Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих

Показано, что биорегуляторы, выделенные из печени быка и крысы, оказывают в сверхмалых дозах гепатопротекторное действие на экспериментальной модели роллерной органоспецифической культуры печени тритона Pleurodeles waltl. В состав данных биорегуляторов входит пептид с молекулярной массой 5026±2 Да...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2010
Hauptverfasser:	Мальцев, Д.И., Ямскова, В.П., Ильина, А.П., Маргасюк, Д.В., Ямсков, И.А.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 2010
Schriftenreihe:	Фактори експериментальної еволюції організмів
Schlagworte:	Біотехнології у медицині та сільському господарстві
Online Zugang:	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/177840
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих / Д.И. Мальцев, В.П. Ямскова, А.П. Ильина, Д.В. Маргасюк, И.А. Ямсков // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 303-308. — Бібліогр.: 14 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	irk-123456789-177840
record_format	dspace
spelling	irk-123456789-1778402021-02-17T01:29:25Z Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих Мальцев, Д.И. Ямскова, В.П. Ильина, А.П. Маргасюк, Д.В. Ямсков, И.А. Біотехнології у медицині та сільському господарстві Показано, что биорегуляторы, выделенные из печени быка и крысы, оказывают в сверхмалых дозах гепатопротекторное действие на экспериментальной модели роллерной органоспецифической культуры печени тритона Pleurodeles waltl. В состав данных биорегуляторов входит пептид с молекулярной массой 5026±2 Да, ответственный за их тканеспецифическую активность. It was shown that bioregulators isolated from bovine and rat livers, hepatoprotective effect at ultra low doses on the experimental model roller organotypic liver culture of newt Pleurodeles waltl. There is a peptide with molecular weight of 5026±2 Da, responsible for tissue-specific activity of bioregulators in their composition. Показано, що біорегулятори, виділені з печінки бика і пацюка, мають у надмалих дозах гепатопротекторну дію на експериментальній роллерній моделі органоспецифічної культури печінки тритона Pleurodeles waltl. До складу даних біорегуляторів входить пептид з молекулярною масою 5026±2 Да, відповідальний за їх тканиноспеціфічну активність. 2010 Article Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих / Д.И. Мальцев, В.П. Ямскова, А.П. Ильина, Д.В. Маргасюк, И.А. Ямсков // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 303-308. — Бібліогр.: 14 назв. — рос. 2219-3782 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/177840 ru Фактори експериментальної еволюції організмів Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Біотехнології у медицині та сільському господарстві Біотехнології у медицині та сільському господарстві
spellingShingle	Біотехнології у медицині та сільському господарстві Біотехнології у медицині та сільському господарстві Мальцев, Д.И. Ямскова, В.П. Ильина, А.П. Маргасюк, Д.В. Ямсков, И.А. Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих Фактори експериментальної еволюції організмів
description	Показано, что биорегуляторы, выделенные из печени быка и крысы, оказывают в сверхмалых дозах гепатопротекторное действие на экспериментальной модели роллерной органоспецифической культуры печени тритона Pleurodeles waltl. В состав данных биорегуляторов входит пептид с молекулярной массой 5026±2 Да, ответственный за их тканеспецифическую активность.
format	Article
author	Мальцев, Д.И. Ямскова, В.П. Ильина, А.П. Маргасюк, Д.В. Ямсков, И.А.
author_facet	Мальцев, Д.И. Ямскова, В.П. Ильина, А.П. Маргасюк, Д.В. Ямсков, И.А.
author_sort	Мальцев, Д.И.
title	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих
title_short	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих
title_full	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих
title_fullStr	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих
title_full_unstemmed	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих
title_sort	исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих
publisher	Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate	2010
topic_facet	Біотехнології у медицині та сільському господарстві
url	http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/177840
citation_txt	Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих / Д.И. Мальцев, В.П. Ямскова, А.П. Ильина, Д.В. Маргасюк, И.А. Ямсков // Фактори експериментальної еволюції організмів: Зб. наук. пр. — 2010. — Т. 9. — С. 303-308. — Бібліогр.: 14 назв. — рос.
