Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа
Исследовано формирование резистентности к вирусу гриппа А у мышей после введения криоконсервированного лейкоконцентрата кордовой крови человека (кЛККЧ) или его компонентов (плазма, ядросодержащие клетки). Методом бронхоальвеолярного лаважа был получен смыв со слизистой оболочки дыхательных путей экс...
Збережено в:
| Дата: | 2013 |
|---|---|
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68730 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа / О.Ю. Кожина, М.В. Останков, Л.В. Останкова, Н.А. Бондарович, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 3. — С. 247-259. — Бібліогр.: 22 назв. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-68730 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-687302014-10-06T22:12:33Z Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа Кожина, О.Ю. Останков, М.В. Останкова, Л.В. Бондарович, Н.А. Гольцев, А.Н. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Исследовано формирование резистентности к вирусу гриппа А у мышей после введения криоконсервированного лейкоконцентрата кордовой крови человека (кЛККЧ) или его компонентов (плазма, ядросодержащие клетки). Методом бронхоальвеолярного лаважа был получен смыв со слизистой оболочки дыхательных путей экспериментальных животных в условиях развития гриппа. Проведен сравнительный анализ клеточного состава смыва дыхательных путей и функциональной активности альвеолярных макрофагов легких мышей на 7- и 14-е сутки после инфицирования вирусом гриппа. Инфицирование проводили через 6 месяцев после интраназального введения кЛККЧ или его компонентов. Установлено, что кЛККЧ в большей степени, чем его компоненты, корригировал функциональную активность альвеолярных макрофагов, повышая их фагоцитарную активность и предотвращая развитие иммунодефицита у животных с индукцией вирусной патологии. Досліджено формування резистентності до вирусу гриппу А у мишей після введення кріоконсервованого лейконцентрату кордової крові людини (кЛККЛ) або його компонентів (плазми, ядерних клітин). Методом бронхоальвеолярного лаважу отримано змив зі слизової оболонки дихальних шляхів експериментальних тварин в умовах розвитку грипу. Проведено порівняльний аналіз клітинного складу змиву дихальних шляхів і функціональної активності альвеолярних макрофагів легень мишей на 7- та 14-ту добу після інфікування вірусом грипу. Інфікування проводили через 6 місяців після інтраназального введення кЛККЛ або його компонентів. Встановлено, що використання кЛККЛ більшою мірою, ніж його компонентів, модифікувало функціональну активність альвеолярних макрофагів, підвищуючи їх фагоцитарну активність та запобігаючи розвитку імунодефіциту у тварин з індукцією вірусної патології. Formation of resistance to influenza virus of type A in mice following introduction of cryopreserved human cord blood leucoconcentrate (cHCBL) or its components (plasma, nucleated cells). Bronchoalveolar lavage was obtained from mucous membrane of respiratory tract in experimental animals during influenza development. Analyzis of cell composition of bronchoalveolar lavage as well as functional activity of alveolar macrophages in lungs of animals in 7 and 14 days following influenza virus introduction. The infectioning was performed in 6 month after preventive intranasal introduction of cHCBL or its components. It was found that cHCBL in more extent than its components corrected the functional activity of alveolar macrophages increasing their phagocytic activity and preventing the immune deficiency development in animals with inducted viral pathology. 2013 Article Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа / О.Ю. Кожина, М.В. Останков, Л.В. Останкова, Н.А. Бондарович, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 3. — С. 247-259. — Бібліогр.: 22 назв. — рос., англ. 2307-6143 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68730 612.649.011.87:615.014.41:615.921.5.018.1-092.4 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| spellingShingle |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Кожина, О.Ю. Останков, М.В. Останкова, Л.В. Бондарович, Н.А. Гольцев, А.Н. Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description |
Исследовано формирование резистентности к вирусу гриппа А у мышей после введения криоконсервированного лейкоконцентрата кордовой крови человека (кЛККЧ) или его компонентов (плазма, ядросодержащие клетки). Методом бронхоальвеолярного лаважа был получен смыв со слизистой оболочки дыхательных путей экспериментальных животных в условиях развития гриппа. Проведен сравнительный анализ клеточного состава смыва дыхательных путей и функциональной активности альвеолярных макрофагов легких мышей на 7- и 14-е сутки после инфицирования вирусом гриппа. Инфицирование проводили через 6 месяцев после интраназального введения кЛККЧ или его компонентов. Установлено, что кЛККЧ в большей степени, чем его компоненты, корригировал функциональную активность альвеолярных макрофагов, повышая их фагоцитарную активность и предотвращая развитие иммунодефицита у животных с индукцией вирусной патологии. |
| format |
Article |
| author |
Кожина, О.Ю. Останков, М.В. Останкова, Л.В. Бондарович, Н.А. Гольцев, А.Н. |
| author_facet |
Кожина, О.Ю. Останков, М.В. Останкова, Л.В. Бондарович, Н.А. Гольцев, А.Н. |
| author_sort |
Кожина, О.Ю. |
| title |
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа |
| title_short |
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа |
| title_full |
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа |
| title_fullStr |
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа |
| title_full_unstemmed |
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа |
| title_sort |
влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2013 |
| topic_facet |
Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68730 |
| citation_txt |
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа / О.Ю. Кожина, М.В. Останков, Л.В. Останкова, Н.А. Бондарович, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 3. — С. 247-259. — Бібліогр.: 22 назв. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT kožinaoû vliâniekriokonservirovannojkordovojkrovinaaktivnostʹalʹveolârnyhmakrofagovvéksperimentalʹnojmodeligrippa AT ostankovmv vliâniekriokonservirovannojkordovojkrovinaaktivnostʹalʹveolârnyhmakrofagovvéksperimentalʹnojmodeligrippa AT ostankovalv vliâniekriokonservirovannojkordovojkrovinaaktivnostʹalʹveolârnyhmakrofagovvéksperimentalʹnojmodeligrippa AT bondarovična vliâniekriokonservirovannojkordovojkrovinaaktivnostʹalʹveolârnyhmakrofagovvéksperimentalʹnojmodeligrippa AT golʹcevan vliâniekriokonservirovannojkordovojkrovinaaktivnostʹalʹveolârnyhmakrofagovvéksperimentalʹnojmodeligrippa |
| first_indexed |
2025-07-05T18:32:22Z |
| last_indexed |
2025-07-05T18:32:22Z |
| _version_ |
1836832881782030336 |
| fulltext |
УДК 612.649.011.87:615.014.41:615.921.5.018.1-092.4
О.Ю.Кожина*, М.В.Останков, Л.В. Останкова, Н.А. Бондарович, А.Н. Гольцев
Влияние криоконсервированной кордовой крови на активность
альвеолярных макрофагов в экспериментальной модели гриппа
UDC 612.649.011.87:615.014.41:615.921.5.018.1-092.4
O.Yu. Kozhina*, M.V. Ostankov, L.V. Ostankova, N.A. Bondarovich, A.N. Goltsev
Effect of Cryopreserved Cord Blood on Activity of Alveolar
Macrophages in Experimental Model of Influenza
Реферат: Исследовано формирование резистентности к вирусу гриппа А у мышей после введения криокон-
сервированного лейкоконцентрата кордовой крови человека (кЛККЧ) или его компонентов (плазма, ядросодержащие клетки).
Методом бронхоальвеолярного лаважа был получен смыв со слизистой оболочки дыхательных путей экспериментальных
животных в условиях развития гриппа. Проведен сравнительный анализ клеточного состава смыва дыхательных путей
и функциональной активности альвеолярных макрофагов легких мышей на 7- и 14-е сутки после инфицирования вирусом
гриппа. Инфицирование проводили через 6 месяцев после интраназального введения кЛККЧ или его компонентов.
Установлено, что кЛККЧ в большей степени, чем его компоненты, корригировал функциональную активность альвеолярных
макрофагов, повышая их фагоцитарную активность и предотвращая развитие иммунодефицита у животных с индукцией
вирусной патологии.
Ключевые слова: альвеолярные макрофаги, криоконсервированная кордовая кровь, профилактика гриппа.
Реферат: Досліджено формування резистентності до вирусу гриппу А у мишей після введення кріоконсервованого
лейконцентрату кордової крові людини (кЛККЛ) або його компонентів (плазми, ядерних клітин). Методом бронхоальвеолярного
лаважу отримано змив зі слизової оболонки дихальних шляхів експериментальних тварин в умовах розвитку грипу. Прове-
дено порівняльний аналіз клітинного складу змиву дихальних шляхів і функціональної активності альвеолярних макрофагів
легень мишей на 7- та 14-ту добу після інфікування вірусом грипу. Інфікування проводили через 6 місяців після інтраназального
введення кЛККЛ або його компонентів. Встановлено, що використання кЛККЛ більшою мірою, ніж його компонентів,
модифікувало функціональну активність альвеолярних макрофагів, підвищуючи їх фагоцитарну активність та запобігаючи
розвитку імунодефіциту у тварин з індукцією вірусної патології.
