Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1
Определены нуклеотидные последовательности 5' - и 3'-концевых участков, а также фрагмента средней части гена обратной транскриптазы (ревертазы) вируса-помощника MAV-1 из комплекса вируса миелобластоза птиц. Сиквенированные фрагменты гена обладают высокой степенью гомологии с аналогичными у...
Збережено в:
| Дата: | 1989 |
|---|---|
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Назва видання: | Биополимеры и клетка |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155176 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 / С.В. Шагун, А.П. Коваль, В.М. Кавсан // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 75-80. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-155176 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1551762019-06-17T01:28:14Z Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 Шагун, С.В. Коваль, А.П. Кавсан, В.М. Структура и функции биополимеров Определены нуклеотидные последовательности 5' - и 3'-концевых участков, а также фрагмента средней части гена обратной транскриптазы (ревертазы) вируса-помощника MAV-1 из комплекса вируса миелобластоза птиц. Сиквенированные фрагменты гена обладают высокой степенью гомологии с аналогичными участками генома вируса саркомы Рауса. В последовательности из 507 нуклеотидных остатков обнаружено только 15 замен, из которых шесть приводят к изменению кодируемого аминокислотного остатка. Визначено нуклеотидні послідовності 5'- і 3'-кінцевих ділянок, а також фрагмента середньої частини гена зворотної транскриптази (ревертази) вірусу-помічника MAV-1 з комплексу вірусу мієлобластоза птахів. Секвеновані фрагменти гена мають високий ступінь гомології з аналогічними ділянками геному вірусу саркоми Рауса. У послідовності з 507 нуклеотидних залишків виявлено лише 15 замін, шість з яких призводять до зміни кодованого амінокислотного залишку. The nucleotide sequences of 5'-, and 3'-terminal parts of MAV-1 pol gene are determined. 94.6 % homology between RSV and MAV-1 reverse transcriptase genes has been established. Only 15 base pairs from the sequencing regions differ from the corresponding RSV sequence. Six of them determine amino acids substitutions. The asparagin appearance in position 15 of the MAV-1 reserse transcriptase is in accordance with the previous data on protein. This observation may serve as an evidence, that the MAV-1 pol gene codes for reverse transcriptase of AMV-complex. 1989 Article Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 / С.В. Шагун, А.П. Коваль, В.М. Кавсан // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 75-80. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000E8 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155176 578.828.11:577.212.3 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров |
| spellingShingle |
Структура и функции биополимеров Структура и функции биополимеров Шагун, С.В. Коваль, А.П. Кавсан, В.М. Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 Биополимеры и клетка |
| description |
Определены нуклеотидные последовательности 5' - и 3'-концевых участков, а также фрагмента средней части гена обратной транскриптазы (ревертазы) вируса-помощника MAV-1 из комплекса вируса миелобластоза птиц. Сиквенированные фрагменты гена обладают высокой степенью гомологии с аналогичными участками генома вируса саркомы Рауса. В последовательности из 507 нуклеотидных остатков обнаружено только 15 замен, из которых шесть приводят к изменению кодируемого аминокислотного остатка. |
| format |
Article |
| author |
Шагун, С.В. Коваль, А.П. Кавсан, В.М. |
| author_facet |
Шагун, С.В. Коваль, А.П. Кавсан, В.М. |
| author_sort |
Шагун, С.В. |
| title |
Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 |
| title_short |
Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 |
| title_full |
Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 |
| title_fullStr |
Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 |
| title_full_unstemmed |
Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 |
| title_sort |
определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса mav-1 |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1989 |
| topic_facet |
Структура и функции биополимеров |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155176 |
| citation_txt |
Определение 5'- и 3'-нуклеотидной последовательности гена обратной транскриптазы вируса MAV-1 / С.В. Шагун, А.П. Коваль, В.М. Кавсан // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 5. — С. 75-80. — Бібліогр.: 20 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT šagunsv opredelenie5i3nukleotidnojposledovatelʹnostigenaobratnojtranskriptazyvirusamav1 AT kovalʹap opredelenie5i3nukleotidnojposledovatelʹnostigenaobratnojtranskriptazyvirusamav1 AT kavsanvm opredelenie5i3nukleotidnojposledovatelʹnostigenaobratnojtranskriptazyvirusamav1 |
| first_indexed |
2025-07-14T07:15:30Z |
| last_indexed |
2025-07-14T07:15:30Z |
| _version_ |
1837605669990039552 |
| fulltext |
С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы
1. Potapov А. P. A stereospecific mechanism for the aminoacyl selection at the rlboso-
me / / F E B S Lett.— 1982.— 146, N 1.— P. 5—8.