series	Фактори експериментальної еволюції організмів
work_keys_str_mv	AT malʹcevdi issledovaniebioregulâtorovvydelennyhiztkanipečenimlekopitaûŝih AT âmskovavp issledovaniebioregulâtorovvydelennyhiztkanipečenimlekopitaûŝih AT ilʹinaap issledovaniebioregulâtorovvydelennyhiztkanipečenimlekopitaûŝih AT margasûkdv issledovaniebioregulâtorovvydelennyhiztkanipečenimlekopitaûŝih AT âmskovia issledovaniebioregulâtorovvydelennyhiztkanipečenimlekopitaûŝih
first_indexed	2025-07-15T16:04:17Z
last_indexed	2025-07-15T16:04:17Z
_version_	1837729535777308672
fulltext	303 Вивчення впливу різних факторів культивування дозволило отримати гібридні проростки з зав’язей і зародків абрикоса, сливи, аличі та розробити біотехнологічні прийоми створення нових селекційних форм садових рослин. The studying of influence of different factors of cultivation allowed to obtain the hybrid germs from ovaries and embryos of apricot, cherry-plum, plum and to work out the biotechnological methods of obtaining new selection forms of horticultural plants. МАЛЬЦЕВ Д.И1., ЯМСКОВА В.П. 2, ИЛЬИНА А.П1., МАРГАСЮК Д.В1., ЯМСКОВ И.А1. 1Учреждение Российской Академии Наук Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН, Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 28, e-mail: mal-dima@yandex.ru 2Учреждение Российской Академии Наук Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Россия, 119334 Москва, ул. Вавилова, 26 ИССЛЕДОВАНИЕ БИОРЕГУЛЯТОРОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ТКАНИ ПЕЧЕНИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ Впервые биорегуляторы данной группы были обнаружены в печени млекопитающих как адгезивные белки [1]. Впоследствии присутствие этих белков было показано для многих тканей позвоночных животных [2–8]. На основании сходства их физико-химических свойств и характера биоло- гической активности они были выделены в отдельную группу. Активность биорегуляторов характеризуется отсутствием видовой, но проявлением тка- невой специфичности [5–9]. Показано, что в основе протекторного действия и ранозаживляющих свойств биорегуляторов лежит их способность активи- ровать клеточные источники регенерации в тканях [5]. Биорегуляторы данной группы представляют собой сложные ассоциаты белков, углеводов, липидов, весьма устойчивые к воздействию ряда физико-химических факторов [4– 10]. Важнейшим свойством биорегуляторов является их способность при- сутствовать в водных растворах в виде частиц размером 100–200 нм и прояв- лять свою активность в сверхмалых дозах (СМД), соответствующих 10-8– 10-15 мг белка/мл [3]. В настоящей работе было проведено сравнительное исследование био- регуляторов, выделенных из печени крыс и печени быка. С помощью метода MALDI-TOF масс-спектрометрии был изучен состав пептидов, входящих в их состав. На модели роллерного органотипического культивирования пече- ни тритона in vitro было изучено протекторное действие данных биорегу- ляторов. Материалы и методы Экстракты получали по методике, ранее разработанной для биорегуля- торов данной группы [2, 4]. Количественное определение белка в исследуе- 304 мых фракциях осуществляли с помощью колориметрического метода с использованием бицинхонината меди при 562 нм. Во время очистки во всех фракциях идентифицировали биорегуляторы с помощью адгезиометри- ческого метода, в основе которого лежит определение их мембранотропной активности [2, 4]. Анализ молекулярной массы пептидов проводили методом MALDI-TOF на времяпролетном масс-спектрометре Ultra Flex 2 (Bruker Dal- tonic, Германия). Времяпролетные масс-спектры фиксировали в линейном режиме и режиме рефлектора. Образцы для масс-спектрометрического ана- лиза получали