Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК

Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК

Образование окрашенного металлокомплекса на основе аденина включает последова­тельные этапы модификации основания формальдегидом, присоединение этаноламина и удлинение боковой цепочки за счет нескольких метоксильных групп. Окраска формиру­ется после добавления серебра, конечный разветвленный металло...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:1994
Hauptverfasser: Личина, М.В., Шугалий, А.В.
Format: Artikel
Sprache:Russian
Veröffentlicht: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1994
Schriftenreihe:Биополимеры и клетка
Online Zugang:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155436
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК / М.В. Личина, А.В. Шугалий // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 5. — С. 98-104. — Бібліогр.: 6 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-155436
record_format dspace
spelling irk-123456789-1554362019-06-17T01:29:59Z Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК Личина, М.В. Шугалий, А.В. Образование окрашенного металлокомплекса на основе аденина включает последова­тельные этапы модификации основания формальдегидом, присоединение этаноламина и удлинение боковой цепочки за счет нескольких метоксильных групп. Окраска формиру­ется после добавления серебра, конечный разветвленный металлокомплекс обладает, кроме того, флюоресцентными свойствами. На однонитчатой ДНК наиболее быстро раз­вивается фиолетовая окраска. Уровень модификации 10–15 %, не препятствующий об­разованию устойчивых дуплексов при молекулярной гибридизации, достигается при рН 8,2 за 15–20 мин. Утворення забарвленого металокомплексу на основі аденіна включае послідовні етапи модифікації основи формальдегідом, приеднання етаноламіна та видовження бічного ланцюжка за рахунок декількох метоксильних груп. Забарвлення формуеться після додавання срібла, кінцевому розгалуженому металокомплексу притаманні флюоресцентні властивості. На однонитчастій ДНК найшвидше розвиваеться фіолетове забарвлення. Рівень модифікації 10–15 %, який не перешкоджае утворенню стійких дуплексів при молекулярній гібридизації, досягаеться за 15–20 хв. i pH 8,2. Some aspects of adenine modification as a one of DNA base during the preparing of coloured metal-complex is under investigation. After the N-metoxyadenine formation as a result of formaldehyde reaction with the amino/imino groups of the base the lengthing of lateral chain is occured at the expense of ethanolamine and some metoxy groups. The colour of modified adenine is developed after a silvre addition and the ultimate branched metal-complex possess in addition the fluorescent properties. The kind of clour is determined by pH of incubation media, the violet probe with a 10–15 % modification level is obtained in an alkaline solution in the course of 15–20 minutes. 1994 Article Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК / М.В. Личина, А.В. Шугалий // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 5. — С. 98-104. — Бібліогр.: 6 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003BF http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155436 577,113.4:577.336 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
description Образование окрашенного металлокомплекса на основе аденина включает последова­тельные этапы модификации основания формальдегидом, присоединение этаноламина и удлинение боковой цепочки за счет нескольких метоксильных групп. Окраска формиру­ется после добавления серебра, конечный разветвленный металлокомплекс обладает, кроме того, флюоресцентными свойствами. На однонитчатой ДНК наиболее быстро раз­вивается фиолетовая окраска. Уровень модификации 10–15 %, не препятствующий об­разованию устойчивых дуплексов при молекулярной гибридизации, достигается при рН 8,2 за 15–20 мин.
format Article
author Личина, М.В.
Шугалий, А.В.
spellingShingle Личина, М.В.
Шугалий, А.В.
Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК
Биополимеры и клетка
author_facet Личина, М.В.
Шугалий, А.В.
author_sort Личина, М.В.
title Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК
title_short Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК
title_full Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК
title_fullStr Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК
title_full_unstemmed Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК
title_sort конструирование днк-зонда с использованием соли серебра. 2. окрашивание мономера и однонитчатой днк
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 1994
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155436
citation_txt Конструирование ДНК-зонда с использованием соли серебра. 2. Окрашивание мономера и однонитчатой ДНК / М.В. Личина, А.В. Шугалий // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 5. — С. 98-104. — Бібліогр.: 6 назв. — рос.
series Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv AT ličinamv konstruirovaniednkzondasispolʹzovaniemsoliserebra2okrašivaniemonomeraiodnonitčatojdnk
AT šugalijav konstruirovaniednkzondasispolʹzovaniemsoliserebra2okrašivaniemonomeraiodnonitčatojdnk
first_indexed 2025-07-14T07:39:47Z
last_indexed 2025-07-14T07:39:47Z
_version_ 1837607201712111616
fulltext УДК 577,113.4:577.336 М. В. Личина, А. В. Шугалий КОНСТРУИРОВАНИЕ ДНК-ЗОНДА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СОЛИ СЕРЕБРА. 2. ОКРАШИВАНИЕ МОНОМЕРА И ОДНОНИТЧАТОЙ ДНК Образование окрашенного металлокомплекса на основе аденина включает последова­ тельные этапы модификации основания формальдегидом, присоединение этаноламина и удлинение боковой цепочки за счет нескольких метоксильных групп. Окраска формиру­ ется после добавления серебра, конечный разветвленный металлокомплекс обладает, кроме того, флюоресцентными свойствами. На однонитчатой ДНК наиболее быстро раз­ вивается фиолетовая окраска. Уровень модификации 10—15 %, не препятствующий об­ разованию устойчивых дуплексов при молекулярной гибридизации, достигается при рН 8,2 за 15—20 мин. Введение. Полученный окрашенный металлокомплекс [1] включает олигомерные этаноламино-формальдегидные цепочки с брутто-форму- лой NC5Hi304, образующие координационные связи с ионом серебра. Формирование окраски комплекса в растворе (от фиолетовой до оран­ жево-красной) определяется числом связанных с kg элементарных це­ почек, фиолетовой окраске соответствует одна координационная связь, оранжево-красной — от 4 до 6 подобных связей. Образование олигомерной цепочки — основного компонента метал­ локомплекса — достаточно сложный процесс, по-видимому, двухпара- метрический, зависящий от рН раствора и соотношения этаноламин : : формальдегид. Присутствие в инкубационной среде дополнительных инициирующих центров, которыми являются свободные амино- и ими- ногруппы оснований ДНК, вносит неопределенность в момент инициа­ ции формирования этаноламино-формальдегидной цепочки, а также на стадии элонгации или разветвления уже образованных цепочек. Кроме того, конденсация формальдегида (в том числе, очевидно, и на доступ­ ных группах оснований) может проявляться и в виде димера [2], что способно откорректировать предложенный нами в [1] механизм обра­ зования цепи. Поэтому в общем контексте задачи выработки оптималь­ ного режима получения окрашенного ДНК-зонда мы специально изу­ чили вопрос о взаимодействии компонентов металлокомплекса со сво­ бодными основаниями. Помимо этого, в работе представлены резуль­ таты модификации однонитчатой ДНК как в плане установления ха­ рактеристик окрашивания в зависимости от различных условий инку­ бации, так и для выбора требуемого уровня модификации ДНК-зонда. Материалы и методы. Хроматографию исходного и модифицирован­ ного аденина на пластинках «Silufol UV-254» осуществляли либо в цит- ратном буфере, 0,1 М Na, рН 7,5 (рис. 1, 2), либо в 0,03 М боратном буфере, рН 8,5 (рис. 4). Количество нанесенного материала составля­ ло 1—2 мкг. При хроматографии на бумаге FN1 (Германия) также ис­ пользовали 0,03 М боратный буфер. Для цветной окраски пятен бумаж­ ную хроматограмму после ее просушки пропитывали азотнокислым се­ ребром, растворенным в том же буфере в концентрации 0,5 мг/мл. Фотографическую регистрацию пластин на пленке «Микрат-изо- пан» со светофильтром ЗС-1 проводили в отраженном УФ-свете ультра- химископа УИ-1. Флюоресцирующие пятна на бумажной хроматограм- W6i 'ииггуллт *а v 'УНИЬШГ *я *w о 98 ISSN 0233-7057. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 5 ме регистрировали так же, как и УФ-поглощающий материал на плас­ тинках «Silufol». Для проведения кинетики модификации однонитчатой ДНК ком­ мерческий препарат ДНК селезенки крупного рогатого скота (Олайне), растворенный в 0,02 М Na-цитратном буфере и доведенный до концент­ рации 50—100 мкг/мл, предварительно прогревали до 95 °С и охлаж­ дали во льду. Инкубационную смесь, содержащую азотнокислое сереб­ ро, этаноламин и формальдегид, приготавливали, как указано в работе [1]; рН смеси регулировали добавлением необходимого количества / Z J 4 5 6 7 8 9 Рис. 1. Хроматография на пластинках «Silufol» продуктов модификации аденина: а — аденин с формальдегидом, А+ФА (1— исходный А; 2 — А+-ФА, время реакции 0,5 ч; 3 — 2 ч; 4—12 ч; 5—120 ч); б — полная реакционная смесь, включающая аденин, формальдегид и этаноламин, А+ФА + ЭА (6 — инкубация смеси в течение 2 ч; 7 — инкубация А+ФА в течение 2 ч, добавление ЭА и постинкубация 10 мин; 8 — то же, что 7, но постинкубация 0,5 ч; 9 — постинкубация 1,5 ч). Цифры внизу — нумерация полос, стрелками обозначены положения исходного аденина и продуктов реакции (см. схему в тексте) ^ 10%-й лимонной кислоты. После инкубации каждой порции однонит­ чатой ДНК в нужной реакционной смеси ее диализовали против соот­ ветствующего буфера со значением рН, отвечающим окраске данной фракции [1], для удаления так называемой растворной окраски, об­ разуемой без участия ДНК. Окраску однонитчатой ДНК регистрирова­ ли на спектрофотометре «Specord UV-VIS при длине волны 410 нм. Результаты и обсуждение. В инкубационной смеси без ДНК окра­ шенный металлокомплекс образуется за счет присоединения к иону се­ ребра полностью сформированной цепочки из четырех молекул форм­ альдегида и одной молекулы этанол амина [1]. Представленные на рис. 1 фотографии пластинок «Silufol» позволяют оценить, как форми­ руется цепочка на свободных N-группах основания. При этом четко дискриминируются две возможности — постепенное удлинение цепи на основании или присоединение к нему уже сформированной метоксиль- ной цепочки из четырех молекул формальдегида. Мы использовали два варианта реакционной смеси — без этанол- амина (рис. 1, а) и с ним (рис. 1, б). Присутствующий в смеси форм­ альдегид сначала присоединяли к одному из двух возможных реак­ ционных сайтов на аденине — иминогруппе [3]. В сроки инкубации 0,5 и 2 ч наблюдалось появление единственного продукта с большей, не­ жели у исходного аденина, хроматографической подвижностью (2-я и 3-я полосы на рис. 1, а). Он обозначен на рис. 1(a) и на схеме, как мА1 (модифицированный AI). При этом доля исходного аденина про­ грессивно снижается и к 12-му ч (4-я полоса) в реакционной смеси при­ сутствует только мА1. В дальнейшем происходит реакция по NH2-rpyn- пе аденина [4], и к мА1 добавляется мАП — модифицированный аденин с двумя молекулами формальдегида, присоединенными к NH- и NH2- ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. ЛЬ 5 7* 99 группам. Через 120 ч в реакционной смеси имеется только мАП — ко нечный продукт реакции аденина с формальдегидом (5-я полоса). МАП Пр1 —*- п=1 Пр IV —~-п^4 В присутствии этаноламина (рис. 1, б) происходит его присоеди­ нение к модифицированному формальдегидом аденину с образованием мАШ (см. схему). Из сравнения полос 6 и 7 однозначно следует, что первым актом реакции в подобной трехкомпонентной смеси является формирование комплекса аденин — формальдегид и уже к этому моди­ фицированному аденину достраивается этаноламин. Полоса 6 — это инкубация в течение 2 ч смеси аденин + формальдегид + этаноламин (А+ФА+ЭА), а полоса 7— та же инкубация смеси А+ФА с добав­ лением ЭА и постинкубацией 10 мин. В обоих случаях получен один и тот же продукт мАШ с меньшей, нежели у мА1, подвижностью в ис­ пользованном нами системе (0,1 М Na-цитратный буфер, рН 7,5). Сразу же после образования мАШ начинается конденсация на его боковой цепочке молекул формальдегида. На полосах 7—9, отвечаю­ щих инкубации с ЭА в течение 0,15—1,5 ч, появляется гетерогенная по­ лоса с минимальной подвижностью, очевидно, смесь Пр I—IV. После­ довательное исчезновение в реакционной смеси мАШ и появление про­ дуктов