результатов свидетельствует о том, что конформационный переход Фн от компактной к развернутой форме не сопровождается изменениями вторичной и третичной струк- тур фрагментов полипептидных цепей, а связан с изменением относи- тельного расположения и взаимодействий доменов в пространстве. Оче- видно, протяженная конформация Фн является наиболее оптимальной для функционирования молекулы этого белка. Авторы благодарят С. Ю. Вениаминова (Ин-т белка АН СССР, Пущино) за полезную дискуссию и критические замечания во время об- суждения рукописи статьи. С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Vartio Т. F ibronect in : mul t ip le in te rac t ions ass igned to s t ruc tu ra l d o m a i n s / / M e d . Biol.— 1983.—61, N 3 . — P . 283—295. 2. Yamada К. M. Cell sur face in terac t ions wi th ext race l lu lar m a t e r i a l / / A n n u . Rev. Biochem.— 1983.—52.—P. 761—799. 3. Petersen T. E., Skorstetigaard K. P r i m a r y s t ruc ture / / P l a s m a f ibronect in / Ed. J . McDonagh .— New York; Basel : Marcel Dekker, 1985 — P . 7—29. 4. Partial p r imary s t ruc tu re of bovine p lasma f ibronect in: three types of in te rna l ho- mo logy / T. E. Petersen, H. C. Thogersen , K. S k o r s t e n g a a r d et al. / / Proc . Nat . Acad. Sci. USA.— 1983.—80, N 1 .—P. 137—141. 5. Erickson H. P. S t ruc tu re seen by electron microscopy / / P l a s m a f ibronect in / Ed. J . McDonagh .— New York; Basel : Marcel Dekker, 1985 .—P. 31—51. 6. Hormann H., Richter H. Mode ls for the subuni t a r r a n g e m e n t in soluble and a g g r e g a - ted p lasma f i b r o n e c t i n / / B i o p o l y m e r s . — 1986.—25, N 7 . — P . 947—958. 7. Демченко А. П. Ультрафиолетовая спектрофотометрия и структура белков.— К. : Наук , думка , 1981.—208 с. 8. Vuento M., Vaheri A. Pur i f ica t ion of f ibronect in f rom h u m a n p la sma by a f f in i ty chro- m a t o g r a p h y under n o n - d e n a t u r i n g c o n d i t i o n s / / B i o c h e m . J.— 1979.—183, N 2.—ч P. 331—337. 9. Mosesson M. W., Umfleet R. A. The cold-insoluble globul in of h u m a n p la sma . 1. Pu - rif icat ion, p r imary charac te r iza t ion and re la t ionship to f ib r inogen and other cold-in- soluble f rac t ion c o m p o n e n t s / / J . Biol. Chem.— 1970.—245, N 2 1 . — P . 5728—5736. 10. Атамась С. П., Тетин С. Ю., Троицкий Г. В. Депротонирование тирозиновых остат- ков как в о з м о ж н а я причина появления длинноволнового максимума в температур- но-пертурбационных дифференциальных спектрах б е л к о в / / Б и о ф и з и к а , — 1985.—30, № 6 . — С . 967—970. 11. Тэтин С. Ю., Атамась С. П., Ефетов К. А. Уточненный метод расчета температур- ио-пертурбационных дифференциальных спектров белков / / V Всесоюз. конф. по спектроскопии биополимеров: Тез. докл .—Харьков , 1984.—С 238 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя 3 87 12. Alexander S. S., Jr., Colonna G., Edelhoch Η. The s t ruc ture and s tabi l i ty of h u m a n p l a s m a cold- insoluble g l o b u l i n / / J . Biol. C h e m . - 1979,—254, N 5 . — P . 1501—1505. 13. Lai Ch.-S., Tooney N. M., Ankel E. G. S t ruc tu re and flexibility of p l a sma f ib ronec tm in solut ion: e lect ron spin resonance spin-label , circular dichroism and sed imenta t ion s tudies / / Biochemist ry .— 1984.—23, N 26.— P. 6396—6397. 14. Circular dichroic analysis of immunoglobulins in phylogenetic perspective / G. W. Lit- man , D. Frommel , A. Rosenberg , R. A. G o o d / / B i o c h i m . et biophys. ac t a .