Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68865 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения / Е.В. Бровко, С.С. Черноусова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 1. — С. 73-76. — Бібліогр.: 5 назв. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-68865 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-688652014-10-01T03:01:48Z Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения Бровко, Е.В. Черноусова, С.С. Краткие сообщения 2008 Article Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения / Е.В. Бровко, С.С. Черноусова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 1. — С. 73-76. — Бібліогр.: 5 назв. — рос., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68865 615.361.018.5.013.8.014.41 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Краткие сообщения Краткие сообщения |
| spellingShingle |
Краткие сообщения Краткие сообщения Бровко, Е.В. Черноусова, С.С. Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Бровко, Е.В. Черноусова, С.С. |
| author_facet |
Бровко, Е.В. Черноусова, С.С. |
| author_sort |
Бровко, Е.В. |
| title |
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения |
| title_short |
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения |
| title_full |
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения |
| title_fullStr |
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения |
| title_full_unstemmed |
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения |
| title_sort |
функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68865 |
| citation_txt |
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток кордовой крови человека в зависимости от условий предварительного гипотермического хранения / Е.В. Бровко, С.С. Черноусова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 1. — С. 73-76. — Бібліогр.: 5 назв. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT brovkoev funkcionalʹnyeharakteristikikriokonservirovannyhkletokkordovojkrovičelovekavzavisimostiotuslovijpredvaritelʹnogogipotermičeskogohraneniâ AT černousovass funkcionalʹnyeharakteristikikriokonservirovannyhkletokkordovojkrovičelovekavzavisimostiotuslovijpredvaritelʹnogogipotermičeskogohraneniâ |
| first_indexed |
2025-07-05T18:37:25Z |
| last_indexed |
2025-07-05T18:37:25Z |
| _version_ |
1836833199266725888 |
| fulltext |
73 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
УДК 615.361.018.5.013.8.014.41
Е.В. БРОВКО*, С.С. ЧЕРНОУСОВА
Функциональные характеристики криоконсервированных клеток
кордовой крови человека в зависимости от условий
предварительного гипотермического хранения
UDC 615.361.018.5.013.8.014.41
E.V. BROVKO*, S.S. CHERNOUSOVA
Functional Characteristics of Cryopreserved Human Cord Blood Cells
Depending on Preliminary Hypothermic Storage Conditions
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-31-26, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyaslavskaya
str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 3126, fax: +380 57
373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
В настоящее время в медицине широко при-
меняется кордовая кровь человека (ККЧ), которая
вследствие простоты и дешевизны заготовки
является альтернативным костному мозгу и крови
взрослого донора источником получения необ-
ходимых компонентов (стволовых кроветворных
клеток, ядросодержащих клеток, плазмы и т.д.).
На базе ИПК и К НАН Украины разработан метод
получения и криоконсервирования препарата
«Гемокорд» без применения традиционных крио-
протекторов, в его состав входят ядросодержащие
клетки ККЧ, взвешенные в аутологичной плазме
[4]. Технологический процесс криоконсервирования
нативного препарата обеспечивает максимальное
сохранение криоустойчивости его компонентов.
Нативный препарат сразу же после приготовления
может не подвергаться криоконсервированию.
Цель работы – изучение функциональных ха-
рактеристик криоконсервированных ядросодер-
жащих клеток препарата в зависимости от условий
его предварительного гипотермического хранения.
Материалы и методы
Объектом исследования служили образцы пре-
парата «Гемокорд», которые хранились 24 и 48 ч в
пластиковых контейнерах в холодильнике при
температуре 2–4°С. Контролем суспензий после
хранения в условиях гипотермии 24 и 48 ч были
нативные суспензии препарата, контролем об-
разцов, хранившихся 48 ч, – нативные суспензии и
суспензии после 24 ч хранения. На каждом этапе
гипотермического хранения образцы препарата
криоконсервировали по двухэтапной программе без
традиционных криопротекторов [5] и хранили при
температуре –196°С. Материал отогревали на
водяной бане при температуре 40–41°С.
Для контроля образцов препарата, криоконсер-
вированных сразу после приготовления, использо-
вали нативные суспензии. Показатели препарата,
The human cord blood (HCB), being now widely
applied in medicine, due to its simplicity and low price
for procurement is an alternative source to bone marrow
and blood of adult donor in obtaining the necessary
components ( hemopoietic stem cells, nucleated cells,
plasm etc.). The method for the “Hemocord” prepara-
tion procurement and cryopreservation with no traditio-
nal cryoprotectant use, comprising nucleated HCB cells,
suspended in autologous plasm, has been designed at
the base of the Institute for Problems of Cryobiology
and Cryomedicine of the National Academy of
Sciences of Ukraine [4]. Technological process of cryo-
preservation for a native preparation provides the maxi-
mum cryoresistance for its components. The native
preparation may not be subjected to cryopreservation
right after preparing.
