Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця
В данной работе изучался уровень экспрессии репаративного энзима О6-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы в образцах миксом сердца. Низкий уровень этого энзима повышает риск канцерогенеза. Определялся общий уровень MGMT в пробах и процент синтезирующих его клеток. Исследованные опухоли оказались довол...
Збережено в:
| Дата: | 2012 |
|---|---|
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Кримський науковий центр НАН України і МОН України
2012
|
| Назва видання: | Таврический медико-биологический вестник |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/57836 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця / Л.А. Шапошник, Є.В. Кузенко, Р.М. Вітовський, В.В.Лило, Л.Л. Лукаш // Таврический медико-биологический вестник. — 2012. — Т. 15, № 3, ч. 2 (59). — С. 253-255. — Бібліогр.: 10 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-57836 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-578362014-03-15T03:02:20Z Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця Шапошник, Л.А. Кузенко, Є.В. Вітовський, Р.М. Лило, В.В. Лукаш, Л.Л. Оригинальные статьи В данной работе изучался уровень экспрессии репаративного энзима О6-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы в образцах миксом сердца. Низкий уровень этого энзима повышает риск канцерогенеза. Определялся общий уровень MGMT в пробах и процент синтезирующих его клеток. Исследованные опухоли оказались довольно разнообразными по этим характеристикам. Это говорит о том, что ген MGMT был задействован в этиопатогенезе не всех изученных опухолей. The expression level of repair enzyme O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) have been studied in the samples of heart myxoma. Low level of this enzyme increases the risk of carcinogenesis. The overall level of MGMT in the samples and the percentage of cells that synthesize it were detected. Tumors were very different for these characteristics. This suggests that a gene MGMT was involved in etiopathogenezis of some of these tumors. 2012 Article Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця / Л.А. Шапошник, Є.В. Кузенко, Р.М. Вітовський, В.В.Лило, Л.Л. Лукаш // Таврический медико-биологический вестник. — 2012. — Т. 15, № 3, ч. 2 (59). — С. 253-255. — Бібліогр.: 10 назв. — укр. 2070-8092 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/57836 577.151.3:616.12–006.326–003.9 uk Таврический медико-биологический вестник Кримський науковий центр НАН України і МОН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Оригинальные статьи Оригинальные статьи |
| spellingShingle |
Оригинальные статьи Оригинальные статьи Шапошник, Л.А. Кузенко, Є.В. Вітовський, Р.М. Лило, В.В. Лукаш, Л.Л. Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця Таврический медико-биологический вестник |
| description |
В данной работе изучался уровень экспрессии репаративного энзима О6-метилгуанин-ДНК
метилтрансферазы в образцах миксом сердца. Низкий уровень этого энзима повышает риск
канцерогенеза. Определялся общий уровень MGMT в пробах и процент синтезирующих его клеток.
Исследованные опухоли оказались довольно разнообразными по этим характеристикам. Это говорит
о том, что ген MGMT был задействован в этиопатогенезе не всех изученных опухолей. |
| format |
Article |
| author |
Шапошник, Л.А. Кузенко, Є.В. Вітовський, Р.М. Лило, В.В. Лукаш, Л.Л. |
| author_facet |
Шапошник, Л.А. Кузенко, Є.В. Вітовський, Р.М. Лило, В.В. Лукаш, Л.Л. |
| author_sort |
Шапошник, Л.А. |
| title |
Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця |
| title_short |
Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця |
| title_full |
Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця |
| title_fullStr |
Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця |
| title_full_unstemmed |
Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця |
| title_sort |
вивчення рівню експресії репаративного ензиму о6-метилгуанін-днк метилтрансферази у міксомах серця |
| publisher |
Кримський науковий центр НАН України і МОН України |
| publishDate |
2012 |
| topic_facet |
Оригинальные статьи |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/57836 |
| citation_txt |
Вивчення рівню експресії репаративного ензиму О6-метилгуанін-ДНК метилтрансферази у міксомах серця / Л.А. Шапошник, Є.В. Кузенко, Р.М. Вітовський, В.В.Лило, Л.Л. Лукаш // Таврический медико-биологический вестник. — 2012. — Т. 15, № 3, ч. 2 (59). — С. 253-255. — Бібліогр.: 10 назв. — укр. |
| series |
Таврический медико-биологический вестник |
| work_keys_str_mv |
AT šapošnikla vivčennârívnûekspresííreparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferaziumíksomahsercâ AT kuzenkoêv vivčennârívnûekspresííreparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferaziumíksomahsercâ AT vítovsʹkijrm vivčennârívnûekspresííreparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferaziumíksomahsercâ AT lilovv vivčennârívnûekspresííreparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferaziumíksomahsercâ AT lukašll vivčennârívnûekspresííreparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferaziumíksomahsercâ |
| first_indexed |
2025-07-05T09:08:44Z |
| last_indexed |
2025-07-05T09:08:44Z |
| _version_ |
1836797420946587648 |
| fulltext |
253
О Р И Г И Н А Л Ь Н Ы Е С Т А Т Ь И
УДК 577.151.3:616.12–006.326–003.9
© Колектив авторів, 2012
ВИВЧЕННЯ РІВНЮ ЕКСПРЕСІЇ РЕПАРАТИВНОГО ЕНЗИМУ О6-
МЕТИЛГУАНІН-ДНК МЕТИЛТРАНСФЕРАЗИ У МІКСОМАХ
СЕРЦЯ
Л.А. Шапошник1, Є.В. Кузенко2, Р.М. Вітовський3, В.В.Лило1, Л.Л. Лукаш1
1Відділ генетики людини (зав. – проф. Л.Л. Лукаш), Інститут молекулярної біології і генетики НАН України,
м. Київ; 2кафедра патоморфології (зав. – А.М. Романюк), медичний факультет Сумського державного
університету, м. Суми; 3кафедра хірургії серця та магістральних судин (зав. – проф. Г.Н. Книшов), Національна
медична академія післядипломної освіти ім. П.Л.Шупика, м. Київ.
