Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака
В ходе двух последовательных трансформаций получены трансгенные растения табака с интегрированными в хромосому генетическими конструкциями, включающими ген nptll под конститутивным nos-промотором, а также его антисмысловую форму под индуцибельным промотором hsp70 гена белка теплового шока из Drosoph...
Збережено в:
Дата: | 1993 |
---|---|
Автори: | , , |
Формат: | Стаття |
Мова: | Russian |
Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
1993
|
Назва видання: | Биополимеры и клетка |
Теми: | |
Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156257 |
Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
Цитувати: | Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака / И.Г. Богдарина, М.И. Мырхова, Я.И. Бурьянов // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 5. — С. 101-106. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraineid |
irk-123456789-156257 |
---|---|
record_format |
dspace |
spelling |
irk-123456789-1562572019-06-19T01:31:14Z Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака Богдарина, И.Г. Мырхова, М.И. Бурьянов, Я.И. Генно-инженерная биотехнология В ходе двух последовательных трансформаций получены трансгенные растения табака с интегрированными в хромосому генетическими конструкциями, включающими ген nptll под конститутивным nos-промотором, а также его антисмысловую форму под индуцибельным промотором hsp70 гена белка теплового шока из Drosophila melanogaster. Практически полное подавление активности неомицинфосфотрансферазы II в таких растениях происходило лишь в условиях теплового шока. Такой же эффект наблюдался в экспериментах по временной экспрессии гена nptII, введенного в протопласты трансформированного табака, содержащего только антисмысловой ген nptll под промотором гена hsp70. Следовательно, в трансгенных растениях промотор гена белка теплового шока может быть использован в антисмысловых генетических конструкциях для индуцированного подавления генетической экспрессии. Протягом двох послідовних трансформацій отримано трансгенні рослини тютюну з інтегрованими до хромосоми генетичними конструкціями, які мають ген nptll під конститутивним nos-промотором, а також його антисенсову форму під іyдуци бельним промотором hsp70-гена. білка теплового шоку з Drosophila melanogaster. Практично цілковите пригнічення активності неоміцинфосфотрансферази II у таких рослинах відбувалося лише за умов теплового шоку. Той самий ефект спостерігався в експериментах з почасової експресії гена nptll, введеного до протопластів трансформованого тютюну, який містив лише антисенсовий ген nptllпід промотором гена hsp70. Отже, у трапесенпих рослинах промотор теплового шоку може використовуватися в антисенсових генетичних конструкціях для індукованого пригнічення генетичної експресії. Double transformed tobacco plants were obtained by successive transformation using two nptll gene constructs: the sense gene under the control of the constitutive nos promoter and the antisense form under the control of the inducible Drosophila melanogaster hsp70 promoter. Virtually total inhibition of the neomycin phosphotransferase II activity was observed in these plants only in response to heat shock. The same effect was observed in experiments on transient expression of the nptll gene in protoplasts of single transformed plants carrying the antisense nptll gene under the hsp70 promoter. Therefore, the hsp70 promoter can be used in anlisens'e gene construction to inducibiy repress gene expression in transgenic plants. 1993 Article Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака / И.Г. Богдарина, М.И. Мырхова, Я.И. Бурьянов // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 5. — С. 101-106. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000379 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156257 577.21:581.15 ru Биополимеры и клетка Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
collection |
DSpace DC |
language |
Russian |
topic |
Генно-инженерная биотехнология Генно-инженерная биотехнология |
spellingShingle |
Генно-инженерная биотехнология Генно-инженерная биотехнология Богдарина, И.Г. Мырхова, М.И. Бурьянов, Я.И. Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака Биополимеры и клетка |
description |