Ключові слова: альвеолярні макрофаги, кріоконсервована кордова кров, профілактика грипу.
Abstract: Formation of resistance to influenza virus of type A in mice following introduction of cryopreserved human cord blood
leucoconcentrate (cHCBL) or its components (plasma, nucleated cells). Bronchoalveolar lavage was obtained from mucous membrane
of respiratory tract in experimental animals during influenza development. Analyzis of cell composition of bronchoalveolar lavage as
well as functional activity of alveolar macrophages in lungs of animals in 7 and 14 days following influenza virus introduction. The
infectioning was performed in 6 month after preventive intranasal introduction of cHCBL or its components. It was found that cHCBL
in more extent than its components corrected the functional activity of alveolar macrophages increasing their phagocytic activity and
preventing the immune deficiency development in animals with inducted viral pathology.
Key words: alveolar macrophages, cryopreserved cord blood, influnza preventive maintenance.
*Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015;
тел.: (+38 057) 373-31-87, факс: (+38 057) 373-30-84,
электронная почта: dr_yalo@mail.ru
* To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 3007, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: dr_yalo@mail.ru
Department of Cryopathophysilogy and Immunology, Institute for
Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Acad-
emy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Отдел криопатофизиологии и иммунологии, Институт проблем
криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Поступила 19.02.2013
Принята в печать 19.09.2013
Проблемы криобиологии и криомедицины. – 2013. – Т. 23, №3. – С. 247–259.
© 2013 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Received February, 19, 2013
Accepted September, 19, 2013
Problems of Cryobiology and Cryomedicine. – 2013. – Vol. 23, Nr. 3. – P. 247–259.
© 2013 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
Проблема поиска эффективных средств для
профилактики и лечения вирусных инфекций, вызы-
вающих патологию респираторного тракта, остает-
ся актуальной в связи с высокими показателями
заболеваемости [4, 12]. Несмотря на интенсивный
скрининг лекарственных препаратов против гриппа,
проводимый во всем мире, применение противови-
русных средств ограничено из-за формирования к
ним резистентности у вирусов. Перспективным на-
правлением в профилактике гриппа является разра-
The task of searching for effective preparations to
prevent and treat viral infections of respiratory tract
has remained an actual one due to high indices of
morbidity [4, 12]. In spite of intensive screening of
medical products against influenza performed all over
the world, application of antiviral preparations is limited
due to resistance formed in viruses. Perspective direc-
tion in influenza prophylaxis is the development of
preparations enabling to increase the activity of an
organism own defence systems.
оригинальное исследование research article
ботка средств, способных повышать активность
собственных защитных сил организма.
Известно, что альвеолярные макрофаги, входя-
щие в состав моноцитарно-фагоцитарной системы
(МФС) организма, выступают в первой линии эф-
фекторных механизмов иммунологического гомео-
стаза и являются основными факторами неспеци-
фической защиты [10, 18]. Обладая исключитель-
ной реактивностью и высокой мобилизационной го-
товностью, они принимают непосредственное
участие в регуляции иммунного ответа в лёгких как
в нормальных физиологических условиях, так и при
различных патологических процессах, в частности
при инфицировании респираторными вирусами.
Альвеолярные макрофаги способны опосредован-
но модулировать ответные реакции других имму-
нокомпетентных клеток через высвобождение ме-
диаторов [7]. Так, активированные альвеолярные
макрофаги продуцируют свободные радикалы, ци-
токины, хемокины и другие медиаторы воспаления,
которые запускают реакции организма для осу-
ществления врожденного и адаптивного иммун-
ного ответа на внедрение патогенов [10, 11]. Ни
одно из проявлений приобретенного иммунитета
не реализуется в полном объеме без участия кле-
ток МФС [7, 10, 15]. Так и активированные альвео-
лярные макрофаги благодаря своей фагоцитарной
и секреторной активности играют главную роль в
инициации и развитии воспалительного процесса в
лёгких.
Ранее было показано, что интраназальное вве-
дение криоконсервированного лейкоконцентрата
кордовой крови человека (кЛККЧ) способствовало
повышению фагоцитарной активности перито-
неальных фагоцитов у мышей, инфицированных ви-
русом гриппа [6]. Поскольку клетки МФС являют-
ся гетерогенной популяцией, которая включает как
циркулирующие, так и резидентные фагоциты, то
в настоящей работе было оценено влияние кЛККЧ
и его отдельных компонентов на функциональное
состояние альвеолярных макрофагов мышей.
Исследования показали, что клетки наиболее
эффективно проявляют свои свойства в естествен-
ных для них условиях, т. е. в среде с определённым
химическим составом [7, 20]. Принимая во внима-
ние тот факт, что кЛККЧ представляет собой сус-
пензию ядросодержащих клеток в аутологичной
плазме, то логично предположить, что максималь-
ный защитный потенциал будет иметь цельный
кЛККЧ по сравнению с отдельными компонентами.
В связи с вышеизложенным целью данного ис-
следования была сравнительная оценка функцио-
нального состояния альвеолярных макрофагов у
мышей, инфицированных вирусом гриппа А/Вик-
тория через 6 месяцев после превентивного вве-
дения кЛККЧ или его компонентов.
Alveolar macrophages being the part of organism
monocyte-phagocyte system (MPS) are known to be
activated in the first line of affecting mechanisms in
immune homeostasis and are the basic factors of non-
specific defense [11]. Possessing an exceptional reac-
tivity and high mobilization readiness they directly
participate in regulation of immune response of lungs
both in normal physiological conditions and different
pathological processes, in particular during infection
with respiratory viruses. Alveolar macrophages are
able to indirectly modulate the responses of other
immunocompetent cells by release of mediators [7].
For example, activated alveolar macrophages produce
free radicals, cytokines, chemokines and other inflam-
mation mediators triggering the reactions of organism
to implement congenital and adaptive immune response
to the introduction of pathogens [10, 11]. No manifes-
tation is entirely implemented without MPS cells [7,
10, 15]. Activated alveolar macrophages due to their
phagocytic and secretory activity play an essential role
in initiation and development of inflammatory process
in lungs as well.
Previously we have found that intranasal introduc-
tion of cryopreserved human cord blood leukoconcent-
rate (cHCBL) contributed to the increase of phago-
cytic activity in peritoneal phagocytes of mice infected
with influenza virus [6]. The MPS cells are hetero-
geneous population which includes circulating as well
as resident phagocytes, thereby in this research we
have assessed the effect of cHCBL and its individual
components on functional state of murine alveolar
macrophages.
The investigations showed that the cells most effec-
tively manifested the properties in their natural environ-
ment, i. e. in the medium with certain chemical and
composition [7, 20]. Considering the fact that cHCBL
is a suspension of nucleated cells in autologous plasma
we may suggest that the whole cHCBL will have
maximum protective potential if compared to its sepa-
rate components.
In this regard the research aim was to compara-
tively assess the functional state of alveolar macro-
phages of mice infected with A/Victoria influenza virus
in 6 months after preventive introduction of cHCBL
and its components.
Materials and methods
The experiments were performed in 2 (at the start
of experiment) and 8 month-old (at the end of the
experiment) Balb/C mice of 18–20g weight in complian-
ce with the General Principles of Experiments in
Animals approved by the 3rd National Congress on
Bioethics (Kiev, 2007) and agreed with the regulations
of European Convention on Protection of Vertebrate
Animals Used for Experimental and Other Scientific
Purposes (Strasbourg, 1986).
248 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
Материалы и методы
Эксперименты проведены на мышах линии
Balb/C 2- (в начале эксперимента) и 8-месячного
(в конце эксперимента) возраста с массой 18–20 г
в соответствии с «Общими принципами экспе-
риментов на животных», одобренными III Нацио-
нальным конгрессом по биоэтике (Киев, 2007) и
согласованными с положениями «Европейской кон-
венции о защите позвоночных животных, исполь-
зуемых для экспериментальных и других научных
целей» (Страсбург, 1986).
Кордовую кровь получали от здоровых рожениц
после подписания ими добровольного информиро-
ванного согласия. Лейкоконцентрат кордовой крови
человека готовили путём пассивной седиментации
эритроцитов в градиенте плотности высокомолеку-
лярного декстрана (полиглюкин, «Юриа-фарм»,
Украина). Криоконсервировали ЛККЧ в аутологич-
ной плазме по двухэтапной программе на программ-
ном замораживателе УОП-6 производства СКТБ
с ОП ИПКиК НАН Украины по ранее разработан-
ному методу [17]. Образцы размораживали на во-
дяной бане при температуре 40...41°С [3]. Плазму
получали из кЛККЧ после его размораживания и
центрифугирования при 380g в течение 15 мин при
20°С. Ядросодержащие клетки (ЯСК) выделяли
из кЛККЧ двукратным центрифугированием при
170g в течение 10 мин при 20°С, отмывали сте-
рильным рингер-фосфатным буферным раствором
(РФБ) и перед введением животному ресуспен-
дировали в 2,0 мл РФБ. Стерильность кЛККЧ
оценивали согласно методическим рекомендациям
[16].
