RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo

Передача митогенного сигнала от RTK (рецепторных тирозиновых киназ) тесно связана с эндоцитозом, регулирующим ее точность. Интерсектин 1 (ITSN1) – эволюционно-консервативный адапторный белок, вовлеченный в самые ранние стадии клатринопосредованного эндоцитоза, а также в злокачественную трансформацию...

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Date:	2012
Main Authors:	Novokhatska, O.V., Skrypkina, I.Ya., Dergai, M.V., Tsyba, L.O., Rynditch, A.V.
Format:	Article
Language:	English
Published:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2012
Series:	Вiopolymers and Cell
Subjects:	Short Communications
Online Access:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156934
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo / O.V. Novokhatska, I.Ya. Skrypkina, M.V. Dergai, L.O. Tsyba, A.V. Rynditch // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 4. — С. 314-316. — Бібліогр.: 7 назв. — англ.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-156934
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1569342019-06-20T01:27:25Z RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo Novokhatska, O.V. Skrypkina, I.Ya. Dergai, M.V. Tsyba, L.O. Rynditch, A.V. Short Communications Передача митогенного сигнала от RTK (рецепторных тирозиновых киназ) тесно связана с эндоцитозом, регулирующим ее точность. Интерсектин 1 (ITSN1) – эволюционно-консервативный адапторный белок, вовлеченный в самые ранние стадии клатринопосредованного эндоцитоза, а также в злокачественную трансформацию в случае его сверхэкспрессии. Цель. Поиск белков, способных обеспечивать связь ITSN1 с процессом передачи сигнала от RTK. Методы. Предсказание мотивов взаимодействия in silico, экспрессия белков в бактериальной системе и в культуре клеток млекопитающих, иммунопреципитация, преципитация белков, слитых с GST, иммунофлуоресцентный анализ. Результаты. С применением сервиса «Scansite» предсказано связывание домена SH3A ITSN1 с SPRY2. Для экспериментального подтверждения этого взаимодействия GST-слитые домены ITSN1 получены и очищены из клеток Escherichia coli. Используя преципитацию белков, слитых с GST, установлено, что домены SH3A, N-SH3A (нейрон-специфический вариант), SH3C и SH3E способны преципитировать SPRY2-Flag из лизата клеток. Данные иммунофлуоресцентного анализа и коиммунопреципитации свидетельствуют о частичной колокализации белков Omni-ITSN1 и Flag-SPRY2 и формирование ими комплекса in vivo. Выводы. Полученные данные подтверждают ассоциацию эндоцитозного адапторного белка ITSN1 с сигнальным белком SPRY2 in vivo. Ключевые слова: интерсектин 1, передача митогенного сигнала, SPRY2, домен SH3. Передача мітогенного сигналу від рецепторних тирозинкіназ (RTK) у клітині тісно пов’язана з ендоцитозом, який регулює точність такої передачі. Інтерсектин 1 (ITSN1) – це еволюційно консервативний адапторний білок, що бере участь у найбільш ранніх етапах клатрин-опосередкованого ендоцитозу та залучений до процесу злоякісної трансформації за умов надекспресії. Мета. Пошук білків, які можуть забезпечити зв’язок ITSN1 із процесом передачі сигналу від RTK. Методи. Передбачення мотивів взаємодії in silico, експресія білків у бактерійній системі та культурі клітин ссавців, імунопреципітація, преципітація білків, злитих з GST, імунофлуоресцентні дослідження. Результати. За допомогою сервісу «Scansite» передбачено зв’язування домену SH3A ITSN1 із SPRY2. Для експериментального підтвердження цієї взаємодії