В ходе двух последовательных трансформаций получены трансгенные растения табака с интегрированными в хромосому генетическими конструкциями, включающими ген nptll под конститутивным nos-промотором, а также его антисмысловую форму под индуцибельным промотором hsp70 гена белка теплового шока из Drosophila melanogaster. Практически полное подавление активности неомицинфосфотрансферазы II в таких растениях происходило лишь в условиях теплового шока. Такой же эффект наблюдался в экспериментах по временной экспрессии гена nptII, введенного в протопласты трансформированного табака, содержащего только антисмысловой ген nptll под промотором гена hsp70. Следовательно, в трансгенных растениях промотор гена белка теплового шока может быть использован в антисмысловых генетических конструкциях для индуцированного подавления генетической экспрессии. |
format |
Article |
author |
Богдарина, И.Г. Мырхова, М.И. Бурьянов, Я.И. |
author_facet |
Богдарина, И.Г. Мырхова, М.И. Бурьянов, Я.И. |
author_sort |
Богдарина, И.Г. |
title |
Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака |
title_short |
Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака |
title_full |
Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака |
title_fullStr |
Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака |
title_full_unstemmed |
Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака |
title_sort |
тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы ii в клетках трансгенного табака |
publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
publishDate |
1993 |
topic_facet |
Генно-инженерная биотехнология |
url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156257 |
citation_txt |
Тепловая индукция подавления активностти неомицинфосфотрансферызы II в клетках трансгенного табака / И.Г. Богдарина, М.И. Мырхова, Я.И. Бурьянов // Биополимеры и клетка. — 1993. — Т. 9, № 5. — С. 101-106. — Бібліогр.: 15 назв. — рос. |
series |
Биополимеры и клетка |
work_keys_str_mv |
AT bogdarinaig teplovaâindukciâpodavleniâaktivnosttineomicinfosfotransferyzyiivkletkahtransgennogotabaka AT myrhovami teplovaâindukciâpodavleniâaktivnosttineomicinfosfotransferyzyiivkletkahtransgennogotabaka AT burʹânovâi teplovaâindukciâpodavleniâaktivnosttineomicinfosfotransferyzyiivkletkahtransgennogotabaka |
first_indexed |
2025-07-14T08:42:54Z |
last_indexed |
2025-07-14T08:42:54Z |
_version_ |
1837611169080147968 |
fulltext |
УДК 577.21:581.15
И. Г. Богдарина, М. И. Мырхова, Я. И. Бурьянов
ТЕПЛОВАЯ ИНДУКЦИЯ ПОДАВЛЕНИЯ
АКТИВНОСТТИ НЕОМИЦИНФОСФОТРАНСФЕРЫЗЫ II
В КЛЕТКАХ ТРАНСГЕННОГО ТАБАКА
В ходе двух последовательных трансформаций получены трансгенные растения табака
с интегрированными в хромосому генетическими конструкциями, включающими ген
nptll под конститутивным aos-промотором, а также его антисмысловую форму под ин-
дуцибельным промотором hsp70 гена белка теплового шока из Drosophila melanogaster.
Практически полное подавление активности неомицинфосфотрансферазы II в таких рас-
тениях происходило лишь в условиях теплового шока. Такой же эффект наблюдался в
экспериментах по временной экспрессии гена ηρίΙΙ, введенного в протопласты трансфор-
мированного табака, содержащего только антисмысловой ген nptll под промотором ге-
на hsp70.
Следовательно, в трансгенных растениях промотор гена белка теплового шока мо-
жет быть использован в антисмысловых генетических конструкциях для индуцирован-
ного подавления генетической экспрессии.
Введение. Антисмысловые (ас) Р Н К — важный современный инстру-
мент анализа функциональных свойств индивидуальных генов в живой
клетке. Эффект асРНК напоминает мутацию, однако молекулярные ме-
ханизмы подавления генетической экспрессии окончательно не установ-
лены [1]. .
Имеются гипотетические представления о том, что в эукариотиче-
ской клетке асРНК способны блокировать перенос генетической инфор-
мации на разных этапах транскрипции, созревания и транспорта т Р Н К
из ядра в цитоплазму. и на уровне трансляции т Р Н К [1]. Благодаря
способности подавлять экспрессию «своих» генов-мишеней а с Р Н К все
чаще применяются в геиноинженерных биотехнологиях. Впервые у вые-'
ших зукариот биологическая активность искусственных антисмысловых
генов показана на растениях. а сРНК успешно используют как для по-
давления экспрессии эндогенных растительных генов, так и чужерод-
ных генов, стабильно интегрированных в ядерный геном растений (см.