2. Потапов А. П. Механизм стереоспецифической стабилизации кодон-антикодоновых
комплексов на рибосомах в ходе трансляции / / Журн. общ. биологии.— 1985.— 46,
№ ι . _ с . 63—77.
3. McCarthy В. J., Holland J. / . Denaturated DNA as a direct template for in vitro
protein syn thes i s / /Proc . Nat. Acad. Sci. USA.— 1965.—54, N 3 . — P . 880—886.
4. The role of template sugar -phosphate backbone in ri,bosomal decoding mechanism /
A. P. Potapov, K. A. Soldatkin, A. P. Soldatkin, Α. V. E l s k a y a / / J . Мої. Biol.—
1988.—203, N 3 — P . 885—893.
5. Сазыкин Ю. О. Антибиотики как биохимические . реагенты/ /Биол. химия.— M . :
ВИНИТИ, 1984.—Т. 20.—С. 111 — 161.
6. Yarus М. The accuracy of translat ion/ /Progr. Nucl. Acid Res. and Мої. Biol.—
1979.— 23.—P. 195—225.
7. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике.— М . : Мир, 1984.— 436 с.
8. Davis /., Gilbert L., Gorini L. Streptomycin, suppression and the code / /Proc . Nat.
Acad. Sci. USA.— 1964.—51, N 5 .—P. 883—890.
9. Молекулярные основы действия антибиотиков / Э. Гэйл, Э. Кандлифф, П. Рейнолдс
и др.— М . : Мир, 1975.— 500 с.
10. Неоднозначность трансляции полиуридиловой кислоты транспортными РНК из раз-
личных эукариотических объектов / А. П. Солдаткин, Н. И. Желтовская, Г. В. Ов-
чаренко, А. В. Ельская//Укр. биохим. журн.— 1983.—55, № 6 — С. 603—607.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики Получено 10.03.89
АН УССР, Киев
S T U D I E S IN CORRELATION B E T W E E N POLY(U) MISREADING
AND EFFICIENCY O F POLY(dT) TRANSLATION
IN THE CELL-FREE PROTEIN -SYNTHESIZING SYSTEMS OF E. coli
I. S. Groismanf A. P. Potapov
Ins t i tu te of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukra in ian SSR, Kiev
S u m m a r y
The efficiency of poly(dT) t rans la t ion and misreading of poly(U) has been studied in
cell-free systems from wild-type E. coli and s treptomycin-resis tant m u t a n t s with altered
ribosome protein S12. The data show that there is a positive correlat ion between poly(U)
misreading and efficiency of poly(dT) t rans la t ion. Condit ions promot ing mis read ing of
po ly (U) : an increase in the concentrat ion of neomycin, kanamycin, s treptomycin antibio-
tics, of Mg 2 + ions st imulate poly(dT) t rans la t ion as well. A series of antibiotics activi-
ties in promotion of both poly(U) mis read ing and poly(dT) t rans la t ion is the same: neo-,
m y c i n > k a n a m y c i n > streptomycin. The more accurate ribosomes with altered protein
Sl2 are less efficient in t rans la t ion of po ly(dT) . The data obtained are in good agreement
with the hypothesis on stereospecific stabil ization of codon-anticodon complexes on the
ribosome.
УДК 578.828.11:577.212.3
С. В. Шагун, А. П. Коваль, В. М. Кавсан
ОПРЕДЕЛЕНИЕ 5'- И 3'[-НУКЛЕОТИДНОЙ
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПТАЗЫ
ВИРУСА MAV-I
Определены нуклеотидные последовательности 5f- и 3'-концевых участков, а также
фрагмента средней части гена обратной транскриптазы (ревертазы) вируса-помощника
MAV-I из комплекса вируса миелобластоза птиц. Сиквенированные фрагменты гена об-
ладают высокой степенью гомологии с аналогичными участками генома вируса саркомы
Рауса. В последовательности из 507 нуклеотидных остатков обнаружено только 15 за-
мен, из которых шесть приводят к изменению кодируемого аминокислотного остатка.
