Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції
Дослiджено герпесвiрус коропових риб третього типу (CyHV-3), який викликає висококонтагiозну iнфекцiю у декоративного коропа коi та у коропа звичайного (Cyprinus carpio). Були застосованi ПЛР-дiагностика та електронномiкроскопiчне дослiдження морфологiї та репродукцiї CyHV-3 методом ультратонких з...
Збережено в:
| Дата: | 2013 |
|---|---|
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2013
|
| Назва видання: | Доповіді НАН України |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/85651 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції / М.І. Майстренко, Ю.П. Рудь, Н.М. Матвієнко, Л.С. Холодна, Л.П. Бучацький // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 4. — С. 139–143. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
irk-123456789-85651 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
irk-123456789-856512015-08-12T03:02:04Z Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції Майстренко, М.І. Рудь, Ю.П. Матвієнко, Н.М. Холодна, Л.С. Бучацький, Л.П. Біологія Дослiджено герпесвiрус коропових риб третього типу (CyHV-3), який викликає висококонтагiозну iнфекцiю у декоративного коропа коi та у коропа звичайного (Cyprinus carpio). Були застосованi ПЛР-дiагностика та електронномiкроскопiчне дослiдження морфологiї та репродукцiї CyHV-3 методом ультратонких зрiзiв. При електронномiкроскопiчному дослiдженнi очищених вiрiонiв CyHV-3 виявлено вiруснi частки такого ж дiаметра, що й на ультратонких зрiзах уражених клiтин. Цi препарати використано як контроль при адаптацiї методу ПЛР для дiагностики CyHV-3. Показано, що дослiдженi пари олiгонуклеотидних праймерiв, специфiчних до гена тимiдинкiнази CyHV-3, амплiфiкують фрагмент ДНК вiрусу розмiром близько 400 пар нуклеотидiв. Цi праймери можуть бути використанi для експрес-дiагностики CyHV-3 в рибних господарствах та рiчках України. Исследован герпесвирус карповых рыб третьего типа (CyHV-3), который вызывает висококонтагиозную инфекцию у декоративного карпа кои и у карпа обычного (Cyprinus carpio). Применяли ПЦР-диагностику и электронномикроскопическое исследование морфологии и репродукции CyHV-3 методом ультратонких срезов. При электронномикроскопическом исследовании очищенных вирионов CyHV-3 обнаружены вирусные частички такогоже диаметра, как и на ультратонких срезах пораженных клеток. Эти препараты использованы в качестве контроля при адаптации метода ПЦР для диагностики CyHV-3. Показано выбранные пары олигонуклеотидных праймеров, специфических к гену тимидинкиназы CyHV-3, амплифицировали фрагмент ДНК вируса размером примерно 400 пар нуклеотидов. Эти праймеры могут быть использованы для експресс-диагностики CyHV-3 в рыбных хозяйствах и речках Украины. The carp herpes virus type III (CyHV-3), which causes the highly contagious infection of ornamental koi carp and common carp (Cyprinus carpio), is investigated. The goal of this research was to use the method of PCR for virus diagnostics and electron microscopy of purified virions and ultra thin sections of infected tissue for the investigation of CyHV-3 morphology and reproduction. It is shown that purified CyHV-3 viral particles have the same size as that in ultrathin sections of infected cells. These samples were used as a control in PCR for CyHV-3 diagnostics. We selected a pair of oligonucleotide primers specific to the thymidine kinase gene of CyHV-3, which amplified virus DNA fragment of approximately 400 base pairs. These primers can be used for the CyHV-3 virus rapid diagnostics at fish farms and rivers of Ukraine. 2013 Article Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції / М.І. Майстренко, Ю.П. Рудь, Н.М. Матвієнко, Л.С. Холодна, Л.П. Бучацький // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 4. — С. 139–143. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. 1025-6415 http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/85651 [597-12:576.85]:57.086 uk Доповіді НАН України Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Біологія Біологія |