обзор [1] ) .
К перспективным для биотехнологии трансгенным растениям сле-
дует отнести растения с регулируемой экспрессией генов асРНК,
которой можно достичь, сливая гены асРНК с промоторами индуци-
бельных генов.
В данной работе на модельных трансгенных растениях табака изу-
чено регуляцию экспрессии гена неомицинфосфотрансферазы II {nptll)
с помощью его ас-конструкций.
Для создания ас-конструкций гена nptll использовали индуцибель-
ный промотор гена белка теплового шока JispVO из Drosophila melano-
gaster. Этот промотор активен также в растительных клетках [2], что,
видимо, связано с исключительной эволюционной консервативностью
его регуляторных последовательностей и с функциональной гомологией
белковых факторов теплового шока у разных организмов [3].
Материалы и методы. К о н с т р у и р о в а н и е π л а з м и д. Для
получения плазмид, содержащих смысловой и ас-ген np i l l под контро-
лем промотора IispVOy использовали модульные элементы промотора
hspVO и кодирующей последовательности гена nptll из плазмид
pPCVVOS и pMON129 соответственно [4, 5]. Вектор pPCVVOS расщеп-
ляли рестриктазой BamHIy обрабатывали бактериальной щелочной
фосфатазой и лигировали с BG// / -BamH/-фрагментом нлазмиды
ρΜΟΝ129, кодирующим структурную последовательность гена npill.
Ориентацию клонированного фрагмента определяли совместным гидро-
лизом Д Н К рестриктазами EcoRI и BamHI. Полученная плазмида
pSnpt содержала ген nptll в смысловой ориентации относительно про-
мотора IispVO и сигнала полиаденилирования гена нопалинсинтазы
<Ё> И. Г. Богдарина , М. И. Мырхова, Я. И. Бурьянов, 1993
1 ISSN 0233-7657 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Jfc 5
(nos), в плазмиде pASnpt — фрагмент с геном nptli находился в об-
ратной (ас) ориентации. Все этапы молекулярного клонирования про-
водили по Маниатису [6],
Смысловую и ас-кассеты, содержащие проМОТСф ГОНЯ IispJO, ГОН
nptli и сигнал полиаденилирования nos-гена, вырезали рестриктазами
£со/?/ и Hindlll и встраивали в бинарный вектор pGDW31 [7], пред-
варительно гидролизованный теми же рестриктазами и обработанный
щелочной фосфатазой. В результате получены плазмиды p # S и pHAS,
несущие ген яр/7/ в смысловой и ас-ориентации относительно промото-
ра гена hsp70, а также ген гигроми-
цинфосфотрансферазы под /гоз-промо-
тором, позволяющий проводить селек-
цию трансформированных раститель-
ных клеток. Схема конструирования
указанных плазмид приведена на
рис. 1.
Рис. 1. Конструирование плазмид и содержащих смысловой и антисмысло-
вой ген nptli под промотором гена белка теплового шока hsp70. Phsp70 — термоинду-
цибельный промотор гена белка теплового шока из D. melanogasier\ L и R — левая и
правая границы Т-ДНК; HPT — гигромицинфосфотрансфераза; PJ — R. EcoRI\ В — R.
