Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины

Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) в полиморфных системах pERT87-8-BamHI, pERT87-8-XmnI, pERT87-15-TaqI гена дистрофина проведен в 28 семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна. Системы оказались диагностически информативными для 26 семей. Получены данные по распредел...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	1993
Hauptverfasser:	Гришко, В.И., Малярчук, С.Г., Лившиц, Л.А.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1993
Schriftenreihe:	Биополимеры и клетка
Schlagworte:	Генно-инженерная биотехнология
Online Zugang:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156232
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины / В.И. Гришко, С.Г. Малярчук, Л.А. Лившиц // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 4. — С. 105-108. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-156232
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1562322019-06-19T01:31:26Z Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины Гришко, В.И. Малярчук, С.Г. Лившиц, Л.А. Генно-инженерная биотехнология Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) в полиморфных системах pERT87-8-BamHI, pERT87-8-XmnI, pERT87-15-TaqI гена дистрофина проведен в 28 семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна. Системы оказались диагностически информативными для 26 семей. Получены данные по распределению ПДРД-генотипов среди 97 здоровых женщин Украины. Обсуждается необходимость анализа внутригенных и фланкирующих ПДРФ- маркеров для эффективной диагностики мышечной дистрофии Дюшенна в Украине. Аналіз поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів (ПДРФ) у поліморфних системах pERT87-8-BamHI, pERT87-8-XmnI, pERT87-15-TaqI гена дистрофина проведено в 28 сім'ях з високим ризиком м'язової дистрофії Дюшенна. Системи виявилися діагностично інформативними для 26 сімей. Отримано дані щодо розподілу ПДРД-Генотипів серед 97 здорових жінок України. Обговорюється необхідність аналізу внутрігенних і фланкуючих ПДРФ- маркерів для ефективної діагностики м'язової дистрофії Дюшенна в Україні. RELP-analysis in polymorphic systems pERT87-8-BamH1, pERT87-8-XmnI, pERT87-15-Taq1 of dystrophin gene performed in 28 families with high risk of muscular Duchenne dystrophy. This systems were diagnostically informatived for 26 families. The distribution of RELP-genotypes of pERT locus was found for 97 healthy women from Ukraine. The necessity of analysis of intragenic and Flanking markers RFLP for effective diagnosis of muscular Duchenne dystrophy is discussed in this report. 1993 Article Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины / В.И. Гришко, С.Г. Малярчук, Л.А. Лившиц // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 4. — С. 105-108. — Бібліогр.: 11 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000369 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156232 577.213.3 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Генно-инженерная биотехнология Генно-инженерная биотехнология
spellingShingle	Генно-инженерная биотехнология Генно-инженерная биотехнология Гришко, В.И. Малярчук, С.Г. Лившиц, Л.А. Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины Биополимеры и клетка
description	Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) в полиморфных системах pERT87-8-BamHI, pERT87-8-XmnI, pERT87-15-TaqI гена дистрофина проведен в 28 семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна. Системы оказались диагностически информативными для 26 семей. Получены данные по распределению ПДРД-генотипов среди 97 здоровых женщин Украины. Обсуждается необходимость анализа внутригенных и фланкирующих ПДРФ- маркеров для эффективной диагностики мышечной дистрофии Дюшенна в Украине.
format	Article
author	Гришко, В.И. Малярчук, С.Г. Лившиц, Л.А.
author_facet	Гришко, В.И. Малярчук, С.Г. Лившиц, Л.А.
author_sort	Гришко, В.И.
title	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины
title_short	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины
title_full	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины
title_fullStr	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины
title_full_unstemmed	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины
title_sort	полиморфизм реrt-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии дюшенна и среди здоровых женщин украины
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	1993
topic_facet	Генно-инженерная биотехнология
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156232
citation_txt	Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины / В.И. Гришко, С.Г. Малярчук, Л.А. Лившиц // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 4. — С. 105-108. — Бібліогр.: 11 назв. — рос.