75 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя $
Наличие остатка аспарагина в позиции 15 соответствует ранее опубликованным
данным по определению последовательности аминокислот в белке и делает вероятным
предположение, что именно MAV-I является источником ревертазы в вирусном комп-
лексе, вызывающем миелобластоз у птиц.
Введение. Стандартный сток (BAI strain) вируса миелобластоза птиц
(AMV) представляет собой комплекс из трех вирусов: собственно виру-
са миелобластоза птиц и двух вирусов-помощников MAV-I и MAV-2.
Вирусы-помощники относятся к различным подгруппам: MAV-I — к
подгруппе A, a MAV-2 — к подгруппе В [1—3]. Количество каждого
из трех вирусов в комплексе неодинаково: число частиц вирусов-помощ-
ников в десять раз больше, чем вируса миелобластоза птиц. Показано,
что оба вируса-помощника репликативно компетентны и способны вы-
зывать опухоли у цыплят, однако не трансформируют клетки in vitro
[2]. Также обнаружено, что при титровании AMV in vitro до единичных
колоний образуются вирусные псевдочастицы, не имеющие гликопро-
теидной оболочки и в которых отсутствует ревертазная активность [1,2].
Дефектность AMV связана с захватом клеточного онкогена c-myb
и утерей большей части гена env [4]. Встраивание онкогена происходит
по сайту сплайсинга гена env, что приводит к появлению нового сайта
сплайсинга, реализация которого вызывает утерю терминирующего
триплета в мРНК, кодирующей обратную транскриптазу, и синтезу бел-
ка, не обладающего ревертазной активностью [5]. Таким образом,
можно предположить, что синтез белковых компонентов оболочки ви-
риона и ревертазы, необходимых для жизненного цикла AMVy проис-
ходит на матрице вирусов-помощников.
Вирус миелобластоза накапливается в крови зараженных птиц с
высоким титром — до IO12 частиц на 1 мл плазмы. Кроме того, актив-
ность фермента в вирусных частицах комплекса AMV более чем в
двадцать пять раз превышает эту величину в частицах вируса лейке-
мии Раушера [6]. Эти биологические особенности делают комплекс
вируса миелобластоза птиц основным источником препаративного вы-
деления ревертазы [7], одного из важнейших инструментов для генной
инженерии.
Однако процесс наработки и очистки фермента в больших коли-
чествах ограничивается трудоемким этапом — заражением и содержа-
нием большого количества цыплят для получения вируссодержащей
плазмы. Альтернативным способом производства ревертазы представ-
ляется создание генноинженерной конструкции, способной синтезиро-
вать белок в количестве, сравнимом с традиционным источником по-
лучения фермента.
Д л я решения в последующем этой задачи осуществлено клониро-
вание гена рої вируса-помощника MAV-Jf определена нуклеотидная
последовательность фрагмента средней части, 3'- и 5'-концов гена ро/,
проведено сравнение их с ранее опубликованными данными по сикве-
нированию N-концевой последовательности белка [8], а также с нук-
леотидной последовательностью З'-конца гена рої вируса-помощника
MAV-2 [5] и геном рої вируса саркомы Рауса [19].
Материалы и методы. Ген обратной транскриптазы выделен из полного провируса
MAV-1, клонированного в составе плазмиды pMAV-1 [10, 11], любезно предоставленной
М. Б а л у д о й (Джонсоновский центр комплексного исследования рака при Кали-
форн. ун-те).
Д л я получения гена и рестриктного анализа использовали эндонуклеазы HindIII,
EcoRI, PstI, BamHI, XbaI, XhoI производства Н П О «Фермент» (Вильнюс) и KpnI —
фирмы «BRL» (США), а т а к ж е нуклеазу S i . Д л я достройки З'-концов применяли
фрагмент Кленова Д Н К - п о л и м е р а з ы I, любезно предоставленный Р. Ш. Бибилашвили
(Ин-т эксперим. кардиологии В К Н Ц А М Н С С С Р ) .
Выделение и очистку Д Н К фагов и плазмид, гидролиз Д Н К рестриктазами, лиги-
рование фрагментов, поиск рекомбинантных клонов гибридизацией на фильтрах осу-
ществляли по Маниатису и др. [12], а приготовление компетентных клеток — по Xa-
нагану [13].