BarnIiI; Bg — R. BglII H3 — R. HindIII; 74-l igase — ДНК-лигаза фага Т4
Рис. 2. Блот-гибридизационный анализ интеграции гена nptli в трансгенных растениях:
/ , 2, 5 — Д Н К индивидуальных растений — двойных трансформантов; 3, 4 — Д Н К та-
бака, содержащего химерные гены Phsp70-nptII-po\yAnos и Phsp70-asnptII-po\yAnos со
ответственно; 6 — Д Н К нетрансформированного табака; 7 — Д Н К плазмиды pHS (10
копий), гидролизованная рестриктазой BamHI
Т р а н с ф о р м а ц и я и р е г е н е р а ц и я т а б а к а . Плазмиды
pHS и pHAS переносили в Agrobacterium tumefaciens CV3101
(pMP90RK) трехродительским скрещиванием при участии конъюгатив-
ной плазмиды pRK20l3 [8]. Полученными агробактериями заражали
листовые диски табака Nicotiana tabacum var. Samsun [9]. Селекцию
трансформантов и регенерацию трансгенных растений вели на MS-cpe-
де, содержащей 1 мкг/мл бензиламинопурина, 0,1 мкг/мл нафтилуксус-
ной кислоты, 250 мкг/мл цефатоксима, 1 мг/мл карбенициллина и 15—
20 мкг/мл гигромицина. Через 3—4 недели побеги, устойчивые к гигро-
мицину, переносили на среду MS с гигромицином и 0,1 мкг/мл феру-
ловой кислоты для укоренения.
П о л у ч е н и е д в о й н ы х т р а н с ф о р м а н т о в т а б а к а . Сте-
рильный трансгенный табак, содержащий в геноме конструкцию Pnos-
nptll-poly Anos повторно заражали клетками A. tumefaciens (pMP90RK,
pHAS). Материал трансформировали по описанной выше схеме.
В л и я н и е т е п л о в о г о ш о к а н а а к т и в н о с т ь н е о м и -
ц и н ф о с ф о т р а н с ф е р а з ы II (NPTII) определяли в каллусной
ткани и листьях стерильных растений, выросших до стадии четвертого
1 0 2 ISSN 0233-7657 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Jfc 5
листа [9]. Тепловую индукцию проводили, инкубируя ткани растений
при 40 °С в течение 1 ч на чашках Петри с MS-агаром. Результаты ана-
лизировали после 2-ч восстановительного периода при 24 °С. Белковые
экстракты получали из 50і мг растительной ткани. NPTII отделяли от
интерферирующих белков электрофорезом в 10%-м ПААГ в нативных
условиях, нанося в каждую лунку геля по 10—20 мкг белка. Концент-
рацию белка регистрировали по Брэдфорду [10].
П е р е н о с Д Н К н а Z-м е м б р а н у и г и б р и д и з а ц и ю осу-
ществляли по Маниатису [6J. 10 мкг растительной Д Н К гидролизова-
ли рестриктазой BamHIy разделяли в 0,8 %-м агарозном геле, перено-
Рис. 3. Диализ активности N P T I I (здесь и на рис. 4—б локализация указана стрелкой)
в трансгенных растениях, содержащих смысловой ген nptll под /zsp7C'-npOMOTOpOM: 1 —
экстракт из необработанных листьев; 2*—экстракт из листьев после теплового шока
(1 ч, 40 °С) и восстановительного периода (2 ч, 24 °С) ; 3 — э к с т р а к т из каллусной
ткани после теплового шока
Рис. 4. Анализ временной экспрессии N P T I I в протопластах трансгенного табака , содер-
ж а щ е г о антисмысловой ген Phsp70-asnptII-po\yAtios. Плазмиду pVIL35 (10 мкг) с ге-
ном Pnos-np/11-po\y/\nos вводили в протопласты электропорированием. Активность
N P T I I определяли после обработки тепловым шоком (40 °С, 1 ч) или без него; 1 —
протопласты + 10 мкг pVIL35\ 2 — протопласты + 10 мкг ρVIL35 + тепловой шок; 3 —
протопласты без обработки
сили на нейлоновую мембрану и гибридизовали с BglII-BamHI-φраг-
ментом плазмиды pMONI29y меченным 32P с помощью набора Multi-
prime («Amersham», Англия), согласно указаниям фирмы. Удельная ак-
тивность зонда более 5-Ю8 ими · мин -1 · мкг -1 .
