ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ

ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ

Background: Approximately 15% to 24% of essential thrombocythemia (ET) and 25–35% of primary myelofibrosis cases carry a mutation in the calreticulin (CALR) gene. Sanger sequencing, qPCR, high resolution melt or targeted next generation sequencing usually used to detect these mutations are expensive...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Datum:2023
Hauptverfasser: Dybkov, M.V., Zavelevich, M.P., Gluzman, D.F., Telegeev, G.D.
Format: Artikel
Sprache:English
Veröffentlicht: PH Akademperiodyka 2023
Schlagworte:
CALR (кальретикулін)
есенціальна тромбоцитемія (ЕТ)
алельспецифічна ПЛР
мієлопроліферативні новоутворення
мутація.
Online Zugang:https://exp-oncology.com.ua/index.php/Exp/article/view/2022-1-1
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:Experimental Oncology

Institution

Experimental Oncology
id oai:ojs2.ex.aqua-time.com.ua:article-55
record_format ojs
institution Experimental Oncology
baseUrl_str
datestamp_date 2023-10-11T16:45:51Z
collection OJS
language English
topic CALR (кальретикулін)
есенціальна тромбоцитемія (ЕТ)
алельспецифічна ПЛР
мієлопроліферативні новоутворення
мутація.
spellingShingle CALR (кальретикулін)
есенціальна тромбоцитемія (ЕТ)
алельспецифічна ПЛР
мієлопроліферативні новоутворення
мутація.
Dybkov, M.V.
Zavelevich, M.P.
Gluzman, D.F.
Telegeev, G.D.
ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
topic_facet CALR (кальретикулін)
есенціальна тромбоцитемія (ЕТ)
алельспецифічна ПЛР
мієлопроліферативні новоутворення
мутація.
allele-specific PCR
calreticulin
essential thrombocythemia
mutation.
myeloproliferative neoplasms
format Article
author Dybkov, M.V.
Zavelevich, M.P.
Gluzman, D.F.
Telegeev, G.D.
author_facet Dybkov, M.V.
Zavelevich, M.P.
Gluzman, D.F.
Telegeev, G.D.
author_sort Dybkov, M.V.
title ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
title_short ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
title_full ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
title_fullStr ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
title_full_unstemmed ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ
title_sort швидкий та дешевий спосіб виявлення мутації 2-го типу гена calr за допомогою алель-специфічної зт-плр для діагностики мієлопроліферативних новоутворень
title_alt RAPID LOW-COST DETECTION OF TYPE 2CALR MUTATION BY ALLELE-SPECIFIC RT-PCR FOR DIAGNOSIS OF MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASMS
description Background: Approximately 15% to 24% of essential thrombocythemia (ET) and 25–35% of primary myelofibrosis cases carry a mutation in the calreticulin (CALR) gene. Sanger sequencing, qPCR, high resolution melt or targeted next generation sequencing usually used to detect these mutations are expensive and require costly equipment. Nevertheless, type 1 CALR mutations are detectable by using polymerase chain reaction (PCR) and agarose gel electrophoresis. Aim: To offer the use of the allele-specific reverse transcription (RT) PCR for rapid low-cost detection of the type 2 mutation in the CALR gene. Materials and Methods: Allele-specific primers designed for detecting type 2 mutation (5-bp insertion; c.1154_1155 ins TTGTC) of the CALR gene were used for allele-specific RT-PCR analysis of cDNA of the patient with JAK2-, MPL-negative ET, whose mutation in CALR gene has been identified by Sanger sequencing. RT-PCR samples were analyzed by agarose gel electrophoresis. Results: The type 2 mutation (K385fs*47 ins5) in CALR gene was detected by Sanger sequencing in JAK2- and MPL-negative ET patient. The cDNA obtained was then re-analyzed by using allele-specific RT-PCR with newly designed primers. Normal and type 2 mutation alleles of the CALR gene were detected by gel electrophoresis. The results of allele-specific RT-PCR were consistent with the data of Sanger sequencing. Conclusion: Allele-specific RT-PCR analysis may be used for the fast low-cost detection of the major type 2 mutation (ins 5) of the CALR gene in patients with MPNs.