—1971 — 236, N 3.— P. 647—654. 15. A study of the s t ruc tu re of f ibronect in / V . E. Kotel iansky, M. A. Glukhova , Μ. V. Be- j a n i a n et al. / / Eur . J. Biochem.—1981.—119, N 3 . — P . 619—624. 16. Distribution of secondary s t ruc tu re a long the f ibronect in m o l e c u l e / S . Yu. Venyami- nov, M. L. Metsis , M. A. Chernousov, V. E. Kote l iansky / / Ibid.— 1983.—135, N 3.— P. 485—489. 17. Chose A. C., Jirgensons B. Circular dichroism s tudies of the var iab le and cons tan t ha lves of kappa - type Bence-Jones p r o t e i n s / / B i o c h i m . et biophys. acta — 1971.—251, N 1 . — P . 14—20. 18. Диксон M., Уэбб Э. Ферменты.—Μ. : Мир, 1982.—743 с. 19. Keil-Dlouha V., Planchemaut Т. Po ten t i a l proteolyt ic activity of h u m a n p la sma fib- r o n e c t i n / / P r o c . Nat . Acad. Sci. USA.— 1986.—83, N 1 5 . — P . 5377—5381. 20. Beaven G. H., Holiday E. R. Ul t ravio le t absorpt ion spectra of pro te ins and amino a c i d s / / A d v . P ro te in C h e m . - 1952.—7.—P. 319—386. Ин-т ревматологии А М Н СССР, Москва Получено 23.03.88 Крым. мед. ин-т, Симферополь F I B R O N E C T I N C O N F O R M A T I O N W I T H D I F F E R E N T IONIC S T R E N G T H O F T H E S O L U T I O N AS D E T E R M I N E D BY CIRCULAR D I C H R O I S M M E T H O D S AND T H E R M A L - P E R T U R B A T I O N D I F F E R E N T I A L S P E C T R O S C O P Y Yu. K. Sykulev, S. Yu. Tetin, S. P. Atamas, L. J. Matulskaya A. F. Panasyuk,G. V. Troitsky Ins t i tu te of Rheumato logy , Academy of Medical Sciences of the U S S R , Moscow Cr imean Medical Ins t i tu te , S imferopol S u m m a r y C o n f o r m a t i o n of p l a sma f ibronect in w a s determined by circular dichroism and the rmal pe r tu rba t ion d i f fe rent ia l spectroscopy with d i f ferent ionic s t r eng th of the solut ion. It w a s found tha t con fo rma t iona l t r ans i t ion in f ibronect in molecule, induced by an increase of the ionic solut ion s t r e n g t h w a s fol lowed by no c h a n g e s in secondary and te r t i a ry s t ru- c ture of protein but w a s a resul t of c h a n g e s in relat ive a r r a n g e m e n t and domain -domain in terac t ion in space. УДК 547.963.32 А. И. Зинченко, И. Л. Попов, В. Η. Барай, И. А. Михайлопуло 5'-ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ПРИРОДНЫХ НУКЛЕОЗИДОВ И ИХ МОДИФИЦИРОВАННЫХ АНАЛОГОВ ИНТАКТНЫМИ КЛЕТКАМИ ERWINIA HERBICOLA: СПЕЦИФИЧНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ ДОНОРА ФОСФАТНОЙ ГРУППЫ И АКЦЕПТОРА Изучена нуклеозидфосфотрансферазная реакция, катализируемая интактными клетками Erw. herbicola 47/3. Показано, что среди исследованных доноров фосфатной группы при фосфорилировании аденозина до AMP наиболее эффективным оказался п-нитрофе- нилфосфат. Эффективность нуклеозидов рибо-ряда в качестве акцепторов фосфата убывает в ряду гуанозин> у ридин> риботимидин>цитидин> аденозин> инозин> >ксантозин. 2'-Дезоксинуклеозиды оказались менее эффективными акцепторами фос- фатной группы в сравнении с соответствующими рибонуклеозидами. Введение. Нуклеозид-5'-монофосфаты представляют интерес для физи- ко-химической биологии, медицины и пищевой промышленности. В на- стоящее время существуют следующие принципиальные возможности ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя 3 88

Репозитарії

Схожі ресурси