П о л у ч е н и е п р о т о п л а с т о в и а н а л и з в р е м е н н о й
э к с п р е с с и и г е н а nptll проводили, как описано ранее [11]. Струк-
тура вводимой плазмиды pVIL35 со смысловым геном nptll под nos-
промотором описана там же.
Результаты и обсуждение. Для изучения влияния ас-гена nptll в
условиях его конститутивной и индуцибельной экспрессии на актив-
ность NPTII в клетках трансгенного табака использовали сконструи-
рованные в данной работе плазмиды pHS и pHAS, содержащие ген
яр / / / в прямой и обратной ориентации относительно промотора гена
hsp70. Указанные конструкции вводили в табак с помощью агробакте-
рий. В результате получены трансгенные растения следующих типов:
1) Phsp70-nptII-po\yAnos (растения содержат смысловой ген nptll
под промотором гена белка теплового шока);
103 I S S N 0233-7657 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Jfc 5
2) Phsp70-antisense nptl I-poiyAnos (в этих растениях под тем же
промотором находится ген nptli в ас-ориентации);
3) Pnos-nptlI-poiyAnos (Phsp70-antisense nptlI-poiyAnos (двойные
трансформанты, содержащие интегрированные в хромосому смысловой
ген n p t l i под ^оз-пром'отором и ас-ген под промотором гена белка теп-
лового шока) .
Геномную Д Н К этих растений анализировали гибридизацией по
Саузерну [9], используя в качестве ДНК-зонда меченный 32P Bglll-
BamHI-фрагмент плазмиды ρΜΟΝ129, содержащий полную, кодирую-
щую последовательность гена nptli. Сравнение интенсивности сигналов
Рис. 5. Определение активности N P T I I в двойных трапсформантах, содержащих Pncs-
nptll-polyAnos и Phsp70-asnptII-po\yAnos: 1 — необработанные листья; 2— листья пос-
ле теплового шока; 3 — необработанный каллус; 4 — каллус после теплового шока
Рис. 6. Анализ активности N P T I I в трансформированных растениях, содержащих: 1 —
Pnos-nptII-po\yAnos; 2 — Phsp70-nptlΙ-polyAnos (после теплового ш о к а ) ; 'З — контроль
(агробактерии с плазмидой pGV3850npt)
с сигналом, который дают 10 копий плазмиды pHS, показало, что по-
лученные растения содержат около 5 копий гена nptli на геном (рис. 2)..
В тканях растений первого типа со смысловым геном up!JI под
промотором гена белка теплового шока (рис. 3) активность NPTII на-
блюдалась только после теплового шока (40 °С), причем в каллусных
тканях она была значительно выше, чем в листьях, что соответствует
результатам, 'полученным другими авторами [12].
Ткани растений второго типа, содержащие ас-ген nptli под hsp70-
промотором, были проанализированы в экспериментах по временной
экспрессии генов. Д л я этого в протопласты табака (1 млн) злектропо-
рировлнием вводили плазмиду pVIL35 (10 мкг), содержащую ген nptli
в смысловой ориентации относительно nos-промотора. Условия тепло-
вого шока создавали через 1 сут после электропорирования, помещая
чашки Петри с протопластами в термостат с температурой 4 0 ° С (1 ч),
затем их инкубировали при 24 °С в течение 2 ч. Тепловой шок вызывал
полное подавление экспрессии гена nptli, тогда как при 24 0C продол-
жалось проявление активности NPTII (рис. 4) .
В листьях и каллусе двойных трансформантов активность NPTIl
практически полностью исчезала только после теплового шока, в то
время как в неиндуцированных тканях ингибирующий эффект а с Р Н К
отсутствовал (рис. 5). Таким образом, эффект ас-конструкций гена
nptli под промотором гена hsp70 наблюдался в экспериментах in vivo
и in vitro только в ответ на тепловой шок. Известно, что индукция гена
теплового шока hsp70 наблюдается в растениях при 37 и 40 °С [12].
