Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза

Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза

В работе предложено использовать двухэтапную процедуру (прямую амплификацию ДНК из пятен крови в сочетании с идентификацией мутации модифицированным мето­дом диагностических гетеродуплексов) выявления наиболее распространенной среди на­селения Украины мутации в гене трансмембранного регуляторного бе...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:1994
Hauptverfasser: Гусак, Н.М., Горовенко, Н.Г., Хоменко, Н.Л., Бужиевская, Т.И.
Format: Artikel
Sprache:Russian
Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1994
Schriftenreihe:Биополимеры и клетка
Online Zugang:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155394
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза / Н.М. Гусак, Н.Г. Горовенко, Н.Л. Хоменко, Т.И. Бужиевская // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 58-62. — Бібліогр.: 15 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-155394
record_format dspace
spelling irk-123456789-1553942019-06-17T01:29:43Z Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза Гусак, Н.М. Горовенко, Н.Г. Хоменко, Н.Л. Бужиевская, Т.И. В работе предложено использовать двухэтапную процедуру (прямую амплификацию ДНК из пятен крови в сочетании с идентификацией мутации модифицированным мето­дом диагностических гетеродуплексов) выявления наиболее распространенной среди на­селения Украины мутации в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза – делеции F508. Обсуждаются преимущества данного подхода молекулярной ди­агностики муковисцидоза при осуществлении скрининга различных контингентов насе­ления на муковисцидоз. Методология апробирована при обследовании 21 семьи с высоким риском муко­висцидоза. В роботі запропанновано використання двохетапної процедури (пряму ампліфікацію ДНК з плям крові у сукупності з ідентифікацією мутації за допомогою модифікованого методу діагностичних гетеродуплексів) для виявления найпоширвншої серед насе­ления України мутації в гені трансмембранного регуляторного білка муковюцидоза – делеції F508. Обговорюються переваги запропонованого підходу молекулярної діагностики для здійснення скринингу різних контингенів населения на муковісцидоз. The procedure consisted of two steps (direct amplification of DNA from dried blood spots and identification of mutation with the modified method of diagnostic heteroduplexes) was proposed to test the most common mutation in the cystic fibrosis transmembrane regulator gene (ΔF508). The advantages of this approach for screening of different population groups are discussed. The procedure was used to examine 21 families with positive history of CF. 1994 Article Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза / Н.М. Гусак, Н.Г. Горовенко, Н.Л. Хоменко, Т.И. Бужиевская // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 58-62. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003AE http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155394 616—056.7—07:571.1 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
description В работе предложено использовать двухэтапную процедуру (прямую амплификацию ДНК из пятен крови в сочетании с идентификацией мутации модифицированным мето­дом диагностических гетеродуплексов) выявления наиболее распространенной среди на­селения Украины мутации в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза – делеции F508. Обсуждаются преимущества данного подхода молекулярной ди­агностики муковисцидоза при осуществлении скрининга различных контингентов насе­ления на муковисцидоз. Методология апробирована при обследовании 21 семьи с высоким риском муко­висцидоза.
format Article
author Гусак, Н.М.
Горовенко, Н.Г.
Хоменко, Н.Л.
Бужиевская, Т.И.
spellingShingle Гусак, Н.М.
Горовенко, Н.Г.
Хоменко, Н.Л.
Бужиевская, Т.И.
Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
Биополимеры и клетка
author_facet Гусак, Н.М.
Горовенко, Н.Г.
Хоменко, Н.Л.
Бужиевская, Т.И.
author_sort Гусак, Н.М.
title Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
title_short Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
title_full Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
title_fullStr Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
title_full_unstemmed Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
title_sort методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации δf508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 1994
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155394
citation_txt Методологические подходы к упрощению и ускорению процедуры идентификации мутации ΔF508 в гене трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза / Н.М. Гусак, Н.Г. Горовенко, Н.Л. Хоменко, Т.И. Бужиевская // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 58-62. — Бібліогр.: 15 назв. — рос.
series Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv AT gusaknm metodologičeskiepodhodykuproŝeniûiuskoreniûproceduryidentifikaciimutaciidf508vgenetransmembrannogoregulâtornogobelkamukoviscidoza
AT gorovenkong metodologičeskiepodhodykuproŝeniûiuskoreniûproceduryidentifikaciimutaciidf508vgenetransmembrannogoregulâtornogobelkamukoviscidoza
AT homenkonl metodologičeskiepodhodykuproŝeniûiuskoreniûproceduryidentifikaciimutaciidf508vgenetransmembrannogoregulâtornogobelkamukoviscidoza
AT bužievskaâti metodologičeskiepodhodykuproŝeniûiuskoreniûproceduryidentifikaciimutaciidf508vgenetransmembrannogoregulâtornogobelkamukoviscidoza
first_indexed 2025-07-14T07:34:22Z
last_indexed 2025-07-14T07:34:22Z
_version_ 1837606856705441792
fulltext УДК 616—056.7—07:571.1 Н. М. Гусак, Н. Г. Горовенко, Н. Л. Хоменко, Т. И. Бужиевская МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К УПРОЩЕНИЮ И УСКОРЕНИЮ ПРОЦЕДУРЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МУТАЦИИ AF508 В ГЕНЕ ТРАНСМЕМБРАННОГО РЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА МУКОВИСЦИДОЗА В работе предложено использовать двухэтапную процедуру (прямую амплификацию ДНК из пятен крови в сочетании с идентификацией мутации модифицированным мето­ дом диагностических гетеродуплексов) выявления наиболее распространенной среди на­ селения Украины мутации в гене транс мембранного регуляторного белка муковисци- доза — делеции F508. Обсуждаются преимущества данного подхода молекулярной ди­ агностики муковисцидоза при осуществлении скрининга различных контингентов насе­ ления на муковисцидоз. Методология апробирована при обследовании 21 семьи с высоким риском муко­ висцидоза. Муковисцидоз (MB) — наиболее распространенное моногенное наслед­ ственное заболевание с аутосомно-рецессивным типом наследования, частота которого составляет 1 : (2000—2500) новорожденных белой расы [1]. Ген MB был картирован на хромосоме 7 [2], и нуклеотидная последовательность его расшифрована в 1989 г. [3]. Причиной заболе­ вания являются мутации гена MB, приводящие к различным нарушени­ ям в синтезе его продукта — трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза (ТРБМ). В настоящее время известно более 200 мута­ ций гена ТРБМ [4]. Наиболее распространенная среди них — делеция тринуклеотида в 10-м экзоне гена, названная AF508. Частота этой му­ тации варьирует в разных популяциях. По результатам пилотного скри­ нинга [5], частота встречаемости мутации у больных MB в Украине составляет 55 %. Другие виды мутаций, выявленные в Украине у больных MB, в сумме представляют величину не более 1 % [6]. Исходя из это­ го, первым шагом при скрининге различных контингентов населения (семьи с высоким риском MB, новорожденные и др.) на наличие му­ таций в гене ТРБМ является тестирование мутации AF508. Используемая до настоящего времени процедура выявления дан­ ной мутации в исследуемой ДНК обычно включает три этапа: 1) экс­ тракция ДНК из лейкоцитов или других ядерных клеток [7]; 2) ампли­ фикация участка ДНК, в котором локализована мутация; 3) идентифи­ кация мутации в продукте амплификации. Для решения последней за­ дачи наиболее широко применяются два методологических подхода: 1) аллельспецифическая гибридизация с мечеными ДНК-зондами амп- лификата соответствующего участка ДНК обследуемого [8]; 2) опреде­ ление размера амплификата соответствующего участка ДНК методом электрофореза в 10—12%-м полиакриламидном геле (ПААГ) [9]. По­ казана высокая информативность обоих методических подходов. Одна­ ко широкое внедрение этих методик в практику здравоохранения для лабораторной диагностики MB сопряжено с рядом трудностей. Так, чувствительный и быстрый метод аллельспецифической гибридизации требует значительных затрат на приобретение меченых ДНК-зондов, мембран и других реагентов. Более же дешевый метод определения раз­ мера амплификата участка ДНК, содержащего делецию, по электрофо- © Н. М. ГУСАК, Н. Г. ГОРОВЕНКО, Н. Л. ХОМЕНКО, Т. И. БУЖИЕВСКАЯ, 1994 58 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3—4 ретической подвижности