| spellingShingle |
Біологія Біологія Майстренко, М.І. Рудь, Ю.П. Матвієнко, Н.М. Холодна, Л.С. Бучацький, Л.П. Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції Доповіді НАН України |
| description |
Дослiджено герпесвiрус коропових риб третього типу (CyHV-3), який викликає висококонтагiозну iнфекцiю у декоративного коропа коi та у коропа звичайного (Cyprinus
carpio). Були застосованi ПЛР-дiагностика та електронномiкроскопiчне дослiдження
морфологiї та репродукцiї CyHV-3 методом ультратонких зрiзiв. При електронномiкроскопiчному дослiдженнi очищених вiрiонiв CyHV-3 виявлено вiруснi частки такого ж
дiаметра, що й на ультратонких зрiзах уражених клiтин. Цi препарати використано
як контроль при адаптацiї методу ПЛР для дiагностики CyHV-3. Показано, що дослiдженi пари олiгонуклеотидних праймерiв, специфiчних до гена тимiдинкiнази CyHV-3, амплiфiкують фрагмент ДНК вiрусу розмiром близько 400 пар нуклеотидiв. Цi праймери можуть бути використанi для експрес-дiагностики CyHV-3 в рибних господарствах та рiчках України. |
| format |
Article |
| author |
Майстренко, М.І. Рудь, Ю.П. Матвієнко, Н.М. Холодна, Л.С. Бучацький, Л.П. |
| author_facet |
Майстренко, М.І. Рудь, Ю.П. Матвієнко, Н.М. Холодна, Л.С. Бучацький, Л.П. |
| author_sort |
Майстренко, М.І. |
| title |
Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції |
| title_short |
Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції |
| title_full |
Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції |
| title_fullStr |
Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції |
| title_full_unstemmed |
Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції |
| title_sort |
ідентифікація вірусу cyhv-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| publishDate |
2013 |
| topic_facet |
Біологія |
| url |
http://dspace.nbuv.gov.ua/handle/123456789/85651 |
| citation_txt |
Ідентифікація вірусу CyHV-3 методами електронної мікроскопії та полімеразної ланцюгової реакції / М.І. Майстренко, Ю.П. Рудь, Н.М. Матвієнко, Л.С. Холодна, Л.П. Бучацький // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 4. — С. 139–143. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. |
| series |
Доповіді НАН України |
| work_keys_str_mv |
AT majstrenkomí ídentifíkacíâvírusucyhv3metodamielektronnoímíkroskopíítapolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT rudʹûp ídentifíkacíâvírusucyhv3metodamielektronnoímíkroskopíítapolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT matvíênkonm ídentifíkacíâvírusucyhv3metodamielektronnoímíkroskopíítapolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT holodnals ídentifíkacíâvírusucyhv3metodamielektronnoímíkroskopíítapolímeraznoílancûgovoíreakcíí AT bučacʹkijlp ídentifíkacíâvírusucyhv3metodamielektronnoímíkroskopíítapolímeraznoílancûgovoíreakcíí |
| first_indexed |
2025-07-06T12:55:51Z |
| last_indexed |
2025-07-06T12:55:51Z |
| _version_ |
1836902306657861632 |
| fulltext |
УДК [597-12:576.85]:57.086
М. I. Майстренко, Ю.П. Рудь, Н.М. Матвiєнко, Л. С. Холодна,
Л.П. Бучацький
Iдентифiкацiя вiрусу CyHV-3 методами електронної
мiкроскопiї та полiмеразної ланцюгової реакцiї
(Представлено членом-кореспондентом НАН України Д. М. Говоруном)
Дослiджено герпесвiрус коропових риб третього типу (CyHV-3), який викликає висо-
коконтагiозну iнфекцiю у декоративного коропа коi та у коропа звичайного (Cyprinus
carpio). Були застосованi ПЛР-дiагностика та електронномiкроскопiчне дослiдження
морфологiї та репродукцiї CyHV-3 методом ультратонких зрiзiв. При електронномiк-
роскопiчному дослiдженнi очищених вiрiонiв CyHV-3 виявлено вiруснi частки такого ж
дiаметра, що й на ультратонких зрiзах уражених клiтин. Цi препарати використано
як контроль при адаптацiї методу ПЛР для дiагностики CyHV-3. Показано, що дослiд-
женi пари олiгонуклеотидних праймерiв, специфiчних до гена тимiдинкiнази CyHV-3,
амплiфiкують фрагмент ДНК вiрусу розмiром близько 400 пар нуклеотидiв. Цi прайме-
ри можуть бути використанi для експрес-дiагностики CyHV-3 в рибних господарствах
та рiчках України.