series	Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv	AT griškovi polimorfizmrertlokucagenadistrofinavsemʹâhsvysokimriskommyšečnojdistrofiidûšennaisredizdorovyhženŝinukrainy AT malârčuksg polimorfizmrertlokucagenadistrofinavsemʹâhsvysokimriskommyšečnojdistrofiidûšennaisredizdorovyhženŝinukrainy AT livšicla polimorfizmrertlokucagenadistrofinavsemʹâhsvysokimriskommyšečnojdistrofiidûšennaisredizdorovyhženŝinukrainy
first_indexed	2025-07-14T08:41:39Z
last_indexed	2025-07-14T08:41:39Z
_version_	1837611089435557888
fulltext	УДК 577.213.3 В. И. Гришко, С. Г. Малярчук, Л. А. Лившиц ПОЛИМОРФИЗМ рЕRT-ЛОКУCA ГЕНА ДИСТРОФИНА В СЕМЬЯХ С ВЫСОКИМ РИСКОМ МЫШЕЧНОЙ ДИСТРОФИИ ДЮШЕННА И СРЕДИ ЗДОРОВЫХ ЖЕНЩИН УКРАИНЫ Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) в полиморфных системах pERT87-8-BamHI, pERT87-8-XmtiI, pERT87-15-TaqI гена дистрофика прове- ден в 28 семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюіиинна. Системы оказа- лись диагностически информативными для 26 семей. Получены данные по распре- делению ΠДРΦ-генотипов среди 97 здоровых женщин Украины. Обсуждается необходимость анализа внутригенных и фланкирующих ПДРФ- маркеров для эффективной диагностики мышечной дистрофии Дюшенна в Украине. Введение. Мышечная дистрофия Дюшенна (МДД) — тяжелое моноген- ное наследственное заболевание с Х-сцепленным характером наследова- ния, встречающееся с частотой примерно 1 : 3500 новорожденных маль- чиков [1]. Ген, мутации в котором вызывают развитие МДД, открыт з 1985 году [2]. Позже был описан белковый продукт гена, названный дистрофнном [3]. Рядом авторов показаіі-ю, что МДД вызывает целый спектр разнообразных мутаций, среди которых преобладают мутации делеционного типа [4]. Несмотря на успехи, достигнутые в исследовании гена дистрофина и происходящих в нем мутаций, 30 % всех известных на сегодняшний день случаев заболевания М Д Д представляют собой неидентифициро- ванные нарушения экспрессии гена ,и функционирования его белкового продукта [5]. В этих случаях для эффективной диагностики МДД и прогноза потомства применяют метод внутрисемейного анализа сцеп- ления МДД-мутаций с маркерами полиморфизма длины рестрикцион- ных фрагментов (ПДРФ). В настоящее время описан и используется в диагностических целях целый ряд ПДРФ-маркеров как внутригенных, так и фланкирующих ген дистрофина [6]. Одним из наиболее широко известных и используемых сейчас является полиморфизм последова- тельностей р£7?Г-локуса гена дистрофина, Епервые описанного Л. М. Кункелем с соавт. [7]. Целью данной работы был анализ ПДРФ по трем полиморфным системам /?£7?7\локуса ( p E R T 8 7 - 8 - B a m H I , pERT87-8-XmnI, pERT87-15- TaqI) в семьях с высоким риском МДД и анализ распределения ПДРФ-генотипов в данных системах среди здоровых женщин Украины. Материалы и методы. В качестве материала для проведенных ис- следований ,использовали образцы крови со стандартным консервантом глюгициром больных мышечной дистрофией Дюшенна и их родителей, которые были получены из медико-генетических учреждений Украины, а также образцы крови здоровых доноров женского пола. Праймеры для специфической амплификации полиморфных после- довательностей были синтезированы в АО «Экотур» (Литва), термо- стабильная ДНК-полимераза и рестриктазы производства НПО «Био- пол» (Россия). Д Н К из лейкоцитов периферической крови выделяли по методу Веннерта и др. [8]. ПДРФ-анализ проводили с помощью специфиче- ской амплификации irt vitro внутригенных полиморфных последователь- ностей р£7?Г-локуса гена дистрофина на основе полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией продуктов амплификации. Полимеразную цепную реакцию осуществляли в автоматическом режиме на термоциклере «Perkin Elmer» фирмы «Cetus» (США). Сос- тав реакционной смеси и условия описаны ранее [9]. Последователь- ности олигонуклео-тидных праймеров приведены в работе [10]. После завершения полимеразной цепной реакции в реакционную смесь добав- © в. И. гришко, С. Г. Малярчук, Л. А. Лившиц, 1993 106 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Nb 4 ляли 5—10 ед. активности соответствующей эндонуклеазы рестрикции. Продукты амплификации гидролизовали в течение 8—12 ч, после чего