Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68923 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка / И.В. Савинцева, А.А. Смирнов, Н.Ю. Сахарова, Б.К. Гаврилюк // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 174. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-68923 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-689232014-10-05T13:51:24Z Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка Савинцева, И.В. Смирнов, А.А. Сахарова, Н.Ю. Гаврилюк, Б.К. Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» 2008 Article Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка / И.В. Савинцева, А.А. Смирнов, Н.Ю. Сахарова, Б.К. Гаврилюк // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 174. — рос., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68923 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| spellingShingle |
Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» Савинцева, И.В. Смирнов, А.А. Сахарова, Н.Ю. Гаврилюк, Б.К. Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Савинцева, И.В. Смирнов, А.А. Сахарова, Н.Ю. Гаврилюк, Б.К. |
| author_facet |
Савинцева, И.В. Смирнов, А.А. Сахарова, Н.Ю. Гаврилюк, Б.К. |
| author_sort |
Савинцева, И.В. |
| title |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка |
| title_short |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка |
| title_full |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка |
| title_fullStr |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка |
| title_full_unstemmed |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка |
| title_sort |
влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68923 |
| citation_txt |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка / И.В. Савинцева, А.А. Смирнов, Н.Ю. Сахарова, Б.К. Гаврилюк // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 174. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT savincevaiv vliâniezamoraživaniânasohrannostʹkulʹturkletokpolučennyhizémbrionovmyšejnesuŝihgenulučšennogozelenogoflûoresciruûŝegobelka AT smirnovaa vliâniezamoraživaniânasohrannostʹkulʹturkletokpolučennyhizémbrionovmyšejnesuŝihgenulučšennogozelenogoflûoresciruûŝegobelka AT saharovanû vliâniezamoraživaniânasohrannostʹkulʹturkletokpolučennyhizémbrionovmyšejnesuŝihgenulučšennogozelenogoflûoresciruûŝegobelka AT gavrilûkbk vliâniezamoraživaniânasohrannostʹkulʹturkletokpolučennyhizémbrionovmyšejnesuŝihgenulučšennogozelenogoflûoresciruûŝegobelka |
| first_indexed |
2025-07-05T18:42:36Z |
| last_indexed |
2025-07-05T18:42:36Z |
| _version_ |
1836833525158903808 |
| fulltext |
Влияние замораживания на сохранность культур клеток, полученных из эмбрионов
мышей, несущих ген улучшенного зеленого флюоресцирующего белка
И.В. САВИНЦЕВА, А.А. СМИРНОВ, Н.Ю. САХАРОВА, Б.К. ГАВРИЛЮК
Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, г. Пущино
Freezing Effect on Integrity of Cell Cultures, Derived from Murine Embryos
with Enhanced Green Fluorescenting Protein Gene
I.V. SAVINTSEVA, A.A. SMIRNOV, N.YU. SAKHAROVA, B.K. GAVRILYUK
Institute of Theoretical and Experimental Biophysics of Russian Academy of Sciences, Pushchino, Russia
Клетки животных, содержащих в геноме трансген
улучшенного зеленого флюоресцирующего белка
(EGFP), являются перспективным материалом для по-
лучения клеточных и тканевых культур. EGFP − клеточный
маркер, который позволяет длительно наблюдать за
конкретными клетками при культивировании. Для серий-
ных экспериментов клетки желательно сохранять в
криобанке. В связи с этим необходимо исследовать влия-
ние низких температур на состояние EGFP и способность
клеток, перенесших процедуры замораживания-размо-
раживания, и экспрессировать этот белок. Мы изучали
экспрессию EGFP в эмбриональных клетках после их
замораживания по стандартной методике и хранения при
температуре –196°С.
