Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс
Исследовалась представленность РНК протоонкогена c-fos а мРНК, содержащей повтор 132 (В²⁺мРНКx) в ядерной РНК и в цитоплазматической поли(А) РНК клеток регенерирующей печени β период 0–12 ч после частичной гепатэктомии. Судя по результатам гибридизации ДНК – РНК, транскрипты c-fos сосредоточены в ос...
Збережено в:
| Дата: | 1989 |
|---|---|
| Автори: | , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1989
|
| Назва видання: | Биополимеры и клетка |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155532 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс / В.И. Прима, Т.А. Клочко, М.Ю. Оболенская, П.Л. Иванов, А.П. Рысков, О.М. Платонов // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 6. — С. 83-86. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-155532 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-1555322019-06-18T01:29:03Z Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс Прима, В.И. Клочко, Т.А. Оболенская, М.Ю. Иванов, П.Л. Рысков, А.П. Платонов, О.М. Клеточная биология Исследовалась представленность РНК протоонкогена c-fos а мРНК, содержащей повтор 132 (В²⁺мРНКx) в ядерной РНК и в цитоплазматической поли(А) РНК клеток регенерирующей печени β период 0–12 ч после частичной гепатэктомии. Судя по результатам гибридизации ДНК – РНК, транскрипты c-fos сосредоточены в основном в ядре и концентрация их максимальна к 0,5 и 12 ч регенерации. Напротив, В²⁺мРНКx сосредоточена в поли(А)⁺РНКx цитоплазмы и в те же сроки имеет минимальную концентрацию. Различия в экспрессии исследованных генов могут определяться функциональными особенностями кодируемых ими продуктов. Досліджувалася представленість РНК протоонкогена c-fos а мРНК, що містить повтор 132 (В²⁺мРНКx) в ядерній РНК і в цитоплазматичної полі (А) РНК клітин регенеруючої печінки β період 0–12 год після часткової гепатектомії. Судячи з результатів гібридизації ДНК-РНК, транскрипти c-fos зосереджені в основному в ядрі і концентрація їх максимальна до 0,5 і 12 год регенерації. Навпаки, В²⁺мРНКx зосереджена в полі (А)⁺ РНК цитоплазми і в ті ж терміни має мінімальну концентрацію. Відмінності в експресії досліджених генів можуть визначатися функціональними особливостями кодованих ними продуктів. The relative abundance of c-fos RNA and mRNA containing repetitive sequence B2 (B²⁺mRNAx) has been studied in nuclear and poly(A)+ cytoplasmic RNA of regenerating liver during 0–12 h after partial hepatectomy. The data of DNA-RNA hybridization reveal that c-fos transcripts are mainly localized in nucleus and their relative abundance is maximal 0.5 and 12 h after operation. On the contrary B²⁺mRNAx is mainly localized in poly (A)⁺ cytoplasmic RNA and its concentration is the lowest in the same periods after operation. The differences in the investigated gene expression are possibly connected with functional peculiarities of terminal products of both genes. 1989 Article Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс / В.И. Прима, Т.А. Клочко, М.Ю. Оболенская, П.Л. Иванов, А.П. Рысков, О.М. Платонов // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 6. — С. 83-86. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0000FC http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155532 547.963.3 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Клеточная биология Клеточная биология |
| spellingShingle |
Клеточная биология Клеточная биология Прима, В.И. Клочко, Т.А. Оболенская, М.Ю. Иванов, П.Л. Рысков, А.П. Платонов, О.М. Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс Биополимеры и клетка |
| description |
Исследовалась представленность РНК протоонкогена c-fos а мРНК, содержащей повтор 132 (В²⁺мРНКx) в ядерной РНК и в цитоплазматической поли(А) РНК клеток регенерирующей печени β период 0–12 ч после частичной гепатэктомии. Судя по результатам гибридизации ДНК – РНК, транскрипты c-fos сосредоточены в основном в ядре и концентрация их максимальна к 0,5 и 12 ч регенерации. Напротив, В²⁺мРНКx сосредоточена в поли(А)⁺РНКx цитоплазмы и в те же сроки имеет минимальную концентрацию. Различия в экспрессии исследованных генов могут определяться функциональными особенностями кодируемых ими продуктов. |