Мыши были разделены на 7 групп. Животным
опытных групп 1–6 в возрасте 2-х месяцев интра-
назально вводили: 1 – кЛККЧ 0,05мл ((6 ± 2)×105
клеток/мышь) однократно (n = 21); 2 – плазму
кЛККЧ 0,05мл однократно (n = 21); 3 – ЯСК
кЛККЧ 0,05мл ((6 ± 2)×105 клеток/мышь) одно-
кратно (n = 21); 4 – вирус гриппа А/Виктория в
дозе LD25/10 (n = 21); 5 – интерферон («Лаферо-
бион», «ОАО Киевмедпрепарат», Украина) 14 МЕ
5 раз в день в течение 3 дней (n = 21); 6 – физио-
логический раствор 0,05мл (0,9% NaCl, «Юриа-
фарм», Украина) однократно (n = 21). Группу 7
составили интактные мыши (n = 7).
Через 6 месяцев после введения указанных суб-
стратов 14 животных (из 21) опытных групп интра-
назально заражали вирусом гриппа А/Виктория в
дозе LD100/10. Неинфицированные мыши этих групп
составили контроль (n = 7 в каждой группе).
Вирус гриппа (штамм А/Виктория/7/75 (H3N2))
был предоставлен НИИ гриппа РАМН (Санкт-
Петербург, Россия), прошёл 6 пассажей на белых
Cord blood was derived from healthy obstetric pa-
tients after their voluntary informed consent. Human
cord blood leukoconcentrate was prepared by passive
sedimentation of erythrocytes in density gradient of
high molecular weight dextran (Polyglucin, Yuria-
Pharm, Ukraine). HCBL was cryopreserved in auto-
logous plasma by two-step program in programmable
freezer UOP-6 (Special Designing and Technical
Bureau with Experimental Unit of the Institute for
Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the
National Academy of Sciences of Ukraine) using
previously developed method [18]. The samples were
thawed in water bath at 40–41°C [3]. Plasma was
obtained from cHCBL after its thawing and centri-
fuging at 380g for 15 min at 20°C. Nucleated cells
(NC) were isolated from cHCBL by two-fold centri-
fugation at 170g during 10 min at 20°C, washed with
sterile Krebs-Ringer’s solution (KRS) and resuspen-
ded prior to introduction into animal in 2.0 ml of KRS.
Sterility of cHCBL was assessed according to the me-
thodical recommendations [17].
The mice were divided into 7 groups. The animals
of experimental groups 1–6 of 2 months old were
intranasally administered with: 1) 0.05 ml cHCBL ((6 ±
2)×105 cells/mice) one-fold (n = 21); 2) 0.05 ml
cHCBL plasma one-fold; 3) cHCBL NC of 0.05 ml
((6 ± 2)×105 cells/mice) one-fold (n = 21); 4)
A/Victoria influenza virus of LD25/10 (n = 21); 5) 14 IU
of Interferon (Laferobion, Arterium, Ukraine) 5 times
a day during 3 days (n = 21); 6) 0.05 ml of physiological
saline (0.9% NaCl, Yuria-Pharm, Ukraine) one-fold
(n = 21). Group 7 comprised the intact mice (n = 7).
Six months later the administration of the mentioned
substrates 14 animals (among 21) of each experimental
groups were intranasally infected with influenza virus
A/Victoria of LD100/10. Non-infected mice of these
groups made the control (n = 7).
Influenza virus (A/Victoria strain (H3N2), procured
from the Scientific Research Institute of Influenza of
the Russian Academy of Medical Sciences, St. Peters-
burg, Russia) was exposed to 6 passages in white mice
and 2 passages in avian embryos. Titer of hemagglu-
tinins of infected allantoic fluid was 1:512, infectious
titer made 104 LD50/10.
The material for assessment was procured from
mice of groups 1–6 6 months later the administration
of the mentioned substrates and in 7 and 14 days after
infection with influenza virus. To obtain the alveolar
macrophages the mice after cutting of inferior vena
cava and exsanguination were thrice subjected to
bronchoalveolar lavage (BAL) by 1.0 ml sterile KRS
at 37°C using endotracheal catheter [19]. The obtained
cell suspension was centrifuged at 170g for 5 min at
21–22°C. Supernatant was removed, the sedimented
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
249
мышах и 2 пассажа на куриных эмбрионах. Титр
гемагглютининов инфицированной аллантоисной
жидкости соответствовал 1:512, инфекционный
титр – 104 LD50/10.
Забор исследуемого материала у мышей групп
1–6 проводили через 6 месяцев после введения
указанных субстратов и на 7- и 14-е сутки после
инфицирования вирусом гриппа. Для получения аль-
веолярных макрофагов мышам после перерезания
нижней полой вены и обескровливания троекратно
проводили бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) по
1,0 мл стерильным РФБ при 37°С с помощью внут-
ритрахеального катетера [19]. Полученную клеточ-
ную суспензию центрифугировали при 170g в те-
чение 5 мин при температуре 21...22°С. Надоса-
дочную жидкость удаляли, осевшие клетки ресус-
пендировали в 2,0 мл среды Хенкса («ИПВЭ
им. М.П. Чумакова РАМН, Россия). Концентрацию
клеток подсчитывали в камере Горяева [8] и до-
водили до 1×106кл/мл. Цитологический состав и
фагоцитарную активность клеток БАЛ определяли
в мазках, окрашенных азур II-эозином по Романов-
скому [8] с использованием светового микроскопа
ЛОМО (ок. 10, об. 40, 90).
Фагоцитарную активность определяли по ме-
тоду М.Г. Александрова и соавт. [1]: оценивали
фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарное число
(ФЧ), абсолютный показатель фагоцитарной ак-
тивности (АПФА) альвеолярных макрофагов.
Экспрессию молекул CD11b (Мас-1) определя-
ли на клетках БАЛ методом проточной цитофлуо-
риметрии («FACS Calibur», «BD», США) с исполь-
зованием моноклональных антител FITC anti-mouse
CD11b с изотипом Rat IgG2b («BD», США) в соот-
ветствии с рекомендациями фирмы-производителя.
Статистический учёт данных, полученных после
цитофлуориметрического анализа, осуществляли с
помощью программы WinMDI 2.8 (стандартный
пакет).
Статистическую обработку полученных резуль-
татов проводили по методу Стьюдента с учетом
коэффициента Фишера. Различия между выбор-
ками считали статистически значимыми при
p < 0,05. Данные представлены в виде среднего ±
стандартной ошибки среднего.
Результаты и обсуждение
По результатам цитологического анализа БАЛ
можно определить степень выраженности воспали-
тельной реакции в бронхолегочной системе, оха-
рактеризовать направленность происходящих про-
цессов, спрогнозировать исход заболевания [13].
При исследовании морфологического состава БАЛ
у неинфицированных мышей групп 1–6 не выявлено
cells were resuspended in 2.0 ml Hank’s solution
(Institute of Polymyelitis and Viral Encephalitis,
Russia). Cell concentration was calculated in Go-
ryaev’s chamber [9] and the suspension was diluted
to get 1×106 cells/ml. Cytological composition and
phagocytic activity of BAL cells were determined in
the smears stained with azure II-eosin according Ro-
manowsky [9] using light microscope LOMO (magni-
fication 400 and 900).
Phagocytic activity was determined according me-
thod of Aleksandrov et al. [1]: phagocytic index (PI),
phagocytic number (PN), and absolute index of pha-
gocytic activity (AIPA) of alveolar macrophages were
assessed.
Expression of CD11b (Mac-1) molecules was
assessed in BAL cells using flow cytometry (FACS
Calibur, BD, USA), and monoclonal antibodies FITC
anti-mouse CD11b with Rat IgG2b isotype (BD, USA)
according to the manufacturer recommendations. The
data obtained after flow cytometry analysis were
statistically processed with WinMDI 2.8 software
(standard package).
The obtained data were statistically processed by
Student-Fisher test. Differences were considered as
significant at p < 0.05. The data are presented as
mean ± standard error of the mean.
Results and discussion
Cytological analysis of BAL allows to assess the
intensity of inflammatory response in bronchopul-
monary system, characterize the targeting of the
processes, and predict the disease outcome [13]. In
our study the morphological composition of BAL in
non-infected mice of the groups 1–6 had no significant
differences if compared to the intact control (Fig. 1).