STUDY OF EXPRESSION LEVEL OF REPAIR ENZYME O6-METHYLGUANINE-DNA METHYLTRANSFERASE IN
HEARD MYXOMAS
L.A. Shaposhnyk, Y.V. Kuzenko, R.M. Vytovskiy, V.V.Lylo, L.L. Lukush
SUMMARY
The expression level of repair enzyme O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) have been
studied in the samples of heart myxoma. Low level of this enzyme increases the risk of carcinogenesis. The
overall level of MGMT in the samples and the percentage of cells that synthesize it were detected. Tumors
were very different for these characteristics. This suggests that a gene MGMT was involved in
etiopathogenezis of some of these tumors.
ИЗУЧЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ РЕПАРАТИВНОГО ЭНЗИМА О6-МЕТИЛГУАНИН-ДНК
МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ В МИКСОМАХ СЕРДЦА
Л.А. Шапошник, Е.В. Кузенко, Р.М. Витовский, В.В.Лыло, Л.Л. Лукаш
РЕЗЮМЕ
В данной работе изучался уровень экспрессии репаративного энзима О6-метилгуанин-ДНК
метилтрансферазы в образцах миксом сердца. Низкий уровень этого энзима повышает риск
канцерогенеза. Определялся общий уровень MGMT в пробах и процент синтезирующих его клеток.
Исследованные опухоли оказались довольно разнообразными по этим характеристикам. Это говорит
о том, что ген MGMT был задействован в этиопатогенезе не всех изученных опухолей.
Ключові слова: О6-метилгуанін-ДНК метилтрансфераза, MGMT, міксома серця, репаративний ензим,
канцерогенез.
Міксома серця “ це рідкісна доброякісна пухлина,
що зустрічається з частотою 1:1 млн чол. на рік, але
складає при цьому 66-72 % усіх пухлин серця. 5 %
випадків пов’язано з мутацією гена PRKAR1-α. Ця
мутація є причиною синдрому Карні, що
успадковується аутосомно-домінантно і
характеризується множинними доброякісними
пухлинами [2]. Проте, 95 % міксом серця –
спорадичні.
Відомо, що однією з причин виникнення пухлин
є генні мутації. Існує ряд генів, порушення функції
яких корелює з онкогенною трансформацією клітини.
Зміни їх експресії (зокрема, через мутації) можуть
привести до надмірної проліферації клітини,
накопиченню у структурі її ДНК помилок і, з рештою,
до онкогенної трансформації. Найчастіше у
пухлинних клітинах знаходять мутації генів р53, K-
ras, p16INK4a, APC, p14ARF, p19ARF [3]. Більшість із них є
регуляторами клітинного циклу. Так, супресорні
мутації гена р53 виявляються у більш ніж 50 % пухлин
[4], активаторні мутації гена K-ras – приблизно у 80
% пухлин [5].