образовавшиеся фрагменты Д Н К разделяли в 1,4 %-м агарозном геле. Электрофорез проводили по стандартным методикам [11]. Гели окра- Рис. 1. П Д Р Ф - а н а л и з в полиморфной системе pERT87-8-BamHI. Здесь и на рис. 2, 3: 1,4%-й агарозный гель, маркер молекулярной массы — Д Н К фага λ, гидрэлизоваГшая PstI Рис. 2. ПДРФ-анализ в полиморфной системе pERT87-S-Xmnl шивали бромистым этидием, в качестве маркеров молекулярной массы использовали Д Н К фага λ, гидролизованную эндонуклеазой рестрик- ции PstI. Результаты и обсуждение. В данной работе осуществлен ПДРФ- анализ в трех полиморфных системах pERT-локуса гена дистрофина: pERT87-8-BamHI, pERT87- 8-XmnI, pER T 87-15-T a ql у членов семей с высоким риском МДД из различных регионов Украины. В случае первой систе- мы продукты амплификации размером 216 п. н. гидроли- зовали рестриктазой BamIiI и при наличии сайта для эн- донуклеазы рестрикции об- разовывались фрагменты размером 166 и 50 п. н. (рис. 1). Рис. 3. ПДРФ-анализ в поли- морфной системе pERT87-15-TaqI При использовании второй системы продукты амплификации раз- мером 720 п. н. гидролизовали рестриктазой XmnI и при наличии сай- та рестрикции образовывались фрагменты 520 и 200 п. н. (рис. 2). В случае полиморфной системы pERT87-15-TaqI продукты ампли- фикации размером 145 п. н. образовывали при наличии сайта рест- рикции фрагменты размером 72 и 73 п. н., которые на электрофоре- грамме выглядят как один фрагмент (рис. 3). ПДРФ-анализ, проведенный у пробандов, показал, что МДД-му- тации преимущественно ассоциированы с наличием сайта рестрикции 106 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Nb 4 для BcimtII, XmnI, TaqI в соответствующих полиморфных системах (табл. 1). Как видно, абсолютное большинство Х-хромосом пробап- дов имело сайт рестрикции в проанализированных последователь- ностях. T а б л и u а 1 ΠДРФ-анализ полиморфных систем pERT-локуса гена дистрофина в семьях с IihiCOKiiM риском мышечной дистрофии Дюшенна Іюлиморфная система Число про- анализирован- ных генотипов Распределение ПДРФ-генотипов Іюлиморфная система Число про- анализирован- ных генотипов Больные дети Матери пробандов Іюлиморфная система Число про- анализирован- ных генотипов 4- - + + — рЕR T 87-8- 28 22 6 BumIiI 28 — — 8 19 1 рЕКТ87-15· 28 25 3 — Ti: (j J 28 — — 13 13 2 pLRT87S- 16 ,14 2 — — — XnmI 16 — — 12 3 1 Т а б л и ц а 2 Распределение ПДРФ-генотипов полиморфных систем pERT-локуса гена дистрофина среди здоровых женщин Украины ПДРФ-генотипы (η=97) Полиморфная система + + J — pERT 87-8-BamHI 68 35 4 pERT87 S-XmtiI 45 48 4 pER T87-15-Taql 35 54 8 В случае МДД, как и других Х-сцеплепных наследственных за- болевании, диагностически информативной считается полиморфная система, в которой предполагаемая носительница мутантного гена (мать пробанда) имеет гетерозиготный ПДРФ-генотип, т. е. на одной Х-хромосоме в полиморфном участке имеется сайт рестрик- ции, а на другой—аналогич- ный сайт отсутствует. В этом случае, анализируя рестрик- цпониый полиморфизм в семье, можно проследить передачу хромосомы с мутантным геном сыновьям. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что по всем трем полиморф- ным системам наблюдался большой процент гетерозигот- ных генотипов у матерей про- оандоз (табл. 1). Наиболее эффективным для проанализи- рованных нами семей оказал- ся полиморфизм последова- тельности pERT87-8-BamHI, r;je 19 из 28 женщин имели гетерозиготный ПДРФ-генотип. Большинство из проанализированных ,нами семей обнаружили информативный полиморфизм хотя бы в одной из проанализированных нами ПДРФ-систем, только 2 семьи оказались полностью неинформативными ни по одной системе. В двух случаях нам удалось показать дедовское происхождение МДД-мутации, когда мать передала пробаиду Х-хромосому, получен- ную ею от отца. В одной семье была обнаружена делеция р£7?Г-по- следовательности у обоих пробандов. Кроме того, для предварительной оценки уровня гетерозиготносте [ίο данным полиморфным системам в популяции нами был проведен л.'.'ллиз распределения ПДРФ-генотипов среди здоровых женщин Ук- раины. Результаты этого анализа приведены в табл. 2. Можно видеть, что в популяции здоровых женщин также наблюдается преобладание П р и м е ч а н и е , η — число проанализирован- ных генотипов; « + » — Х-хромосома с сайтом рестрикции в полиморфной последовательно- - отсутствие сайта. 