В первой серии экспериментов использовали культу-
ру клеток, полученных из кожно-мышечной ткани
14-дневных эмбрионов гемизиготных самок линии
C57BL/6-Tgn(ACTbEGFP)10sb-J после их скрещивания
с самцами исходной линии C57BL/6, не несущими гена
EGFP (–/–). Эмбриональные фибробластоподобные
клетки, прошедшие 2-3 пассажа, помещали в криопро-
бирки объемом 1,8 мл. Замораживание проводили в
специальной камере для криоконсервации до –40...–50°C,
затем объекты переносили в сосуд Дьюара. Образцы
хранили в жидком азоте от 24 часов до 10 месяцев. После
оттаивания жизнеспособность клеток оценивали под
микроскопом по состоянию их морфологической це-
лостности, степени адгезии и распластывания, а также
по пролиферативной активности. Показано, что хране-
ние в жидком азоте не отражалось на способности мы-
шиных фибробластоподобных клеток экспрессировать
EGFP. Интенсивно светящиеся клетки были характерны
для культур как непосредственно после оттаивания, так
и после нескольких пассажей при дальнейшем культи-
вировании. Полученные после размораживания клетки
могли быть использованы в различных экспериментах
вплоть до 9-10 пассажа.
Во второй серии проводили замораживание 2-кле-
точных эмбрионов, полученных от самок –/EGFP после
спаривания с самцами –/–. Такие эмбрионы содержат
EGFP, синтезированный ещё в ооцитах гемизиготной
самки. Экспрессия же собственного гена EGFP начинает-
ся на стадии 8 бластомеров во время компактизации.
Таким образом, в этих опытах мы изучали действие
криоконсервации на белок материнского происхож-
дения. После размораживания в 2-клеточных зародышах
не было обнаружено свечения EGFP, что, по-видимому,
свидетельствует о его денатурации.
Сравнение этих данных, которые носят предвари-
тельный характер, с данными, полученными в опытах
по замораживанию клеток 14-дневных эмбрионов,
показывает, что материнский “зеленый” белок, содержа-
щийся в клетках ранних эмбрионов, может быть менее
устойчивым в условиях криоконсервации, чем белок,
экспрессированный на собственных матрицах.
174 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №2
Animal cells, having transgene of enhanced green
fluorescenting protein (EGFP) in genome, are the per-
spective material to obtain cell and tissue cultures. EGFP is
a cell marker, enabling a long-term observation for particular
cells during culturing. For experimental sessions cells are
advisable to be stored in cryobank. Due to this fact of neces-
sary is to investigate the way of low temperature influence
on EGFP state and the capability of cells, underwent the
freeze-thawing procedure, to express this protein. We have
studied the EGFP expression in embryonic cells after their
freezing according to the standard technique and storage
at –196°C.
In the first experimental session we have used the cell
culture, derived from skin-muscle tissue of 14 days’
embryos of C57BL/6-Tgn(ACTbEGFP)10sb-J hemizygous
females after their crossing with males of C57BL/6 initial
line without EGFP gene (–/–). Embryonic fibroblast-like cells,
underwent 2-3 passages, were placed into 1.8 ml cryovials.
Freezing was carried-out in a special chamber for cryopreser-
vation down to –40...–50°C with following object transfer
into Dewar vessel. Samples were stored in liquid nitrogen
from 24 hrs to 10 months. After thawing we have micro-
scopically assessed the cell viability by the state of morpho-
logical integrity, adhesion and flattening degrees, prolifera-
tive activity as well. Storage in liquid nitrogen was shown
as not reflecting on the capability of murine fibroblast-like
cells to express EGFP. Cells with an intensive luminescence
were typical for cultures both right after thawing and after
some passages during following culturing. Cells, procured
after freeze-thawing might be used in different experiments
up to 9-10 passages.
The 2-cell embryos, procured in females –/EFGP after
coupling with males –/–, were frozen in the second session.
Such embryos contain EGFP, synthesized even in oocytes
of hemizygous female. Expression of the own EGFP gene
begins at 8 blastomeres’ stage during compactisation. Thus,
in these experiments we have studied the cryopreservation
effect on protein of maternal origin. No EGFP fluorescence
was revealed in 2-cell embryos after thawed, that apparently
testified to its denaturation.
The comparison of these data of preliminary character
with those, obtained in experiments on freezing cells of 14
days’ embryos demonstrates the mother “green” protein,
containing in cells of early embryos, as less resistant under
cryopreservation condition, than the protein, expressed on
the own matrixes.
|