Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells

Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells

Aim. The aim of this work was to express the human LIF gene in mammalian cells and to study the secretion of recombinant LIF into culture medium. Methods. Recombinant LIF was detected by Western blot analysis and immunoprecipitation in culture medium of CHO-K1, L-M (TK– ) (ins+ ), 293Ò cells, tr...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Дата:2011
Автори: Rymar, S.Yu., Ruban, T.A., Irodov, D.M., Kordium, V.A.
Формат: Стаття
Мова:English
Опубліковано: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2011
Назва видання:Вiopolymers and Cell
Теми:
Molecular and Cell Biotechnologies
Онлайн доступ:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156336
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells / S.Yu. Rymar, T.A. Ruban, D.M. Irodov, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 1. — С. 53-58. — Бібліогр.: 29 назв. — англ., рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-156336
record_format dspace
fulltext
spelling irk-123456789-1563362019-06-19T01:24:58Z Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells Rymar, S.Yu. Ruban, T.A. Irodov, D.M. Kordium, V.A. Molecular and Cell Biotechnologies Aim. The aim of this work was to express the human LIF gene in mammalian cells and to study the secretion of recombinant LIF into culture medium. Methods. Recombinant LIF was detected by Western blot analysis and immunoprecipitation in culture medium of CHO-K1, L-M (TK– ) (ins+ ), 293Ò cells, transfected with recombinant plasmids containing human LIF gene. Results. The recombi- nant plasmids. containing human gene LIF, were constructed. The cells of three (CHO-K1, L-M (TK– ) (ins+ ), 293Ò) mammalian lines were transfected with these plasmids. It was shown that the transfected mammalian cells secreted recombinant human LIF which was characterized by variable degree of glycosylation including completely glycosylated form (approximately 68 kD). Ñonclusions. The conditioned medium of developed cell lines can be used as a sourñe of human recombinant LIF for different purposes, including purification of human recombinant LIF and as an additional supplement for cell culturing. Keywords: recombinant LIF, expression, secretion, transfection, cell lines. Цель работы состояла в получении экспрессии гена LIF человека в генетически модифицированных клетках млекопитающих и изучении секреции рекомбинантного белка этими клетками в культуральную среду. Методы. Для выявления рекомбинантного LIF в кондиционированной среде, полученной в результате культивирования клеток, трансфецированных рекомбинантными плазмидами, содержащими ген LIF, использовали Вестерн-блот-анализ и иммунопреципитацию. Результаты. Сконструированные рекомбинантные плазмиды обеспечивают експрессию и секрецию рекомбинантного LIF человека клетками трех линий (CHO-K1, L-M(TK– )(ins + ) и 293Т), трансфецированными этими плазмидами. Степень гликозилирования продуцируемого такими клетками рекомбинантного LIF варьирует, при этом наблюдается секреция полностью гликозилированного LIF (с молекулярной массой около 68 кДа). Выводы. Кондиционированную среду, полученную вследствие культивирования трансфецированных клеток, можно использовать как источник LIF человека для культивирования клеток, нуждающихся в этом ростовом факторе, и для его выделения в чистом виде. Ключевые слова: рекомбинантный LIF, экспрессия, секреция, трансфекция,клеточные линии Мета. Мета роботи полягала в одержанні експресії гена LIF людини в генетично модифікованих клітинах ссавців і вивченні секреції рекомбінантного білка цими клітинами в культуральне середовище. Методи. Для визначення рекомбінантного LIF в кондиціонованому середовищі, одержаному в результаті культивування клітин, трансфекованих рекомбінантними плазмідами, що містять ген LIF, використовували Вестернблот аналіз та імунопреципітацію. Результати. Сконструйовані рекомбінантні плазміди забезпечують експресію і секрецію рекомбінантного LIF людини клітинами трьох ліній (CHOK1, L-M(TK– )(ins + ) і 293Т), трансфекованих цими плазмідами. Ступінь глікозилювання рекомбінантного LIF, продукованого такими клітинами, варіює, при цьому спостерігається секреція повністю глікозильованого LIF (з молекулярною масою близько 68 кДа). Висновки. Кондиціоноване середовище, одержане внаслідок культивування трансфекованих клітин, можна використовувати як джерело LIF людини для культивування клітин, яким потрібен цей ростовий фактор, а також для його виділення в очищеному стані. Ключові слова: рекомбінантний LIF, експресія, секреція, трансфекція, клітинні лінії. 2011 Article Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells / S.Yu. Rymar, T.A. Ruban, D.M. Irodov, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 1. — С. 53-58. — Бібліогр.: 29 назв. — англ., рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000082 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156336 571.29 + 57.085.23 en Вiopolymers and Cell Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language English
topic Molecular and Cell Biotechnologies
Molecular and Cell Biotechnologies
spellingShingle Molecular and Cell Biotechnologies
Molecular and Cell Biotechnologies
Rymar, S.Yu.
Ruban, T.A.
Irodov, D.M.
Kordium, V.A.
Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells
Вiopolymers and Cell
description Aim. The aim of this work was to express the human LIF gene in mammalian cells and to study the secretion of recombinant LIF into culture medium. Methods. Recombinant LIF was detected by Western blot analysis and immunoprecipitation in culture medium of CHO-K1, L-M (TK– ) (ins+ ), 293Ò cells, transfected with recombinant plasmids containing human LIF gene. Results. The recombi- nant plasmids. containing human gene LIF, were constructed. The cells of three (CHO-K1, L-M (TK– ) (ins+ ), 293Ò) mammalian lines were transfected with these plasmids. It was shown that the transfected mammalian cells secreted recombinant human LIF which was characterized by variable degree of glycosylation including completely glycosylated form (approximately 68 kD). Ñonclusions. The conditioned medium of developed cell lines can be used as a sourñe of human recombinant LIF for different purposes, including purification of human recombinant LIF and as an additional supplement for cell culturing. Keywords: recombinant LIF, expression, secretion, transfection, cell lines.
format Article
author Rymar, S.Yu.
Ruban, T.A.
Irodov, D.M.
Kordium, V.A.
author_facet Rymar, S.Yu.
Ruban, T.A.
Irodov, D.M.
Kordium, V.A.
author_sort Rymar, S.Yu.
title Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells
title_short Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells
title_full Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells
title_fullStr Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells
title_full_unstemmed Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells
title_sort expression and secretion of human recombinant lif by genetically modified mammalian cells
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 2011
topic_facet Molecular and Cell Biotechnologies
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156336
citation_txt Expression and secretion of human recombinant LIF by genetically modified mammalian cells / S.Yu. Rymar, T.A. Ruban, D.M. Irodov, V.A. Kordium // Вiopolymers and Cell. — 2011. — Т. 27, № 1. — С. 53-58. — Бібліогр.: 29 назв. — англ., рос.
series Вiopolymers and Cell
work_keys_str_mv AT rymarsyu expressionandsecretionofhumanrecombinantlifbygeneticallymodifiedmammaliancells
AT rubanta expressionandsecretionofhumanrecombinantlifbygeneticallymodifiedmammaliancells
AT irodovdm expressionandsecretionofhumanrecombinantlifbygeneticallymodifiedmammaliancells
AT kordiumva expressionandsecretionofhumanrecombinantlifbygeneticallymodifiedmammaliancells
first_indexed 2025-07-14T04:41:14Z
last_indexed 2025-07-14T04:41:14Z
_version_ 1837595963990999040

Схожі ресурси