1 0 4 ISSN 0233-7657 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Jfc 5
Следует отбросить возможное альтернативное объяснение наблюдаемо-
го подавления активности NPTII вследствие неспецифического действия
тепловой индукции, против чего свидетельствуют контрольные экспери-
менты с трансгенными растениями табака, содержащими ген nptll под
hsp70-промотором. У таких растений NPTII индуцировалась только пос-
ле теплового шока.
Важно отметить, что, по-видимому, сила промотора гена белка
теплового шока hsp70 в клетках табака соизмерима с таковой
поз-промотора. Это вытекает из сравнительного анализа активнос-
ти NPTTi в трансгенных растениях табака, содержащих смысловой
ген nptll под ш}5-промотором, и в растениях табака, содержащих
ЭТОТ же ген ПОД hsp70-upOMOTOpOM в условиях его тепловой индук-
ции (рис. 6).
Таким образом, в нашей работе показана возможность эффектив-
ного ингибирования активности NPTII в трансгенных растениях с по-
мощью ас-конструкций ее гена, а также применимость для этих целей
/і5р70-промотора. Результаты наших экспериментов с модифицирован-
ным геном npi l l , а также канадских исследователей с геном β-глюку-
ронидазы [13] указывают на возможность применения /г5/?70-промотора
Drosopiiila при изучении функционирования генов с помощью асРНК.
В литературе имеются сообщения об ингибировании экспрессии
чужеродных генов в трансгенных растениях, повторно трансформиро-
ванных генетическими конструкциями, содержащими полную или
частичную копию этих генов [14, 15]. Полученные нами данные сви-
детельствуют об отсутствии супрессии гена nptll его «молчащей»
ас-копией в двойных трансформантах табака. Подавление активнос-
ти NPTlI в двойных трансформантах наблюдалось только в ответ на
тепловой шок.
В развитие этой работы мы планируем установить скорость и дли-
тельность ответа двойных трансформантов на тепловой шок. Для вы-
яснения механизмов антисмыслового ингибирования, а также функцио-
нирования /is/?70-npoMOTOpa необходим дальнейший анализ смысловых
и асРНК в полученных растениях.
P е з ю м е. Протягом двох послідовних трансформацій отримано трансгенні росли-
ни тютюну з інтегрованими до хромосоми генетичними конструкціями, які мають ген
nptll під конститутивним nos-промотором, а також його антисенсову форму під іпдуци-
бельним промотором hsp70-reua. білка теплового шоку з Drosophila melanogaster. Прак-
тично цілковите пригнічення активності неоміцинфосфотрансферази II у таких рослинах
відбувалося лише за умов теплового шоку. Той самий ефект спостерігався в експери-
ментах з почасової експресії гена nptll, введеного до протопластів трансформованого
тютюну, який містив лише антисенсовий ген ηρίΙΙ під промотором гена hsp70.
Отже, у трапегенпих рослинах промотор теплового шоку може використовуватися
в антисенсових генетичних конструкціях для індукованого пригнічення генетичної
експресії.
S u m m а г у. Double t ransformed tobacco plants were obtained by succcssive t ran-
sformation us ing (wo nptll gene constructs : the sense gene under the control of the con-
sti tutive nos promoter and the ant isense form under the control of the inducible Drosophi-
Ia melanogaster hsp70 promoter.
Vir tual ly total inhibition of the neomycin phosphot ransferase II activity was obser-
ved in these p lants only in response to heat shock.
The same effect was observed in experiments on t ransient expression of the nptll
gene in protoplasts of single t ransformed plants carrying the ant isense nptll gene under
the hsp70 promoter.
Therefore, the hsp70 promoter can be used in ant isense gene construct ion to inducib-
Iy repress gene expression in t ransgenic plants.
105 ISSN 0233-7657 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Jfc 5
С П И С О К Л И Т Е Р А Т У Р Ы
1. Van der Krol Α., Мої J., Stuitje A. Ant isense genes in p lan t s : an o v c r r e v i e w / / G e n e . —
1988 .—72 ,—P. 45—50.