упариванием досуха, с последующим разведением в 70% ацетонитриле, содержащем 0,1% ТФУ. В качестве матрицы в работе исполь- зовали a-циано-4-гидроксицинамовую кислоту. состояние ткани печени тритона при роллерном органотипическом культивировании in vitro. Результаты и обсуждение Для выделения и очистки биорегуляторов был использован эксперимен- тальный подход, разработанный для биорегуляторов данной группы [4]. Этот метод включает выделение биорегуляторов из ткани в определенных усло- виях, которые заключаются в экстракции физиологическим раствором ткани, неповрежденной ферментативной и механическим воздействиями. Ранее предполагалось, что экстракция биорегуляторов является следствием их секреции клетками печени [5–10]. Получение биорегуляторов данной группы из замороженной ткани печени быка указывает на то, что биорегуляторы присутствуют в ткани, очевидно, в межклеточном пространстве, из которого “вымываются” в экстрагирующий раствор. Исследование мембранотропной активности экстрактов печени крысы и быка показало, что оба экстракта проявляют этот тип активности, харак- терный для биорегуляторов данной группы [4]. В качестве примера на рис. 1 представлена диаграмма, отражающая полимодальную дозовою зависи- мость мембранотропной активности экстракта печени быка. 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 K 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Рис. 1. Мембранотропная активность экстракта печени быка. По абсциссе — показатель степени последовательного 10-кратного разбавления исходного препарата; по ординате — значение показателя, отражающего мембранотропную активность 305 При высаливании тканевых экстрактов сернокислым аммонием проис- ходит значительная очистка биорегуляторов: примесные белки переходят в осадок, а биорегуляторы остаются в растворенном состоянии [2, 4]. Действи- тельно, осадки экстрактов печени не обладали активностью, а супернатанты экстрактов проявляли ее в СМД. Исследование супернатантов экстрактов методом динамического лазерного светорассеивания, показало, что в них при- сутствуют частицы, средний гидродинамический радиус которых составлял 70–150 нм. Распределение этих частиц в обеих фракциях супернатантов было унимодальным. На рис. 2 представлены кривые распределения по размеру частиц, присутствующих в супернатантах печени крыс и быка. Эти данные совпадают с результатами исследования биорегуляторов, выделенных из других тканей млекопитающих, и показывают, что на данной стадии очистки биорегуляторы печени присутствуют в виде наноразмерных частиц [5–10]. При исследовании методом MALDI-TOF масс-спектрометрии в фрак- ции супернатанта, выделенного из экстракта печени крысы, были иденти- фицированы пептиды с мол. массой 3648 и 5024±2 Да, а из печени быка — 2112, 2170, 2866, 2940, 3009, 3151, 5026, 5237±2 Да. В этом аспекте обращает внимание присутствие в обоих супернатантах пептида с мол. массой 5026±2 Да. Можно предположить, что именно этот пептид входит в состав биорегуля- торов печени млекопитающих двух видов, и что он отвечает за тканеспеци- фическую активность биорегуляторов печени. Действительно, на модели роллерного органотипического культивирования печени тритона in vitro, разработанной для изучения специфической активности биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих [7], было показано, что оба супернатанта оказывают практически одинаковое выраженное протекторное действие на состояние культуры ткани печени тритона. На рис. 3 представлены гистологические срезы интактной печени три- тона, а также ткани после 3-х дневного роллерного культивирования. Как Рис. 2. Распределение частиц по гидродинамическому радиусу (метод