This research was aimed to study the functional
characteristics of cryopreserved nucleated cells of the
preparation depending on its preliminary hypothermic
storage conditions.
Materials and methods
Samples of “Hemocord” preparations stored for
24 and 48 hrs in plastic containers in refrigerator at 2–
4°C served as the investigation object. The control for
suspensions after storing under hypothermia for 24 and
48 hrs were the native suspensions of preparation, the
control for samples, stored for 48 hrs were the native
suspensions and those after 24 hrs storage. At each
step of hypothermic storage the preparation samples
were cryopreserved according to the two-step program
with no traditional cryoprotectants [5] and stored at
–196°C. The material was thawed on water bath at
40–41°C.
For the control of preparation samples, cryopre-
served just after preparing, we used the native suspen-
sions. The indices of the preparation, cryopreserved
after 24 hrs’ hypothermic storage were compared with
those of the suspensions as follows: native; stored for
74
криоконсервированного после 24 ч гипотермичес-
кого хранения, сравнивали с показателями суспен-
зий: нативных; хранившихся 24 ч при 4°С криокон-
сервированных сразу после приготовления препара-
та. Контролем для образцов препарата, криоконсер-
вированных после 48 ч гипотермического хранения,
были суспензии: нативные; после предварительного
гипотермического хранения 24 и 48 ч; криоконсер-
вированные после приготовления и после гипотер-
мического хранения 24 ч.
В образцах определяли количество ядросодер-
жащих клеток и относительное количество сохран-
ных клеток [2]. Фагоцитарную активность ядросо-
держащих клеток исследовали через 1 ч инкубации
клеток с 18-часовой культурой S. aureus, убитой
нагреванием [1]. В окрашенных азур II-эозином
мазках среди 200 ядросодержащих клеток опреде-
ляли фагоцитарный индекс (относительное коли-
чество клеток, находящихся на стадии поглощения
микроорганизмов) и фагоцитарное число. Готов-
ность фагоцитирующих клеток к завершенному
фагоцитозу определяли с помощью индуцирован-
ного теста воcстановления нитросинего тетразо-
лия (НСТ-тест). Об активности метаболических
процессов, обеспечивающих внутриклеточную
выработку перекиси водорода, судили по количест-
ву гранул внутриклеточного диформазана [3].
Результаты и обсуждение
Установлено, что гипотермическое хранение
образцов нативного препарата «Гемокорд» в
течение 48 ч и последующее его криоконсервиро-
вание достоверно не влияли на количество ядросо-
держащих клеток в суспензии по отношению к их
содержанию в нативных образцах (таблица).
На этапах гипотермического хранения натив-
ных образцов препарата «Гемокорд» относитель-
ное количество сохранных клеток не изменялось,
однако после криоконсервирования препарата
после 24 ч его предварительного хранения данный
показатель достоверно снижался. При криоконсер-
вировании препарата после его предварительного
гипотермического хранения в течение 48 ч относи-
тельное количество сохранных клеток было досто-
верно ниже данного показателя для препарата,
криоконсервированного после 24 ч гипотермичес-
кого хранения (таблица).
При изучении функциональной активности
ядросодержащих клеток показано, что более 50%
клеток нативной суспензии обладали способнос-
тью к фагоцитозу. Фагоцитарный индекс в натив-
ных образцах достоверно снижался после гипотер-
мического хранения в течение 48 ч. После отогрева
криоконсервированных образцов, хранившихся в
условиях гипотермии в течение 24 и 48 ч, отмечено
достоверное снижение фагоцитарного индекса
(таблица).
24 hrs at 4°C; cryopreserved just after preparation
preparing. The control for the preparation samples,
cryopreserved after 48 hrs’ hypothermic storage were
the following suspensions: native; after 24 and 48 hrs’
preliminary hypothermic storage; cryopreserved just
after preparing and after 24 hrs’ hypothermic storage.
The amount of nucleated cells and a relative number
of preserved cells were determined in the samples [2].
Phagocyte activity of nucleated cells was studied 1 hr
later cell incubation with 18 hrs heat-killed S. aureus
culture [1]. In the azur II-eosin-stained smears among
200 nucleated cells we determined a phagocyte index
(a relative number of cells at the stage of micro-
organism scavenging) and a phagocyte number. The
promptitude of phagocytising cells to a completed pha-
gocytosis was determined with an induced test of
nitroblue tetrasolium recovery (NBT-test). The activity
of metabolic processes, providing an intracellular
production of peroxide was judged by the number of
intracellular diformazan granules [3].