76 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя $
В качестве зонда для гибридизации использовали фрагмент гена рої, вырезанный
эндонуклеазой BatnHI из плазмиды pATV-8 [14], которая включает полный провирус-
ный геном вируса саркомы Рауса (Pr-RSV-C). Радиоактивно меченный зонд (ЗХ
X l O 8 и м п - м и н - ^ м к г " 1 ) получен с помощью фрагмента Кленова в присутствии
α [ 3 2 P J d C T P (ВО «Изотоп», Ташкент, отд-ние) и рассеянной затравки [12].
Нуклеотидную последовательность определяли методом Сэнгера [15, 16] с исполь-
зованием вектора М13тр19 и «сиквенирующего» праймера 17SP фирмы «New Eng land
Biolabs» (США). Д л я сравнения нуклеотидных последовательностей использовали пер-
сональный компьютер Apple Ile с программами DPSA [17] и процессор аминокислот-
ных последовательностей (Р. Шкленникс, Ин-т орг. синтеза АН ЛатССР, Рига) . По-
строение вторичной структуры белков в программе Р. Шкленникса основано на приме-
нении метода Чу и Фасмана [18].
Результаты и обсуждение. Ген обратной транскриптазы вируса-
помощника MAV-I получен путем полного гидролиза плазмиды pMAV-1
рестриктазой EcoRI с последующим лигированием фрагментов в плаз-
миде pUC19y также обработанной EcoRl (рис. 1). В результате клони-
рования в клетках Escherichia coli отобраны четыре колонии, давшие
положительный сигнал при гибридизации с ро/-гепом вируса саркомы
Рауса. При рестриктном анализе рекомбинантных плазмид эндонукле-
азами EcoRIKpnI из всех четырех клонов были получены идентич-
ные фрагменты.
Д л я сиквенирования вставку разрезали эндонуклеазой BamHI на
два фрагмента длиной 2000 и 1300 н. п., которые затем субклонировали
в фаге М13. Меньший фраг-
мент (Б'-копец гена рої)
дополнительно обрабатыва-
ли рестриктазой EcoRV, что
обеспечивало однонаправ-
ленную ориентацию фраг-
мента при лигировапии с
вектором М13тр19, кото-
рый после обработки ре-
Рис. 1. Схема клонирования гена
рої вируса-помощника MAV-I (а)
и рестрикционная карта и страте-
гия сиквенирования гена (б).
Фрагменты гена, клонированные в
фаге М13, показаны ниже плаз-
мидного клона рброї
Fig. 1. A scheme used for cloning
of the MAV-I pol gene (a) and a
restriction map and DNA sequence
s t ra tegy (6). Subcloned f r agmen t s
in M13 vectors are indicated below
the plasmid clone рброї
стриктазой HindIII и достройки выступающих З'-концов был рестрици-
роваи эндонуклеазой BamHL Фрагмент длиной 2000 н. п. (средняя и
З'-концевая части гена рої) встраивали в BamHI-сайт вектора и нуж-
ное положение вставки по отношению к праймеру отбирали отжигом
матриц, выделенных из фаговых бляшек, что позволило определить по-
следовательность средней части гена. Д л я сиквенирования З'-конца
гена рої больший фрагмент подвергали гидролизу XhoI, обработке пу-
клеазой Sl и после однократной экстракции фенолом, хлороформом и
переосаждения Д Н К дополнительно рестрицировали KpnI. Продукты
гидролиза разделяли электрофорезом в 0,8 %-ной агарозе и из геля
элюировали фрагмент размером 200 н. п., который лигировали с век-
тором М13тр18, рестрицировапным KpnI и XbaI (сайт XbaI обрабо-
тан нуклеазой S i ) .
ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы II КЛЕТКА. 1989. Τ. δ. JVb 5 7?