| format |
Article |
| author |
Прима, В.И. Клочко, Т.А. Оболенская, М.Ю. Иванов, П.Л. Рысков, А.П. Платонов, О.М. |
| author_facet |
Прима, В.И. Клочко, Т.А. Оболенская, М.Ю. Иванов, П.Л. Рысков, А.П. Платонов, О.М. |
| author_sort |
Прима, В.И. |
| title |
Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс |
| title_short |
Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс |
| title_full |
Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс |
| title_fullStr |
Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс |
| title_full_unstemmed |
Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс |
| title_sort |
синхронные изменения концентраций c-fos- рнк и в²⁺мрнкκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| publishDate |
1989 |
| topic_facet |
Клеточная биология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/155532 |
| citation_txt |
Синхронные изменения концентраций c-fos- РНК и В²⁺мРНКκ в пререпликативном периоде регенерации печени у крыс / В.И. Прима, Т.А. Клочко, М.Ю. Оболенская, П.Л. Иванов, А.П. Рысков, О.М. Платонов // Биополимеры и клетка. — 1989. — Т. 5, № 6. — С. 83-86. — Бібліогр.: 10 назв. — рос. |
| series |
Биополимеры и клетка |
| work_keys_str_mv |
AT primavi sinhronnyeizmeneniâkoncentracijcfosrnkiv2mrnkkvprereplikativnomperioderegeneraciipečeniukrys AT kločkota sinhronnyeizmeneniâkoncentracijcfosrnkiv2mrnkkvprereplikativnomperioderegeneraciipečeniukrys AT obolenskaâmû sinhronnyeizmeneniâkoncentracijcfosrnkiv2mrnkkvprereplikativnomperioderegeneraciipečeniukrys AT ivanovpl sinhronnyeizmeneniâkoncentracijcfosrnkiv2mrnkkvprereplikativnomperioderegeneraciipečeniukrys AT ryskovap sinhronnyeizmeneniâkoncentracijcfosrnkiv2mrnkkvprereplikativnomperioderegeneraciipečeniukrys AT platonovom sinhronnyeizmeneniâkoncentracijcfosrnkiv2mrnkkvprereplikativnomperioderegeneraciipečeniukrys |
| first_indexed |
2025-07-14T07:45:05Z |
| last_indexed |
2025-07-14T07:45:05Z |
| _version_ |
1837607531239702528 |
| fulltext |
УДК 547.963.3
В. И. Прима, Т. А. Клочко, М. Ю. Оболенская, П. Л. Иванов,
А. П. Рысков, О. М. Платонов
СИНХРОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИЙ c-fos- РНК
И В2+МРНК* В ПРЕРЕПЛИКАТИВНОМ ПЕРИОДЕ
РЕГЕНЕРАЦИИ ПЕЧЕНИ У КРЫС
Исследовалась представленность РНК протоонкогена c-fos а мРНК, содержащей пов-
тор 132 (В2+мРНКх) β ядерной РНК и β цитоплазматической поли(А)[РНК клеток
регенерирующей печени β период 0—12 ч после частичной гепатэктомии. Судя по ре-
зультатам гибридизации ДНК — РНК, транскрипты c-fos сосредоточены β основном
в ядре и концентрация их максимальна к 0,5 и 12 ч регенерации. Напротив, В2 •мРНК^
сосредоточена в поли(А)+РНК цитоплазмы и в те же сроки имеет минимальную кон-
!{ентрицию. Различия в экспрессии исследованных генов могут определяться функцио-
нальными особенностями кодируемых ими продуктов.
Ц е п ь биологических событий начального периода регенерации печени
приводит к массовому переходу ранее покоившихся клеток в состояние
подготовки к делению. Одним из в а ж н ы х звеньев такой цепи является
резкое повышение активности ряда генов, продукты которых сущест-
венны д л я перехода G 0 - ^ -G 1 , в частности, некоторых ядерных протоон-
когенов [1]. Возможно, д л я этого используются клеточные ресурсы,
сохраняемые за счет выключения части генов, кодирующих Р Ы К , ха-
рактерные д л я состояния покоя [2]. К а к было показано ранее, в пре-
репликативном периоде регенерации, вызванной частичной гепатэкто-
м и ей ( Ч Г Э ) , ключевыми в изменении набора ядерных Р Н К я в л я ю т с я
моменты 0,5 и 3 ч после Ч Г Э [3]. П р е д с т а в л я л о с ь в а ж н ы м выяснить,
каковы ж е слагаемые этого процесса на уровне индивидуальных Р Н К
разного типа.
