Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования

Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:2008
Hauptverfasser: Попандопуло, А.Г., Оберемко, А.В., Оксимец, В.М., Штутин, А.А.
Format: Artikel
Sprache:Russian
Veröffentlicht: Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2008
Schriftenreihe:Проблемы криобиологии и криомедицины
Schlagworte:
Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия»
Online Zugang:http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68942
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования / А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.М. Оксимец, А.А. Штутин // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 193. — рос., англ.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id irk-123456789-68942
record_format dspace
spelling irk-123456789-689422014-10-03T03:01:53Z Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Оксимец, В.М. Штутин, А.А. Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия» 2008 Article Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования / А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.М. Оксимец, А.А. Штутин // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 193. — рос., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68942 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
topic Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия»
Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия»
spellingShingle Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия»
Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия»
Попандопуло, А.Г.
Оберемко, А.В.
Оксимец, В.М.
Штутин, А.А.
Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
Проблемы криобиологии и криомедицины
format Article
author Попандопуло, А.Г.
Оберемко, А.В.
Оксимец, В.М.
Штутин, А.А.
author_facet Попандопуло, А.Г.
Оберемко, А.В.
Оксимец, В.М.
Штутин, А.А.
author_sort Попандопуло, А.Г.
title Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
title_short Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
title_full Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
title_fullStr Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
title_full_unstemmed Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
title_sort некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования
publisher Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
publishDate 2008
topic_facet Секция «Современные проблемы выделения, культивирования, дифференциации и криоконсервирования стволовых клеток. Клеточная и тканевая терапия»
url http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/68942
citation_txt Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования / А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.М. Оксимец, А.А. Штутин // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 193. — рос., англ.
series Проблемы криобиологии и криомедицины
work_keys_str_mv AT popandopuloag nekotoryeaspektyéffektivnostirollernogokulʹtivirovaniâ
AT oberemkoav nekotoryeaspektyéffektivnostirollernogokulʹtivirovaniâ
AT oksimecvm nekotoryeaspektyéffektivnostirollernogokulʹtivirovaniâ
AT štutinaa nekotoryeaspektyéffektivnostirollernogokulʹtivirovaniâ
first_indexed 2025-07-05T18:43:19Z
last_indexed 2025-07-05T18:43:19Z
_version_ 1836833570314780672
fulltext 193 PROBLEMS OF CRYOBIOLOGY Vol. 18, 2008, №2 ПРОБЛЕМЫ КРИОБИОЛОГИИ Т. 18, 2008, №2 Некоторые аспекты эффективности роллерного культивирования А.Г. ПОПАНДОПУЛО, А.В. ОБЕРЕМКО, В.М. ОКСИМЕЦ, А.А. ШТУТИН Институт неотложной и восстановительной хирургии им. В.К. Гусака АМНУ, г. Донецк Some Aspects of Roller Culturing Efficiency A.G. POPANDOPULO, A.V. OBEREMKO, V.M. OKSIMETS, A.A. SHTUTIN V.K. Gusak Institute of Emergency and Reconstructive Surgery of Academy of Medical Sciences of Ukraine, Donetsk, Ukraine При исследовании влияния роллерного культивиро- вания на формирование объёмных 3D-структур, обла- дающих природной архитектоникой костной ткани, была проведена серия экспериментов. Культуру стромальных стволовых клеток (ССК) получали из костного мозга путём механической дезагрегации, центрифугирования с последующим высеиванием в культуральные флаконы 75 см2 (“Costar”, США). Первично выделенную культуру ССК вели на ростовой среде DMEM/F12 1:1 (“Sig- ma”, США) с добавлением 20 % эмбриональной телячьей сыворотки (“Биолот”, Россия), глутамина (“Биолот”, Рос- сия), L-аскорбиновой кислоты (“Sigma”, США) и основ- ного фактора роста фибробластов (“Sigma”, США). Клетки культивировали в СО2-инкубаторе (37°С, содер- жание углекислого газа 5% и влажность 95%). Среду ме- няли каждые 3-е суток. При достижении 70–80% монослоя клетки пассировали раствором 0,25%-го трипсин/версена (1:5). В экспериментах использовали блоки ксено- или аллоколлагена и гидроксиапатита, содержащие костные сульфатированные гликозаминогликаны. Пористый био- материал “Остеоматрикс” (“Конектбиофарм”, Россия), применяемый для заполнения объёма полости или кост- ного дефекта, в стерильных условиях разрезали скальпе- лем на две равные части, заливали культуральной средой и помещали в термостат при температуре 37°С. Через 2 ч добавляли по 1 млн ССК, предварительно снятых с культуральных флаконов и меченных мембранным прижизненным красителем РКН67 Green Fluoreccent Lin- ker Kit (“Sigma”, США). Клетки культивировали в силико- нированной посуде, во избежание адгезии к стеклянной поверхности, при 37°С и содержании углекислого газа 5%, одна половина – в роллерной установке, другая – в чашке Петри диаметром 100 мм. Пролиферацию клеток оценивали визуально при помощи флуоресцентной микроскопии на микроскопе “Laborux” (“Leica”, Германия). На 15-е сутки культивиро- вания проводили МТТ-анализ (MTT-Cell Proliferation Assay), основанный на измерении оптической плотности раствора при отложении кристаллов формазана в мито- хондриях клеток. Преобразование жёлтой соли тетразо- лия, МТТ в нерастворимые в воде тёмно-синие кристаллы формазана возможно только в живых клетках в присутст- вии митохондриального фермента − сукцинат-дегидроге- назы. Оптическую плотность жидкости измеряли спектрофотометрически на микропланшетном фото- метре для многофункционального анализа “Synergy HT” (“Bio-Tek”, США), определяя поглощение как функцию от концентрации преобразованного красителя, количест- во которого прямо пропорционально зависит от коли- чества метаболически активных клеток в культуре. Результаты исследований показали, что количество и жизнеспособность клеток без использования роллер- ного культивирования были в 5 раз больше. The series of experiments were carried-out when studying the effect of roller culturing on formation of volu- metric 3D-structures, having a natural architecture of bone tissue. The culture of stromal stem cells (SSCs) was derived from bone marrow via mechanical disaggregation and centrifugation with following inoculation in 75 cm2 cultural flasks (Costar, USA). Primarily isolated SSCs culture was plated on DMEM/F12 1:1 growth medium (Sigma, USA) with adding 20% fetal calf serum (Biolot, Russia), glutamine (Biolot, Russia), L-ascorbic acid (Sigma, USA) and fibroblast growth main factor (Sigma, USA). Cells were cultured in CO2-incubator (37°C, 5% CO2 content and 95% humidity). Medium was changed each 3 days. When achieving 70- 80% monolayer the cells were passed with 0.25% trypsin/ versene solution (1:5). The blocks of either xeno- or allocollagen and hydro- xyapatite, containing bone sulphated glycosaminoglycans, have been used in the experiments. Porous biomaterial “Osteomatrix” (Konektbiofarm, Russia), applied for filling the cavity volume or bone defect under sterile conditions, was cut with scalpel in two equal parts, embedded with cultural medium and placed into thermostat at 37°C. Two hours later we added 1 ml SSCs, preliminarily removed from cultural flasks and labeled with membrane supravital dye PKH67 Green Fluorescent Linker Kit (Sigma, USA). Cells were cultured in silicone dish to avoid the adhesion to glass surface at 37°C and 5% CO2 content, one part in a roller device, another in 100 mm Petri dish. Cell proliferation was visually assessed by means of fluorescent microscopy with Laborux microscope (Leica, Germany). The MMT analysis (MMT-Cell Proliferation Assay), based on measuring optical density of solution at formazan crystal deposit in mitochondrial cells, was carried- out to the 15th culturing days. Transformation of tetrasolium yellow salt, MTT into water-insoluble dark blue formazan crystals is only possible in living cells at the presence of mitochondrial enzyme: succinate-dehydrogenase. Optical density of liquid was spectrophotometrically measured with microplotting photometer for multifunctional analysis Synergy HT (Bio-Tek, USA), by determining absorption as the function of concentration of transformed dye, which amount depended in a direct proportion on the amount of metabolically active cells in the culture. Research results have demonstrated the cell amount and viability to be 5 time higher when roller culturing is not used.

Ähnliche Einträge