RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators

RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators

SAM68 is a nuclear RNA-binding protein involved in the regulation of mRNA processing. SAM68 overexpression is observed in multiple types of cancer. Recently, the possible link between RNA-binding protein SAM68 and scaffold protein ITSN1 has been identified. The aim of the study was to confirm the...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Date:2020
Main Authors: Pankivskyi, S.V., Senchenko, N.V., Busko, P.B., Rynditch, A.V.
Format: Article
Language:English
Published: Видавничий дім "Академперіодика" НАН України 2020
Series:Доповіді НАН України
Subjects:
Біологія
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators / S.V. Pankivskyi, N.V. Senchenko, P.B. Busko, A.V. Rynditch // Доповіді Національної академії наук України. — 2020. — № 5. — С. 103-109. — Бібліогр.: 15 назв. — англ.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id oai:nasplib.isofts.kiev.ua:123456789-170510
record_format dspace
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language English
topic Біологія
Біологія
spellingShingle Біологія
Біологія
Pankivskyi, S.V.
Senchenko, N.V.
Busko, P.B.
Rynditch, A.V.
RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
Доповіді НАН України
description SAM68 is a nuclear RNA-binding protein involved in the regulation of mRNA processing. SAM68 overexpression is observed in multiple types of cancer. Recently, the possible link between RNA-binding protein SAM68 and scaffold protein ITSN1 has been identified. The aim of the study was to confirm the probability of direct binding bet ween SAM68 and ITSN, analyze the effect of ITSN1 on SAM68-mediated alternative splicing, and identify novel SAM68 partners among endocytic proteins and actin cytoskeleton modulators. The interactions were revealed in pull-down assays using purified recombinant proteins or cell lysates. ITSN1 knockdown in HeLa cells was performed using the shRNA approach. The expression of isoforms produced by alternative splicing was measured using RT-PCR. It was demonstrated that SAM68 directly interacted with ITSN1 in vitro. Next, it was found that ITSN1 knockdown in HeLa cells induced SRSF1 intron 3 retention increasing the expression of the proto-oncogenic isoform of SRSF1 by three times. It was also shown that SH3 domains of AMPH1, BIN1, CTTN1, TKS4, and TKS5 precipitated SAM68 from lysate of 293 cells. As a result, SAM68 directly binds to ITSN1 and interacts with endocytic proteins and actin cytoskeleton modulators, whereas SAM68-mediated splicing in HeLa cells may be regulated by ITSN1.
format Article
author Pankivskyi, S.V.
Senchenko, N.V.
Busko, P.B.
Rynditch, A.V.
author_facet Pankivskyi, S.V.
Senchenko, N.V.
Busko, P.B.
Rynditch, A.V.
author_sort Pankivskyi, S.V.
title RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
title_short RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
title_full RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
title_fullStr RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
title_full_unstemmed RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
title_sort rna-binding protein sam68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators
publisher Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
publishDate 2020
topic_facet Біологія
citation_txt RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators / S.V. Pankivskyi, N.V. Senchenko, P.B. Busko, A.V. Rynditch // Доповіді Національної академії наук України. — 2020. — № 5. — С. 103-109. — Бібліогр.: 15 назв. — англ.
series Доповіді НАН України
work_keys_str_mv AT pankivskyisv rnabindingproteinsam68interactswithendocyticproteinsandactincytoskeletonmodulators
AT senchenkonv rnabindingproteinsam68interactswithendocyticproteinsandactincytoskeletonmodulators
AT buskopb rnabindingproteinsam68interactswithendocyticproteinsandactincytoskeletonmodulators
AT rynditchav rnabindingproteinsam68interactswithendocyticproteinsandactincytoskeletonmodulators
AT pankivskyisv rnkzvâzuvalʹnijbíloksam68vzaêmodíêízbílkamiendocitozutamodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT senchenkonv rnkzvâzuvalʹnijbíloksam68vzaêmodíêízbílkamiendocitozutamodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT buskopb rnkzvâzuvalʹnijbíloksam68vzaêmodíêízbílkamiendocitozutamodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT rynditchav rnkzvâzuvalʹnijbíloksam68vzaêmodíêízbílkamiendocitozutamodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT pankivskyisv rnksvâzyvaûŝijbeloksam68vzaimodejstvuetsbelkamiéndocitozaimodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT senchenkonv rnksvâzyvaûŝijbeloksam68vzaimodejstvuetsbelkamiéndocitozaimodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT buskopb rnksvâzyvaûŝijbeloksam68vzaimodejstvuetsbelkamiéndocitozaimodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