Results and discussion
Hypothermic storage of samples of “Hemocord”
native preparation for 48 hrs and its following cryopre-
servation were established as not affecting the amount
of nucleated cells in suspension in respect of their
content in native samples (Table).
At the stage of hypothermic storage of native samp-
les of “Hemocord” preparation a relative number of
preserved cells remained unchanged, but after the
preparation cryopreservation following 24 hrs’ preli-
minary storage this index was statistically and signifi-
cantly reduced. Under preparation cryopreservation
after its preliminary 48 hrs’ hypothermic storage a rela-
tive number of preserved cells was statistically and
significantly lower than this index for the preparation,
cryopreserved after 24 hrs’ hypothermic storage
(Table).
When studying a functional activity of nucleated
cells more than 50% of cells of native suspension were
shown as capable for phagocytosis. Phagocyte index
in native samples statistically and significantly decre-
ased after 48 hrs’ hypothermic storage. After thawing
of the cryopreserved samples, stored under hypother-
mia for 24–48 hrs a statistically significant reduction
of phagocyte index was noted (Table).
Phagocyte number statistically and significantly
reduced even after 24 hrs’ hypothermic storage of
native suspensions of the preparation. When cryo-
preserving both native and stored for 24 and 48 hrs
preparations at 4°C, there was a statistically significant
decrease in phagocyte number compared to this index
for native and cryopreserved suspensions (Table).
A relative number of NBT-positive cells was
statistically and significantly reduced both in frozen-
thawed native suspensions and after their 24 and 48 hrs’
preliminary hypothermic storage (Table).
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
75 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
Количество сохранных, ядросодержащих клеток и показатели их функциональной активности в образцах
препарата «Гемокорд» на этапах гипотермического хранения до криоконсервирования
и после отогрева криоконсервированных суспензий
The number of preserved nucleated cells and indices of their functional activity in samples of “Hemocord” preparation
at the stages of hypothermic storage prior to cryopreservation and after cryopreserved suspension thawing
Примечания: Н – нативный образец; К – криоконсервированный нативный образец; 1 – достоверные различия (р<0,05) по
сравнению с Н0;
2 – достоверные различия (р<0,05) по сравнению с H24;
3 – достоверные различия (р<0,05) по сравнению с
Н48;
4 – достоверные различия (р<0,05) по сравнению с К0;
5 – достоверные различия (р<0,05) по сравнению с К24.
Notes: N is a native sample; C is a cryopreserved native sample; 1 – statistically significant differences (p<0.05) compared to H0;
2 –
statistically significant differences (p<0.05) compared to H24;
3 – statistically significant differences (p<0.05) compared to H48;
4 –
statistically significant differences (p<0.05) compared to C0;
5 – statistically significant differences (p<0.05) compared to C24.
Number of the preparation’s nucleated cells was
shown as unchanged under hypothermic storage and
after cryopreservation. A relative number of preserved
cells reduced under preparation cryopreservation after
24-hrs’ hypothermia. The indices of nucleated cells’
phagocyte activity manifested a different sensitivity to
both factors of hypothermic storage and cryopre-
servation. Phagocyte index decreased after 48-hrs’
hypothermic storage but phagocyte number reduced
to the 24 hrs of hypothermic storage of native
preparation; a relative number of NBT-positive cells
of “Hemocord” preparation was unchanged at the
stages of hypothermic storage and was statistically and
significantly decreased after cryopreservation of
preparation’s native samples.
Conclusions
The data presented confirm the fact, that a hypo-
thermic storage of “Hemocord” preparation provides
a cryolability of its components. Basing on the used
methodical approaches there is possible to determine
the “optimal” terms for hypothermic storage of
“Hemocord” preparation prior to cryopreservation.
Фагоцитарное число достоверно уменьшалось
уже после 24 ч гипотермического хранения натив-
ных суспензий препарата. При криоконсервировании
нативного препарата, как и препарата, хранив-
шегося 24 и 48 ч при 4°С, достоверно уменьшалось
фагоцитарное число по сравнению с данным пока-
зателем нативных и криоконсервированных суспен-
зий (таблица).
Относительное количество НСТ-положитель-
ных клеток достоверно уменьшалось как в декон-
сервированных нативных суспензиях, так и после
24 и 48 ч их предварительного гипотермического
хранения (таблица).