The derived lavages mainly contained alveolar macro-
phages (65–71%), lymphocytes (10–13.5%), and small
number of neutrophils, eosinophils, basophils (0–1%)
and epithelial cells.
To the 7th day after infection with influenza virus a
significant redistribution in cell composition of BAL
was observed in mice of the studied groups (Fig. 2).
For example, in mice of group 1 the number of alveolar
macrophages and basophils was twice increased (p <
0.05), and the number of lymphocytes and epithelial
cells was 10 and 2.5 times decreased, respectively,
testifying to the development of inflammation in lungs
as a response to introduction of influenza virus A.
The number of basophilic granulocytes in BAL in
infected mice of the second group was 6 times higher
than of the intact control (p < 0.05). Concentration of
lymphocytes was 4 times decreased. The number of
neutrophils and epithelial cells remained at the level of
group control. The obtained data attested more ex-
250 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
статистически значимых отличий по сравнению с
интактным контролем (рис. 1). В полученных смы-
вах преобладали альвеолярные макрофаги (65–
71%) и лимфоциты (10–13,5%), в небольшом коли-
честве определялись нейтрофилы, эозинофилы, ба-
зофилы (0–1%) и эпителиальные клетки.
На 7-е сутки после инфицирования вирусом
гриппа у мышей исследуемых групп наблюдали
значимое перераспределение в клеточном составе
БАЛ (рис. 2). Так, у мышей группы 1 в 2 раза увели-
чилось количество альвеолярных макрофагов и
базофилов (р < 0,05), а количество лимфоцитов и
эпителиальных клеток снизилось в 10 и 2,5 раза
соответственно, что свидетельствовало о развитии
воспалительного процесса в лёгких в ответ на внед-
рение вируса гриппа А/Виктория.
У инфицированных мышей группы 2 количество
базофильных гранулоцитов в БАЛ было в 6 раз вы-
ше значений интактного контроля (р < 0,05). Кон-
центрация лимфоцитов снизилась в 4 раза. На уров-
не показателей контрольных животных группы
оставалось количество нейтрофилов и эпителиаль-
ных клеток. Полученные данные свидетельствуют
о более выраженном воспалительном процессе в
легких мышей данной группы по сравнению с
животными группы 1 на 7-е сутки после инфици-
рования.
У инфицированных мышей группы 3 увеличи-
лось количество базофилов, эозинофилов и эпите-
лиальных клеток в 10, 4 и 1,4 раза соответственно
по сравнению с интактным контролем (р < 0,05),
что подтвердило факт развития острого воспаления
с элементами аллергической реакции. При этом
концентрация альвеолярных макрофагов остава-
лась на уровне контроля группы, что может свиде-
тельствовать о задержке миграции клеток МФС в
очаг воспаления.
В группе 4 отмечали незначимое увеличение в
БАЛ инфицированных животных количества аль-
веолярных макрофагов в 1,2 раза при снижении в
1,7 раза лимфоидных и в 2 раза эпителиальных
клеток относительно показателей интактного конт-
роля (рис. 2). Содержание зрелых гранулоцитов
достоверно не отличалось от показателей контроля
группы. Полученные данные также свидетельст-
вовали о развитии воспалительной реакции в лёгких
мышей к 7-м суткам после инфицирования грип-
пом.
У инфицированных мышей групп 5 и 6 на 7-е
сутки развития гриппа отмечалось повышение со-
держания нейтрофильных, эозинофильных, базо-
фильных гранулоцитов, а также дегенеративно из-
мененных эпителиальных клеток, при этом коли-
чество альвеолярных макрофагов было в 1,2 ра-
Рис. 1. Клеточный состав БАЛ у мышей через 6 месяцев
после введения кЛККЧ и его компонентов:
123
123 – эпите-
лиальные клетки; – альвеолярные макрофаги;
123
123
123 –
лимфоциты; – нейтрофилы; – эозинофилы;
123
123 –
базофилы; Int – интактные животные.
Fig. 1. Cell composition of BAL in the mice 6 months after
cHCBL and its components introduction:
123
123
123 – epithelial cells;
– alveolar macrophages;
12
12 – lymphocytes; – neutro-
phils; – eosinophils,
123
123 – basophils; Int – intact animals.
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
Группы животных Groups of animals
pressed inflammatory process in lungs of mice of this
group comparing with the animals of the 1st group to
the 7th day after infection.
Infected mice of the group 3 had 10; 4 and 1.4
times increased number of basophils, eosinophils and
epithelial cells, respectively, compared to the intact
control (p < 0.05) indicating the development of acute
inflammation with elements of hypersensitivity reac-
tion. It should be noted that concentration of alveolar
macrophages remained at the control level probably
indicating the delay of MPS cells migration into focus
of inflammation.
In group 4 we noted insignificant (1.2 times) increase
in BAL of alveolar macrophages number and 1.7 times
decrease of lymphoid cells and 2 times decrease of
epithelial ones with respect to the indices of the intact
control (Fig. 2). The content of mature granulocytes
differed insignificantly from the group control indices.
The findings also testified to the development of inflam-
mation reaction in lungs of the mice to the 7th day after
infection with influenza virus.
In mice of the experimental groups 5 and 6 to the
7th day of influenza development we noted the rise in
the content of neutrophil, eosinophil, basophil granu-
locytes as well as degeneratively changed epithelial
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
251
за ниже показателей контроля группы. Такая кар-
тина, вероятнее всего, свидетельствовала о актив-
ном течении патологических процессов у мышей
данных групп, формировании аллергической на-
строенности организма, создании предпосылок для
развития отёка лёгких [4]. Полученные результаты
подтверждаются данными работы В.И. Совалкина
и соавт., в которой показано, что при выраженном
воспалении число нейтрофильных лейкоцитов в
БАЛ резко увеличивается, а значительное сниже-
ние содержания альвеолярных макрофагов, ве-
роятно, свидетельствует об истощении макрофа-
гального звена иммунитета [14].
При исследовании клеточного состава БАЛ у
инфицированных животных всех групп на 14-е сут-
ки после инфицирования тенденцию к репарации
ткани лёгких отмечали только у мышей группы 1,
у которых сохранялось повышенное содержание
(в 1,2 раза) альвеолярных макрофагов при снижен-
ном в 1,5 раза количестве лимфоцитов, в 3,5 раза
нейтрофилов и 1,8 раза эпителиальных клеток отно-
сительно показателей интактного контроля (рис. 3).
В этот период у инфицированных мышей групп 2 и
3 в БАЛ оставалось повышенным в 2 раза коли-
чество нейтрофилов и 1,2–2 раза эпителиальных
Рис. 2. Клеточный состав БАЛ у мышей на 7-е сутки
после инфицирования вирусом гриппа А:
123
123
123 – эпите-
лиальные клетки; – альвеолярные макрофаги;
12
12
12 –
лимфоциты; – нейтрофилы; – эозинофилы;
12
12 –
базофилы; Int – интактные животные.
Fig. 2. Cell composition of BAL in the mice to the 7th day
after infection with influenza virus A:
123
123 – epithelial cells;
– alveolar macrophages;
123
123
123 – lymphocytes; – neutro-
phils; – eosinophils,
123
123 – basophils; Int – intact animals.
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
Группы животных Groups of animals
cells, moreover the number of alveolar macrophages
was 1.2 times lower than the control values. This
probably indicated to a significant activity of alteration
processes in mice of these groups, formation of or-
ganism’s allergy disposition, providing the conditions
for development of pulmonary edema [4]. Our findings
are confirmed by the data of the paper of Sovalkin et
al., showing that at severe inflammation the number
of neutrophilic leukocytes in BAL is dramatically
increased, and significant reduction in content of
alveolar macrophages presumably indicates to the ex-
haustion of immunity macrophagal link [14].
Analyzing the cell composition of BAL in infected
animals of all the groups to the 14th day after infection
we observed the tendency to lung tissue reparation
only in the mice of group 1, in which an increased
content (1.2 times) of alveolar macrophages was
preserved, and decreased number of lymphocytes (1.5
times), neutrophils (3.5 times), and epithelial cells (1.8
times) in respect to the indices of intact control was
found (Fig. 3). In this period, the infected mice of groups
2 and 3 exhibited the number of neutrophils as 2 times
increased and number of epithelial cells as 1.2–2 times
increased comparing to the group control, and the
macrophages content was 1.2–1.4 times lower com-
paring to the group control (p < 0.05). This attested
the proceeding inflammation induced by causative agent
of influenza and remnants of the cells infected with
virus. In infected mice of group 4 the indices of BAL
differed insignificantly from the group control, but a
relative lymphocytosis was preserved if compared to
the intact group. This fact was probably associated
with the attenuation of inflammation and started
recovery. All the animals of groups 5 and 6 to the 10th
day died so no data of BAL cell composition on the
14th day after infection could be presented. It was fpund
previously that the main cause of death of the mice
infected with lethal dose of A/Victoria influenza virus
is the development of hemorrhagic edema-pneumonia
[2].