лазерного динамического светорассеивания): А — в растворе супернатанта экстракта печени крысы; б — в растворе супернатанта экстракта печени быка. По абсциссе — средний гидродинамический радиус частиц; по ординате — количество частиц с соответствующим радиусом 306 видно, после культивирования в ткани печени наблюдаются процессы дегра- дации: часть паренхиматозных клеток находится в состоянии апоптоза, нару- шаются адгезионные и контактные межклеточные взаимодействия, наруша- ются процессы кроветворения. Следует отметить сохранение структуры ткани печени и кроветворных клеток при действии в СМД обоих супернатантов по сравнению с культурами контрольной серии: сохраняется балочное строение ткани печени и крове- творение в субкапсулярной области и вокруг сосудов, поддерживаются адге- зионные, контактные взаимодействия между клетками, а также их жизне- способность, то есть состояние ткани наиболее приближается к состоянию интактной печени тритона. Кроме того при добавлении в СМД супернатантов печени быка и крысы было выявлено статистически достоверное увеличение приблизительно на 50% площади, занимаемой меланомакрофагами в ткани печени тритона, по сравнению с культурами контрольной серии (p<0,05), а также по сравне- нию с интактной печенью тритона, в которой площадь, занимаемая пиг- ментированными клетками соответствовала 2,9±0,4% от общей площади среза (p<0,05). Различия в биологическом действии обоих супернатантов не было обнаружено (p>0,5) (табл.). Последнее можно ценить как стимулирование в печени тритона защит- ной функции ткани, которая развивается в ответ на повреждающие условия культивирования. Рис. 3. Гистологические срезы печени тритона: а — интактная печень тритона; б — после 3-х дневного органотипического роллерного культивирования, без добавления биорегуляторов (контроль); в — после 3-х дневного органотипического роллерного культивирования, при добавлении супернатанта экстракта печени быка; г — после 3-х дневного органотипического роллерного культивирования, при добавлении супернатанта экстракта печени крысы 307 Из литературных источников известно, что у хвостатых амфибий при неблагоприятных условиях (изменение температуры, интоксикация, гипоксе- мия и др.) меланомакрофаги печени, являющиеся аналогами клеток Купфера млекопитающих, способны образовывать крупные скопления [11]. Эти клетки располагаются как в кортикальном слое, так и в паренхиме печени, часто по периферии сосудов и в лимфатических щелях, в основном, в виде скопле- ний темно-бурого или черного цвета, окруженных соединительнотканными клетками, идентичными кортикальным. Основной функцией меланомакро- фагов печени амфибий, как и купферовских клеток у млекопитающих, явля- ется фагоцитоз различных бактерий, вирусных частиц, клеточного детрита и другие частицы размером до 10 нм, а также осуществление процессов детоксикации организма [11–14]. При неблагоприятных условиях внешней среды, а также при интоксикации организма у амфибий в печени увеличива- ется площадь кластеров меланомакрофагов [11]. Поэтому экспериментально установленный факт влияния биорегуляторов, выделенных из печени мле- копитающих двух видов, на площадь пигментированных клеток в печени тритона еще раз подтверждает гепатопротекторное действие этих эндоген- ных веществ. Литература 1.Ямскова В.П., Модянова Е.А., Резникова М.М., Маленков А.Г. // Молекул. биология.— 1977.— Т.11.— №5.— С. 1147–1154. 2.Ямскова В.П., Резникова М.М. // Журн. общей биологии.— 1991.— Т.52.— №2.—С. 181–191. 3.Ямскова В.П., Скрипникова В.С., Краснов М.С., Ямсков И.А. // Биохимия.— 2009.— Т.74.— №9.— С. 1195–1203. 4.Ямсков И.А., Ямскова В.П., Даниленко А.Н. и др. // Рос. Хим. Журн.