в ПААГ достаточно продолжителен по вре­ мени и малорентабелен для массовых анализов. Кроме того, значи­ тельно ограничивает возможности широкого использования процедуры идентификации AF508 довольно трудоемкий с существенными затрата­ ми энергии этап экстракции ДНК из клеток. В связи с этим нам представляется более приемлемой для практи­ ческого использования двухэтапная процедура, включающая: 1) пря­ мую амплификацию (без предварительной микроэкстракции) ДНК из пятен крови и 2) идентификацию мутации в амплификате с помощью модифицированного метода гетеродуплексов. Метод прямой амплификации ДНК из пятен крови был предложен Шварцем с соавт. [10] для идентификации мутаций в гене фенилала- нингидроксилазы. Мы использовали эту методику, несколько модифици­ ровав и адаптировав ее для гена ТРБМ. Для этого из пятна крови (высушенного на карточке Гатри или на бумаге Whatman 3M) выби­ вали диск диаметром 2 мм, помещали в микропробирку для термоцик- лера и заливали 100 мкл метилового спирта. Микропробирку интенсив­ но встряхивали и оставляли на 15 мин для фиксации. После этого спирт удаляли и диск тщательно высушивали на воздухе. Затем в пробирку добавляли 100 мкл смеси для амплификации и проводили полимераз- ную цепную реакцию в автоматическом режиме на термоциклере Рег- kin-Elmer Thermal Cycler. Амплифицировали 10-й экзон гена ТРБМ, используя в качестве праймеров олигонуклеотиды, гомологичные после­ довательностям, фланкирующим 10-й экзон: 1015 и 1013 [11J. Реак­ цию проводили в буфере для амплификации (10 мМ трис-HCl, рН 8,3, 50 мМ КС1, 1,5 мМ MgCl2, 0,01 %-й желатин), содержащем 200 мкмоль каждого дезоксинуклеотидтрифосфата, 100 пмоль каждого олигонуклео- тидного праймера (праймеры любезно предоставлены д-р Карсон из Лаборатории клинической химии Центра здоровья, Виннипег, Канада), 2,5 единицы активности термостабильной ДНК-полимеразы (фирма «Perkin-Elmer Cetus»). Режим амплификации: нагревание при 94 °С — 6 мин, затем 30 циклов: 94 °С — 30 с; 55 °С — 30 с; 72 °С — 1 мин и про­ лонгированный синтез 72 °С — 7 мин. . Продукты амплификации анализировали для выявления мутации AF508 с помощью модифицированного метода диагностических гетеро­ дуплексов. Методика основана на использовании открытого ранее [9, 12, 13] явления формирования в ходе полимеразной цепной реакции ге- теродуплекса между продуктами амплификации гомологичных, но от­ личающихся по длине на 1—4 нуклеотида участков ДНК. Такой гете- родуплекс имеет отличную от гомодуплекса (идентичные последова­ тельности) конформацию и благодаря этому заметно менее подвижен при электрофорезе в ПААГ. Причем это различие тем значительнее, чем больше размер амплифицированного участка (этим фактором мы руководствовались при выборе участка амплификации—10-й экзон). В работе [9] этот феномен использовали для обнаружения гетерози­ готных носителей мутации AF508. Хэндисайд и др. [14] показали возможность индуцирования образования гетеродуплексов при смешивании анализируемого амплификата с ранее амплифициро- ванной ДНК (заведомо известной гомозиготой по нормальному или мутантному аллелю). Мы применили данную методологию для вы­ явления как гетерозиготных носителей (AF508/N, где N — аллель, не несущий данной делеции), так и обоих типов гомозигот (N/N и AF508/AF508). С этой целью продукт амплификации каждого исследуемого образ­ ца ДНК (15 мкл) смешивали с 5 мкл амплификата (полученного в тех же условиях) контрольной ДНК — гомозиготы по нормальному алле­ лю (N/N)—и с 5 мкл амплификата контрольной ДНК — гомозиготы по делеции (AF508/AF508). Смеси прогревали 5 мин при 95 °С и 5 мин при 65 °С, осуществляя таким образом процедуру денатурации — ре- натурации смеси молекул ДНК. Анализировали смеси электрофорезом ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 - 4 59 в 10 %-м ПААГ (использовали пластинки минигеля, ТВЕ буфер, 200 В, 45 мин), окрашивали электрофореграммы 5 %-м раствором бромистого этидия. Как видно из рис. 1, амплификаты ДНК индивидуумов, которые ЯВ­ ЛЯЮТСЯ гетерозиготными носителями делеции, формируют гетеродуп- лекс и с контрольной ДНК N/N, и с контрольной ДНК AF508/AF508 (дорожки 2 и З соответственно). Амплифи- А каты ДНК индивидуумов, являющихся го­ мозиготами по нормальному аллелю, об­ разуют гетеродуплекс только с контроль­ ной ДИК AF508/AF508 (дорожка 5). Ам- Рис. 1. Схема разделения в ПААГ гетеродуплексов, формирующихся в процессе дена­ турации—• ренатурации смеси амплификаггов тестируемой и контрольной ДНК: 1 — маркер молекулярной м.