злиті з GST SH3-домени ITSN1 отримано і очищено з бактерій Escherichia coli. Використовуючи преципітацію білків, злитих з GST, встановлено, що домени SH3A, N-SH3A (нейрон-специфічний варіант), SH3C і SH3E ITSN1 здатні преципітувати Flag-SPRY2 з лізату клітин. Дані імунофлуоресцентного аналізу та коімунопреципітації свідчать про часткову колокалізацію білків Omni-ITSN1 і Flag-SPRY2 та формування ними комплексу in vivo. Висновки. Отримані дані підтверджують асоціацію ендоцитозного адапторного білка ITSN1 із сигнальним білком SPRY2 in vivo. Ключові слова: інтерсектин 1, передача мітогенного сигналу, SPRY2, домен SH3. 2012 Article RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo / O.V. Novokhatska, I.Ya. Skrypkina, M.V. Dergai, L.O. Tsyba, A.V. Rynditch // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 4. — С. 314-316. — Бібліогр.: 7 назв. — англ. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.000067 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156934 577.22 en Вiopolymers and Cell Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	English
topic	Short Communications Short Communications
spellingShingle	Short Communications Short Communications Novokhatska, O.V. Skrypkina, I.Ya. Dergai, M.V. Tsyba, L.O. Rynditch, A.V. RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo Вiopolymers and Cell
description	Передача митогенного сигнала от RTK (рецепторных тирозиновых киназ) тесно связана с эндоцитозом, регулирующим ее точность. Интерсектин 1 (ITSN1) – эволюционно-консервативный адапторный белок, вовлеченный в самые ранние стадии клатринопосредованного эндоцитоза, а также в злокачественную трансформацию в случае его сверхэкспрессии. Цель. Поиск белков, способных обеспечивать связь ITSN1 с процессом передачи сигнала от RTK. Методы. Предсказание мотивов взаимодействия in silico, экспрессия белков в бактериальной системе и в культуре клеток млекопитающих, иммунопреципитация, преципитация белков, слитых с GST, иммунофлуоресцентный анализ. Результаты. С применением сервиса «Scansite» предсказано связывание домена SH3A ITSN1 с SPRY2. Для экспериментального подтверждения этого взаимодействия GST-слитые домены ITSN1 получены и очищены из клеток Escherichia coli. Используя преципитацию белков, слитых с GST, установлено, что домены SH3A, N-SH3A (нейрон-специфический вариант), SH3C и SH3E способны преципитировать SPRY2-Flag из лизата клеток. Данные иммунофлуоресцентного анализа и коиммунопреципитации свидетельствуют о частичной колокализации белков Omni-ITSN1 и Flag-SPRY2 и формирование ими комплекса in vivo. Выводы. Полученные данные подтверждают ассоциацию эндоцитозного адапторного белка ITSN1 с сигнальным белком SPRY2 in vivo. Ключевые слова: интерсектин 1, передача митогенного сигнала, SPRY2, домен SH3.
format	Article
author	Novokhatska, O.V. Skrypkina, I.Ya. Dergai, M.V. Tsyba, L.O. Rynditch, A.V.
author_facet	Novokhatska, O.V. Skrypkina, I.Ya. Dergai, M.V. Tsyba, L.O. Rynditch, A.V.
author_sort	Novokhatska, O.V.
title	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo
title_short	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo
title_full	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo
title_fullStr	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo
title_full_unstemmed	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo
title_sort	rtk signaling regulator spry2 associates with endocytic adaptor itsn1 in vivo
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	2012
topic_facet	Short Communications