106 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Nb 4 Χ-χροмосом с сайтами рестрикции для соответствующих рестриктаз в тех же трех полиморфных последовательностях pERT-локуса ієна дистрофииа. Около половины проанализированных нами жепщтш име- ли гетерозиготный ГІДРФ-генотип в системах pERT87-8-XtnnJ и pERT87-15-TaqI, и только у 35 из 97 женщин был обнаружен гетеро зиготный генотип в полиморфной системе pERT87-8-BamHI. Таким образом, у здоровых женщин также было выявлено преоб- ладание сайтов рестрикции в полиморфных последовательностях рЕRT-локуса гена дистрофииа. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности ис пользования данных полиморфных систем для диагностики М Д Д в Украине прежде всего благодаря высокому уровню гетерозиготності·? по этим локусам в проанализированных выборках. При этом ДНК- анализ по внутрнгенным полиморфным системам обязательно должен быть дополнен анализом полиморфизма фланкирующих ген дистрофи- иа последовательностей из-за возможного виутригенного хроссингоае- ра вследствие гигантского размера исследованного гена. S ι; m m а г у. RELP-analys is in polymorphic systems pERT87-8-BamH/; pERT87- 8-XninI, pERT87-15-TaqI of dystrophin gene performed in 28 families with high risk, of m u s c n l a r Duchenne dystrophy. This systems were diagnostical lv iniormatived Ioi 26 families. The distribution of RELP-genotypes oi pERT locus was found for 97 healihy women from Ukraine. The necessity of analysis of intragenic and f lanking markers RFLP for ciieolive- diagnosis oi muscular Duchenne dystrophy is discussed in this report. С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы 1. Emery Α. Ε. II. Duchenne muscular dysirophy // Oxford monographs on rried k-я Г genetics.— Oxford : Univ. press, 1987.— N 15,— 277 p. 2. Kankel L. Al., Monaco A. PMiddlesworih W. et al. Specific cloning oi DNA frag- ments absent f rom the DNA a male patient with an X chromosome deletion // Proc. Nat. Acad. Sci. U S A . — 1 9 8 5 , — 8 2 , — P . 4778—4782. 3. Hoffman E. P., Brown R. H., Kunkel E. Ai. et al. Dystrophin : The protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus // Ce!! — 1987.— 52 .—P. 919—928. ' 4. Forrest S. M., Cross G. S., Speer A. et al. Preferential deletion of exons in Duciien- ne and Becker muscular dystrophics // Nature.— J 987.— 329.— P. 638—640. 5. Koenig M., Hoffman E. P.. Bertelson C. J. еї al. Complete cloning of the Duehomie muscular dystrophy (DMD) cDNA and preliminary genomic organizat ion of the DMD gene "in normal and affected individuals // Cell.—1987,— 50 ,—P. 509—517. 6. Hofker M. H., Wapenaar Al. C., Goor N. ei al. Isolation oi probes delecting restri- ction f r agmen t length polymorphisms from X chromosome-specific, libraries: poten- tial use for diagnosis of Duchenne muscular dystrophy // Hum. Genet.— 70.—· P. 148—156. 7. Kunkel L. M., Boyce F. M., Beggs A. H. Analysis of deletions in DNA from pa tients with Becker and Duchenne muscular dystrophy // Nature.— 1986.— 322.— P. 73—77. 8. Wehnert M., Herrmann G. H., Metzke H., Thilie H. Erste Ergebnisse bei der Geno- mischen Carrierdianost ik in Risikosippen mit Haemophilie A und B in der DDR // Z. gesante Ihn. Med.— 1988.— 43.—S. 441—414. 9. Roberts R. G., Cole C. GIiart K. E. et ah Rapid carrier and prenatal diagnosis of Duchenne arid Becker muscular dystrophy // Nucl. Acids. Res.— 1989.— 17.— P. 811. 10. Лифшиц JI. Α., Еришко В. И., Кравченко С. А. и др. Анализ полиморфизма Д Н К в участках, тесно сцепленных с геном муковисцидоза в популяции Киева // Био- полимеры и клетка.— 1990 — 6 , N° 2.— С. 60—64. М. Маниатис Т., Сэмбрук Ф., Фрич Т. Молекулярное 1983,— 453 с. Ин-т молекуляр. биологии и генетики АН Украины, Киев клонирование.— М. : Мир, Получено 21.08.92 106 I S S N 0233-7657. Б И О П О Л И М Е Р Ы И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Nb 4

Полиморфизм рЕRT-локуca гена дистрофина в семьях с высоким риском мышечной дистрофии Дюшенна и среди здоровых женщин Украины

Institution

Ähnliche Einträge