аосы; 2, 3— смесь амплифимата ДНК гетерозиготного носителя мутадии AF508 с контрольными ДНК N/N и AF508/AF508 соответственно; 4, 5 — смесь амплификата ДНК нормального индивидуума с контрольными ДНК N/N и AF508/AF508 соответственно; 6, 7 — смесь амплификата ДНК гомозиготного по деле­ ции индивидуума с контрольными ДНК N/N и AF508/AF508 соответственно; 8 — смесь амплификатов контрольной ДНК N/N и контрольной ДНК AF508/AF508. N/N — го­ мозигота по нормальному аллелю; AF508/AF508 — гомозигота по мутантному аллелю Рис. 2. Идентификация распределения мутации AF508 в одной из семей с высоким рис­ кам муковисцидоза: А — родословная обследованной семьи; Б — электрофореграммы амплификатов ДНК соответствующих (/, 2, 3, 4) членов семьи (а—исследуемая ДНК-f контрольная ДНК N/N; б — последуем а я ДНК+контрольная ДНК AF508/AF508; к — контрольная ДНК N/N-f контрольна я ДНК AF508/AF508). N/N— гомозигота по нормальному .аллелю; N/AF508 — носитель мутации; AF508/AF508 — го­ мозигота по мутантному аллелю плификат ДНК индивидуумов, гомозиготных по аллелю, несущему де- лецию, формируют гетеродуплекс только с контрольной ДНК N/N (до­ рожка 6). Нормальный и мутантный гомодуплексы плохо разделяются в этих условиях, так как размеры амплификатов равны 491 и 488 п. о. соответственно. Гетеродуплекс же мигрирует в районе полос 700— 800 п. о. и четко отделяется от гомодуплексов. Это определяет простую и эффективную идентификацию данной мутации в ДНК пациентов. Единственное затруднение, которое может возникнуть при интерпрета­ ции результатов, обусловлено обнаружением в 10-м экзоне гена ТРБМ иных, нежели AF508, мутаций [15]. Таковыми могут быть, например, мутации AI507 и 1677delTA. Однако, во-первых, эти типы мутаций встре­ чаются в различных популяциях в единичных случаях и, во-вторых, электрофоретическая подвижность гетеродуплексов типа A1507/AF508 и 1677delTA/AF508 будет отличной от таковой гетеродуплекса AF508/N [5, 15]. Тем не менее, необходимым условием проведения электрофоре- тического анализа гетеродуплексов является наличие внутреннего конт­ роля (рис. 1, дорожка 8). 60 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1904. Т. 10. № Используя вышеизложенную методологию, мы провели обследова­ ние 21 семьи (132 хромосомы) с высоким риском MB и идентифициро­ вали делецию AF508 в 37 хромосомах. Это позволило дать характерис­ тику генотипа больных MB, выявить носителей AF508 среди родителей и сибсов (рис. 2), что послужило основой для стратегии дальнейших лечебно-профилактических мероприятий в семьях, включая пренаталь- ную диагностику. Применение двухэтапной процедуры выявления мутации AF508 в анализируемой ДНК дает возможность исследовать несколько образцов одновременно, значительно сократить время анализа (вся процедура за­ нимает не более 6 ч) и удешевить процесс, исключив этап экстракции ДНК из клеток. Все перечисленное, а также однозначность интерпрета­ ции данных, отсутствие ложноположительных и ложноотрицательных результатов делают предлагаемый подход более перспективным для обследования различных контингентов населения и, в первую очередь, для осуществления скрининговых программ. Выражаем благодарность доктору Ненси Карсон (Лаборатория клинической химии, Центр здоровья, Виннипег, Канада) за любезно предоставленные олигонуклеотидные праимеры, за внимание и помощь в данной работе. Работа выполнена при поддержке Канадско-Украинского проекта «Чернобыльские дети», финансируется Министерством здравоохране­ ния Украины (ОК.91.276). И. М. Гусак, Н. Г. Горовенко, Н. Л. Хоменко, Т. I. Буж1евська МЕТОДОЛОПЧН1 ШДХОДИ ДО ОПРОЩЕНИЯ ТА ПРИШВИДШЕННЯ ПРОЦЕДУРЫ 1ДЕНТИФ1КАЦН МУТАЦИ AF508 У ГЕН1 ГРАНСМЕМБРАННОГО РЕГУЛЯТОРНОГО Б1ЛКА МУКОВ1СЦИДОЗА Р е з ю м е В робел зап районов аао аикористалня двохетаитно)" (процедур и (пряму амплгфжаицю ДНК з плям крош у юукупиосп з дантмфжаидею мутаци за допомогою м од и ф жевано­ го методу д1агностичних гетеродуплекав) для виявления найпоширвншо! серед насе­ ления Укра'ши мутадп в ген! трансмеморалного регуляторного быка муковюцидоза — делецн F508. Обговарюються перевали залропоиованого шдходу молекулярно! д1аг.