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/156934
citation_txt	RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo / O.V. Novokhatska, I.Ya. Skrypkina, M.V. Dergai, L.O. Tsyba, A.V. Rynditch // Вiopolymers and Cell. — 2012. — Т. 28, № 4. — С. 314-316. — Бібліогр.: 7 назв. — англ.
series	Вiopolymers and Cell
work_keys_str_mv	AT novokhatskaov rtksignalingregulatorspry2associateswithendocyticadaptoritsn1invivo AT skrypkinaiya rtksignalingregulatorspry2associateswithendocyticadaptoritsn1invivo AT dergaimv rtksignalingregulatorspry2associateswithendocyticadaptoritsn1invivo AT tsybalo rtksignalingregulatorspry2associateswithendocyticadaptoritsn1invivo AT rynditchav rtksignalingregulatorspry2associateswithendocyticadaptoritsn1invivo
first_indexed	2025-07-14T09:17:59Z
last_indexed	2025-07-14T09:17:59Z
_version_	1837613375262031872
fulltext	314 UDC 577.22 RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo O. V. Novokhatska, I. Ya. Skrypkina, M. V. Dergai, L. O. Tsyba, A. V. Rynditch Institute of Molecular Biology and Genetics, NAS of Ukraine 150, Zabolotnoho Str., Kyiv, Ukraine, 03680 olga.novokhatska@gmail.com Aim. Mitogenic signaling from RTK (receptor tyrosine kinase) is tightly linked to endocytosis that regulates the fidelity of signal transduction. Intersectin 1 (ITSN1) is an evolutionarily conserved adaptor implicated in the ear- liest stages of clathrin-mediated endocytosis and involved in malignant transformation when overexpressed. The aim of this study was to find proteins that could connect ITSN1 to RTK signaling. Methods. In silico prediction of interaction motifs, expression of proteins in bacterial system and mammalian cell culture, immunoprecipitation, GST pull-down analysis, immunofluorescent studies. Results. Using «Scansite» service a binding of ITSN1 SH3A domain to signaling protein SPRY2 was predicted. For experimental verification of this interaction the GST fu- sion SH3 domains of ITSN1 were produced and purified from Escherichia coli. GST pull-down analysis showed that SH3A, N-SH3A (neuron-specific variant), SH3C and SH3E domains of ITSN1 were able to pull-down Flag- SPRY2 from cell lysate. Immunofluorescent analysis together with coimmunoprecipitation indicated that Omni- ITSN1 and Flag-SPRY2 were partially colocalized and formed a complex in vivo. Conclusions. Our data showed that endocytic adaptor ITSN1 and signaling protein SPRY2 are associated in vivo presumably via PRD/SH3 interaction. Keywords: intersectin 1, signaling, SPRY2, SH3 domain. Introduction. Intersectin 1 (ITSN1) is conserved from nematodes to humans multidomain adaptor that is cru- cial for the initiation of clathrin-mediated endocytosis. Depletion of highly similar ITSN1 and ITSN2 scaffol- ding molecules together with Eps15 proteins abolishes clathrin-coated pits assembly [1]. Clathrin-mediated en- docytosis is a common mechanism for internalization of activated receptor tyrosine kinases (RTKs) and regu- lation of mitogenic signaling. Endocytic adaptor ITSN1 is involved in intra- cellular signal transduction through interaction with Ras activator SOS1, ubiquitin ligase Cbl and signaling protein CIN85 [2]. It was reported that overexpression of ITSN1 results in fibroblasts malignant transfor- mation [3]. The aim of this study was to find other sig- naling molecules that could link ITSN1 to mitogenic signaling. Materials and methods. Expression constructs and antibodies. The GST-SH3 domains of ITSN1 and Omni-ITSN1 were described previously [4]. The Flag- SPRY2 was kindly provided by Dr. Susana de la Luna (Barcelona, Spain). Anti-Omni (D-8): sc-7270 antibody was purchased from «Santa Cruz Biotechnology» (USA). Anti-Flag antibody was purchased from «Sigma» (USA). Binding assays and Western blot analysis. The GST fusion proteins were purified on glutathione-Sepharose 4B beads («GE Healthcare»). Lysates of HEK293 cells were prepared in extraction buffer that contained 20 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 % Triton X-100, 1 mM PMSF. For pull-down assays, immobilized on beads GST-SH3 domains were incubated with cell lysa- tes for 1 h at 4 °C. For immunoprecipitation (IP), the cell lysate was incubated with antibodies and protein A/G Agarose beads («Santa Cruz Biotechnology») for 2 h. Bound proteins were subjected to SDS-PAGE and immunoblotting. ISSN 0233–7657. Biopolymers and Cell. 2012. Vol. 28. N 4. P. 314–316 Ó Institute of Molecular Biology and Genetics, NAS of Ukraine, 2012 315 RTK SIGNALING REGULATOR SPRY2 ASSOCIATES WITH ENDOCYTIC ADAPTOR ITSN1 IN VIVO Cell culture and confocal microscopy. Adherent cell lines HEK293 and MCF-7 cells were maintained and transfected as described [5]. For immunofluorescent analysis fixed MCF-7 cells were incubated with the ap- propriate antibodies. Confocal images were taken using a Zeiss LSM510 microscope. Results and discussion. Analysis of available data in the field of signaling from activated RTKs suggested SPRY2 (Sprouty 2) as a possible candidate for ITSN1 binding. This protein belongs to a family of SPRY pro- teins known to regulate signal transduction from flies to mammals [6]. SPRY2 possesses cysteine-rich domain common for all family members and contains at the C- terminus several proline residues (PRD) that could re- present interaction motif for the SH3 domains. Using «Scansite» service (www.scansite.mit.edu) a binding of the SH3A domain to proline in position 307 of SPRY2 molecule was predicted. To test this possibility, the affi- nity purified GST-fused SH3 domains of ITSN1 were used to pull down Flag-SPRY2 from lysate of HEK293 cells expressing this protein. Obtained results showed that the SH3A, as well as its neuron-specific variant (N- SH3A), SH3C and SH3E domains interacted with Flag- tagged SPRY2 in vitro (Fig. 1, A). To study this interac- tion in vivo HEK293 cells were cotransfected with con- structs encoding Omni-ITSN1 and Flag-SPRY2. Using antibodies against Omni-tag SPRY2 was precipitated from cell lysate together with ITSN1 (Fig. 1, B). Immunofluorescent studies were used to investiga- te the intracellular distribution of ITSN1/SPRY2 pro- tein complexes. In quiescent cells SPRY2 is associated with microtubules and translocates to the membrane ruf- fles upon EGF-stimulation [7]. In serum-starved cells coexpressing Omni-ITSN1 and Flag-SPRY2 these pro- teins were spatially separated (Fig. 2, A) but displayed partial colocalization when supplemented with FBS (Fig. 2, B). Accumulated data indicate that SPRY proteins are sensors and integrators of signaling [6]. In this study we demonstrated an in vivo complex formation between SPRY2 and endocytic adaptor ITSN1. A direct interac- tion between these molecules was mediated by binding of proline-rich motif of SPRY2 to the SH3 domains of ITSN1. Regarding that several SH3 domains were able to pull down signaling protein, a role of ITSN1 in clus- tering a few SPRY2 molecules could be suggested. Ano- WB: anti-Flag Ponce au S staining A B ¬Flag-SPRY2 ¬GST-SH 3 domain ¬GST WB: anti-Omni WB: anti-Flag ¬O mni-ITSN1 ¬Flag-SPRY2 G ST N-SH3A SH 3 A B C D E input NMS anti-O mni IP Fig. 1. ITSN1 interacts with SPRY2 in vitro and in vivo: A – GST-fused SH3 domains of ITSN1 were incubated with extracts of HEK293 cells expressing Flag-SPRY2 (GST-fused proteins were visualized with Ponceau S staining, Flag-SPRY2 was detected using antibodies against tag); B – HEK293T cells were cotransfected with Omni-ITSN1 and Flag-SPRY2 (cell extracts were subjected to immunoprecipitation with anti-Omni antibodies; protein complexes were analyzed by Western blotting using anti-Omni and anti-Flag antibodies); NMS – normal mouse serum Fig. 2. Adaptor protein ITSN1 and signaling protein SPRY2 partially overlap in MCF-7 cells. Cells were cotransfected with Omni-ITSN1 and Flag-SPRY2 and starved for 24 h (A) or supplemented with FBS (B). Proteins were stained with primary antibodies against tags and visualized with secondary antibodies conjugated to Texas Red or Alexa488 316 NOVOKHATSKA O. V. ET AL. ther possibility is bringing together signaling regulators SPRY2 and Cbl that are functionally linked and both in- teract with the SH3 domains of ITSN1. Our previous results showed that ITSN1 and Cbl form a complex in vi- vo independently of growth factor stimulation [5]. Con- trary to this ITSN1 and SPRY2 displayed distinct loca- lization in quiescent cells but partially overlapped when supplemented with FBS. Obtained data could suggest recruitment of SPRY2 to preexisting ITSN1/Cbl comp- lex after growth factor stimulation. This question re- mains a challenge for future investigations. Î. Â. Íî âî õàöü êà, ². ß. Ñêðèïê³íà, Ì. Â. Äåð ãàé, Ë. Î. Öèáà, À. Â. Ðèí äè÷ Ðå ãó ëÿ òîð ïå ðå äà÷³ ì³òî ãåí íî ãî ñèã íà ëó SPRY2 ôîð ìóº êîì ïëåêñ ç àäàï òîð íèì á³ëêîì ITSN1 in vivo Ðå çþ ìå Ïå ðå äà ÷à ì³òî ãåí íî ãî ñèã íà ëó â³ä ðå öåï òîð íèõ òè ðî çèíê³íàç (RTK) ó êë³òèí³ ò³ñíî ïî â’ÿ çà íà ç åí äî öè òî çîì, ÿêèé ðå ãó ëþº òî÷í³ñòü òà êî¿ ïå ðå äà÷³. ²íòåð ñåê òèí 1 (ITSN1) – öå åâî ëþö³éíî êîí ñåð âà - òèâ íèé àäàï òîð íèé á³ëîê, ùî áåðå ó÷àñòü ó íàéá³ëüø ðàíí³õ åòà - ïàõ êëàò ðèí-îïî ñå ðåä êî âà íî ãî åí äî öè òî çó òà çà ëó ÷å íèé äî ïðî- öåñó çëî ÿê³ñíî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿ çà óìîâ íàä å êñïðåñ³¿. Ìåòà. Ïî øóê á³ëê³â, ÿê³ ìî æóòü çà áåç ïå ÷è òè çâ’ÿ çîê ITSN1 ³ç ïðî öå ñîì ïå ðå äà- ÷³ ñèã íà ëó â³ä RTK. Ìå òî äè. Ïå ðåä áà ÷åí íÿ ìî òèâ³â âçàºìîä³¿ in si- lico, åêñïðåñ³ÿ á³ëê³â ó áàê òåð³éí³é ñèñ òåì³ òà êóëü òóð³ êë³òèí ññàâö³â, ³ìó íîï ðå öèï³òàö³ÿ, ïðå öèï³òàö³ÿ á³ëê³â, çëè òèõ ç GST, ³ìó íîô ëó î ðåñöåíòí³ äîñë³äæåí íÿ. Ðåçóëüòà òè. Çà äî ïîìîãîþ ñåð- â³ñó «Scansite» ïå ðå äáà ÷å íî çâ’ÿ çó âàí íÿ äî ìå íó SH3A ITSN1 ³ç SPRY2. Äëÿ åê ñïå ðè ìåí òàëü íî ãî ï³äòâåð äæåí íÿ ö³º¿ âçàºìîä³¿ çëèò³ ç GST SH3-äî ìå íè ITSN1 îò ðè ìà íî ³ î÷è ùå íî ç áàê òåð³é Es- cherichia coli. Âè êî ðèñ òî âó þ ÷è ïðå öèï³òàö³þ á³ëê³â, çëè òèõ ç GST, âñòà íîâ ëå íî, ùî äî ìå íè SH3A, N-SH3A (íå é ðîí-ñïå öèô³÷íèé âà- ð³àíò), SH3C ³ SH3E ITSN1 çäàòí³ ïðå öèï³òóâàòè Flag-SPRY2 ç ë³- çàòó êë³òèí. Äàí³ ³ìó íîô ëó î ðåñ öåí òíî ãî àíàë³çó òà êî³ìó íîï ðå- öèï³òàö³¿ ñâ³ä÷àòü ïðî ÷àñ òêî âó êîëîêàë³çàö³þ á³ëê³â Omni-ITSN1 ³ Flag-SPRY2 òà ôîð ìó âàí íÿ íèìè êîì ïëåê ñó in vivo. Âèñ íîâ êè. Îòðè ìàí³ äàí³ ï³äòâåð äæó þòü àñîö³àö³þ åí äî öè òîç íî ãî àäàï - òîð íî ãî á³ëêà ITSN1 ³ç ñèã íàëü íèì á³ëêîì SPRY2 in vivo. Êëþ ÷îâ³ ñëî âà: ³íòåð ñåê òèí 1, ïå ðå äà ÷à ì³òî ãåí íî ãî ñèã íà ëó, SPRY2, äî ìåí SH3. Î. Â. Íî âî õàö êàÿ, È. ß. Ñêðèï