Показано, что количество ядросодержащих
клеток препарата не изменялось при гипотермичес-
ком хранении и после криоконсервирования. Отно-
сительное количество сохранных клеток умень-
шалось при криоконсервировании препарата после
24 ч гипотермии. Показатели фагоцитарной актив-
ности ядросодержащих клеток проявляли разную
чувствительность к факторам гипотермического
хранения и криоконсервирования. Фагоцитарный ин-
декс уменьшился после 48 ч гипотермического
хранения, а фагоцитарное число уменьшилось к
24 ч гипотермического хранения нативного препа-
рата; относительное количество НСТ-положитель-
ных клеток препарата «Гемокорд» не изменялось
на этапах гипотермического хранения и достоверно
References
Lebedev K.A., Ponyakina I.D. Immunogram in clinical
practice.– Moscow: Nauka, 1990.– 224 p.
яиненархямерВ
одС°4ирпвоцзарбо
ч,яинаворивреснокоирк
taemitegarots'selpmaS
otnwodC°4
rh,noitavreserpoyrc
еоньлетисонтО
овтсечилок
%,котелкхыннархос
forebmunevitaleR
%,sllecdevreserp
овтсечилоК
хищажредосордя
,котелк × 01 7 лм/
detaelcunforebmuN
,sllec × 01 7 lm/
йынратицогаФ
скедни
xednietycogahP
еонратицогаФ
олсич
rebmunetycogahP
еоньлетисонтО
-ТСНовтсечилок
хыньлетижолоп
%,котелк
forebmunevitaleR
%,sllecevitisop-TBN
0
H
0
N
0
71,0±71,99 70,0±17,1 28,1±33,25 81,0±75,3 3,3±38,08
K
0
C
0
80,1±71,69 70,0±27,1 24,2±5,15 03,0±69,2 1 17,1±33,35 1
42
H
42
N
42
78,0±71,79 80,0±37,1 75,2±5,25 51,0±31,3 1 45,1±5,97
K
42
C
42
88,1±5,35 4,2,1 80,0±66,1 80,4±38,24 4,2,1 02,0±77,2 2,1 64,1±0,44 4,2,1
84
H
84
N
84
6,0±38,69 21,0±76,1 34,1±33,04 2,1 80,0±66,1 2,1 6,0±71,18
K
84
C
84
90,2±71,44 5,4,3,2,1 90,0±26,1 94,1±71,91 5,4,3,2,1 21,0±72,1 5,4,3,2,1 18,2±0,13 5,4,3,2,1
1.
76 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
снижалось после криоконсервирования нативных
образцов препарата.
Выводы
Представленные данные подтверждают, что
гипотермическое хранение препарата «Гемокорд»
обеспечивает криолабильность его компонентов.
На основе использованных методических подхо-
дов возможно определение «оптимальных» сроков
гипотермического хранения препарата «Гемокорд»
до криоконсервирования.
Литература
Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клини-
ческой практике.– М.: Наука, 1990.– 224 с.
Лабораторные методы исследования в клинике: Спра-
вочник / В.В. Меньшиков, Л.Н. Делекторская, Р.П. Золот-
ницкая и др.– М.: Медицина, 1987.– 368 с.
Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов.–
М.: Мир, 1982.– 270 с.
Цуцаєва А.О., Грищенко В.І. та інш. Заготівля, кріо-
консервування та клінічне застосування гемопоетичних
клітин кордової крові людини: Метод. рекомендації.–
Харків, 2000.– 17 с.
Патент №31847А (Україна) МПК А01№1/02. Спосіб
кріоконсервування кровотворних клітин кордової крові /
А.О. Цуцаєва, В.І. Грищенко, О.В. Кудокоцева та інш.
Заявлено 05.11.1998 р.; Опубл. 15.12.2000р., Бюл. №7.–
С. 1.10.
Поступила 20.05.2008
1.
2.
3.
4.
5.
Laboratory research methods in clinic: Reference book /
V.V. Menshikov, L.N. Delektorskaya, R.P. Zolotnitskaya et al.–
Moscow: Meditsina, 1987.– 368 p.
Loyda Z., Gossrau R., Shibler T. Histochemistry of enzymes.–
Moscow: Mir, 1982.– 270 p.
Tsutsayeva A.O., Grischenko V.I. et al. Procurement, cryopre-
servation and clinical application of human cord blood
hemopoietic cells: Methodical recommendations.– Kharkov.–
2000.– 17 p.
Patent N 31847A (Ukraine) IPC A01N1/02. Method for cord
blood hemopoietic cell cryopreservation / A.O. Tsutsayeva,
V.I. Grischenko, O.V. Kudokotseva et al. Applied 05.11.1998;
Published 15.12.2000, Bull. N7.– P.1.10.
Accepted in 20.05.2008
2.
3.
4.
5.
|