Герпесвiрус коропових риб третього типу (CyHV-3) викликає висококонтагiозну емерджент-
ну iнфекцiю як у звичайного (Cyprinus carpio), так i у декоративного коропа коi. Вперше
вiн був видiлений у коi, тому ранiше його позначали як вiрус герпесу коi (КHV). Цей вiрус
поширений у всьому свiтi i завдає великої шкоди рибним господарствам — смертнiсть риб
вiд цiєї iнфекцiї сягає 80–100% [1]. CyHV-3 зустрiчається як в аквакультурi, так i в озерах та
рiчках. Спалахи вiрусної iнфекцiї у коропiв вiдбуваються навеснi та восени при температурi
води вiд 18 до 28 ◦C [2]. Смертнiсть у коропiв розпочинається через 5–6 дiб пiсля iнфiку-
вання, ще через двi доби пiсля того вiдбувається їх масова загибель i цей рiвень смертностi
зберiгається протягом 10–12 дiб. До вiрусу бiльш сприйнятливi мальки коропа (вiком 1–3
мiсяцi), нiж дорослi риби (масою понад 230 г). Клiнiчнi ознаки захворювання у риб вияв-
ляються вже через 3 доби пiсля iнфiкування. Iнфiкованi коропи втрачають координацiю,
плавають хаотично, зазвичай вони знаходяться бiля поверхнi води. У iнфiкованих коропiв
також спостерiгається некроз зябер, запалiсть очей, наявнiсть на шкiрi бiлих цяток [3].
CyHV-3 має вузьку видову специфiчнiсть — iншi представники коропових до цього вi-
русу несприйнятливi. В експериментальних умовах до CyHV-3 виявились нечутливими бi-
лий амур (Ctenopharyngodon idella), срiблястий карась (Carassius auratus gibelio), товстоло-
бик (Hypophtalmichthys molitrix ), тiлапiя (Oreochromis niloticus) тощо [4]. Срiблястий карась
(Carassius auratus gibelio) може iнфiкуватись CyHV-3 без проявiв симптомiв захворювання,
проте його гiбриди з коi мають типовi ознаки хвороби.
Для дiагностики CyHV-3 у багатьох країнах використовують полiмеразну ланцюгову
реакцiю (ПЛР), iмуноферментний аналiз (ELISA) та метод електронної мiкроскопiї. На
сьогоднi ПЛР є найбiльш точним та чутливим методом дiагностики вiрусних захворювань
риб. Метод дає змогу виявити наявнiсть збудника, навiть якщо в пробi присутнi лише де-
© М. I. Майстренко, Ю. П. Рудь, Н.М. Матвiєнко, Л.С. Холодна, Л.П. Бучацький, 2013
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №4 139
кiлька молекул його ДНК. Чутливiсть цiєї реакцiї перевищує таку в iмунохiмiчному та
iнших методах, а принцип методу дозволяє дiагностувати наявнiсть iнфекцiй зi значною
антигенною мiнливiстю. Важливi вiдомостi про структуру та морфогенез вiрусiв дає також
метод електронної мiкроскопiї.
Метою дослiдження було застосування ПЛР-дiагностики та електронномiкроскопiчного
дослiдження морфологiї та репродукцiї CyHV-3 в печiнцi та нирках звичайного коропа
методом ультратонких зрiзiв.
Матерiали та методи. Бiопробу ставили в лабораторних умовах шляхом введення
0,2 мл вiрусовмiсного розчину у черевину звичайного коропа. Риб утримували в ваннах
при кiмнатнiй температурi протягом 10 дiб.
Для очистки CyHV-3 застосовували метод ультрацентрифугування в градiєнтi щiльнос-
тi сахарози. Очищений вiрус був використаний для розробки дiагностики герпесвiрусної
iнфекцiї коропових риб на основi ПЛР.