One of the characteristics of alveolar macrophage
functional activity is known to be their ability to pha-
gocytosis. Namely the rate of their reaction and inten-
sity of response to antigen affects the outcome and
duration of inflammation [11].
The data obtained from the study of the alveolar
macrophage phagocytic activity in mice prior to and
after infection with influenza virus A are presented in
Table. It was found that prior to virus infection in mice
of group 1 the PI was increased in 1.2, PN in 1.5 and
AIPA in 1.3 times if compared with the intact animals.
In control mice of group 2 only PN was significantly
increased (in 1.4 times). In non-infected mice of the
groups 3–6 the indices of phagocytic activity were not
252 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
клеток при сниженном в 1,2–1,4 раза содержании
макрофагов (р < 0,05), что свидетельствовало о
продолжающемся воспалительном процессе, выз-
ванном возбудителем гриппа и продуктами распада
инфицированных вирусом клеток. У инфицирован-
ных мышей группы 4 показатели БАЛ значимо не
отличались от контроля группы, однако сохранялся
незначительный лимфоцитоз по сравнению с ин-
тактной группой. Данный факт, вероятно, связан с
затуханием воспалительного процесса и формиро-
ванием состояния реконвалесценции (рис. 3). Все
инфицированные животные групп 5 и 6 к 10-м сут-
кам погибли, поэтому данные о клеточном составе
БАЛ на 14-е сутки после инфицирования не пред-
ставлены. Ранее было показано, что основной при-
чиной гибели мышей, инфицированных летальной
дозой вируса гриппа А, является развитие гемор-
рагического отёка-пневмонии [2].
Известно, что одной из характеристик функцио-
нальной активности альвеолярных макрофагов
является их способность к фагоцитозу. Именно от
скорости их реагирования и интенсивности ответа
на антиген зависит исход и продолжительность
воспалительной реакции [11].
Данные, полученные при исследовании фагоци-
тарной активности альвеолярных макрофагов у
мышей до и после инфицирования вирусом грип-
па А, представлены в таблице и на рис.4. Так, до
инфицирования вирусом у мышей группы 1 от-
мечали повышение ФИ в 1,2, ФЧ в 1,5 и АПФА в
1,3 раза по сравнению с интактным контролем. У
контрольных мышей группы 2 значимо повыша-
лось (в 1,4 раза) только ФЧ. У неинфицированных
мышей групп 3–6 показатели фагоцитарной актив-
ности статистически значимо не отличались от
уровня интактного контроля. Следовательно, аль-
веолярные макрофаги у мышей групп 1 и 2 до ин-
фицирования вирусом гриппа А были функцио-
нально более активными, чем в группах 3–6.
Полученные данные свидетельствуют о том, что
именно нефракционированный кЛККЧ и его плазма
в большей степени, чем ЯСК кЛККЧ, оказывают
стимулирующее действие на фагоцитарную актив-
ность альвеолярных макрофагов.
У животных группы 1 на 7-е сутки после инфи-
цирования фагоцитарная активность альвеолярных
макрофагов была выше по сравнению с интактным
контролем и неинфицированными мышами этой
группы. Фагоцитарный индекс увеличился в 1,3, а
фагоцитарное число – в 2 раза относительно
показателей интактного контроля (р < 0,05). В груп-
пах 2, 3 и 4 повышение фагоцитарной активности
альвеолярных макрофагов на 7-е сутки после ин-
фицирования было менее выражено по сравнению
significantly differed from the control. Therefore, the
alveolar macrophages in mice of groups 1 and 2 prior
to infection with influenza virus A were more active
than the cells in groups 3–6. The obtained data testify
to the fact that namely unfractioned cHCBL and its
plasma stimulate the phagocytic activity of alveolar
macrophages in greater extent if compared to NC of
cHCBL.
In the animals of the group 1 the phagocytic activity
of alveolar macrophages in 7 day after infection was
higher if compared with intact animals and non-infected
mice of this group. Phagocytic index was increased in
1.3, and phagocytic number enhanced in 2 times com-
paring to the intact control indices (p < 0.05). In the
groups 2, 3 and 4 the increasing of phagocytic activity
of alveolar macrophages to the 7th day after infection
was less expressed if compared with the indices of
the group 1. In infected animals of groups 5 and 6 at
the same observation period the PN was 1.5 times hi-
gher comparing to intact mice, PI and AIPA were not
significantly differed from the intact control, that was
associated with the decreasing of alveolar macro-
phages number in BAL.
To the 14th day of influenza development in the
mice of the group 1 all the indices of phagocytic activity
Рис. 3. Клеточный состав БАЛ у мышей на 14-е сутки
после инфицирования вирусом гриппа А/Виктория:
123
123
123 –
эпителиальные клетки; – альвеолярные макрофаги;123
123
123 – лимфоциты; – нейтрофилы; – эозинофилы;123
123
123 – базофилы; Int – интактные животные.
Fig. 3. Cell composition of BAL in mice to the 14th day after
infection with influenza virus A/Victoria:
12
12
12 – epithelial cells;
– alveolar macrophages;
12
12 – lymphocytes; – neutro-
phils; – eosinophils,
123
123
123 – basophils; Int – intact animals.
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
Группы животных Groups of animals
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
253
Показатели фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов у
мышей до и после инфицирования вирусом гриппа, M ± m
Indices of phagocytic activity of alveolar macrophages in mice prior to and
after infection with influenza virus, M ± m
Примечания: АМ – абсолютное число альвеолярных макрофагов в БАЛ
мышей;различия значимы по сравнению с: * – интактным контролем (груп-
па 7); # – группой 6 на 7-е сутки после инфицирования вирусом гриппа
А/Виктория (p ≤ 0,05).
Note: AM – number of alveolar macrophages in BAL of mice; the differences are
significant if compared with: * – intact control (group 7); # – group 6 to the 7th day
after infection (p ≤ 0.05).
с показателями группы 1. У инфици-
рованных животных групп 5 и 6 в этот
же период наблюдения ФЧ было в
1,5 раза выше, чем у интактных мы-
шей, ФИ и АПФА достоверно не отли-
чались от интактного контроля, что
связано с уменьшением количества
альвеолярных макрофагов в БАЛ.
На 14-е сутки развития гриппа у
мышей группы 1 все показатели фа-
гоцитарной активности макрофагов
значимо (р < 0,05) превышали конт-
рольные значения. Подобного рода
изменения могут свидетельствовать
об активации процессов репарации,
поскольку клетки МФС принимают
участие не только в элиминации пато-
генов из организма, но и в удалении
продуктов распада клеток, погибших
в результате вирусной экспансии. В
группах 2 и 3 в этот срок наблюдения
ФЧ и ФИ инфицированных животных
превышали показатели контрольных
(р < 0,05), однако суммарный показа-
тель фагоцитарной активности аль-
веолярных макрофагов достоверно не
отличался от показателей интактных
животных, что может быть обуслов-
лено снижением содержания макро-
фагов в БАЛ. У инфицированных мы-
шей группы 4 в этот период сохраня-
лось повышение ФИ, а ФЧ и АПФА
соответствовали показателям груп-
пы 7.