publisher PH Akademperiodyka
publishDate 2023
url https://exp-oncology.com.ua/index.php/Exp/article/view/2022-1-1
work_keys_str_mv AT dybkovmv rapidlowcostdetectionoftype2calrmutationbyallelespecificrtpcrfordiagnosisofmyeloproliferativeneoplasms
AT zavelevichmp rapidlowcostdetectionoftype2calrmutationbyallelespecificrtpcrfordiagnosisofmyeloproliferativeneoplasms
AT gluzmandf rapidlowcostdetectionoftype2calrmutationbyallelespecificrtpcrfordiagnosisofmyeloproliferativeneoplasms
AT telegeevgd rapidlowcostdetectionoftype2calrmutationbyallelespecificrtpcrfordiagnosisofmyeloproliferativeneoplasms
AT dybkovmv švidkijtadeševijsposíbviâvlennâmutacíí2gotipugenacalrzadopomogoûalelʹspecifíčnoíztplrdlâdíagnostikimíêloprolíferativnihnovoutvorenʹ
AT zavelevichmp švidkijtadeševijsposíbviâvlennâmutacíí2gotipugenacalrzadopomogoûalelʹspecifíčnoíztplrdlâdíagnostikimíêloprolíferativnihnovoutvorenʹ
AT gluzmandf švidkijtadeševijsposíbviâvlennâmutacíí2gotipugenacalrzadopomogoûalelʹspecifíčnoíztplrdlâdíagnostikimíêloprolíferativnihnovoutvorenʹ
AT telegeevgd švidkijtadeševijsposíbviâvlennâmutacíí2gotipugenacalrzadopomogoûalelʹspecifíčnoíztplrdlâdíagnostikimíêloprolíferativnihnovoutvorenʹ
first_indexed 2025-07-17T12:14:50Z
last_indexed 2025-07-17T12:14:50Z
_version_ 1837896292794105856
spelling oai:ojs2.ex.aqua-time.com.ua:article-552023-10-11T16:45:51Z RAPID LOW-COST DETECTION OF TYPE 2CALR MUTATION BY ALLELE-SPECIFIC RT-PCR FOR DIAGNOSIS OF MYELOPROLIFERATIVE NEOPLASMS ШВИДКИЙ ТА ДЕШЕВИЙ СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ МУТАЦІЇ 2-го ТИПУ ГЕНА CALR ЗА ДОПОМОГОЮ АЛЕЛЬ-СПЕЦИФІЧНОЇ ЗТ-ПЛР ДЛЯ ДІАГНОСТИКИ МІЄЛОПРОЛІФЕРАТИВНИХ НОВОУТВОРЕНЬ Dybkov, M.V. Zavelevich, M.P. Gluzman, D.F. Telegeev, G.D. CALR (кальретикулін), есенціальна тромбоцитемія (ЕТ), алельспецифічна ПЛР, мієлопроліферативні новоутворення, мутація. allele-specific PCR, calreticulin, essential thrombocythemia, mutation., myeloproliferative neoplasms Background: Approximately 15% to 24% of essential thrombocythemia (ET) and 25–35% of primary myelofibrosis cases carry a mutation in the calreticulin (CALR) gene. Sanger sequencing, qPCR, high resolution melt or targeted next generation sequencing usually used to detect these mutations are expensive and require costly equipment. Nevertheless, type 1 CALR mutations are detectable by using polymerase chain reaction (PCR) and agarose gel electrophoresis. Aim: To offer the use of the allele-specific reverse transcription (RT) PCR for rapid low-cost detection of the type 2 mutation in the CALR gene. Materials and Methods: Allele-specific primers designed for detecting type 2 mutation (5-bp insertion; c.1154_1155 ins TTGTC) of the CALR gene were used for allele-specific RT-PCR analysis of cDNA of the patient with JAK2-, MPL-negative ET, whose mutation in CALR gene has been identified by Sanger sequencing. RT-PCR samples were analyzed by agarose gel electrophoresis. Results: The type 2 mutation (K385fs*47 ins5) in CALR gene was detected by Sanger sequencing in JAK2- and MPL-negative ET patient. The cDNA obtained was then