На рис. 2 представлены сиквенированные участки генома MAV-1:
З'-конец гена gag (111 н. п.), межгенный участок (17 н. п.), 5'-конец,
средняя часть и З'-конец гена pol (74,100 и 205 н. п. соответственно) и
5'-конец гена env, который на протяжении 135 н. п. частично перекры-
вается с кодирующей частью ро/-гена. Из 507 сиквенированных нуклео-
тидов четырнадцать отличаются от Pr-RSV-C9 большинство которых
T A T
66АТССТССТТ66А6С6АССССТ6СТССТСТТСССС6СА6Т66СТАТ66ТТА8А668А6САТССТА66
— 9*9
с
2439 AA6A6ATT6TCTGCA666CCTA666CTCCC6CTT6ACAAATTTATA6ggagggccactgttcttACT6
- gag - >*« I —
6
2507 ТТ6С6СТАСАТСТ66СШТСС6СТСАААТ66ААсССАААССАСАС6ССТ6Т6Т66АТТ6АССА6Т66
- - рої —
Рис. 2. Сиквенированные участки ненов вируса-помощника MAV-L Кодирующие участ-
ки всех генов выделены прописными, межгенный участок — строчными буквами. Разли-
чия м е ж д у RSV и MAV-I выписаны над последовательностью. Нумерация нуклеотидов
соответствует принятой для вируса саркомы Рауса [19] . ~ участки,
д л я которых последовательность нуклеотидов не определяли; стрелки — участки генов
gag, pol, env\ звездочки — терминирующие кодоны генов gag и pol
Fig. 2. Nucleot ide sequence of MAV-I рої gene. Cod ing reg ions are represented by ca-
pital letters, a,η intergenic region — by lower letters. Differences between RSV and
MAV-I sequence are indicatd above. Nucleot ide anumera t ion is the s a m e as for the RSV
[19]. - — — - non-sequenced regions; >- reg ions of the gag, pol and env genes,
-χ.** — t e r m i n a t i n g s top-codons for gag and pol genes
расположено в З'-концевой части гена. Отмеченные различия в нуклео-
тидной последовательности двух вирусов обобщены в таблице, где так-
ж е представлены соответствующие замены в других штаммах RSV.
Шесть замен находятся в третьем положении кодона и являются мол-
чащими, пять (2545, 3725, 5136, 5171 и 5214-й нуклеотиды) приводят
к возникновению иного аминокислотного остатка, еще три (5092, 5093,
5094-й) дают новый триплет. Замена G на А в положении 2545 обра-
зует триплет АСС, кодирующий Asn, a HeAsp, как в гене pol Pr-RSV-C.
Несмотря на изменение заряда, компьютерный анализ не обнаружил
различий во вторичной структуре этого района ревертазы MAV-I по
сравнению с аналогичным белком вируса саркомы Рауса. Изменение
пуклеотида 3725 (замена А на G) дает триплет AGG, кодирующий
Arg, вместо AAG, соответствующего Lys в ревертазе Pr-RSV-С. Ком-
пьютерное моделирование показало, что такая замена приводит к
уменьшению длины α-спирали в этом районе с 11 до 10 аминокислот-
ных остатков при незначительном изменении заряда, так как обе ами-
нокислоты относятся к группе с ионными радикалами (pi 10,76 и
ρI 9,74).
78 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя $
Отличия в последовательности гена рої виру с а-помощника MAV-I по сравнению
с различными штаммами вируса саркомы Рауса
Difference between the рої gene sequences of MAV-I and various RSV strains
Номер
нуклеотида
Номер
аминокислоты Pr-RSV-C MAV-I В H-RSV BH-RSV
(мутант)
2380 — T С С г
2413 — А G С г
2431 — . T С T T
2502 — С T С ρ
2542 15 G (Asp) A (Asn) А Λ
3725 408 A (Lys) G (Arg ) G \ϊ
5092-4 864 ATA (Не) G C G (Ala) ATA ΑΤΑ
5105 868 A (Asp) G (Gly) А А
5126 872 G (GIv) A (Glu) G « 1
5136 — T G T T
5171 890 'Г (Leu) С ( P r o ) T T
5214 — T С с
Сравнение нуклеотидных последовательностей AMV и линии Брайян
вируса саркомы Рауса (линия, дающая высокий титр вируса a-BH-RSV)
также обнаружило эту замену, сохраняющуюся и у мутанта fi-BH-RSV,
потерявшего способность к продуцированию частиц вируса с высоким
титром [20].