В данной работе определяли кон-
центрацию клеток, содержащих ре-
цептор CD11b (Mac-1, CR3), который,
помимо рецепторной функции, выпол-
няет роль молекулы межклеточной
адгезии [9]. Он принимает непосред-
ственное участие в процессе мигра-
ции клетки, клеточно-опосредованной
цитотоксичности, фагоцитозе частиц,
опсонизированных iC3b, хемотаксисе
и активации клеток. Рецептор CD11b
опосредует взаимодействии бронхо-
альвеолярных клеток друг с другом,
количество которых на мембране аль-
веолярных макрофагов может варьи-
ровать при разных патологических
процессах [10]. Запуск Fc-опосре-
дованной цитотоксичности возможен
только после активации рецепторов
адгезии CD11b, которые являются
254 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
ыппурГ
хынтовиж
fospuorG
slamina
илетазакоП
secidnI
-орицифниеН
ишымеыннав
)ьлортнок(
detcefni-noN
)lortnoc(ecim
ишымеыннаворицифнИ
ecimdetcefnI
иктусе-7
7 ht yad
иктусе-41
41 ht yad
1
%,ИФ
%,IP *4,5±1,48 *5,5±0,19 # *5,5±3,78
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP *3,0±1,5 *4,0±3,7 # *4,0±7,6
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 40,0±66,0 *50,0±9,0 # *50,0±28,0
2
%,ИФ
%,IP 5,4±2,57 *8,4±1,08 6,4±8,57
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP *3,0±8,4 *3,0±4,5 *43,0±6,5
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 40,0±56,0 *50,0±67,0 # *30,0±25,0
3
%,ИФ
%,IP 3,4±1,27 5,4±7,57 *3,5±7,88
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP 3,0±9,3 *3,0±1,5 *3,0±2,5
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 40,0±66,0 40,0±76,0 # *30,0±54,0
4
%,ИФ
%,IP 1,4±3,86 0,5±2,48 *6,4±8,77
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP 2,0±6,3 *3,0±6,4 3,0±2,4
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 40,0±17,0 *50,0±18,0 # 730,0±26,0
5
%,ИФ
%,IP 2,4±1,17 5,4±9,57 -
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP 2,0±2,3 *3,0±0,5 -
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 840,0±86,0 *30,0±5,0 -
6
%,ИФ
%,IP 4,4±8,37 7,4±1,87 -
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP 2,0±5,3 *3,0±8,4 -
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 50,0±17,0 30,0±45,0 -
7
еынткатнИ
еынтовиж
tcatnI
slamina
%,ИФ
%,IP 0,4±1,86 - -
.де.сба,ЧФ
stinu.sba,NP 2,0±4,3 - -
,МА × 01 6 лм/лк
,MA × 01 6 lm/sllec 40,0±56,0 - -
Рис. 4. Абсолютный показатель фагоцитарной актив-
ности альвеолярных макрофагов у мышей до и после
инфицирования вирусом гриппа А/Виктория: – до
инфицирования; – на 7-е сутки после инфициро-
вания; – на 14-е сутки после инфицирования.
Различия значимы по сравнению с: * – интактным
контролем (группа 7); # – группой 6 на 7-е сутки после
инфицирования (p < 0,05).
Fig. 4. Absolute index of phagocytic activity of alveolar
macrophages in mice prior to and after infection with influ-
enza virus A/Victoria: – prior to infection; – to the 7th day
after infection; – to the 14th day after infection. The differ-
ences are significant if compared with: * – intact control
(group 7); # – group 6 to the 7th day after infection (p < 0.05).
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
Группы животных Groups of animals
одновременно и рецепторами адгезии комплемен-
та, связывающего С3-компонент комплемента [9].
Содержание CD11b+-клеток в БАЛ у контроль-
ных мышей групп 1–6 до инфицирования вирусом
значимо не отличается от данного показателя ин-
тактного контроля (рис. 5). Средняя интенсивность
флуоресценции (СИФ) в контроле группы 1 на 65%
была выше значений интактного контроля (рис. 6).
Такое повышение СИФ можно объяснить увеличе-
нием числа рецепторов на клетках БАЛ, что позво-
лило клеткам животных этих групп эффективнее
реагировать на патоген при инфицировании живот-
ных.
Так, при исследовании содержания CD11b+-кле-
ток и СИФ на 7-е сутки после инфицирования ле-
тальной дозой вируса гриппа у мышей групп 1–4 в
БАЛ наблюдали увеличение концентрации этих
клеток по сравнению с интактным контролем
(рис. 5, 6). Это может быть связано с повышенной
напряженностью фагоцитарной активности в про-
цессе формирования иммунного ответа. У инфи-
цированных мышей групп 5 и 6 на 7-е сутки коли-
чество CD11b+-клеток в БАЛ было ниже, а СИФ
выше, чем в интактном контроле, что может быть
связано с гибелью фагоцитов и компенсаторным
увеличением количества рецепторов адгезии на
альвеолярных макрофагах при формировании
иммунной защиты.
На 14-е сутки после инфицирования гриппом у
мышей группы 1 количество CD11b+-клеток и СИФ
в БАЛ превышали показатели интактного конт-
роля. В группе 2 содержание CD11b+-клеток в БАЛ
инфицированных животных было таким, как и до
инфицирования, а СИФ в 2 раза была выше интакт-
ного контроля. Количество CD11b+-клеток у инфи-
of macrophages were significantly higher (p < 0.05)
than the control values. These changes may testify to
activation of reparation processes, since the cells of
MPS contribute not only to elimination of pathogens in
an organism, but to removal of cell remnants, left after
their death due to viral expansion. In the groups 2 and
3 the indices of PN and PI in infected animals in this
observation period exceeded the group control indices
(p < 0.05), however, the total index of phagocytic
activity of alveolar macrophages was not significantly
differed from the indices of the intact animals, that
may be stipulated by reduced content of macrophages
in the BAL. In the infected mice of the group 4 an in-
creased PI was preserved in this period, but PN and
AIPA were the same as in the group 7.
Performing this research we established concent-
ration of the cells, containing CD11b receptor (Mac-1,
CR3), which along with receptor function fulfilled the
role of molecule of cell-cell adhesion [9]. It is directly
involved to cell migration, cell-mediated cytotoxicity,
phagocytosis of iC3b opsonized particles, chemotaxis
and cell activation. CD11b receptor mediates interaction
of bronchoalveolar cells, the receptors number on the
membrane of alveolar macrophages may vary at
different pathologies [10]. Initiation of Fc-mediated
cytotoxicity is possible only after activation of CD11b
adhesion receptors, which also are the complement
receptors, binding C3 component of the complement
[9].
The content of CD11b+ cells in BAL in control mice
of the groups 1–6 prior to infection did not significantly
differ from this index of the intact control (Fig. 5).
Mean fluorescent intensity (MFI) in the group 1 control
was by 65% higher than intact control values (Fig. 6).
This increasing of MFI may be explained by the increa-
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
255
цированных мышей группы 3 было ниже, а СИФ
выше, чем в интактном контроле, в группе 4
количество CD11b+-клеток у инфицированных жи-
вотных совпадало с показателем контрольных, а
СИФ превышала значения интактного контроля
(рис. 5, 6).
Таким образом, у инфицированных мышей
групп 5 и 6 отмечены развитие выраженного воспа-
лительного процесса в дыхательных путях и фор-
мирование вторичного иммунодефицита за счёт
снижения активности альвеолярных макрофагов
(см. рис. 4). У животных групп 1–3, которые по-
лучали кЛККЧ или его компоненты за 6 месяцев
до инфицирования, деструктивные изменения в
респираторном тракте были менее выражены, а
активность альвеолярных макрофагов, относящих-
ся к факторам неспецифической защиты, не отли-
чалась от интактного контроля. Наибольший за-
щитный потенциал был отмечен у животных, пре-
вентивно получавших нефракционированный
кЛККЧ до инфицирования вирусом гриппа.
В работе Tumitanу A.R. et al. указано, что у
мышей Balb/c, используемых в эксперименте, пре-
sed number of receptors in BAL cells, that could enable
the cells from animals of these groups to reveal patho-
gen more rapidly and effectively after infection intro-
duction.
In particular, assessment of the content of CD11b+
cells and MFI to the 7th day after infection introduction
with lethal doze of influenza virus in BAL of mice of
the groups 1–4 in revealed the increased concentration
of these cells if compared with the intact control (Fig.
5, 6). This may be associated with higher phagocytic
activity during immune response formation. In the
infected mice of the groups 5 and 6 to the 7th day the
number of CD11b+ cells in BAL was lower, but MFI
was higher than in the intact control that may be
associated with death of phagocytes and compensatory
increase of adhesion receptors number in alveolar mac-
rophages during immune responce.
To the 14th day after influenza virus infection intro-
duction in mice of the group 1 a number of CD11b+
cells and MFI in BAL exceeded the indices of intact
control. In the group 2 the content of CD11b+ cells in
BAL was the same as prior to infectioning, but MFI
was 2 times higher than the one of the intact control.
Рис. 5. Количество CD11b+-клеток в БАЛ у мышей до и
после инфицирования вирусом гриппа А/Виктория: –
до инфицирования; – на 7-е сутки после инфициро-
вания; – на 14-е сутки после инфицирования. Раз-
личия значимы по сравнению с: * – интактным контро-
лем (группа 7); # – группой 6 на 7-е сутки после инфици-
рования (p < 0,05).
Fig. 5. Number of CD11b+-cells in BAL of mice prior to and
after infection with influenza virus A/Victoria: – prior to
infection; – to the 7th day after infection; – to the 14th day
after infection. The differences are significant if compared
with: * – intact control (group 7); # – group 6 to the 7th day
after infection (p < 0.05).