Часто причиною мутацій зі зміною або втратою
функції гена є метилування нуклеотидів, що
викликане дією різноманітних метилувальних сполук,
які надзвичайно поширені у зовнішньому
середовищі. Головним ензимом, який видаляє
метильні групи з ДНК, є О6-метилгуанін-ДНК
метилтрансфераза (MGMT). Він забирає метильний
радикал від О6-позиції гуаніну ДНК. Саме вона є
найбільш критичною в плані виникнення мутацій або
апоптозу. Від рівня MGMT залежить чутливість
клітини до метилувальних агентів і частота виникнення
мутацій типу транзицій типу GC->AT. Саме такі
транзиції є наслідком метилування ДНК [6]. Відомо,
що низька активність MGMT корелює з високою
частотою вищевказаних транзицій у протоонкогенах
і генах-супресорах (p53, K-ras, APC і β-катеніну) [7,
8]. Генетичні аспекти етіопатогенезу вивчені для
багатьох типів пухлин. Зазвичай, це широко
розповсюджені пухлини – карцинома легень,
гліобластома, рак молочної залози тощо. Через
рідкісність міксоми серця, дуже мало робіт по
дослідженню генетичних особливостей цих пухлин.
Метою нашої роботи було вивчення
особливостей експресії гена MGMT на рівні білку у
міксомах серця для того, щоб оцінити можливу роль
цього гена у механізмі онкотрансформації
досліджуваних пухлин.
254
ТАВРИЧЕСКИЙ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ВЕСТНИК2012, том 15, № 3, ч. 2 (59)
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ
Матеріалом дослідження слугували зразки були
зразки пухлин хворих, прооперованих у Інституті
серцево-судинної хірургії ім. Н. А. Амосова НАМН
України. Діагноз було верифіковано гістологічно.
Після резекції зразки пухлин були одразу заморожені
і зберігалися при температурі -80°С. У нашій роботі
ми використовували два різні методи оцінки наявності
білка у зразках – Вестерн блот аналіз та
імуногістохімічний метод.
Для Вестерн блот аналізу білок зі зразків виділявся
згідно протоколу [1]. Концентрацію загального білка
у клітинному екстракті вимірювали за методом
Бредфорда. Білковий екстракт досліджували за
допомогою SDS–електрофореза у 12%-
поліакріламідному гелі за Леммлі. Ідентифікацію
MGMT в клітинному екстракті проводили за
допомогою Вестерн блот аналізу з моноклональними
антітілами проти MGMT виробництва “Novus
Biologicals Littleton, Co” (США) У якості вторинних
використовували видоспецифічні коньюговані з
пероксидазою хріна антітіла виробництва “Jackson
ImmunoResearch” (США) Ідентифікацію MGMT
проводили за рекомендацією фірми-виробника [9].
Для імуногістохімічний методу парафінові зрізи
депарафінізували за стандартною методикою.
Демаскування проводилося у 0,1% розчині трипсину
з 0,1% KCl. Для блокування ендогенної пероксидази
зрізи інкубували у 1% розчині Н2О2, а для блокування
неспецифічного зв’язування “ у 5 % розчині
знежиреного сухого молока. Первинні та вторинні
антитіла були тими ж, що й для Вестерн блот аналізу.
Візуалізація комплексу антиген-антитіло проводилася
за допомогою активатора пероксидази
аміноетилкоразолу. Оцінку результатів проводили
підрахунком відсотка клітин з позитивною реакцією
ядра на 1000 клітин у двох різних ділянках зрізу.
Статистична обробка даних проводилась
прикладними статистичними програмами, які
використовуються в біології і медицині. Враховувався
та аналізувався основний параметр коефіцієнта
кореляції (r) з квантилями розподілу (Р).
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ
Ми проаналізували зразки 15 пухлин. При Вестерн
блот аналізі MGMT був виявлений у 8 зразках: у 5
зразках знайдено стандартну (24 кДа) і важку (48 кДа)
форми ензима, у зразках – лише стандартну (24 кДа)
форму. У 7 зразках білок не виявлено взагалі (Рис. 1).
Рис. 1. Вестерн блот аналіз. 2-7, 9, 10"міксоми серця; 8–позитивний контроль.
Через порушену функцію репаративних систем
для пухлинних клітин характерна генетична
нестабільність – дочірні клітини можуть відрізнятися
від материнської за своїми генетичними
особливостями, формуючи, таким чином, клітинні
клони. Це призводить до того, що будь-яка пухлини є
неоднорідною за своєю морфологією, біохімічними
і генетичними характеристиками. Певна частина
клітин може синтезувати білок, а інша частина – ні.
Для аналізу відсотка клітин міксом, які експресують
MGMT нами було використано імуногістохімічний
метод. MGMT – це, переважно, ядерний білок, а вміст
його у цитоплазмі настільки низький, що він не має
суттєвого значення. Щодо наявності реакції міксоми
виявилися гетерогенними. Поряд із ядрами в яких
відбулася реакція можна побачити незабарвлені ядра.