êè íà, Í. Â. Äåð ãàé, Ë. À. Öûáà, À. Â. Ðûí äè÷ Ðå ãó ëÿ òîð ïå ðå äà ÷è ìè òî ãåí íî ãî ñèã íà ëà SPRY2 àñ ñî öè è ðî âàí ñ àäàï òîð íûì áåë êîì ITSN1 in vivo Ðå çþ ìå Ïå ðå äà ÷à ìè òî ãåí íî ãî ñèã íà ëà îò RTK (ðå öåï òîð íûõ òè ðî çè íî - âûõ êè íàç) òåñ íî ñâÿ çà íà ñ ýí äî öè òî çîì, ðå ãó ëè ðó þ ùèì åå òî÷ - íîñòü. Èíòåð ñåê òèí 1 (ITSN1) – ýâî ëþ öè îí íî-êîí ñåð âà òèâ íûé àäàï òîð íûé áå ëîê, âîâ ëå ÷åí íûé â ñà ìûå ðàí íèå ñòà äèè êëàò ðèí- îïîñðå äî âàí íî ãî ýí äî öè òî çà, à òàê æå â çëî êà ÷åñ òâåí íóþ òðàíñ- ôîð ìà öèþ â ñëó ÷àå åãî ñâåðõ ý êñïðåñ ñèè. Öåëü. Ïî èñê áåë êîâ, ñïî - ñîá íûõ îá åñ ïå ÷è âàòü ñâÿçü ITSN1 ñ ïðî öåñ ñîì ïå ðå äà ÷è ñèã íà ëà îò RTK. Ìå òî äû. Ýêñïðåñ ñèÿ áåë êîâ â áàê òå ðè àëü íîé ñèñ òå ìå è â êóëü òó ðå êëå òîê ìëå êî ïè òà þ ùèõ, èì ìó íîï ðå öè ïè òà öèÿ, ïðå öè- ïèòà öèÿ áåë êîâ, ñëè òûõ ñ GST, èì ìó íîô ëó î ðåñ öåí òíûé àíà ëèç. Ðå- çóëüòà òû. Ñ ïðè ìå íå íè åì ñåðâèñà «Scansite» ïðåä ñêà çà íî ñâÿ çû - âà íèå äî ìå íà SH3A ITSN1 ñ SPRY2. Äëÿ ýêñ ïå ðè ìåí òàëü íî ãî ïîäò- âåð æäå íèÿ ýòî ãî âçà è ìî äå éñòâèÿ GST-ñëè òûå äî ìå íû ITSN1 ïî- ëó÷åíû è î÷è ùå íû èç êëå òîê Escherichia coli. Èñïîëü çóÿ ïðå öè ïè òà- öèþ áåë êîâ, ñëè òûõ ñ GST, óñòà íîâ ëå íî, ÷òî äî ìå íû SH3A, N-SH3A (íå é ðîí-ñïå öè ôè ÷åñ êèé âà ðè àíò), SH3C è SH3E ñïî ñîá íû ïðå öè ïè- òè ðî âàòü SPRY2-Flag èç ëè çà òà êëå òîê. Äàí íûå èì ìó íîô ëó î ðåñ - öåí òíî ãî àíà ëè çà è êî èì ìó íîï ðå öè ïè òà öèè ñâè äå ò åëüñòâó þò î ÷àñ òè÷ íîé êî ëî êà ëè çà öèè áåë êîâ Omni-ITSN1 è Flag-SPRY2 è ôîð- ìè ðî âà íèå èìè êîì ïëåê ñà in vivo . Âû âî äû. Ïî ëó ÷åí íûå äàí íûå ïîä- òâåð æäà þò àñ ñî öè à öèþ ýí äî öè òîç íî ãî àäàï òîð íî ãî áåë êà ITSN1 ñ ñèã íàëü íûì áåë êîì SPRY2 in vivo. Êëþ ÷å âûå ñëî âà: èí òåð ñåê òèí 1, ïå ðå äà ÷à ìè òî ãåí íî ãî ñèã - íà ëà, SPRY2, äî ìåí SH3. REFERENCES 1. Henne W. M., Boucrot E., Meinecke M., Evergren E., Vallis Y., Mittal R., McMahon H. T. FCHo proteins are nucleators of clath- rin-mediated endocytosis // Science.–2010.–328, N 59833.– P. 1281–1284. 2. Tsyba L., Nikolaienko O., Dergai O., Dergai M., Novokhatska O., Skrypkina I., Rynditch A. Intersectin multidomain adaptor pro- teins: regulation of functional diversity // Gene.–2011.–473, N 2.– P. 67–75. 3. Adams A., Thorn J. M., Yamabhai M., Kay B. K., O’Bryan J. P. Intersectin, an adaptor protein Involved in clathrin-mediated en- docytosis, activates mitogenic signaling pathways // J. Biol. Chem.–2000–275, N 35.–P. 27414–27420. 4. Dergai O., Novokhatska O., Dergai M., Skrypkina I., Tsyba L., Moreau J., Rynditch A. Intersectin 1 forms complexes with SGIP1 and Reps1 in clathrin-coated pits // Biochem. Biophys. Res. Commun. –2010.–402, N 2.–P. 408–413. 5. Dergai M., Skrypkina I., Dergai O., Tsyba L., Novokhatska O., Filonenko V., Drobot L., Rynditch A. Identification and characterization of a novel mammalian isoform of the endocytic adaptor ITSN1 // Gene.–2011.–485, N 2 P. 120–129. 6. Guy G. R., Jackson R. A., Yusoff P., Chow S. Y. Sprouty proteins: modified modulators, matchmakers or missing links? // J. Endo- crinol.–2009.–203, N 2.–P. 191–202. 7. Lim J., Wong E. S., Ong S. H., Yusoff P., Low B. C., Guy G. R. Sprouty proteins are targeted to membrane ruffles upon growth factor receptor tyrosine kinase activation. Identification of a no- vel translocation domain // J. Biol. Chem.–2000.–275, N 42.– P. 32837– 32845. Received 20.03.12

RTK signaling regulator SPRY2 associates with endocytic adaptor ITSN1 in vivo

Institution

Similar Items