конденсации молекул формальдегида ясно прослеживается на хроматограмме рис. 2 для времен инкубации 7—48 ч. Сканограмма на рис. 3 отражает количественную сторону изменения доли мАШ и про­ дуктов реакции I—IV. Увеличение времени инкубации сопровождается уменьшением мАШ и одновременным возрастанием количества про­ дуктов I—IV, формирующих на рис. 2 полосу с минимальной подвиж­ ностью при временах инкубации 7—48 ч. Естественно, что в этом гете­ рогенном наборе могут присутствовать и продукты, полученные из мАИ, т. е. с разветвлениями по обоим реакционным центрам — NH- 100 ISSN 0233-7057. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № & группе гетероциклс* и экзоциклической NH2-rpynne, хотя их доля для аденина может быть и невелика [5]. Подбором хроматографической системы мы добились разрешения суммарной полосы для Пр I—IV на ряд отдельных компонентов (рис. 4). Этим компонентам отвечают, как мы считаем, индивидуаль­ ные продукты с одношаговым увеличением длины боковой оксимети- леновой цепочки. Если учесть, что при нанесении на старт минималь­ ных количеств препарата (0,2—0,5 мкг) в зоне с максимальной хрома­ тографической подвижностью мы разрешали дуплет полос (очевидно, Рис. 2. Продукты модификации аденина в полной реакционной смеси А+ФА + ЭА: / — исходный А; 2 — инкубация в течение 1 ч; 3 — 7 ч; 4— 18 ч; 5 —48 ч Рис. 3. Сканограмма хроматографической пластины, изображенной на рис. 2. Обо­ значения кривых соответствуют нумерации полос, стрелками указано положение продуктов мАШ и Пр I, обозначен горизонтальной штриховой стрелкой), то на рис. 4 представлены, по-видимому, все классы получаемых в процессе реакции продуктов — от Пр I до Пр IV; они отмечены стрелками. С возрастанием времени инкубации до 42 ч основная доля продуктов представлена Пр IV. Окраска металлокомплекса появляется после добавления в реак­ ционную смесь серебра. Для хроматографически «разогнанных» про­ дуктов реакции аденина с формальдегидом и этаноламином единст­ венно возможным способом окраски является обработка конечной хро- матограммы раствором азотнокислого серебра, так как предваритель­ но окрашенные продукты не хроматографируются и остаются на стар­ те из-за повышенной адсорбции. Мы провели подобную обработку, при этом окрашивались только- конечный продукт, Пр IV (вероятно, и воз­ можные производные мАП), в минимальной степени — Пр III, а ис­ ходный аденин и мАШ оставались неокрашенными и детектировались только как темные поглощающие пятна при сквозном УФ-просвечива- нии бумажной хроматограммы. Отметим, что для данной системы (0,03 М боратный буфер, рН 8,5) происходит инверсия хроматогра­ фической подвижности на бумаге по сравнению с пластинкой «Silufol»: минимальной подвижностью обладает исходный аденин, да­ лее мАШ и максимальной — разветвленные Пр III—IV. Их значения Rf в использованной нами системе составляют 0,32; 0,65; 0,80 и 0,87 соответственно. При боковом освещении бумажной хроматограммы УФ-светом до­ полнительно зарегистрировано появление яркого флюоресцирующего пятна в той позиции, где локализован фиолетово окрашенный комплекс с максимальной хроматографической подвижностью, т. е. Пр IV со зна­ чением Rf — Qy87 (рис. 5, а) . Существенной особенностью феномена све­ чения является то, что свойства флюоресценции Пр IV проявляются и ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 5 101 в отсутствие Ag, который необходим только для его окраски. На рис. 5 (б) схематически представлено флюоресцирующее пятно (сплошная стрелка), а также пятна, отмеченные штриховыми стрелками. Они де­ тектируются как фиолетово окрашенный продукт (в месте флюорес­ ценции) или УФ-поглощающий материал (остальные пятна) и соответ­ ствуют от старта мАШ, промежуточному Пр III и конечному Пр IV. Приведенные данные хроматографии однозначно свидетельствуют о механизме образования металлокомплекса на основе аденина