Наиболее существенные различия в аминокислотных последова-
тельностях обратных транскриптаз MAV-I и Pr-RSV-C обнаружены на
карбоксильном конце фермента или в пептиде рр32 (его кодируют нук-
леотиды с 5054-го по 5252-й). Здесь обнаружено изменение триплета
ATA в положении 5092-4, кодирующего Ile у Pr-RSV-Cy на триплет
GCG, кодирующий Ala у MAV-I. Изменение третьего нуклеотида в
триплетах приводит к замене аминокислотных остатков в положениях
864, 868, 872 и 890. Сумма этих замен выражается в появлении допол-
нительной α-спирали между 865-м и 876-м аминокислотными остатка-
ми, что можно связать с локальным перераспределением зарядов.
Так, Asp (pi 2,77) в 868-м положении ревертазы вируса саркомы
Рауса заменен на Gly (pi 5,97) в ревертазе вируса-помощника MAV-Iy
a Gly в 872-м положении изменен на Glu (pi 3,22). Вероятнее всего,
такие замены на карбоксильном конце фермента не затрагивают соб-
ственно обратнотранскриптазной активности, что не исключает влияния
обнаруженных изменений на эндонуклеазную активность пептида рр32.
Тем не менее полученные результаты свидетельствуют о большом
сходстве генов, кодирующих обратные транскриптазы в вирусе-помощ-
нике MAV-I и вирусе саркомы Рауса. Это сходство сохраняется и на
уровне белковой молекулы — гомология сиквенированных областей со-
ставляет 94,6 %. Скорее всего, в отличие от белка, кодируемого геном
pol AMVj обратная транскриптаза MAV-I является функционирующим
ферментом. Это предположение подтверждается и данными других ав-
торов, поскольку выведенная из нуклеотидной последовательности пер-
вичная структура N-конца полностью соответствует N-концевой амино-
кислотной последовательности, определенной в ревертазе из ЛΛί!/-ком-
плекса [8]. Окончательный ответ на вопрос о роли ревертазы MAV-I
в репликации комплекса AMV можно будет дать при наличии амино-
кислотной последовательности N-конца ревертазы другого вируса-по-
мощника, а именно: MAV-2. Из работы Кэн и др. [5] следует, что, по-
видимому, ревертазы этих вирусов чрезвычайно близки, поскольку сре-
ди 202 сиквенированных нуклеотидных остатков З '-конца гена рої
MAV-2 есть только одно различие — молчащая замена G на С в поло-
жении 5145, нарушающая полную гомологию с соответствующим райо-
ном нуклеотидной последовательности MAV-1, определенной в данной
работе.
79 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя $
С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы
1. Baluda Μ. Α., Goetz Т. Ε. Morfo log ica l convers ion of cell cul ture by avian myelo-
blas tos is v i rus / / V i r o l o g y . — 1961.—15, N 2 . — P . !'85'—193.
2. Moscovici C., Zanetti M. S tudies on s ingle foci of hematopoiet ic cells t r ans fo rmed by
myeloblas tos i s v i rus / / Ibid.— 1970.—42, N 1.— P. 61—67.
3. Moscovici C., Vogt P. K. E f f ec t s of genet ic cel lular res is tance on cell t r a n s f o r m a t i o n
and v i rus replicat ion in chicken hematopoie t ic cell cu l tures infected with avian mye-
loblas tos is v i rus (BAI-s t ra in) / / I b i d . — 1968.—35, N 4 . — P . 489—497.
4. Nucleotide sequence of t r a n s f o r m i n g gene of av ian myeloblas tos i s v i rus / К. E. Rus-
lov, J. A. Lautenberger , T. S. P a p a s et a l . / / S c i e n c e . — 1982.—216, N 9 . — P . 1421 —
1423.
5. Kan N. C., Baluda Μ. A., Papas T. S. Sites of r ecombina t ion between the t r a n s f o r m i n g
gene of av ian myelob las tos i s v i rus and its helper v i r u s / / V i r o l o g y . — 1985.— 145,
N 3.— P. 323—329.
6. Reverse t r ansc r ip t a se activi ty per virion for avian myeloblas tos is v i rus and Rausher
mur ine leukemia v i rus / L. F. Liebes, M. A. Rich, J. J. McCormic et a l . / / J . Virol.—
1976,—18, N 1 . — P . 42—47.
7. Reverse t r ansc r ip t a se f rom avian -myeloblastosis v i rus / G. E. Houts , M. Mi jag i ,
C. Ell is et al. / / Ibid.— 1979.—29, N 2.— P. 517—522.
8. Copeland T. D., Grandgenet D. P., Oroszlan S. / / A m i n o acid sequence ana lys i s of
reverse t r ansc r ip t a se subuni t s f rom avian myeloblas tos i s v i r u s / / I b i d . — 1980.—36,
N 1 . — P . 115—119.