Електронномiкроскопiчне дослiдження. Для виготовлення ультратонких зрiзiв нирки
та печiнку хворих риб фiксували в 1%-му розчинi ОsO4, доведеному до pH 7,0 за допомо-
гою 0,1 М фосфатного буфера. Пiсля фарбування 0,5%-м водним розчином уранiлацетату
матерiал зневоднювали, проводили крiзь етанол та ацетон i вмiщували в епоксидну смолу.
Ультратонкi зрiзи фарбували цитратом свинцю. Одержанi таким чином препарати вивчали
на електронному мiкроскопi JEM-100B при iнструментальному збiльшеннi 20000 разiв.
Видiлення ДНК. Загальну ДНК видiляли iз зябер та нирок iнфiкованих коропiв. До
100 мкл приготовленого на фосфатному буферi (pH 7,4) гомогенату додавали 500 мкл лiзую-
чого буферу (10 мМ трис-HCl, pH 8,0, 0,1 М NaCl, 25 мМ EДTA, 0,5% ДСН) та протеїназу
К, ретельно перемiшували та iнкубували 2 год при 37 ◦С. ДНК екстрагували фенолом та
центрифугували 5 хв при 13 000 об/хв. Надосадову рiдину вiдбирали та проводили повторну
екстракцiю ДНК сумiшшю хлороформ — iзоамiловий спирт (24 : 1). Потiм надосадову
рiдину вiдбирали та додавали 0,1 об’єм розчину 3 М ацетату натрiю (pH 5,2) та 2,5 об’єми
охолодженого до −20
◦С абсолютного етанолу. Преципiтацiю ДНК проводили при кiмнатнiй
температурi протягом 1 год. Пiсля цього осаджували ДНК на мiкроцентрифузi при 13 000
об/хв протягом 10 хв. Осад ДНК промивали 70% етанолом. ДНК розчиняли в ТЕ-буферi
(10 мМ трис-HCl, 1 мМ EДTA, pH 7,5) або у деiонiзованiй водi [5].
Для iдентифiкацiї вiрусу методом ПЛР використовували олiгонуклеотиднi праймери,
специфiчнi до дiлянки гена тимiдинкiнази CyHV-3 [6]. Послiдовнiсть олiгонуклеотидiв була
такою: TKf 5′-GGGTTACCTGTACGAG-3′ та TKr 5′-CACCCAGTAGATTATGC-3′ . Визна-
чення специфiчностi праймерiв та їхнiх фiзичних властивостей проводили за допомогою
програмного забезпечення VectorNTI10 та онлайн-сервiсу BLAST.
Амплiфiкацiя дiлянки гена тимiдинкiнази CyHV-3 включала один цикл попередньої де-
натурацiї ДНК при 94 ◦С протягом 5 хв, 40 циклiв денатурацiї при 95 ◦С (1 хв), вiджигу
праймерiв при 55 ◦С (1 хв), синтезу при 72 ◦С (1 хв) та додатковий цикл синтезу в кiнцi
реакцiї при 72 ◦С (10 хв). Пiсля амплiфiкацiї продукти реакцiї аналiзували в 2% агарозно-
му гелi. По закiнченнi електрофорезу гель фарбували бромистим етидiєм та спостерiгали
результати пiд ультрафiолетовим трансiлюмiнатором.
Результати та обговорення. Iнфiкованi CyHV-3 коропи при вiзуальному обстеженнi
мали виснажений вигляд, на шкiрi у них були наявнi яскраво вираженi бiлi плями. Очi в ура-
жених риб були запалi, риби iнтенсивно видiляли у воду слиз. У хворих коропiв вiдмiчено
iнтенсивний некроз зябер (рис. 1). На розтинi у них виявився нефрит та iншi патологiчнi
ознаки, обумовленi вторинними бактерiальними iнфекцiями.
140 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №4
Рис. 1. Зябра коропа коi, ураженi CyHV-3
Рис. 2. Ультратонкий зрiз нирок коропа коi, ураженого CyHV-3.