по Рис. 4. Продукты модификации аденина при хро­ матографии пластинок «Silufol» в 0,03 М борат- ном буфере: 1 — инкубация в течение 20 ч; 2 — 42 ч; 3 — исходный А • Рис. 5. Флюоресцентная регистрация бумажной хроматограммы продуктов модификации аденина в полной реакционной смеси А+ФА+ЭА (а) и схематическое изображение хроматограммы (б). Температура реакции 15°С, время инкубации 18 ч. Горизонтальными стрелками указаны поло­ жения флюоресцирующего пятна, а также на­ бора УФ-поглощающих и окрашенных пятен (штриховые стрелки) принципу «step-by-step». Флюоресцентные свойства проявляются толь­ ко на полностью сформированной оксиметиленовой цепочке, окраши­ вание возникает после добавления Ag. По сравнению с изученной ранее так называемой растворной окрас­ кой, т. е. получением металлокомплекса в растворе без ДНК [1], об­ разование окрашенного ДНК-зонда является более медленным процес­ сом. Это демонстрируют кривые на рис. 6. Здесь кривая 1 получена в инкубационной смеси без однонитчатой ДНК, остальные — с ДНК, причем каждая точка кривых 2—4 измерена после диализа, проводи­ мого для удаления растворного окрашивания. При рН 7,2, что соответствует, согласно обозначениям из [1], оранжево-желтой фракции 7, интенсивность растворной окраски дости­ гает насыщения через ^ 5 ч (кривая У), а для окрашенной ДНК — только через ~ 3 0 ч (кривая 2). Еще более медленная кинетика обра­ зования окрашенного комплекса на ДНК наблюдается, если проводить инкубацию при значениях рН, соответствующих красно-оранжевой ок­ раске (рис. 6, кривая <?). Интенсивное окрашивание отмечается через 100—150 ч инкубации, что создает определенные неудобства при час­ тых получениях ДНК-зонда. Кроме того, оранжевая окраска металло­ комплекса — это достаточно разветвленная сеть этаноламино-формаль- дегидных цепочек (во всяком случае, число цепочек > 3 ) , и стериче- ские препятствия при гибридизации объемного зонда являются серьез­ ным негативным фактором. 102 ISSN 0233-7667. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 5 Резким контрастом служит кинетика окрашивания ДНК, проведен­ ная при рН 8,2 (рис. 2, кривая 4). Формирование фиолетовой окраски полностью завершается через 3—4 ч. При этом, однако, интенсивность фиолетового окрашивания оказалось значительно ниже, чем красно- оранжевого. При одинаковых концентрациях компонентов инкубацион­ ной смеси уровень насыщения интенсивности окраски, измеренный при 410 нм, равен 12,5—15 ед. оптической плотности для кривых 2 и 5, но лишь 2,5 — для кривой 4. Напомним, что эти оценки получены после 2 4 Ю 40 70 /00 130 Ч Рис. 6. Зависимость от времени интенсивности окраски в полной реакционной смеси, содержащей все компоненты, кроме ДНК (1), и с ДНК (2—4): 1, 2 — рН 7,2 (оран­ жево-желтая); 3 — рН 6,9 (красно-оранжевая); 4 — рН 8,2 (фиолетовая окраска). Температура инкубации 30 °С интенсивного диализа препаратов окрашенного ДНК-зонда для безусловного удаления растворной окраски. Вопрос о том, в какой сте­ пени диализ снижает количество оксиметиленовых цепочек за счет воз­ можной диссоциации молекул формальдегида, специально нами не ис­ следовался. Таким образом, формирование наиболее интенсивной красно-оран­ жевой окраски ДНК является достаточно медленным процессом, реак­ ция завершается только после недельной инкубации. Существенный вы­ игрыш во времени происходит при фиолетовом окрашивании ДНК, вре­ мя инкубации снижается до нескольких часов, но налицо явный про­ игрыш в интенсивности окраски. Мы разработали прием (материалы будут представлены в следующей работе этой серии), который можно условно назвать «достраиванием» или разветвлением окрашенного ком­ плекса, но не на ДНК-зонде, а уже в составе гибрида. Это позволит, по нашим оценкам, повысить чувствительность детектирования комплемен­ тарных последовательностей ДНК, как минимум, в 5—10 раз по сравне­ нию с фиолетовым