re-analyzed by using allele-specific RT-PCR with newly designed primers. Normal and type 2 mutation alleles of the CALR gene were detected by gel electrophoresis. The results of allele-specific RT-PCR were consistent with the data of Sanger sequencing. Conclusion: Allele-specific RT-PCR analysis may be used for the fast low-cost detection of the major type 2 mutation (ins 5) of the CALR gene in patients with MPNs. Близько 15–24% випадків есенціальної тромбоцитемії (ЕТ) і 25–35% випадків первинного мієлофіброзу (ПМФ) характеризуються наявністю мутації в гені кальретикуліну (CALR). Секвенування за Сенгером, кількісна полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), аналіз плавлення ДНК з високою роздільною здатністю (high resolution melt — HRM) або пов­ногеномне секвенування наступного покоління (next ge­neration sequencing — NGS), які зазвичай використовуються для виявлення цих мутацій, є дорогими та вимагають високовартісного обладнання. Однак, мутацію CALR 1-го типу можна виявити за допомогою ПЛР та електрофорезу в агарозному гелі. Мета: Використання алель-специфічної ПЛР зі зворотною транскрипцією для швидкого та недорогого виявлення мутації 2-го типу в гені CALR. Матеріали та методи: Алельспецифічні праймери, призначені для виявлення мутації 2-го типу (вставка 5-bp; c.1154_1155 ins TTGTC) гена CALR були використані для алельспецифічного аналізу методом ПЛР зі зворотною транскрипцією кДНК пацієнта з мієлопроліферативним новоутворенням, у якого не було виявлено мутацій в генах JAK2 та MPL і визначено мутацію гена CALR секвенуванням за Сенгером. Зразки методом ПЛР зі зворотною транскрипцією аналізували електрофорезом у агарозному гелі. Результати: Для аналізу використано випадок з JAK2- та MPL-негативною ЕТ. Мутацію 2-го типу (K385fs*47 ins5) було виявлено секвенуванням за Сенгером. Цю кДНК повторно аналізували за допомогою алель-специфічної ПЛР зі зворотною транскрипцією. Нормальний алель та алель з мутацією 2-го типу гена CALR виявляли за допомогою гель-електрофорезу. Отримані результати повністю узгоджуються з даними, отриманими за допомогою секвенування за Сенгером. Виявлення мутації 2-го типу (K385fs*47 ins5) остаточно підтвердило діагноз «есенціальна тромбоцитемія» згідно з сучасними критеріями ВООЗ. Висновки: Алель-специфічний аналіз ПЛР зі зворотною транскрипцією може бути використано для швидкого та недорогого виявлення основної мутації 2-го типу (ins 5) гена CALR у пацієнтів з мієлопроліферативними новоутвореннями. PH Akademperiodyka 2023-05-26 Article Article application/pdf https://exp-oncology.com.ua/index.php/Exp/article/view/2022-1-1 10.32471/exp-oncology.2312-8852.vol-44-no-1.17329 Experimental Oncology; Vol. 44 No. 1 (2022): Experimental Oncology ; 83-86 Експериментальна онкологія; Том 44 № 1 (2022): Експериментальна онкологія ; 83-86 2312-8852 1812-9269 10.32471/exp-oncology.2312-8852.vol-44-no-1 en https://exp-oncology.com.ua/index.php/Exp/article/view/2022-1-1/2022-1-1 Copyright (c) 2023 Experimental Oncology https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Ähnliche Einträge