Як показано [10], лише при наявності не менше ніж
20 % клітин з пофарбованими ядрами у тканині, рівень
ензиму в цілому високий, тканина нечутлива до
метилувальних речовин і її можна вважати MGMT-
позитивною. Тому нам було важливо визначити саме
відсоток MGMT-позитивних клітин у зразках. Відсоток
ядер із реакцією за результатами імуногістохімії
коливався від 14 % до 73 % у різних зразках. З них
MGMT-позитивними були 9 пухлин (Рис. 2). У 8 з них
ензим виявлений і при Вестерн блот аналізі.
При статистичному аналізі (коефіцієнт кореляції
Пірсона) з’ясувалось r= 0.755 при квантілях розподілу
255
О Р И Г И Н А Л Ь Н Ы Е С Т А Т Ь И
Рис. 2. Міксома серця, збільшення об’єктива 100х. А – ядра з MGMT, В – ядра без MGMT, С – поле
слизу.
Р < 0,001. Різниця розходження між результатами
Вестерн блот аналізу і імуногістохімічного аналізу
склала 13,33±2,5 %. Це входить в межі допустимих
розбіжностей з результатами молекулярно-
генетичних досліджень, адже при морфологічному у
зрізі можна виявити інфільтрацію клітинами
гемопоетичного походження, які дають позитивну
реакцію.
ВИСНОВКИ
Генні та хромосомні перестройки є причиною
канцерогенезу. Ензим MGMT захищає клітини від
мутагенної, канцерогенної і цитотоксичної дії
метилувальних сполук. Зміни його експресії дуже
часто виявляються в пухлинних клітинах. Вже вивчені
особливості експресії MGMT в багатьох типах пухлин
людини. Через рідкісність міксом серця поки мало
відомо про рівень цього білка в них. Нами було
проаналізовано 15 міксом серця на наявність білка
MGMT. Високий рівень білку був виявлений двома
різними методами. При Вестерн блот аналізі ензим
виявлений у 9 зразках. При імуногістохімічному
дослідженні кількість клітин з позитивною реакцією
була різною, а їх розподіл у тканині нерівномірним.
MGMT-позитивними виявилися 9 зразків. Кореляція
між результатами цих двох досліджень дозволяє
вважати їх достовірними r= 0.755 при Р < 0,001.
ЛІТЕРАТУРА
1. Шапошник Л. А. Некоторые особенности
белкового спектра нормальных и опухолевых клеток
человека / Л. А. Шапошник, В. В. Лыло, Л. Л. Лукаш
// Фактори експериментальної еволюції організмів. –
2011. “ Т. 11. – С. 554”557.
2. Stratakis C. A. Clinical and molecular features of
the Carney complex: diagnostic criteria and
recommendations for patient evaluation / C. A. Stratakis,
L. S. Kirschner, J. A. Carney // J. Clin. Endocrinol. Metab.
– 2001. – Vol. 86, № 9. – P. 4041–4046.
3. Fridman A. L. Critical pathways in cellular
senescence and immortalization revealed by gene
expression profiling / A. L. Fridman, M. A. Tainsky //
Oncogene. “ 2008. – Vol. 27, № 46. - P. 5975-5987.
4. p53 mutations in human cancers / M. Hollstein,
D. Sidransky, B. Vogelstein [et al.] // Science. - 1991. -
Vol. 253, № 5015. - Р. 49-53.
5. Analysis of lung tumor initiation and progression
using conditional expression of oncogenic K-ras / E. L.
Jackson, N. Willis, K. Mercer [et al.] // Genes. Dev. –
2001. № 15. – P. 3243-3248.
6. Kaina B. Mechanisms and consequences of
methylating agent-induced SCEs and chromosomal
aberrations: a long road traveled and still a far way to go
/ B. Kaina // Cytogenet. Genome Res. - 2004. - № 104. –
P. 77–86.
7. Osanai T. Inverse correlation between the
expression of O6-methylguanine-DNA methyltransferase
(MGMT) and p53 in breast cancer / T. Osanai, Y. Takagi,
Y. Toriya // Jpn. J. Clin. Oncol. - 2005. - Vol. 35, № 3. - P.
121-125.
8. O6-methylguanine methyltransferase in colorectal
cancers: detection of mutations, loss of expression, and
weak association with G:C>A:T transitions / S. Halford,
A. Rowan, E. Sawyer [et al.] // Gut. – 2005. - № 54. – P.
797-802.
9. http://www.novusbio.com/support/protocols/
protocol-specific-for-mgmt-antibody-nb100-168.html
10. Quantitative analysis of O6-alkylguanine-DNA
alkyltransferase in malignant glioma / J. A. Maxwell, S.
P. Johnson, J. A. Quinn [et al.] // Mol. Cancer Ther. –
2006. – Vol. 10, № 5. – P. 2531-2539.
|