зондом. Располагая набором кривых типа 1—4 (рис. 6), мы можем совер­ шенно точно дозировать уровень модификации ДНК-зонда. Напомним, что присоединение окрашенной цепочки происходит по «формальдегид- ным» реакционным N-сайтам, т. е. амино- и иминогруппам оснований, участвующих в последующем формировании дуплекса при гибридиза­ ции. Поэтому увеличение степени модификации, способствующее уси­ лению интенсивности окраски, одновременно ухудшает условия форми­ рования дуплекса за счет нейтрализации возможных сайтов комплемен­ тарного спаривания. Экспериментально подобранный уровень модификации, который обеспечивает образование устойчивых гибридов, составляет 10—15%. Для фиолетового зонда (рис. 6, кривая 4) это отвечает времени инку­ бации однонитчатой ДНК 15—20 мин. ISSN 0233-76)67. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 5 103 Предложенный в работе метод получения ДНК-зонда с окрашен­ ным металлокомплексом достаточно прост и существенно выигрывает перед известными радужными зондами, требующими для формирова­ ния окраски конъюгаты щелочной фосфатазы с различными комбина­ циями нафтол-АБ-фосфат/диазониевой соли [6]. Неоспоримым преиму­ ществом является флюоресценция нашего зонда, значительно расши­ ряющая возможности его применения. М. В. Личина, О. В. Шугалш КОНСТРУЮВАННЯ ДНК-ЗОНДА 3 ВИКОРИСТАННЯ'М СОЛ1 СР1БЛА. 2. ЗАБАРВЛЕННЯ МОНОМЕРА I ОДНОНИТЧАСТ01 ДНК Р е з ю м е Утворення забарвленого металокомплексу на основ! адешна включае послщовш етапи модифшацп основи формальдег1дом, приеднання етаноламша та видовження 6i4iioro ланцюжка за рахунок демлькох метоксильних груп. Забарвлення формуеться шсля до- давання ср!бла, кшцевому розгалуженому металокомплексу притаманш флюоресцентш властивоеп. На однонитчастш ДНК найшвидше розвиваеться фюлетове забарвлення. Р1вень модифшаци 10—15 %, який не перешкоджае утворенню стшких дуплекслв при молекулярнш пбридизацп, досягаеться за 15—.'20 хв. i pH 8,2. М. V. Lichina, A. V. Shugalii THE DNA PROBE CONSTRUCTION WITH USE THE SILVER SALT. 2. THE COLOURING OF THE MONOMER AND THE SINGLE-STRANDED DNA S u m m a r y Some aspects of adenine modification as a one of DNA base during the preparing of co­ loured metal-complex is under investigation. After the N-metoxyadenine formation as a result of formaldehyde reaction with the amino/imino groups of the base the lengthing of lateral chain is occured at the expense of ethanolamine and some metoxy groups. The co­ lour of modified adenine is developed after a silvre addition and the ultimate branched metal-complex possess in addition the fluorescent properties. The kind of clour is determi­ ned by pH of incubation media, the violet probe with a 10—15 % modification level is obtained in an alkaline solution in the course of 15—20 minutes. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Личина М. В., Шугалий А. В. Конструирование ДНК зонда с использованием соли серебра. I. Образование и характеристика олигомерных окрашенных цепей // Биополи­ меры и клетка.—1994.—10, № 2.—С. 38—44. 2. Чичибабин Л. Е. Основные начала органической химии.— М. : ГХИ, 1963.— Т. 1.— 910 с. 3. Eyring E. J., Ofengang /. Reaction of formaldehyde with heterocyclic imino nitrogen of purine and pyrimidine nucleosides // Biochemistry.— 1967.— 6, N 8.— P. 2500— 2506. 4. McGhee J. D., Von Hippel P. H. Formaldehyde as a probe DNA structure. II. Reac­ tion with endocyclic imino groups of DNA bases // Ibid.—1975.—14, N 6.— P. 1297—1303. 5. Кочетков Н. К., Будовский Э. И., Свердлов Е. Д. и др. Органическая химия нуклеи­ новых кислот.— М.: Химия, 1970.—720 с. 6. Hoeltke H. /., ЕШ /., Finken M. et al. Multiple nucleic acid labeling and rainbow de­ tection / / Anal. Biochem.—1992.—207, N 1.—P. 24—31. Ин-т хим. физики в Черноголовке РАН Получено 11.04.94 Ю4 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 5

Ähnliche Einträge