Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/69002 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные / В.К. Гринь, А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.В. Буше // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 253. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-69002 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-690022014-10-04T03:01:41Z Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные Гринь, В.К. Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Буше, В.В. Cтендовые доклады 2008 Article Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные / В.К. Гринь, А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.В. Буше // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 253. — рос., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/69002 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Cтендовые доклады Cтендовые доклады |
| spellingShingle |
Cтендовые доклады Cтендовые доклады Гринь, В.К. Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Буше, В.В. Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Гринь, В.К. Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Буше, В.В. |
| author_facet |
Гринь, В.К. Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Буше, В.В. |
| author_sort |
Гринь, В.К. |
| title |
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные |
| title_short |
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные |
| title_full |
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные |
| title_fullStr |
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные |
| title_full_unstemmed |
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные |
| title_sort |
метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Cтендовые доклады |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/69002 |
| citation_txt |
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные / В.К. Гринь, А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.В. Буше // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 253. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT grinʹvk metoddifferencirovkistvolovyhkletokvkardiomiocitopodobnye AT popandopuloag metoddifferencirovkistvolovyhkletokvkardiomiocitopodobnye AT oberemkoav metoddifferencirovkistvolovyhkletokvkardiomiocitopodobnye AT buševv metoddifferencirovkistvolovyhkletokvkardiomiocitopodobnye |
| first_indexed |
2025-07-05T18:45:36Z |
| last_indexed |
2025-07-05T18:45:36Z |
| _version_ |
1836833714378637312 |
| fulltext |
253 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №2
Метод дифференцировки стволовых клеток в кардиомиоцитоподобные
В.К. ГРИНЬ, А.Г. ПОПАНДОПУЛО, А.В. ОБЕРЕМКО, В.В. БУШЕ
Институт неотложной и восстановительной хирургии им. В.К. Гусака АМН Украины, г. Донецк
Method of Stem Cell Differentiation in Cardiomyocyte-like Ones
V.K. GRIN’, A.G. POPANDOPULO, A.V. OBEREMKO, V.V. BUSHE
V.K. Gusak Institute of Emergency and Reconstructive Surgery
of Academy of Medical Sciences of Ukraine, Donetsk, Ukraine
Для исследования возможности дифференцировки
клеток стромы костного мозга по кардиомиоцитарному
пути была проведена серия экспериментов. Культуру
стромальных стволовых клеток получали из костного
мозга путём механической дезагрегации, центрифуги-
рования с последующим высеиванием в культуральные
флаконы 75 см2 (“Costar”, США). Первично выделенную
культуру ССК вели на ростовой среде DMEM/F12 1:1
(“Sigma”, США) с добавлением 20% эмбриональной
телячей сыворотки (“Биолот”, Россия), глутамина (“Био-
лот”, Россия), L-аскорбиновой кислоты (“Sigma”, США)
и основного фактора роста фибробластов (“Sigma”,
США). Клетки культивировали в СО2-инкубаторе (37°С,
содержание углекислого газа 5% и влажность 95%). Сре-
ду меняли каждые 3-е суток. При достижении 70–80%
монослоя клетки пассировали раствором 0,25% трипсин/
версена (1:5).
Конфлуентную культуру второго пассажа стимули-
ровали к дифференцировке добавлением в культураль-
ную среду 5-азацитидина в концентрации 10 мкмоль/л
на 24 ч. После этого среду заменяли на среду DMEM/F12
1:1 (“Sigma”, США), содержащую дополнительно 20%
фетальной телячьей сыворотки (“Биолот”, Россия), глута-
мин (“Биолот”, Россия), инсулин (“Sigma”, США), декса-
метазон (“Sigma”, США), L-аскорбиновую кислоту
(“Sigma”, США) и фактор роста фибробластов b (FGFb)
(“Sigma”, США). Среду меняли каждые 3-е суток.
Изменение клеточной морфологии наблюдали ви-
зуально при помощи метода световой микроскопии.
Через одну неделю после начала индукции культура пред-
ставляла собой монослой фибробластоподобных клеток.
В конце второй недели появлялись продольные кардио-
миоцитоподобные мускульные клетки, до 20% от общего
количества клеток. Через 3–4 недели культивирования
до 30% клеток спонтанно сокращались и содержали от
одного до нескольких ядер.
Для подтверждения состоявшейся дифференцировки
ССК в кардиомиоцитоподобные клетки использовали
иммуногистохимический метод идентификации в куль-
турах этих клеток специфических белков – тропонина I и
актина с помощью моноклональных антител. Фазово-
контрастную и флуоресцентную микроскопию прово-
дили на микроскопе “Laborux” (“Leica”, Германия).
The series of experiments were carried-out for studying
the possibility for bone marrow stromal cell differentiation
by cardiomyocyte way. The culture of stromal stem cells
was derived from bone marrow via mechanical disaggre-
gation and centrifugation with following inoculation in 75
cm2 cultural flasks (“Costar”, USA). Primarily isolated SSCs
culture was plated on DMEM/F12 1:1 growth medium
(“Sigma, USA”) with adding 20% fetal calf serum (“Biolot”,
Russia), glutamine (“Biolot”, Russia), L-ascorbic acid
(“Sigma, USA”) and main fibroblast growth factor (“Sigma”,
USA). Cells were cultured in CO2-incubator (37°C, 5% CO2
content and 95% humidity). Medium was changed each 3
days. When achieving 70-80% monolayer the cells were
passed with 0.25% trypsin/versene solution (1:5)
Confluent culture of the second passage was stimulated
to differentiation by adding into cultural medium of 5-
azacytidine in 1µM/l concentration for 24 hrs. Afterwards
the medium was changed for DMEM/F12 1:1 (“Sigma”,
USA), additionally containing 20% fetal bovine serum
(“Biolot”, Russia), glutamine (“Biolot”, Russia), insulin
(“Sigma”, USA), dexamethazone (“Sigma”, USA), L-ascor-
bic acid (“Sigma”, USA) and fibroblast growth factor b
(FGFb) (“Sigma, USA”). The medium was changed every 3
days.
Change in cell morphology was visually observed by
means of light microscopy. One week after beginning the
induction, the culture represented a monolayer of fibroblast-
like cells. At the end of the second week the lateral cardio-
myocyte-like muscular cells, up to 20% of total cell amount,
appeared. Three-four weeks after culturing up to 30% of
cells contracted spontaneously and contained from one to
several nuclei.
To confirm the occurred SSCs differentiation in cardio-
myocyte-like cells we used the immune histochemical method
of identification of specific proteins: troponin I and actin
using monoclonal antibodies in cultures of these cells. Pha-
se-contrast and fluorescent microscopies were done with
“Laborux” microscope (“Leica”, Germany).
|