но- стики для здшонення скринингу р1зних 1Коитангент[в населения на мукошецидоз. N. М. Gusak, N. G. Gorotvnko, N. L. Homenko, Т. I. Buzhievskaya A METHODOLOGICAL APPROACH ALLOWING A FASTER AND EASIER PROCEDURE FOR IDENTIFICATION OF AF508 IN CFTR GENE S u m m a r y The procedure consisted of two steps (direct amplification of DNA from dried blood spots and identification of mutation with the modified method of diagnostic heteroduplexes) was proposed to test the most common mutation in the cystic fibrosis transmembrane re­ gulator gene (AF508). The advantages of this approach for screening of different popula­ tion groups are discussed. The procedure was used to examine 21 families with positive history of CF. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Harris A, Cuper M. Cystic fibrosis. The fact.—Oxford: Univ. press, 1987.—133 p. 2. Rommens J. M., Iannuzzi M. C., Kerem B. et al. Identification of the cystic fibrosis gene: chromosome walking and jumping//Science.—1989.—245, N 4922.—P. 1059— 1065. 3. Riordan J. P., Rommens J. M., Kerem B. et al. Identification of the cystic fibrosis ge­ ne: cloning arid characterization of the complementary DNA//Ibid.—P. 1066—1073. 4. Cystic fibrosis / / E d s J. A. Dodge, D. J. H. Brock et al.—Chichester: John Wiley and sons, 1993.—Vol. 2.—358 p. ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3-4 61 5. Кравченко С. А., Лившиц Л. А. Анализ мутаций в 7, 10, 11-м экзонах и полимор­ физм четы(рех яуклеютидных тандемных (повторов З'-кшца 6-ш нитрона .гена ТРБМ в семьях с высоким риском муковисцидоза из Украины / / Цитология и генетика.— 1993.—27, № 4.—С. 72—77. 6. Barancu V. S. Molecular diagnosis of some common genetic diseases in Russia and the former USSR present and future/ /J . Med. Genet.—1993.—30.—P. 141 — 146. 7. Wenham P. R. DNA-based techniques in clinical biochemistry: a beginners guide to theory and practice//Annu. Clin. Biochem.—1992.—29.—P. 598—629. 8. Kerem В., Zilenski J., Markiewicz D. et al. Identification of mutations in regions cor­ responding to the two putative nucleotide ATP-binding folds of the cystic fibrosis gene/ /Proc. Nat. Acad. Sci. USA.—1990.—87.—P. 8447—8451. 9. Rommens J., Kerem В., Greer W. et al. Rapid nonradioactive detection of the magior cystic fibrosis mutation / / Amer. J. Hum. Genet.—1990,—46.—P. 395—396. 10. Schwartz E. I., Khalchitsky S. E., Eisensmith R. C, Woo S. L. Polymerase chaine reaction of amplification from dried blood spots on Guthrie cards//Lancet.—1990.— N 1.—P. 15—17. 11. Zelensky J., Rozmahel R., Bozon D., Kerem B. et al. Genomic DNA sequence of tru< cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene / / Genomics.— 1991.—10.—P. 214—228. 12. Nagamine С M., Chan K, Lou Y. A PCR artifact generation of heteroduplexes// Amer. J. Hum. Genet.—1989.—45.—P. 337—339. 13. Triggs-Raine В., Gravel R. Diagnostic heteroduplexes: simple detection of a 4-bp in­ sertion mutation in Tay-Sachs disease / / Ibid.—1990.—46.— P. 183—184. 14. Handyside A. H., Lesko J. G., Tarin J. J. et al. Bith of a normal girl after in vitro fertilization and preimplantation diagnostic testing for cystic fibrosis//New Engl. J. Med.—1992.—327, N 13.—P. 905—909. 15. Cuppens H., Loumi O., Marynen P., Cassiman J. Identification of a new frameshift mutation and a duplication polymorphism in CFTR gene in Algarian population / / Human Mol. Genet.—1992.—1, N 4.—P. 141 — 146. Киев, ин-т усовершенствования врачей МЗ Украины Получено 14.01.94 62 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 - 4

Ähnliche Einträge