В настоящей работе сопоставлялись изменения концентраций Р Н К
ядерного протоонкогена c-fos [4] и тканеспецифической В 2 + м Р Н К х
[5] в ядре и цитоплазме клеток печени после Ч Г Э . О к а з а л о с ь , что
различны не только л о к а л и з а ц и и основной массы этих Р Н К , но и наи-
более з а м е т н ы е изменения в их концентрациях р а з н о н а п р а в л е н н ы , хотя
происходят одновременно. Один из моментов резкого изменения кон-
центрации совпадает с ранее отмеченным ключевым сроком — 0,5 ч,
другой находится около 12 ч после ЧГЭ.
В опытах использовали Р Н К , выделенные фенольным методом [3]
из ядер или цитоплазмы клеток печени белых крыс в ра зные сроки
периода, предшествующего началу репликации (0—12 ч после Ч Г Э ) .
В качестве контроля с л у ж и л и препараты, выделенные из печени в те
ж е сроки после ложной операции ( J l O ) . Степень нативности препара -
тов Р Н К проверяли с помощью гель-электрофореза по наличию высо-
комолекулярной Р Н К и полос р Р Н К . Поли ( А ) - с о д е р ж а щ у ю Р Н К от-
д е л я л и х р о м а т о г р а ф и е й на олиго ( d T ) - ц е л л ю л о з е («Serva» , Ф Р Г ) [6].
В качестве зондов д л я гибридизации использовали Ps /7 -фрагмент онко-
гена v-fos (1 100 н. п.) в составе п л а з м и д ы pGEM2, любезно предостав-
ленный П. }А. Ч у м а к о в ы м , и Ps /7 -фрагмент к Д Н К В 2 + м Р Н К х (300 н. п.)
в составе pUC19 [5], выделенной с т а н д а р т н ы м методом [6]. 3 2Р-мечен-
ную зондовую Д Н К с удельной активностью порядка IO8 и м п / ( м к г Х
X мин) получали в реакции ник-трансляции [6]. Д о т - г и б р и д и з а ц и ю
Д Н К — Р Н К проводили с р а з н ы м количеством Р Н К , з а ф и к с и р о в а н -
ной на нейлоновых ф и л ь т р а х («Amersham», А н г л и я ) . Фильтры пред-
гибридизовали в растворе: 50 % формамид , 750 мМ NaCl , 75 мМ цит-
р а т Na, 0 , 2 % DS-Na , 0,1 % Na 4 P 2 O 7 , 0,1 мг /мл гепарина при 42 °С в
течение 1—2 ч. Г и б р и д и з а ц и ю вели в том ж е растворе, с о д е р ж а щ е м
IO6—IO7 и м п / ( м и н - м л ) меченного 3 2P радиоактивного зонда Д Н К , при
42 °С в течение 18—24 ч. От несвязавшейся радиоактивной метки
фильтры о т м ы в а л и при 42 °С в растворе I x S S C (150 м М NaCl , 15 м М
цитрат N a ) с 0,1 % D S - N a в течение 1 ч. Р а д и о а в т о г р а ф и ю проводили
с у с и л и в а ю щ и м экраном ЭУ-В2 на пленке P M B в течение 1—5 сут.
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989, т. 5, № 6 6* 8 3
Пленки с р а д и о а в т о г р а ф а м и сканировали на лазерном денситометре
(«LKB U l t r o s c a n XL», Ш в е ц и я ) . Д л я повторной гибридизации с дру^
гим зондом фильтры полностью отмывали от радиоактивности в двух
сменах M2O по 2 мин при 90 °С. Р е з у л ь т а т ы гибридизации проверяли в
серии аналогичных опытов с п р е п а р а т а м и Р Н К из разных выделений.