С
од
ер
жа
ни
е
кл
ет
ок
,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
Группы животных Groups of animals
С
И
Ф
, у
сл
. е
д
M
FI
, a
rb
. u
ni
ts
Группы животных Groups of animals
Рис. 6. Средняя интенсивность флуоресценции
CD11b+-клеток в БАЛ мышей до и после инфицирования
вирусом гриппа А/Виктория: – до инфицирования; –
на 7-е сутки после инфицирования; – на 14-е сутки
после инфицирования. Различия достоверны по срав-
нению с: * – интактным контролем (группа 7); # – группой
6 на 7-е сутки после инфицирования (p < 0,05).
Fig. 6. Mean fluorescent intensity of CD11b+ cells in BAL of
mice prior to and after infection with influenza virus A/Victo-
ria: – prior to infection; – to the 7th day after infection; –
to the 14th day after infection. The differences are signifi-
cant if compared with: * – intact control (group 7); # – group
6 to the 7th day after infection (p < 0.05).
256 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
обладают макрофаги с фенотипом М2 [22], которые
в естественных для них условиях обладают более
высокой миграционной активностью по сравнению
с клетками фенотипа М1, ответственными за
развитие воспалительного процесса за счёт прямо-
го цитотоксического действия и продукции провос-
палительных цитокинов и хемокинов [21]. Макро-
фаги с фенотипом М2 преимущественно отвечают
за фагоцитирование фрагментов погибших клеток,
что определяет их центральную роль в процессах
ремоделирования и восстановления повреждённых
тканей [19, 22]. На основании полученных нами
данных установлено, что на 14-е сутки после инфи-
цирования у мышей группы 1, которым вводили
нефракционированный кЛККЧ, в большей степени,
чем в группах мышей, получавших отдельно плаз-
му или ядросодержащие клетки кЛККЧ, отмеча-
лась активация макрофагов, функционально пред-
назначенных для регулирования воспалительного
ответа и восстановления иммунного гомеостаза.
Снижение экспрессии CD11b на клетках БАЛ,
принимающих участие в иммунном ответе, корре-
лирует с интенсивностью воспалительного процес-
са в лёгких [6], наиболее выраженном у инфициро-
ванных мышей групп 5 и 6. Повышение степени
экспрессии CD11b у инфицированных животных,
которым предварительно были введены кЛККЧ
или его компоненты, имеет прямую зависимость
с повышением фагоцитарной активности альвео-
лярных макрофагов.
Известно, что на первых этапах внедрения пато-
гена ведущую роль играют неспецифические фак-
торы иммунологической защиты [11, 15]. Поэтому
перспективным направлением в медицине является
разработка средств, не только создающих иммуно-
логический барьер на слизистых оболочках после
интраназального введения, но и повышающих ак-
тивность альвеолярных макрофагов, ответствен-
ных за формирование местной воспалительной
реакции в дыхательных путях. На основании полу-
ченных данных можно заключить, что превентивно
введенный нефракционированный кЛККЧ в боль-
шей степени, чем его отдельные компоненты, влия-
ет на выраженность воспалительной реакции, мо-
дулирует фагоцитарную активность альвеолярных
макрофагов, повышая экспрессию рецепторов ад-
гезии на них, обеспечивает формирование адек-
ватного иммунного ответа на патоген. Превентив-
ное введение кЛККЧ препятствовало развитию
вторичного иммунодефицита у экспериментальных
животных за счёт регулирования активности факто-
ров неспецифической защиты (альвеолярных мак-
рофагов).
The number of CD11b+ cells in mice of the group 3
was lower and MFI was higher than in the intact control,
in the group 4 a number of CD11b+ cells in infected
mice coincided with that in the control animals, and
MFI exceeded the intact values (Fig. 5, 6).
Thus, the mice of the groups 5 and 6 exhibited a
significant inflammatory process in respiratory pas-
sages and formed secondary immunodeficiency due
to reduction of alveolar macrophage activity (Fig. 4).
In the animals of the groups 1–3, which were treated
with cHCBL or its components 6 months prior to
infectioning, the destructive changes in respiratory tract
were less expressed and activity of alveolar macro-
phages, as a factor of non-specific protection did not
differ from the intact control. The highest protective
potential was revealed in the animals, which were
treated with unfractionated cHCBL prior to infection-
ing with influenza virus.
Tumitany et al. showed that experimental Balb/c
mice, had the prevailed content of macrophages with
M2 phenotype [22], which under natural conditions had
higher migration activity if compared with the cells of
M1 phenotype, responsible for development of inflam-
matory process due to a direct cytotoxic action and
production of anti-inflammatory cytokines and chemo-
kines [21]. Macrophages with M2 phenotype are re-
sponsible mainly for elimination of fragments of died
cells, that determine their central role in remodelling
and regeneration of injured tissues [19, 22]. Our results
showed that by the 14th day after infectioning in the
mice of the group 1 treated with unfractionated
cHCBL there was revealed activation of macrophages
which were functionally targeted for the control of
inflammatory response and immune balance resto-
ration and this was in a greater extent than in the
groups of mice, treated with solely plasma or nucleated
cells of cHCBL.
Reduction of CD11b expression in BAL cells, taking
part in immune response correlated with intensity of
inflammation in lungs which was the most expressed
in the infected mice of the groups 5 and 6. The increa-
sing of CD11b expression in infected animals pretrea-
ted with cHCBL or its components depended directly
on the increasing of phagocytic activity of alveolar
macrophages.
It is known that early stages of pathogen introduc-
tion are characterised with activity of non-specific fac-
tors of immunological defense [11, 15]. Therefore the
development of the medicines, which provide not only
an immune barrier in mucous membranes after intra-
nasal administration, but also increase the activity of
alveolar macrophages responsible for the formation of
local inflammatory response in respiratory passages is
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
257
Литература
1. Александров М.Г., Кудрявицкий А.И., Румянцева Е.Г. и др.
Метод вычисления абсолютных показателей фагоцито-
за // Лабораторное дело. – 1988. – №9. – С. 30–32.
2. Гольцев А.Н., Волина В.В., Онасенко Е.С. и др. Инфициро-
вание животных вирусом гриппа после предваритель-
ного введения препарата «Криоцелл-гемокорд». Сооб-
щение III. Изучение морфофункционального состояния
лёгких мышей // Проблемы криобиологии. – 2010. – Т. 20,
№3. – С. 318–326.
3. Гольцев А.Н., Калиниченко Т.А. Пуповинная кордовая кровь
человека как источник гемопоэтических клеток для кли-
нического применения. Часть 3. Криоконсервирование //
Проблемы криобиологии. – 1999. – №1. – С. 45–56.
4. Грипп: этиология, профилактика и лечение: Сб. статей и
тезисов. – СПб, 2011. – 72с.
5. Игонин А.А., Кукес В.Г., Сурнакова Н.Е. Иммуномодули-
рующий эффект антибактериальных препаратов у боль-
ных внебольничной пневмонией (ВП) // Клин. микробиоло-
гия и антимикробная химиотерапия. – 2002. – Т. 4,
Прил. 1. – С. 24–25.
6. Кожина О.Ю., Порожан Е.А. Роль моноцитарно-фагоцитар-
ной системы в формировании противовирусной резис-
тентности после введения компонентов криоконсерви-
рованного лейкоконцентрата кордовой крови // Проблемы
криобиологии. – 2012. – Т. 22, №2. – С. 215.
7. Лямина С.В., Веденикин Т.Ю., Круглов С.В. и др. Особен-
ности фагоцитарной и миграционной активности альвео-
лярных макрофагов М1 и М2 фенотипов // Фундаменталь-
ные исследования. – 2011. – № 11. – С. 536–539.
8. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др.
Лабораторные методы исследования: Справочник / Под
ред. В.В. Меньшикова – М.: Медицина, 1987. – 368 с.
9. Нестерова И. В., Колесникова Н. В., Клещенко Е. И. и др.
Варианты трансформации фенотипа нейтрофильных гра-
нулоцитов CD64+CD32+CD11b+ у новорожденных с различ-
ными инфекционно-воспалительными заболеваниями //
Цитокины и воспаление. – 2011. – Т.10, № 4. – С. 61–65.
10. Плехова Н. Г., Сомова Л. М. Роль моноцитов/макрофагов
в патогенезе вирусных инфекций // Тихоокеанский мед.
журнал. – 2010. – №3. – С. 5–9.
11. Попов Н. Н., Романова Е. А. Молекулярные и клеточные
механизмы противовирусного иммунитета // Вісник ХНУ. –
2002. – № 546. – C. 69–73.
12.Протасова С.Ф., Леонтьева Л.И., Козлова Н.М. Новые пре-
параты на основе интерферонов против вирусов гриппа,
включая А (H5N1) // Цитокины и воспаление. – 2007. –
Т. 6, №3. – С. 20–26.