AT rynditchav rnksvâzyvaûŝijbeloksam68vzaimodejstvuetsbelkamiéndocitozaimodulâtoramiaktinovogocitoskeleta
first_indexed 2025-07-22T04:17:24Z
last_indexed 2025-07-22T04:17:24Z
_version_ 1838319240805875712
spelling oai:nasplib.isofts.kiev.ua:123456789-1705102025-02-23T17:23:27Z RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators РНК-зв'язувальний білок SAM68 взаємодіє із білками ендоцитозу та модуляторами актинового цитоскелета РНК-связывающий белок SAM68 взаимодействует с белками эндоцитоза и модуляторами актинового цитоскелета Pankivskyi, S.V. Senchenko, N.V. Busko, P.B. Rynditch, A.V. Біологія SAM68 is a nuclear RNA-binding protein involved in the regulation of mRNA processing. SAM68 overexpression is observed in multiple types of cancer. Recently, the possible link between RNA-binding protein SAM68 and scaffold protein ITSN1 has been identified. The aim of the study was to confirm the probability of direct binding bet ween SAM68 and ITSN, analyze the effect of ITSN1 on SAM68-mediated alternative splicing, and identify novel SAM68 partners among endocytic proteins and actin cytoskeleton modulators. The interactions were revealed in pull-down assays using purified recombinant proteins or cell lysates. ITSN1 knockdown in HeLa cells was performed using the shRNA approach. The expression of isoforms produced by alternative splicing was measured using RT-PCR. It was demonstrated that SAM68 directly interacted with ITSN1 in vitro. Next, it was found that ITSN1 knockdown in HeLa cells induced SRSF1 intron 3 retention increasing the expression of the proto-oncogenic isoform of SRSF1 by three times. It was also shown that SH3 domains of AMPH1, BIN1, CTTN1, TKS4, and TKS5 precipitated SAM68 from lysate of 293 cells. As a result, SAM68 directly binds to ITSN1 and interacts with endocytic proteins and actin cytoskeleton modulators, whereas SAM68-mediated splicing in HeLa cells may be regulated by ITSN1. Метою дослідження було підтвердити можливість прямого зв'язування між SAM68 та ITSN1, проаналізувати вплив ITSN1 на SAM68-опосередкований альтернативний сплайсинг і виявити нових партнерів SAM68 з-поміж ендоцитозних білків та модуляторів реорганізації актинового цитоскелета. Взаємодії проаналізовано за допомогою pull-down методик з використанням очищених рекомбінантних білків або лізатів клітин 293. Нокдаун ITSN1 у клітинах лінії HeLa проводили, використовуючи дві шпилькові РНК. Експресію ізоформ, що утворюються в ході альтернативного сплайсингу, проаналізовано за допомогою ПЛР в реальному часі. Показано, що SAM68 прямо взаємодіє з ITSN1 in vitro. Далі виявлено, що нокдаун ITSN1 у клітинах лінії HeLa підвищує рівень збереження інтрону 3 SRSF1 на 50 %, сприяючи експресії протоонкогенної ізоформи SRSF1. Встановлено, що SH3 домени білків AMPH1, BIN1, CTTN1, TKS4 та TKS5 преципітують SAM68 із лізатів клітин 293. SAM68 безпосередньо зв'язується з ITSN1 і взаємодіє з ендоцитозними білками та модуляторами перебудов актинового цитоскелета, а SAM68-опосередкований сплайсинг у клітинах лінії HeLa може регулюватися ITSN1. Целью исследования было подтвердить возможность прямого связывания между SAM68 и ITSN1, проанализировать влияние ITSN1 на SAM68-опосредованный альтернативный сплайсинг и найти новых партнеров SAM68 среди эндоцитозных белков и модуляторов реорганизации актинового цитоскелета. Взаимодействия проанализированы с помощью pull-down методик с использованием очищенных рекомбинантных белков или лизатов клеток 293. Короткие РНК, образующие шпильки, использовали для нокдауна ITSN1 в клетках линии HeLa. Экспрессия изоформ, образующихся в ходе альтернативного сплайсинга, проанализирована с помощью ПЦР в реальном времени. Показано, что SAM68 прямо взаимодействует с ITSN1 in vitro. Далее обнаружено, что нокдаун ITSN1 в клетках линии HeLa повышает уровень сохранения интрона 3 SRSF1 на 50 %, способствуя экспрессии протоонкогенной изоформы SRSF1. Установлено, что SH3 домены белков AMPH1, BIN1, CTTN1, TKS4 и TKS5 преципитируют SAM68 из лизатов клеток 293. SAM68 непосредственно связывается с ITSN1 и взаимодействует с эндоцитозными белками и модуляторами перестроек актинового цитоскелета, а SAM68-опосредованный сплайсинг в клетках линии HeLa может регулироваться ITSN1. 2020 Article RNA-binding protein SAM68 interacts with endocytic proteins and actin cyto skeleton modulators / S.V. Pankivskyi, N.V. Senchenko, P.B. Busko, A.V. Rynditch // Доповіді Національної академії наук України. — 2020. — № 5. — С. 103-109. — Бібліогр.: 15 назв. — англ. 1025-6415 DOI: doi.org/10.15407/dopovidi2020.05.103 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/170510 577.22+577.218 en Доповіді НАН України application/pdf Видавничий дім "Академперіодика" НАН України

Similar Items