9. Identification of avian myelob las tos i s v i rus genome. Restr ic t ion endonuclease analy-
sis of DNA from provira l r ecombinan t s and leukemic myeloblas t clones / L. M. Souza ,
M. J. Briskin, R. L. HilIard et al. / / Ibid., N 2 , — P . 325—336.
10. Biologically active provira l clone of myeloblas tos is -assoc ia ted v i rus type 1: implicati-
on for the genes is of avian myeloblas tos is v i r u s / B . Perbal , J. S. Lipsick, J. Svoboda
et al. / / Ibid.— 1985.—56, N 1.— P. 240—244.
11. Lipsick J. S., Ibatiez C. E., Baluda M. A. Express ion of molecu la r clones of v-myb in
avian and m a m m a l i a n cells independent ly of t r a n s f o r m a t i o n / / Ibid.— 1986.—59,
N 2.— P. 267—275.
12. Maniatis T., Fritsch E. E., Sambrook J. Molecular c loning. A labora tory manua l .—
New York: Cold Sp r ing H a r b o r Lab, 1982.—545 p.
13. Hanahan D. Techniques for t r a n s f o r m a t i o n of Escherichia coli I/ DNA Cloning / Ed.
D. M. G l o v e r . — O x f o r d : IRL press, 1985.—Vol. 1 . — P . 10Θ—136.
14. Restriction endonuclease and nucleot ide sequence ana lys i s of moleculary cloned unin-
tegra ted avian tumor vi ruses DNA: s t ruc tu re of LTR in circle junct ion / R. A. Katz,
C. A. Omer, J. H. Wies et al. / / J . Virol.— 1982.—42, N 1 . — P . 346—351.
15. Sanger F., Nicklen S., Coulson A. R. DNA sequenc ing wi th cha in - te rmina to r inhibi-
t o r / / P r o c . Nat . Acad. Sci. USA.— 1977.—74, N 12 .—P. 5463—5467.
16. Sanger F., Coulson A. R. The use of thin acrylamid gels for DNA sequencing / / F E B S
Lett.— 1978.—87, N 1 . — P . 107—110.
17. Marck C. Fas t ana lys i s of DNA and protein sequence on A P P L E lie: res t r ic t ion sites
search, a l i gnmen t of short sequence and dot ma t r ix ana lys i s / / Nucl. Acids Res.—
1986,—14, N 1 . — P . 583—590.
18. Chou P. Y., Fasman G. D. Predict ion of protein confo rmat ion / / Biochemistry.—
1974,—13, N 2 , — P . 222—232.
19. Schwartz D. E., Tizard R., Gilbert W. Nucleot ide sequence of Rous sarcoma vi rus / /
Cell.— 1983.—32, N 6 , — P . 853--869.
20. Sudol M., Lerner T. L., Hanafusa H. Po lymerase-defec t ive m u t a n t of the Bryan high-
titer s t ra in of Rous sarcoma v i r u s / / Nucl. Acids Res.— 1986.—14, N 5 . — P . 3291 —
3294.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики Пол\7чено 17.01.89
АН УССР, Киев
D E T E R M I N A T I O N O F 5'- AND 3 ' - N U C L E O T I D E S E Q U E N C E
O F MAV-I POL G E N E
S. V. Shagun, A. P. K o v a l , V. M. Kavsan
Ins t i tu te of Molecular Bio logy and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukra in ian SSR, Kiev
S u m m a r y
The nucleotide sequences of 5'-, and З ' - te rminal pa r t s of MAV-I pol gene are determined.
94.6 % homology between R S V and MAV-I reverse t r ansc r ip tase genes has been es tab-
lished. Only 15 base pai rs f rom the sequencing reg ions differ f rom the co r respond ing
RSV sequence. Six of them determine amino acids subs t i tu t ions . The a s p a r a g i n appea ran -
ce in posit ion 15 of the MAV-I reserse t r ansc r ip t a se is in accordance with the previous
data on protein. This observat ion m a y serve as an evidence, tha t the MAV-I pol gene
codes for reverse t r ansc r ip ta se of AMV-complex.
80 ISSN 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1989. Т. 5. Кя $
|