а — ущiльнення хроматинового матерiалу в ядрi, в перинуклеарнiй зонi розташованi вiруснi частки (стрiл-
ки); б — вiруснi частки в цитоплазмi iнфiкованих клiтин, дiаметр вiрiонiв 120 нм
При електронномiкроскопiчних дослiдженнях в ядрах клiтин нирок хворих коропiв спо-
стерiгалось ущiльнення хроматинового матерiалу. В перинуклеарнiй зонi виявленi вiрiони
дiаметром 120 нм. Здебiльшого вiруснi частки були розташованi мiж внутрiшнiм та зовнiш-
нiм листками ядерної мембрани (рис. 2, а).
У цитоплазмi уражених клiтин нирок коропа, в яку iз ядра проникають нуклеокапсиди,
були розширенi канальцi гранулярного ендоплазматичного ретикулума i спостерiгались вi-
руснi частки, загорнутi в мембрани. Мiтохондрiї уражених клiтин мали видовжену форму
(див. рис. 2, б ), багато мiтохондрiальних крист були зруйнованi.
Для вiрусiв герпесу встановлено, що реплiкацiя вiрусної ДНК вiдбувається в ядрi, пiсля
чого вона вмонтовується у вiрусний капсид i залишає ядро шляхом вип’ячування через
внутрiшню ядерну мембрану. При цьому вiрiони розташовуються в перинуклеарнiй зонi.
Пiсля цього первинна оболонка вiрусу зливається iз зовнiшнiм листком ядерної мембрани
i вiрiони опиняються в цитоплазмi [7]. На наступному етапi вони одягають на себе ще одну
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №4 141
Рис. 3. Електрофореграма фрагментiв ДНК CyHV-3, амплiфiкованих за допомогою праймерiв, специфiчних
до гена тимiдинкiнази: ДНК видiлена iз зябер (1 ) та нирок (2 ) iнфiкованих коропiв; М — ДНК-маркер
оболонку, яка походить iз везикул Гольджi. Отриманi нами результати свiдчать про те, що
репродукцiя CyHV-3 вiдбувається за сценарiєм, схожим для всiх вiрусiв герпесу.
При електронномiкроскопiчному дослiдженнi очищених вiрiонiв CyHV-3 були виявле-
нi вiруснi частки такого ж дiаметра, що й на ультратонких зрiзах уражених клiтин. Цi
препарати були використанi нами як контроль при адаптацiї методу ПЛР для дiагностики
CyHV-3.
Як показали результати дослiджень, вибранi пари олiгонуклеотидних праймерiв, спе-
цифiчних до гена тимiдинкiнази CyHV-3, амплiфiкували фрагмент ДНК вiрусу розмiром
близько 400 пар нуклеотидiв. За допомогою ПЛР було iдентифiковано вiрус у зразках зя-
бер та нирок iнфiкованого коропа (рис. 3).
Вiдомо, що своєчасне виявлення симптомiв у хворої риби та проведення експрес-дiаг-
ностики запобiгають епiзоотiям та масовiй смертностi об’єктiв аквакультури. На сьогоднi
ПЛР є найбiльш точним та чутливим методом дiагностики вiрусних iнфекцiй. Швидке по-
ширення в останнi роки CyHV-3 по всьому свiту обумовлене тим, що декоративний короп
має широкий попит серед акварiумiстiв i є предметом iнтенсивної торгiвлi [8]. Незважаючи
на те що на фiрмi KoVax Ltd (Iзраїль) розроблена вакцина для профiлактики CyHV-3 [9],
вiн продовжує поширюватись по всьому свiтi. В останнi роки цей вiрус виявлений у сусiд-
нiх країнах — Польщi, Румунiї та Чехiї [8], i вiн являє собою реальну загрозу для рибних
господарств нашої країни.
Тому вибранi олiгонуклеотиднi праймери можуть бути використанi для експрес-дiагно-
стики CyHV-3 в рибних господарствах та рiчках України. Профiлактична вакцинацiя здо-
рової риби дозволить уникнути значних економiчних втрат у рибних господарствах.
1. Hedrick R., Gilad О., Yun S. А herpes virus associated with mass mortality of juvenile and adult Koi, а
strain of common carp // J. Agua. Anim. Health. – 2000. – 12. – P. 44–57.