13.Самсонова М. В. Диагностические возможности бронхо-
альвеолярного лаважа // Атмосфера. Пульмонология и
аллергология. – 2006. – №4. – С. 8–12.
14.Совалкин В.И., Алтынова Е. И., Нестерова К.И., Ломбро-
зо А.В. Роль изучения факторов местного иммунитета
Выводы
1. Превентивное интраназальное введение
кЛККЧ или его компонентов модифицирует функ-
циональную активность альвеолярных макрофагов.
2. Применение нефракционированного кЛККЧ
в большей степени, чем его компонентов, повы-
шает функциональную активность альвеолярных
макрофагов в условиях развития вирусной инфек-
ции.
of great importance. Basing on the obtained results we
may conclude that preventively introduced unfractiona-
ted cHCBL affects the intensity of inflammatory res-
ponse, modulates phagocytic activity of alveolar macro-
phages by increasing the expression of their adhesion
receptors, provides the formation of adequate immune
response to pathogen in a greater extent than its indi-
vidual components. Preventive introduction of cHCBL
inhibited development of secondary immunodeficiency
in experimental animals due to the triggering of non-
specific protection factors (alveolar macrophages).
Conclusions
1. Preventive intranasal introduction of cHCBL or
its components modifies functional activity of alveolar
macrophages.
2. Application of unfractionated cHCBL increases
functional activity of alveolar macrophages during
development of viral infection in a greater extent than
its individual components.
References
1. Aleksandrov M.G., Kudryavitskiy A.I., Rumyantseva E.G. et al.
Calculation method of absolute indices of phagocytosis //
Laboratornoe Delo. – 1988. – N9. – P. 30–32.
2. Goltsev A.N., Volina V.V., Onasenko E.S. et al. Infection of
animals with the influenza virus after a preliminary administra-
tion of preparation "Cryocell-Haemocord". Report III. Study of
morphofunctional state of mice lungs // Problems of Cryobio-
logy. – 2010. – Vol. 20, N3. – P. 318–326.
3. Goltsev A.N., Kalinichenko T.A. Umbilical human cord blood as
a source of hemopoietic cells for clinical application. Part III.
Cryopreservation // Problems of Cryobiology. – 1999. – N1. –
P. 45–46.
4. Influenza: etiology, prevention, treatment: Papers and abs-
tracts. – St. Petersburg, 2011. – 72 p.
5. Igonin A.A., Kukes V.G., Surnakova N.E. Immunomodulating
effect of antibacterial preparations in patients with community-
acquired pneumonia (CAP) // Klin. Mikrobiologiya i Antimik-
robnaya Khimioterapiya. – 2002. – Vol.4 (Suppl.1). – P. 24–25.
6. Kozhyna O.Yu., Porozhan E.A. Role of monocyte-phagocytic
system in formation of antiviral resistance after introduction
of cryopreserved cord blood leukoconcentrate components //
Problems of Cryobiology. – 2012. – Vol. 22, N2. – P. 215.
7. Lyamina S.V., Vedenikin T.Yu., Kruglov S.V. et al. Peculiarities
of phagocytic and migrational activity of alveolar macrophages
of M1 and M2 phenotypes // Fundamentalnye Issledovaniya. –
2011. – N11. – P. 536–539.
8. Men'shikov V.V., Delektorskaya L.N., Zolotnitskaya R.P. et al.
Laboratory research methods: Manual / Ed. by V.V. Men'shikov.
Moscow: Meditsina, 1987. – 368 p.
9. Nesterova I.V., Kolesnikova N.V., Kleschenko E.I. et al. Trans-
formation of neutrophil granulocytes phenotype to CD64+CD32+
CD11b+ in newborns with different infectious inflammatory di-
seases // Tsytokiny i Vospalenie. – 2011. – Vol. 10, N4. – P. 61–65.
10. Plekhova N.G., Somova L.M. Role of monocytes/macrophages
in pathogenesis of viral infections // Tikhookeanskiy Med.
Zhurnal. – 2010. – N3. – P.5–9.
11. Popov N.N., Romanova E.A. Molecular and cell mechanisms
of antiviral immunity // Visnyk KhNU. – 2002. – N546. – P. 69–73.
258 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
при патологии дыхательных путей // Фундамент. иссле-
дования. – 2011. – № 10. – С. 151–154.
15.Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. – М.: Медицина,
1978. – 124с.
16. Цуцаева А. А., Грищенко В. И., Кудокоцева О. В., Проко-
пюк О.С. Заготовка, криоконсервирование и клиническое
применение гемопоэтических клеток кордовой крови
человека: Метод. рекомендации. – Харьков, 2000. – 20 c.
17.Патент №31847А, МПК5 А01N1/02. Україна. Спосіб кріокон-
сервування кровотворних клітин кордової крові / А.О. Цу-
цаєва, В.І. Грищенко, О.В. Кудокоцева та ін. Заявл.
05.11.1998; опубл. 15.12.2000, Бюл. №7.
18.Crapo D., Harmsen A.G., Sharman M.P., Musson R.A. Pulmo-
nary immunobiology and inflammation in pulmonary diseases //
Am. J. Respir. Crit. Care Med. – 2000. – Vol. 162, №5. –
P. 1983–1986.
19.Lasbury M. E., Durant P. J., Lee S. H. Numbers of alveolar
macrophages are increased during Pneumocystis pneumonia
in mice // J. Eukariot. Microbiol. – 2003. – Vol. 50 (Suppl.). –
P. 637–638.
20.Martinez F. O., Sica A., Mantovani A. et al. Macrophage activa-
tion and polarization // Front. Biosci. – 2008. – Vol. 13. –
P. 453–461.
21.Stangel M., Joly E., Scolding N. J., Compston D.A.S. Normal
polyclonal immunoglobulins ('IVIg') inhibit microglial phagocy-
tosis in vitro // J. Neuroimmunol. – 2000. – Vol. 106, №1. –
P. 137–144.
22.Tumitan A. R., Monnazzi L. G., Ghiraldi F. R. et al. Pattern of
macrophage activation in yersinia-resistant and yersinia-
susceptible strains of mice // Microbiol. Immunol. – 2007. –
Vol. 51, №10. – Р. 1021–1028.
12. Protasova S.F., Leont'eva L.I., Kozlova N.M. New preparations
based on interferons against influenza virus, including A
(H5N1) // Tsitokiny i Vospalenie. – 2007. – Vol.6, N3. – P. 20–
26.
13.Samsonova M.V. Diagnostic features of bronchoalveolar
lavage // Atmosfera. Pulmonologiya i Allergologiya. – 2006. –
N4. – P. 8–12.
14. Sovalkin V.I., Altynova E.I., Nesterova K.I., Lombrozo A.V.
Role of investigation of tissue immunity factors at respiratory
tract pathology // Fundament. Issledovaniya. – 2011. – N10. –
P. 151–154.
15. Uchitel' I.Ya. Macrophages in immunity. – Moscow: Meditsina,
1978. – 124 p.
16. Tsutsayeva A.O., Grischenko V.I., Kudokotseva O.V., Proko-
pyuk O.S. Procurement, cryopreservation and clinical appli-
cation of hemopoietic cells of human cord blood: Methodical
Recommendations. – Kharkiv, 2000. – 20 p.
17.Patent N31847A Ukraine, IPC A01N1/02. Method of
cryopreservation of hemopoietic cells of cord blood / A.O.
Tsutsayeva, V.I. Grischenko, O.V. Kudokotseva et al. Appl.
05.11.1198. Publ. 15.12.2000. Bul. N7.
18.Crapo D., Harmsen A.G., Sharman M.P., Musson R.A. Pulmo–
nary immunobiology and inflammation in pulmonary diseases //
Am. J. Respir. Crit. Care Med. – 2000. – Vol. 162, N5. – P. 1983–
1986.
19.Lasbury M. E., Durant P. J., Lee S. H. Numbers of alveolar
macrophages are increased during Pneumocystis pneumonia
in mice // J. Eukariot. Microbiol. – 2003. – Vol. 50 (Suppl.). –
P. 637–638.
20.Martinez F. O., Sica A., Mantovani A. et al. Macrophage activa–
tion and polarization // Front. Biosci. – 2008. – Vol. 13. –
P. 453–461.
21.Stangel M., Joly E., Scolding N. J., Compston D.A.S. Normal
polyclonal immunoglobulins ('IVIg') inhibit microglial phagocy–
tosis in vitro // J. Neuroimmunol. – 2000. – Vol. 106, N1. –
P. 137–144.
22.Tumitan A. R., Monnazzi L. G., Ghiraldi F. R. et al. Pattern of
macrophage activation in yersinia-resistant and yersinia-
susceptible strains of mice // Microbiol. Immunol. – 2007. –
Vol. 51, N10. – Р. 1021–1028.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
259
|