Рис. I. Г и б р и д и з а ц и я Р Н К из регенерирующей (а) и ложнооїгерирован іюп (б) печени
с Р 3 2 -меченным u-fол'-зондом. На ф и л ь т р ы нанесены: я д е р н а я Р Н К (А')> ц и т о п л а з м а т и -
ческие поли (A) + P H K и п о л и ( А ) - Р Н К . П о вертикали у к а з а н о количество Р Н К в пят-
нах (мкг) , по горизонтали — время после операции (ч)
F ig . I. H y b r i d i z a t i o n of RNA f r o m r e g e n e r a t i n g (a) and sham opera t ed (6) l iver w i th
P^ 2 - IabeI led v-fos-probe. The f i l t e r s con ta in in do t s : nuc lea r R N A (N) , c y t o p l a s m i c po-
ly (A) ι R N A ( ( A ) + ) and p o l y ( A ) - R N A ( ( A ) - ) . Ver t ica l r o w s — different q u a n t i t y of
RNA, h o r i z o n t a l rows — d i f f e ren t t ime a f t e r o p e r a t i o n
Рис. 2. Гибридизация PIIK из регенерирующей (а) и ложнооперированноп (б) печепи
с Р32-меченньгм В2-мРНКх зондом. Обозначения, как на рис. 1
Fii?. 2. Hybridizat ion of RNA from regenerat ing (α) and sham operated (6) liver with
P 3 2-Iabel led B2mR'N Ax-probe. The des ignat ions (see Fig. 1)
Р е з у л ь т а т ы дот-гибридизации с 3 2 Р-меченным зондом, содержа-
щим v-fos Д Н К , представлены на рис. 1. Они свидетельствуют о том,
что транскрипты с протоонкогена c-fos в течение всего изученного пе-
риода о б н а р у ж и в а ю т с я в основном в я д р а х гепагоцитов с максималь -
ными концентрациями через 0,5 и 12 ч после Ч Г Э . J lO не вызывает зна-
чительного изменения уровня fos-транскриптов в клетке. Эти д а н н ы е
близки к приведенным в работе [7].
В известном смысле противоположные результаты были получены
при гибридизации Р Н К с 3 2 Р-меченным зондом, с о д е р ж а щ и м структур-
ную (т. е. лишенную повтора В2) часть к Д Н К к В 2 + м Р Н К х [5]. Д л я
наглядности сравнения на рис. 2 представлены р а д и о а в т о г р а ф ы тех ж е
8 4 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989, т. 5, № 6 6* 84
фильтров , которые гибридизовались с зондом u-fos (рис. 1) и после
полной отмывки от радиоактивности в Н2О регибридизовались с зон-
дом, комплементарным В2+мРНКх. К а к следует из рис. 2, д а н н а я Р Н К
в регенерирующей печени, как и после Л О , представлена в основном
полиаденилированными молекулами цитоплазмы. Н о в отличие от Л О
Ч Г Э вызывает модуляцию сигнала во времени — максимум гибридиза-
ции приходится на 1—3 ч после Ч Г Э с явными спадами через 0,5 и 12 ч
после ЧГЭ.
Оптическая плотность радиоавтографов РНК из регенерирующей печени (средние из
трех измерений, в % к норме)
The optical density of autoradiographs over the dots containing RNAs from regenerating
liver (averaged on the 3 measurements, in % of normal)
Время после ЧГЭ. ч
Тип Р Н К
0 (норма) 0,5 1 3 G 12
Ядерная
Поли (А)+ цитоплаз-
матическая
Ядерная
Поли (А)+ цито-
плазматическая
v-fos
100 ± 2 1 127+11 9 3 + 1 9 8 6 + 1 2 116+24 136+7
100 + 17 193+17 9 5 + 9 8 4 + 1 4 71 + 11 1 1 6 + 9
к ДНК к В2+мРНК х
100+23 8 5 + 1 7 147+16 127+18 149+17 6 7 + 3
100 + 5 32 + 6 8 6 + 1 4 8 7 + 9 5 1 + 9 16 + 2
Р е з у л ь т а т ы денситометрии р а д и о а в т о г р а ф о в д л я фильтров с Р Н К
из регенерирующей печени представлены в таблице .
РТзвестно, что Р Н К , считанная с протоонкогена c-fos, н а к а п л и в а -
ется в клетках эмбриональных тканей [8], а белок c-fos является ре-
гулятором транскрипции многих генов в клетках , стимулированных к
делению [9]. С другой стороны, В2+мРНКх является тканеспецифиче-
ской Р Н К , наблюдаемой только в печени и почках грызунов. Попытки
о б н а р у ж и т ь ее в п о л и ( А ) + м Р Н К широкого набора изучавшихся опухо-
лей (в том числе гепатомы) не д а л и результата [10]. Таким образом,
в раннем периоде регенерации печени, предшествующем репликации,
н а б л ю д а ю т с я значительные изменения активности генов, продукты ко-
торых считаются х а р а к т е р н ы м и или для делящихся , или для высокоспе-
циализированных интактных клеток, причем величины сигналов д л я
них колеблются в противофазе . Существует ли причинная связь м е ж д у
этими процессами и каковы в таком случае механизмы их координации,
еще подлежит выяснению.
