Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу
Saved in:
| Date: | 2008 |
|---|---|
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Series: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/69003 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу / А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.М. Оксимец // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 254. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-69003 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-690032014-10-04T03:01:44Z Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Оксимец, В.М. Cтендовые доклады 2008 Article Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу / А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.М. Оксимец // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 254. — рос., англ. 0233-7673 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/69003 ru Проблемы криобиологии и криомедицины Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Cтендовые доклады Cтендовые доклады |
| spellingShingle |
Cтендовые доклады Cтендовые доклады Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Оксимец, В.М. Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Оксимец, В.М. |
| author_facet |
Попандопуло, А.Г. Оберемко, А.В. Оксимец, В.М. |
| author_sort |
Попандопуло, А.Г. |
| title |
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу |
| title_short |
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу |
| title_full |
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу |
| title_fullStr |
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу |
| title_full_unstemmed |
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу |
| title_sort |
метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Cтендовые доклады |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/69003 |
| citation_txt |
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу / А.Г. Попандопуло, А.В. Оберемко, В.М. Оксимец // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 254. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT popandopuloag metodindukciistvolovyhkletokstromykostnogomozgapoosteogennomutipu AT oberemkoav metodindukciistvolovyhkletokstromykostnogomozgapoosteogennomutipu AT oksimecvm metodindukciistvolovyhkletokstromykostnogomozgapoosteogennomutipu |
| first_indexed |
2025-07-05T18:45:38Z |
| last_indexed |
2025-07-05T18:45:38Z |
| _version_ |
1836833716492566528 |
| fulltext |
254 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №2
Метод индукции стволовых клеток стромы костного мозга по остеогенному типу
А.Г. ПО ПАНДО ПУЛО, А.В. ОБЕРЕМКО, В.М. ОКСИМЕЦ
Институт неотложной и восстановительной хирургии им. В.К. Гусака АМНУ, г. Донецк
Method for Induction of Bone Marrow Stromal Stem Cells on Osteogenic Type
A.G. POPANDOPULO, A.V. OBEREMKO, V.M. OKSIMETS
V.K. Gusak Institute of Emergency and Reconstructive Surgery
of Academy of Medical Sciences of Ukraine, Donetsk, Ukraine
Для исследования возможности дифференцировки
клеток стромы были созданы микс-культуры стро-
мальных стволовых клеток (ССК) костного мозга и проге-
ниторных клеток надкостницы (ПКН) в соотношении 3:1
(600000 ССК и 200000 ПКН). Культуру ССК получали из
костного мозга путём механической дезагрегации, цент-
рифугирования с последующим высеванием в культу-
ральные флаконы 75 см2 (“Costar”, США). Первично вы-
деленную культуру ССК вели на ростовой среде
DMEM/F12 1:1 (“Sigma”, США) с добавлением 20% эм-
бриональной телячьей сыворотки (“Биолот”, Россия),
глутамина (“Биолот”, Россия), L-аскорбиновой кислоты
(“Sigma”, США) и основного фактора роста фиброблас-
тов (“Sigma”, США). Клетки культивировали в СО2-ин-
кубаторе (37°С, содержание углекислого газа 5% и влаж-
ность 95%). Среду меняли каждые 3-е суток. При дости-
жении 70–80% монослоя клетки пассировали раствором
0,25%-го трипсин/версена (1:5).
Культуру ПКН получали из периоста костных фраг-
ментов. Биоптат многократно промывали раствором PBS
с добавлением 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл
стрептомицина и вносили при 4°С на 24 ч в питательную
среду “Игла” (“Биолот”, Россия), содержащую 100 ед/мл
пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. После этого
элементы мышечной и соединительной ткани отделяли
от костной. Поверхность чашек Петри диаметром 35 мм
предварительно обрабатывали раствором коллагена I
типа и помещали в них костные фрагменты. Культиви-
рование проводили по стандартной методике. На 8-е сут-
ки в фазово-контрастном микроскопе “Laborux” (“Leica”,
Германия) при стократном увеличении наблюдали
миграцию ПКН, через месяц после начала культивиро-
вания была получена конфлуентная культура.
Микс-культуру культивировали по стандартной
методике. Поверхность плазматических мембран пред-
варительно помечали прижизненными красителями
РКН67 Green (для ССК) и PKH26 Red (для ПКН) Fluo-
rescent Linker Kit (“Sigma”, США), которые обладают
флуоресценцией в зелёной и красной частях спектра
соответственно. Каждые 3–4 дня культуры фотографиро-
вали при помощи программы “Qwin” (“Leica”, Герма-
ния). Через 3-4 недели после совместного культивиро-
вания отмечена дифференцировка ССК в остеобласты,
что подтверждалось положительной окраской на щелоч-
ную фосфатазу, которая является продуктом жизнедея-
тельности костных клеток (BCIP/NBT Liquid Substrate
System, “Sigma”, США).
In order to investigate the possibilities for stromal cell
differentiation there were designed the mix-cultures of
stromal stem cells (SSCs) of bone marrow and periosteal
progenitor cells (PPCs) in 3:1 ratio (600,000 SSCs and 200,000
PPCs). SSCs culture was derived from bone marrow by
means of mechanical disaggregation, centrifugation with
following inoculation in 75 cm2 cultural flasks (“Costar”,
USA). The isolated SSCs culture was primarily plated on
DMEM/F12 growth medium in 1:1 ratio (“Sigma”, USA) with
adding 20% fetal calf serum (“Biolot”, Russia), glutamine
(“Biolot”, Russia), L-ascorbic acid (“Sigma, USA”) and main
factor of fibroblast growth (“Sigma”, USA). Cells were
cultured in CO2 incubator (37°C, 5 and 95% of CO2 and
humidity, correspondingly). Medium was changed every 3
days. When getting 70-80% monolayer, the cells were pas-
sed with 0.25% trypsin/versene solution (1:5).
The PPCs culture was derived from bone fragment
periost. Biopsy specimen was many-fold washed with PBS
solution, complimented with 100 U/ml penicillin and
100 µg/ml streptomycin and introduced into the “Eagle”
cultural medium (“Biolot, Russia), containing 100 U/ml
penicillin and 100 мg/ml streptomycin at 4°C for 24 hrs.
Afterwards the elements of muscular and connective tissues
were isolated from the bone one. The surface of 35 mm
diameter’s Petri dishes was preliminarily treated with I type
collagen solution with placing bone fragments into them.
Culturing was carried-out by the standard technique. To
the 7th day the PPCs migration was observed under phase-
contrast microscope “Laborux” (“Leica, Germany”) at 100-
fold magnification, a confluent culture was obtained a month
later of culturing beginning.
The mix-culture was cultured according to the standard
technique. The surface of plasmatic membranes was prelimi-
narily marked with supravital dyes PKH67 Green (for SSCs)
and PKH26 Red (for PPCs) Fluorescent Linker Kit (“Sigma”,
USA), having fluorescence in green and red spectra, corres-
pondingly. Cultures were recorded with “Qwin” software
(“Leica”, Germany) every 3-4 days. The SSCs differentiation
into osteoblasts was noted 3-4 weeks after mutual culturing,
confirmed by a positive staining onto alkaline phosphatase,
being the product of bone cell vital activity (BCIP/NBT
Liquid Sytem, “Sigma”, USA).
|