— 1999.— Т.43, №5.— С. 34–39. 5. Margasyuk, D.V., Krasnov, M.S., Blagodatskikh, I.V. et al // In: New Trends in Biochemical Physics Research, NY, Nova Science Publishers Inc.— 2007.— P. 47–59. 6. Krasnov M.S., Gurmizov E.P., Yamskova V.P., Yamskov I.A. (2007) // In Bioche- mical Physics Frontal Research, NY, Nova Science Publishers Inc.— 2007.— Р. 28–37. 7. Borisenko, A.V., Yamskova, V.P., Krasnov, M.S et al . et al // In: New Trends in Biochemical Physics Research, NY, Nova Science Publishers Inc.— 2007.— P. 35–46. 8. Yamskova, V.P., Krasnov, M.S., Rybakova, E.Yu., Vecherkin,. et al // In: New Trends in Biochemical Physics Research, NY, Nova Science Publishers Inc.— 2007.— P. 71–78. Таблица Площадь пигментированных клеток в печени тритона при роллерном культивировании Исследованная фракция Площадь, занимаемая пигментированными клетками в % от общей площади среза Контроль (физ. раствор) 2,54±0,23 Супернатант экстракта печени крысы 4,27±0,46 Супернатант экстракта печени быка 3,8±0,33 308 9. Nazarova P.A., Yamskova V.P., Krasnov M.S. et al // In: New Trends in Biochemical Physics Research, NY, Nova Science Publishers Inc.— 2007.— P. 73–82. 10. Yamskova V.P., Rybakova E.Yu., Vecherkin V.V. et al // In Biochemical Physics Frontal Research.— NY, Nova Science Publishers Inc.— 2007.— P. 57–70. 11. Sichel G., Scalia M., Corsaro C. // Microsc. Res. Tech.— 2002.— V.57.— P. 477–490. 12. Cicero R, Sciuto S, Chillemi R, Sichel G. // Comp Biochem Physiol.— 1982.— V.73A.— P. 477–479. 13. Corsaro C., Scalia M., Blanco A.R., et al // Pigment. Cell Res.— 1995.— V.8.— P. 279–282. 14. Corsaro C., Scalia M., Leotta N., et al // J. Anat.— 2000.— V.196.— P. 249–261. Резюме Показано, что биорегуляторы, выделенные из печени быка и крысы, оказывают в сверхмалых дозах гепатопротекторное действие на экспериментальной модели роллерной органоспецифической культуры печени тритона Pleurodeles waltl. В сос- тав данных биорегуляторов входит пептид с молекулярной массой 5026±2 Да, ответ- ственный за их тканеспецифическую активность. It was shown that bioregulators isolated from bovine and rat livers, hepatoprotective effect at ultra low doses on the experimental model roller organotypic liver culture of newt Pleurodeles waltl. There is a peptide with molecular weight of 5026±2 Da, respon- sible for tissue-specific activity of bioregulators in their composition. Показано, що біорегулятори, виділені з печінки бика і пацюка, мають у надма- лих дозах гепатопротекторну дію на експериментальній роллерній моделі органо- специфічної культури печінки тритона Pleurodeles waltl. До складу даних біорегуля- торів входить пептид з молекулярною масою 5026±2 Да, відповідальний за їх ткани- носпеціфічну активність. МАТВЕЕВА А.Ю.1, КОРЖ Л.П.1, ХРИСТАН О.О.1, МОРГУН Б.В.2, 1, ТИЩЕНКО Е.Н.1 1Институт физиологии растений и генетики НАН Украины Украина, 03022, Киев, ул. Васильковская, 31/17, e-mail: oltyko@gmail.com 2Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАН Украины Украина, 03143, Киев, ул. Заболотного, 148 АНАЛИЗ КОМПЕТЕНЦИИ К AGROBACTERIUM- ОПОСРЕДОВАННОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ МОРФОГЕННОГО КАЛЛУСА ИНБРЕДНЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ Для кукурузы (Zea mays L.) предложен ряд способов генетического улучшения этой культуры современными биотехнологиями [1–5], которые показали, что при разработке системы методов Agrobacterium-опосредо- ванной трансформации в качестве экспланта целесообразно использовать незрелые зародыши или апикальные меристемы побега. Несмотря на то,

Исследование биорегуляторов, выделенных из ткани печени млекопитающих

Institution

Ähnliche Einträge