SYNCHRONOUS CHANGES OF C-FOS RNA AND B2+mRNAx CONCENTRATIONS
DURING PREREPLICATIVE PERIOD IN REGENERATING RAT LIVER
V. I. Prima, T. A. Clochko, M. Yu. Obolenskaya, P. L. Ivanov,
A. P. Ryskov, O. M. Platonov
Institute of Molecular Biology and Genetics,
Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev;
Institute of Molecular Biology, Academy of Sciences of the USSR, Moscow
S u m m a r y
The relative abundance of c-fos RNA amd mR'NA containing repetitive sequence B2
(B2+mRNAx) has been studied in nuclear and p o l y ( A ) + cytoplasmic RNA of regenera-
ting liver during 0-12 h after partial hepatectomy. The data of DNA-RiNA hybridization
reveal that c-fos transcripts are mainly localized in nucleus and their relative abundance
is maximal 0.5 and ІІ2 h after operation. On the contrary B2+mRNAx is mainly locali-
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989, т. 5, № 6 6* 85
zed і πι poly (A)+ cytoplasmic R1NA and its concentration is the lowest in the same periods
after operation. The differences in the investigated gene expression are possibly con-
nected with functional peculiarities of terminal products of both genes.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Denhardt D. Т., Edwards D. R., Parfett С. L. / . Gene expression during the mamma-
lian cell cycle / / B i o c h i m . et biophys. acta.— 11986.—865, ,N 1.—P. 80—il25.
2. Частичное ограничение экспрессии генома — компонент перестройки его работы в
регенерирующей печени млекопитающих / М. Ю. Оболенская, В. И. Прима, Т. Б. Ге-
расимова, О. М. Платонов / / Биополимеры и клетка.— 19$9.—5, № 2.— С. 79—88.
3. Ядерные P1HK на раннем этапе регенерации печени / М. Ю. Оболенская, В. И. При-
ма, И. А. Куликовская, О. М. П л а т о н о в / / Т а м же.— 1987.—3, № 1.— С. 27—35.
4. FBJ murine osteosarcoma virus; identification and molecular cloning of biologically
active proviral DNA / T. Gurra.n, G. Peters, C. Van Beveren et a l . / / J . Virol —
i!9'82.—44, N 2 — P. 674—682.
5. Mouse ubiquitous B2 repeat in polysomal and cytoplasmic ,poly(A)+ RNiAs: unidi-
rectional orientation and З'-end localization / A. P. Ryskov, P. L. Ivanov, D. A. Kra-
merov, G. P. G e o r g i e v / / N u c h Acids Res.— 19-83.—U, N il 8.— P. 6641—6668.
6. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование.— М. : Мир, 1985.—
479 с.
7. Expression of c-fos, c-myc and hsp70 genes at early stages of the regenerating of
rat liver / E. Biesiada, J. Wisniewski, Z. Krawczyk, M. Chorazy / / Bull. Pol. Acad.
6!ci. Biol. Sci . - !1987.—35, N 7—9.—P. ІІ65—17il.
8. Miiller R., Verma I. M., Adamson E. D. Expression of c-onc genes: c-fos transcripts
accumulate to high levels during development of mouse placenta, yolk sac and am-
nion / / EMBO J.— 1983.—2, N 5.— P. 679^6θ4.
9. Sassone-Corsi P., Sisson J. C., Verma J. M. Transcriptional autoregulation of the
proto-oncogen fos / / Nature.— !І98'8.—334, N 6180.—P. 314—<319.
10. Некоординированная экспрессия В2+мРНКх и других типов В2-содержащих по-
ли ( A ) + P H K в различных тканях мыши / П . JL Иванов, О. Н. Токарская, Д . А. Кра-
меров и др. / /Молекуляр. биология.— 1985—19, № 2 — С . 333— 339.
Ин-т молекуляр. биологии и генетики
АН УССР, Киев
Ин-т молекуляр. биологии АН СССР, Москва
Получено 27.04.89
ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1989, т. 5, № 6 6* 86
|