2. Spena A4 Hain R., Ziervogel U. el al. Cons t ruc t ion of a heat- inducible gene for
p l a n t s / / E M B O J.— 1 9 8 5 , — 4 . — P . 2739—2743.
3. Sorger P. K. Hea t shock fac tor and the shock response // Cell.— 1991.— 65, N 3.—
P. 363—366.
4. Koncz C., Martini N., Mayerhofer R. el al. H igh- f r equency T-DNA-media ted gene t a g -
g i n g in p lan t s // Proc. Nat . Acad. Sci. USA.— 1989.— 8 6 . — P . 8467—8471.
5. Fraley R. T., Rogers S., Horsch R. et al. Express ion of bacter ial genes in p lant cells //
Ibid.— 1983,— 80.— P. 4803—4807.
6. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекуляр-
ное клонирование.— М. : Мир, 1984.— 477 с.
7. Wing D., Koncz С., Schell / . Conserved func t ion on Nicotiana tabacum of a s ing le
Drosophila hsp70 p romoter heat shock e lement when fused to a minimal T-DNA pro-
m o t e r / / М о ї . and Gen. Genet .— 1989 .—219 .—P. 9—16.
8. Ditta G., Stanfield S., Corbin D., Helinski D. R. Broad host r a n g e DNA c lon ing sys-
tem fo r Gram-nega t i ve bacter ia : Cons t ruc t ion of gene bank of Rhizobium melilotiH
Proc. Nat . Acad. Sci. USA.— 1980 .—77,—P. 7347—7351.
9. Herrera-Estrella L., Teeri T. H., Simpson J. Use of reporter genes to s tudy gene ex-
press ion in p lan t c e l l s / / P l a n t molecular , biol. m a n u a l / Eds S. B. Gelvin, R. A. Schil-
peroort , D. P. S. Verma .— Dordrecht ; Boston; London : Kluwer Acad. Publ. , 1991.—
P. 1—22.
10. Bradford M. M. A rapid and sensi t ive method for quant i f ica t ion of mic rogram quant i -
ties of protein u t i l i z ing the principle of prote in-dye b i n d i n g / / A n a l . Biochem.—
1976 .—72 .—P. 248—254.
11. Зинкевич В. E., Богдарина И. Г., Рукавцова Е. Б. и др. Ингибирование экспрессии
гена неомицинфосфотрансферазы II в протопластах табака с помощью антисмысло-
вой Р Н К / / Д о к л . АН СССР.— 1988.—300, № 3 .—С. 727—730.
12. Spena A., Schell J. The expression of a heat- inducible chimeric gene in t r ansgen ic to-
bacco p l a n t s // Мої. and Gen. Genet .— 1987 .—207 ,—P. 436—440.
13. Robert L., Donaldson P., Ladaique C. et al. Ant i sense RNA inhibit ion of g lucuron ida-
se gene express ion in t r a n s g e n i c tobacco can be t rans ien t ly overcome us ing a heat-
inducib le-g lucuronidase gene c o n s t r u c t / / B i o t e c h n o l o g y . — 1990.— 8.— P. 459—463.
14. Matzke Μ. A., Primig M., Trnovsky J., Matzke A. J. M. Reversible methy la t ion and
inact iva t ion of marke r genes in sequent ia l ly t r a n s f o r m e d tobacco p l an t s // E M B O J.—
1989,—8, N 3 . — P . 643—649.
15. Goring D. RThompson L., Rothstein S. / . T r a n s f o r m a t i o n of a par t ia l nopal ine syn-
thase gene into tobacco supress the expression of a res ident wi ld- type gene // Proc.
Nat . Acad. Sci. USA.— 1991.—88, N 5 . — P . 1770—1774.
Филиал Ин-та биоорг. химии Получено 12.01.93
им. академиков Μ. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова
Р А Н , П у щ и н о
1 0 6 ISSN 0233-7657 БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1993. Т. 9. Jfc 5
|