2. Ariav R., Timan S., Paperna I., Bejerano I. First report of newly emerging viral disease of Cyprinus carpio
species in Israel // EAFP 9-th International Conference. – Rhodes, Greece, 1998. – P. 36.
3. Бучацький Л.П. Епiзоотологiчний монiторинг хвороб в аквакультурi. Вiрус нефрита та зяберного
некроза коропа // Вет. медицина України. – 2006. – № 4. – С. 19–20.
4. Perelberg A., Smirnov M., Hutoran M. et al. Epidemiological description of a new viral disease afflicting
cultured cyprinus carpio in Israel // Isr. J. Aquaculture–Bamidgeh. – 2003. – 55. – P. 5–12.
5. Sambrook J., Russell D.W. Molecular cloning: a laboratory manual. – 3rd ed. – New York: Cold Spring
Harbour, 2001. – 2344 p.
6. Bercovier H., Fishman Y., Nahary R. et al. Cloning of the koi herpesvirus (KHV) gene encoding thymidine
kinase and its use for a highly sensitive PCR based diagnosis // BMC Microbiol. – 2005. – 5. – P. 1–9.
142 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №4
7. Viva S., Sano M. Morphogenesis of koi herpesvirus observed by electron microscopy // J. Fish. Dis. –
2007. – 30, No 12. – P. 715–722.
8. Siwicki А.К., Terech-Majewska Е. Herpeswirusy a szczegolnie koi herpes wirus (KHV) nowe zagrozenie w
hodowli karpia // Choroby ryb. – 2002. – P. 368–373.
9. Ronen А., Perelberg А., Abramovitz J. et al. Efficient vaccine against the virus causing а lethal disease in
cultured Cyprinus carpio // Vaccine. – 2003. – 21. – P. 4677–4684.
Надiйшло до редакцiї 11.09.2012Iнститут рибного господарства
НААН України, Київ
Київський нацiональний унiверситет
iм. Тараса Шевченка
М.И. Майстренко, Ю.П. Рудь, Н.Н. Матвиенко, Л. С. Холодная,
Л.П. Бучацкий
Идентификация вируса CyHV-3 методами электронной микроскопии
и полимеразной цепной реакции
Исследован герпесвирус карповых рыб третьего типа (CyHV-3), который вызывает високо-
контагиозную инфекцию у декоративного карпа кои и у карпа обычного (Cyprinus carpio).
Применяли ПЦР-диагностику и электронномикроскопическое исследование морфологии и ре-
продукции CyHV-3 методом ультратонких срезов. При электронномикроскопическом иссле-
довании очищенных вирионов CyHV-3 обнаружены вирусные частички такого же диаметра,
как и на ультратонких срезах пораженных клеток. Эти препараты использованы в качест-
ве контроля при адаптации метода ПЦР для диагностики CyHV-3. Показано выбранные
пары олигонуклеотидных праймеров, специфических к гену тимидинкиназы CyHV-3, ам-
плифицировали фрагмент ДНК вируса размером примерно 400 пар нуклеотидов. Эти прай-
меры могут быть использованы для експресс-диагностики CyHV-3 в рыбных хозяйствах
и речках Украины.
M. I. Maistrenko, Y.P. Rud, N.M. Matvienko, L. S. Holodna, L. P. Buchackii
Identification of CyHV-3 virus by the methods of electron microscopy
and PCR
The carp herpes virus type III (CyHV-3), which causes the highly contagious infection of ornamental
koi carp and common carp (Cyprinus carpio), is investigated. The goal of this research was to use
the method of PCR for virus diagnostics and electron microscopy of purified virions and ultra
thin sections of infected tissue for the investigation of CyHV-3 morphology and reproduction. It
is shown that purified CyHV-3 viral particles have the same size as that in ultrathin sections of
infected cells. These samples were used as a control in PCR for CyHV-3 diagnostics. We selected
a pair of oligonucleotide primers specific to the thymidine kinase gene of CyHV-3, which amplified
virus DNA fragment of approximately 400 base pairs. These primers can be used for the CyHV-3
virus rapid diagnostics at fish farms and rivers of Ukraine.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №4 143
|